BRMS1基因抑制卵巢上皮性癌细胞体内外转移的实验研究

目的 研究BRMS1基因转染卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞后对其体内外转移的抑制作用。方法 应用脂质体介导法将BRMS1基因转染人卵巢癌细胞株A2780细胞内（转染组）,设未进行任何转染的A2780细胞为空白对照组,转染空载体pcDNA3质粒者为阴性对照组。体外观察转染前后3组细胞增殖、凋亡、细胞间缝隙通讯连接、黏附转移情况及超微结构的变化。建立裸鼠人卵巢癌移植瘤模型,观察3组裸鼠BRMS1基因抑制肿瘤体内转移的作用。结果 BRMS1基因成功转染入A2780细胞中。BRMS1基因转染后,空白对照组细胞生长速度与阴性对照组和转染组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;空白对照组、阴性对照组及转染组细胞的每孔克隆数分别为（42±7）、（39±4）及（40±4）个,3组间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;3组细胞S期和G：／M期、Gn／G,期比例比较,差异也无统计学意义（P〉0．05）。转染组细胞问缝隙通讯连接功能增强。细胞侵袭实验显示,转染组转入底层膜的细胞数[（112±23）个]明显低于空白对照组和阴性对照组[分别为（306±49）、（322±91）个;P〈0．01]。BRMS1基因转染后,裸鼠体内转移灶,转染组为（23±7）个,分别与空白对照组和阴性对照组[分别为（96±12）、（112±20）个]比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 作为转移抑制基因,BRMS1基因可抑制卵巢癌细胞的转移。     

卵巢上皮性癌组织中KiSS-1基因及其受体GPR54 mRNA的表达及其意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1及其受体GPR54mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR技术检测37例卵巢上皮性癌、15例卵巢交界性上皮性肿瘤、15例卵巢良性上皮性肿瘤及11例正常卵巢组织中KiSS-1基因及其受体GPR54mRNA的表达,并分析其与各临床病理指标的相关性。结果KiSS-1mRNA在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率(分别为68%、60%)及表达水平(分别为0·82±0·09、0·80±0·10)均显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(分别为20%、18%和0·65±0·10、0·66±0·06;P均<0·05);且KiSS-1mRNA在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平均与手术病理分期和淋巴结转移有明显相关性(P<0·05)。GPR54mRNA在卵巢上皮性癌、卵巢交界性上皮性肿瘤、卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织中的阳性表达率(分别为70%、67%、60%和45%)及表达水平(分别为0·79±0·07、0·76±0·10、0·73±0·07和0·78±0·08)分别比较,差异均无统计学意义(P>0·05);GPR54mRNA在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平与手术病理分期、病理分级、病理类型、淋巴结转移及腹水生成均无相关性(P>0·05)。结论KiSS-1基因及其受体GPR54可能在抑制卵巢上皮性癌浸润和转移的过程中起重要作用。     

凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与bcl-2、bax蛋白表达的关系

目的　探讨凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌中的表达 ,及其与bcl 2、bax蛋白表达的相关性。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 35例卵巢上皮性癌组织中survivin基因的表达 ;应用免疫组织化学链霉亲和素 生物素 过氧化物酶复合物 (SABC)方法 ,检测bcl 2及bax蛋白的表达 ,并与卵巢上皮性交界性肿瘤、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织各 10例进行对照。结果　卵巢上皮性癌、交界性肿瘤组织中 ,survivin基因的表达率分别为 83%及 80 % ,显著高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达率 2 0 %及 0 % (P均 <0 .0 5 )。survivin基因表达与卵巢上皮性癌的临床分期、病理学类型、组织学分级及淋巴结转移无相关性 (P均 >0 .0 5 )。survivin基因表达与bcl 2蛋白表达呈正相关 (P <0 0 1) ,而与bax蛋白表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论　survivin基因可通过抑制癌细胞凋亡 ,对卵巢上皮性癌的发生和发展起作用 ;survivin基因可能与凋亡相关基因bcl 2、bax ,在卵巢上皮性癌的发展中分别起协同和拮抗作用。     

p27kip1蛋白在卵巢上皮癌中的表达及其临床意义

目的 :研究p2 7kip1在卵巢上皮癌中的表达及其临床意义。方法 :采用免疫组化SP法检测 2 0例卵巢良性、5 8例卵巢恶性上皮性肿瘤中p2 7kip1蛋白的表达。应用Kaplan Meier法及Cox比例风险回归模型 ,分析p2 7kip1蛋白表达与卵巢上皮癌患者预后的关系。结果 :(1)卵巢良性和恶性上皮性肿瘤中p2 7kip1蛋白表达阳性率分别为75 .0 % ,4 6 .6 % ,恶性肿瘤中p2 7kip1蛋白表达阳性率明显低于良性肿瘤 ,恶性肿瘤染色阳性部位以胞浆为主 ;(2 )p2 7kip1蛋白的表达与病理学分级有关 ,与年龄、临床分期、淋巴结转移、组织学亚型无关 ;(3)卵巢上皮癌中 ,p2 7kip1蛋白的表达与bax蛋白的表达呈正相关 ,与bcl 2蛋白的表达呈负相关 ,与ki6 7蛋白无明显相关性 ;(4)p2 7kip1蛋白表达是影响卵巢上皮癌患者预后的独立因素 ,阳性者预后较好。结论 :p2 7kip1蛋白可能与卵巢上皮癌的发生有关。p2 7kip1蛋白可作为判断患者预后的指标。     

肿瘤抑制基因p53在卵巢移行细胞癌中的过度表达

采用单克隆本免疫组化技术，对３２例卵巢称行细胞癌组织进行肿瘤抑制基因Ｐ５３表达的检测，分析Ｐ５３过度表达与卵巢移行细胞癌预后诸因素间的相关性。结果：卵巢移行细胞癌Ｐ５３表达率为４１％。     

TSLC1在卵巢上皮性癌的表达及临床意义

卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其特点是早期易发生盆腹腔转移,而肿瘤的浸润和转移是导致患者死亡率增高的主要原因.     

BARD1剪切变异体的自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的临床价值

目的 评价1个新的卵巢恶性肿瘤抗原--乳腺癌易感基因1(BRCA1)相关的具有环状结构域的蛋白(BARD1)剪切变异体(OV-142)的自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的价值.方法 RT-PCR技术克隆OV-142基因的开放阅读框,构建OV-142的原核表达质粒,表达、纯化OV-142重组融合蛋白;用间接酶联免疫吸附试验检测126例卵巢恶性肿瘤患者、15例卵巢交界性肿瘤患者、42例卵巢良性肿瘤患者血清中OV-142的IgG、IgM型自身抗体的相对含量,并分析自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的临床价值.结果 成功构建了OV-142的原核表达质粒,并获得了OV-142重组融合蛋白.当联合分析OV-142 IgG型自身抗体与CA125时,在卵巢恶性肿瘤诊断中的敏感性为71.4%,高于单独分析IgG(41.3%)或CA125(61.1%);特异性为89.1%,高于单独分析IgG(84.2%)或CA125(88.0%);准确性为81.9%,高于单独分析IgG(66.8%)或CA125(77.1%).结论 OV-142是BARD1的1个剪切变异体,其有可能成为卵巢恶性肿瘤免疫治疗的新靶点.OV-142抗原的IgG型自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中有可能成为CA125的1个重要的补充血清学标志物.     

多基因蛋白联合检测判断卵巢上皮性癌患者预后的初步探讨

目的初步探讨多基因蛋白联合检测判断卵巢上皮性癌（卵巢癌）预后的价值。方法选择广西医科大学附属肿瘤医院1991--2001年间确诊为卵巢癌Ⅱ～Ⅲ期的患者共80例,患者均接受理想的肿瘤细胞减灭术和以铂类为主的化疗,其中预后好组（指存活期≥2年）46例,预后差组（指存活期〈2年）34例。采用组织芯片与免疫组化法对两组患者癌组织进行多个基因蛋白（共17个,即ToPo—Ⅱ、Ki-67、MGMT、PCNA、p27、p53、p16、P—gP、LRP、GST-π、bcl-2、C—myc、Fas、bax、MSH2、MRP、BCRP蛋白）表达的检测,并分析其与卵巢癌患者预后的关系;对两组中表达有差异的6个蛋白（即P—gP、BCRP、MGMT、MSH2、p27和p16蛋白）进行多基因蛋白联合检测,并对据此判断的卵巢癌患者预后的价值进行分析。结果（1）预后差组P—gP、BCRP、MSH2蛋白阳性表达率（分别为62％、50％和50％）明显高于预后好组（分别为33％、28％和28％,P〈0．05）;而预后好组MGMT、p27、p16蛋白阳性表达率（分别为43％、54％和43％）明显高于预后差组（分别为18％、29％和24％,P〈0．05）。（2）Cox模型分析显示,MRP、C—myc、LRP、p16、p27、MGMT、ToP0-Ⅱ、P—gP、GST-π蛋白表达与卵巢癌患者的预后有关（P〈0．01）。其中,MRP、C—myc、LRP、ToPo—Ⅱ、P—gP、GST-π蛋白阳性表达者预后差,而MGMT、p27、p16蛋白阳性表达者预后好。（3）多基因蛋白联合检测结果显示,P—gP＋MGMT蛋白联合检测呈阳性表达者与预后密切相关（P〈0．01）,两者联合检测对卵巢癌患者预后总的预测准确率达70％。结论P—gP、MGMT、p27、p16蛋白可作为预测卵巢癌患者预后的标志物,而多基因蛋白联合检测则能更好地预测卵巢癌患者的预后。     

p16基因产物在卵巢恶性生殖细胞肿瘤中的表达

ｐ１６基因产物在卵巢恶性生殖细胞肿瘤中的表达高国兰彭芝兰王和陈爱平姚先莹ｐ１６基因的编码蛋白可特异性抑制ＣＤＫ４激酶（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｔｋｉｎａｓｅ４）活性而影响细胞周期的调控。由于ｐ１６基因这一重要的生物学功能以及在多种肿瘤细胞系中有高频...     

nm23基因产物在正常卵巢和卵巢上皮性肿瘤的表达

ｎｍ２３基因产物在正常卵巢和卵巢上皮性肿瘤的表达姜彦多戴晓淳王永信何安光张乃连ｎｍ２３基因位于人１７号染色体长臂，其蛋白质产物为１７ＫＤ的核苷二磷酸激酶（ＮＤＰＫ）［１］。我们采用免疫组织化学方法，研究ＮＤＰＫ／ｎｍ２３在正常卵巢和卵巢上皮性肿瘤的表...     

miR-200a在卵巢癌患者血清中的表达及临床意义

目的:通过检测上皮性卵巢癌患者血清中miR-200a的表达,分析其与临床病理特征的关系,探讨miR-200a在卵巢癌发生发展中的作用及可能的机制。方法:选取65例上皮性卵巢癌患者为研究对象,30例良性上皮性卵巢肿瘤及50例正常女性作为对照,用Real-time PCR方法检测受试者血清中miR-200a表达,ELISA法检测血清中CA125水平。分析miR-200a在不同临床病理情况下的表达差异。结果:miR-200a在上皮性卵巢癌患者血清中表达量明显高于良性卵巢肿瘤及正常女性(P<0.001),良性组与正常女性两组间miR-200a的表达无明显差异(P=0.633)。血清miR-200a表达与卵巢癌分化程度及血清CA125值呈正相关(P均<0.05),而与卵巢癌的组织病理类型、临床分期及淋巴结转移情况无明显相关性(P>0.05);miR-200a高水平组卵巢癌患者预后明显差于低水平组(P=0.021)。结论:miR-200a在上皮性卵巢癌患者血清中表达上调可能与卵巢癌的发生及不良预后密切相关。     

卵巢上皮性癌组织中DNA甲基转移酶亚型mRNA的表达及其意义

目的 探讨DNA甲基转移酶（DNMT）亚型mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用半定量RT-PCR技术测定55例卵巢上皮性癌组织（其中原发性40例、复发性15例）及20例正常卵巢组织中DNMT亚型1、3A及3BmRNA的表达水平,并对其相关临床病理指标进行分析。结果 正常卵巢、原发性及复发性卵巢上皮性癌组织中,DNMT1 mRNA的表达水平分别为1．15、3．11、2．85,3者之间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;DNMT3A mRNA的表达水平分别为1．32、0．71、1．24,3者之间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;DNMT3B mRNA表达水平分别为0．25、0．60、2．12,复发性卵巢上皮性癌组织显著高于其他两者（P〈0．01）。原发性卵巢上皮性癌组织中DNMT1 mRNA表达水平,中低分化、手术病理分期为Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移阳性者明显高于高分化、Ⅰ～Ⅱ期及淋巴结转移阴性者（分别为4．92和1．38,6．02和2．13,8．25和2．40;P均〈0．05）。原发性卵巢上皮性癌组织中,浆液性癌和透明细胞癌组织中DNMT1、3A、3BmRNA表达水平（分别为5．64、1．00、0．78）均明显高于其他病理类型（分别为1．76、0．44、0．23;P均〈0．05）。COX回归分析发现,卵巢上皮性癌组织中DNMT3B mRNA表达水平可能是影响患者生存期的惟一因素。结论 原发性及复发性卵巢上皮性癌组织中,DNMT1、3BmRNA高表达与其疾病进展及预后有关。     

hScrib和hDlg在上皮性卵巢癌的表达及意义

目的:探讨原发性上皮性卵巢癌中hScrib和hDlg的表达及意义。方法:用免疫组化SP法检测hScrib和hDlg蛋白在60例上皮性卵巢癌组织、18例卵巢交界性肿瘤、19例卵巢良性肿瘤及18例正常卵巢组织中的表达。结果:hScrib和hDlg蛋白在正常卵巢上皮的表达显著低于卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤以及上皮性卵巢癌,差异有统计学意义(P<0.05);hScrib和hDlg蛋白在不同卵巢组织中定位的改变较明显。二者在卵巢癌的表达呈正相关(P<0.05)。结论:hScrib和hDlg蛋白可能通过定位的改变共同参与了卵巢癌的发生。     

细胞周期素D1蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其意义

目的　研究细胞周期素D1(cyclinD1)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义。方法　 1997～ 2 0 0 0年采用免疫组织化学SP法 ,检测恶性卵巢上皮性肿瘤、交界性肿瘤、良性肿瘤、正常卵巢组织cyclinD1的表达。结果　在恶性卵巢上皮性肿瘤 ,良性肿瘤 ,正常卵巢组织之间cyclinD1的表达差异有显著性 (P <0 0 1)。cyclinD1的表达率与组织分化程度和临床分期有显著相关性 (P <0 0 5 ) ,cyclinD1的过度表达见于组织分化差 ,肿瘤发病的晚期。结论　cyclinD1在卵巢癌组织中广泛存在 ,并与组织分化 ,临床分期有一定相关性 ,提示该基因在卵巢癌的发生、发展中起一定作用     

卵巢上皮性癌淋巴结转移相关差异表达蛋白内质网氨基肽酶1的表达及意义

目的 从基因转录及蛋白表达的水平检测内质网氨基肽酶1(ERAP1)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞、组织中的表达,探讨其与卵巢癌转移的关系.方法 应用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法检测在卵巢癌淋巴结非定向转移细胞系(SKOV3)与淋巴结定向高转移细胞系(SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4)中ERAP1 mRNA和蛋白的表达情况;并应用免疫组化方法在人卵巢癌原发灶与相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶与相应的淋巴结转移灶中对ERAP1的蛋白表达进行验证.结果 SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞中ERAP1 mRNA和蛋白的表达呈下降趋势(分别为0.118±0.012、0.031±0.003、0.028±0.003、0.016±0.005;0.91±0.33、0.09±0.03、0.10±0.04、0.05±0.04),其中,SKOV3细胞中ERAP1 mRNA和蛋白的表达显著高于SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).ERAP1蛋白在人卵巢痛原发灶(184±14)和相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶(143±22)和相应的淋巴结转移灶(97±12)中的表达均呈下降趋势,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢癌中ERAP1表达的下降或缺失与淋巴结转移有关.     

SREBP1、ACLY在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

目的:研究胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达,探讨其与患者临床病理参数和预后的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测SREBP1、ACLY在卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤和卵巢上皮性癌中的表达。结果:SREBP1、ACLY蛋白在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率(67.71%,70.83)显著高于卵巢良性肿瘤(31.25%,37.5%)、卵巢交界性肿瘤(13.33%,13.33%)(P<0.05)。卵巢上皮性癌组织中SREBP1、ACLY蛋白阳性表达率与FIGO分期、组织学分级明显相关(P<0.05);卵巢上皮性癌中SFEBP1蛋白表达与ACLY蛋白的表达呈正相关(r=0.83,P<0.001)。卵巢上皮性癌组织学分级、FIGO分期、SREBP1和ACLY表达水平均与患者预后有关(P<0.05),FIGO分期是影响卵巢癌患者预后的独立因素(P<0.05)。结论:SREBP1、ACLY蛋白与卵巢上皮性癌的发生、发展和预后有关。SREBP1、ACLY可能成为治疗卵巢癌的新靶点。     

CA125在鉴别卵巢原发性癌和胃肠道转移性癌中的作用

目的　CA12 5在鉴别卵巢原发性癌和来源于胃肠道的卵巢转移性癌中的价值。方法　采用免疫组织化学伊文生 (Envision) 2步法 ,对 33例卵巢原发性癌、5 0例卵巢转移性癌 (原发灶在胃肠道 )进行了CA12 5检测。结果　 33例卵巢原发性癌CA12 5阳性率为 84 5 % ,5 0例卵巢转移性癌CA12 5阳性率为 4 0 % ,两者比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。结论　CA12 5的测定对鉴别卵巢原发性癌和来源于胃肠道的卵巢转移性癌有重要意义     

组织蛋白酶L基因与卵巢上皮性癌细胞侵袭及转移的关系

目的 构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的真核表达质粒,通过体外实验研究CTSL基因与卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭、转移的关系.方法 采用逆转录(RT)-PCR技术从卵巢癌组织总RNA中扩增CTSL基因的cDNA全长,克隆至pMD18-T载体上;酶切、纯化CTSL基因后与pcDNA3.1载体连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CTSL.应用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒转染卵巢癌HO8910细胞,RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检验CTSL mRNA和蛋白的表达情况,细胞增殖能力测定分别采用四甲基偶氮唑蓝法和集落形成实验,细胞周期检测、细胞体外侵袭、转移、黏附能力测定分别采用流式细胞仪、细胞体外侵袭重建基底膜实验、穿膜小室(transwell小室)实验、体外黏附实验.结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果证实,HO8910细胞转染pcDNA3.1-CTSL质粒后有CTSL基因和蛋白的表达.HO8910-CTSL细胞的生长速度加快,但与对照的HO8910-pcDNA3.1及HO8910细胞分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的S+G2+M期细胞比例为37.9%,与HO8910-pcDNA3.1细胞及HO8910细胞(分别为32.9%、31.8%)比较虽有增加,但差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的侵袭、转移能力增加(分别为0.34±0.18、1.252±0.114),与HO8910-pcDNA3.1细胞(分别为0.17±0.04、0.486±0.027)及HO8910细胞(分别为0.16±0.05、0.459±0.674)分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HO8910-CTSL细胞的黏附能力(0.16±0.04)与HO8910-pcDNA3.1细胞(0.19±0.04)及HO8910细胞(0.19±0.03)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CTSL基因真核表达质粒转染使卵巢癌细胞的体外侵袭和转移能力增加,有可能成为抗卵巢癌侵袭和转移的分子靶点.     

雌孕激素受体基因及其相关基因在卵巢癌组织中的表达

目的应用基因芯片技术筛查卵巢癌雌孕激素受体基因及其相关基因表达。方法制备含有雌孕激素受体及其相关基因表达谱芯片，分别提取人正常卵巢组织及卵巢癌组织的mRNA，通过逆转录PCR方法，将^33P—dATP分别标记两种组织的cDNA纯化后与表达谱芯片进行杂交及扫描，用ImaGene3．0软件分析信号的强度和比值，筛选雌孕激素受体相关基因。对雌孕激素受体基因信号绝对值按早、晚期求均值及标准差筛选受体基因。结果筛选出4条雌孕激素受体基因、受体相关基因12条。结论通过基因芯片技术方法，初步筛出了卵巢癌雌孕激素受体基因及其相关基因。