雷帕霉素对人肝癌细胞BEL-7402体外抗肿瘤作用研究

目的：观察雷帕霉素体外对肝癌细胞BEL-7402生长、细胞凋亡以及细胞转移能力作用。方法：以5nmol／L。10nmol／L，20nmol／L，30nmol／L，40nmol／L和50nmol／L不同浪度的雷帕霉素作用于体外培养的BEL-7402细胞。MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪检测细胞凋亡。Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。细胞粘附分析及体外侵袭试验观察肿瘤细胞的转移能力。结果：雷帕霉素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长．诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系。雷帕霉素作用肝癌细胞BEL-740248h后，在Hoechst 33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。雷帕霉素能抑制其粘附性和侵袭性。具有剂量依赖性。随浓度增加而抑制增加。结论：雷帕霉素不仅能诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡，抑制细胞的生长。而且同时抑制肿瘤细胞的粘附性和侵袭性．阻止肿瘤细胞的转移，雷帕霉素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

背景与目的:雷帕霉素是从吸水性链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)发酵液中提取,最近研究发现雷帕霉素具有免疫抑制作用和广泛的抗肿瘤作用。本研究主要探讨Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用。方法:以不同浓度(5、10、20、30、40、50nmol/L)的雷帕霉素作用于BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,采用Caspase-3试剂盒和Westernblot蛋白电泳测定Caspase-3活性。结果:雷帕霉素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,具有量-效与时-效关系;雷帕霉素作用BEL-7402细胞48h后,Hoechst33258荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;凋亡过程中Caspase-3酶原蛋白的激活,出现20ku亚单位,Caspase-3特异性抑制剂z-DEVD-FMK能阻断凋亡的发生。结论:雷帕霉素能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3酶的激活在雷帕霉素诱导细胞凋亡机制中起到重要作用。     

脂蟾毒配基通过线粒体途径诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究

目的：探讨中药蟾酥主要成份之一脂蟾毒配基（Resihufogenin，RG）诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制。方法：体外培养Bel-7402细胞．采用酸性磷酸酶法检测RG对细胞增殖抑制作用：吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化；流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位（△ψm）变化；Westem Blot检测与细胞调亡相关蛋白表达的变化。结果：RG显著抑制细胞增殖，其作用24、48、72h的IC50分别为3．8、1．8、1．2μmol／L；经10μmol／LRG处理24h后，癌细胞出现凋亡的形态变化，其凋亡率明显高于对照组细胞；RC引起△ψm下降，释放入胞质中的细胞色素c（cytochrome c，CytC）增多，促进caspase-3蛋白活化，抑制Bel-2蛋白表达。诱导细胞凋亡。结论：RG诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡．其诱导凋亡作用可能通过线粒体通路实现。     

全反式维A酸联合c-myc RNA干扰抑制肺腺癌细胞增殖并诱导凋亡

目的 探讨全反式维A酸(ATRA)联合c-myc RNA干扰后肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的改变及对survivin 基因表达的影响.方法 构建c-myc特异RNA小干扰(siRNA)的表达载体,转染A549细胞后G418(Geneticin)筛选出稳定表达c-myc特异siRNA的细胞株,荧光实时定量RT-PCR和免疫印迹 (Western blot)检测c-myc基因表达水平.ATRA作用于c-myc RNA干扰细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测吸光度值,流式细胞仪测凋亡率,定量RT-PCR和免疫印迹检测survivin基因表达.结果 成功构建c-myc-siRNA表达载体.c-myc基因mRNA和蛋白表达下降71.9%和85.6%.ATRA联合c-myc-siRNA细胞组吸光度值在各时间点较单用ATRA组,单用c-myc-siRNA组以及对照组均下降,差异有显著性(P＜0.01),凋亡率增加,差异有显著性(P＜0.01).ATRA联合c-myc-siRNA细胞, survivin表达下降49.2%,差异有显著性(P＜0.01).结论 ATRA联合c-myc-siRNA较单用ATRA或c-myc siRNA能更有效地抑制A549细胞的增殖,促进细胞的凋亡.survivin基因表达降低.     

雷帕霉素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2作用研究

目的探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制及诱导细胞凋亡中的作用及Bcl-2变化在凋亡机制中的意义。方法以5、10、20、30、40和50nmol/L不同浓度的RAPA作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,Westernblot观察Bcl-2、Bcl-xl和bax等凋亡相关表达变化。结果RAPA可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。RAPA作用肝癌细胞BEL-740248h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,凋亡过程中伴有抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax上调。结论RAPA可能通过诱导抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax表达上调而诱导凋亡发生,抑制BEL-7402细胞的生长。     

合成紫花茄皂苷诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的：探讨合成紫花茄皂苷对BEL-7402细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法：采用酸性磷酸酶(APA)法、吖啶橙荧光染色法和流式细胞术检测合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-72102细胞增殖的影响以及诱导细胞凋亡的作用利用蛋白印迹法检测药物作用后凋亡相关蛋白PARP的表达水平。结果：合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用，其72h的IC50为4．2μg／ml。荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡形态流式细胞术分析发现，细胞经皂苷作用6h、12h和24h后，凋亡率显著增加蛋白印迹检测结果显示，合成紫花茄皂苷作用后肿瘤细胞内的PARP蛋白被剪切，Bcl-2蛋白的表达量下调。结论：合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性，具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，且这一作用可能与Bcl-2表达下调有关.     

雷氏大疣蛛蛛毒对人肝癌BEL-7402 细胞增殖的抑制作用及其机制的研究

背景与目的蜘蛛毒素抗肿瘤的研究迄今还是未知领域。本研究探讨雷氏大疣蛛(Macrotheleraveni)蛛毒对BEL-7402细胞增殖的抑制作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定了雷氏大疣蛛蛛毒(10、20、40、80滋g/ml)对BEL-7402细胞增殖作用的影响;采用[3H]-TdR掺入法检测蛛毒加入前后BEL-7402细胞DNA的变化;利用流式细胞光度术(FCM)探讨雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞凋亡率和细胞周期的影响;利用Westernblot方法进一步检测雷氏大疣蛛蛛毒对细胞周期相关基因c-myc的变化。结果雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05),IC50为20滋g/ml,时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛蛛毒可以抑制BEL-7402细胞DNA的合成。流式细胞仪检测发现经过雷氏大疣蛛蛛毒作用下的BEL-7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期。Westernblot方法进一步检测表明雷氏大疣蛛蛛毒作用于BEL-7402细胞72h后,c-myc基因表达减弱。结论雷氏大疣蛛蛛毒就可以抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖和DNA的合成。其药理作用机制可能是除了诱导凋亡外,主要是使细胞周期相关基因c-myc表达减弱,导致细胞周期的变化。     

肝癌细胞中STAT3及c-myc的表达及其意义

目的：探讨STAT3及c-myc在肝癌细胞SMMC-7721中的表达，观察抗体干预对细胞增殖和凋亡的影响以及二者的相互关系。方法：免疫细胞化学及RT-PCR观察STAT3及c-myc在肝癌细胞中的表达；抗体干预后，MTT法检测细胞增殖，FCM检测细胞凋亡，RT-PCR检测STAT3及c-myc mRNA表达的变化。结果：STAT3及c-myc在肝癌细胞SMMC-7721中均有表达，单独应用STAT3或c-myc抗体以及联合应用2种抗体对细胞的增殖、凋亡均有影响，在48h处理组，联合应用抗体的作用更明显。应用STAT3抗体作用于细胞，RT-PCR检测显示c-myc mRNA的表达下降，联合应用抗体后c-myc mRNA的表达明显降低。结论：肝癌细胞SMMC-7721中存在STAT3及c-myc信号通路，STAT3通过上调c-myc而抑制肝癌细胞的凋亡并促进其增殖，二者在肝癌的发生、发展中起重要作用。     

miR-16对人肝癌细胞BEL-7402增殖与凋亡的影响

背景与目的：miR-16和miR-15a基因复合体位于人13q14区域的DLEU2基因内含子内,是目前公认的抑癌基因之一。该基因区域的缺失与多种实体肿瘤有关,miR-16同时促进肿瘤细胞的凋亡。该研究旨在探讨miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人肝癌细胞BEL-7402分为miR-16感染组(加入LV-hsamiR-16-1慢病毒)和阴性对照组(加入阴性对照病毒),采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光的强度;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析miR-16对人肝癌细胞BEL-7402的细胞周期与凋亡的影响。结果：CCK-8检测结果显示,感染组细胞增殖能力明显降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,阴性对照组BEL-7402细胞周期中G₁期细胞百分率数值明显下降,但S及G₂/M期细胞的百分率均明显上升(P<0.05)。miR-16促进BEL-7402肝癌细胞凋亡。结论：miR-16抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,miR-16有望成为临床肝癌靶向治疗的新靶点。     

siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的"梯状"条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞(0.28±0.15vs0.96±0.21,1.03±0.24,P<0.05;1.09±0.21vs0.26±0.10,0.25±0.07,P<0.01)。结论:siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关。     

Characteristics of mitotic cell death induced by enediyne antibiotic lidamycin in human epithelial tumor cells.

Mitotic cell death, a different cell death mode from apoptosis, has been focused on in tumor therapy. It may involve the mechanism of highly potent cytotoxicities of enediyne antibiotics toward tumor cells. We describe the characteristics of mitotic cell death induced by enediyne antibiotic lidamycin at low concentrations (0.01-1 nM), in the human hepatoma BEL-7402 cells and human breast carcinoma MCF-7 cells. The cells exerting mitotic cell death showed retardation at G2+M phase, enlargement of cell volume and multinucleation, some of which were positive in senescence-associate beta-galactosidase staining. The multinucleated living cells did not show apoptotic features by co-staining with mitochondria-specific dye Mitosensor and DNA-specific dye Hoechst 33342. The DNA polyploidy rather than increased with incubation time for the lidamycin-treated BEL-7402 cells. The proliferation status of BEL-7402 cells was shown by flow cytometry after the cells were labeled with PKH-67, a fluorescent dye for labeling living cells, but the fluorescent intensity of the lidamycin-treated cells was little changed. The smear DNA pattern was detected in the multinucleated cells by agarose gel electrophoresis. The results provide the first evidence for elucidating the potent cytotoxicities of lidamycin toward tumor cells and further describing characteristics of mitotic cell death.     

Induction of apoptosis accompanying with G(1) phase arrest and microtubule disassembly in human hepatoma cells by jaspolide B, a new isomalabaricane-type triterpene

Jaspolide B is a novel isomalabaricane-type triterpene isolated from sponge Jaspis sp. We investigated its effects on human hepatoma cells in this study. After 48 h of incubation, jaspolide B inhibited the growth of Bel-7402 and HepG2 cells with IC(50) values of 29.1 and 29.5 μM, respectively. Incubation with 0.5 μM of jaspolide B caused time-dependent induction of apoptosis in up to 66.8% of Bel-7402 cells for 48 h, and the induction of apoptosis was confirmed by the enhancement of mitochondrial masses and cell membrane permeability, and nuclear condensation in Bel-7402 and HepG2 cells. Moreover, jaspolide B arrested cell cycle progression at G(1) phase of human hepatoma cells in a dose- and time-dependent manner. In addition, treatment of the compound caused dose-dependent disassembly of microtubule cytoskeleton in Bel-7402 cells at indicated concentrations, and this effect being similar but weaker than that of colchicine, a well-known microtubule-disassembly agent. We conclude that the anti-cancer effect of jaspolide B relates to the apoptosis induction, cell cycle arrest and microtubule disassembly, and these multiple mechanisms of jaspolide B, especially the induction of apoptosis, open interesting perspectives for further exploration of the isomalabaricane-type terpenes and compounds of marine sponge origin as potential anticancer agents.     

半乳糖受体介导的c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞的靶向投递作用

背景与目的:c-myc反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)能抑制肝癌细胞的增殖,脂质体和腺病毒介导的c-mycASODN投递虽能显著抑制肝癌细胞的增殖,抑制荷肝癌小鼠肿瘤的生长,但这种投递缺乏靶向性;受体介导的药物投递具有高效性和靶向性的特点,已被用于基因及ASODN的靶向投递。本实验以半乳糖(galactose,Gal)-聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)作为载体,介导c-mycASODN作用于人肝癌细胞Bel-7402,探讨c-mycASODN对Bel-7402细胞的靶向投递作用。方法:用流式细胞仪检测Bel-7402、U937细胞对荧光标记的Gal-PEI-c-myc-ASODN(简称Gal-PEI-ASODN)的摄取率及细胞内平均荧光强度;相差/荧光显微镜观察荧光标记的Gal-PEI-ASODN及c-myc-ASODN进入Bel-7402、U937、Raji细胞的形态;台盼蓝拒染法检测不同浓度Gal-PEI-ASODN对这三种细胞增殖的影响。结果:荧光标记的Gal-PEI-ASODN或ASODN与相应细胞孵育10min到4h,Gal-PEI-ASODN-Bel-7402细胞的荧光摄取率为88.25%～98.66%,细胞内平均荧光强度为38.64%～111.90%,与单纯c-mycASODN-Bel-7402细胞组、Gal-PEI-ASODN-U937细胞组相比,所有时间点的细胞荧光摄取率、胞内平均荧光强度均显著增高,经Poission分布检验,均有显著性差异(P<0.01)。相差/荧光显微镜观察到     

EBP50影响HeLa细胞微丝骨架的分布和定位

Objective:To explore the influence of EBP50 (ezrin-radixin-moesin-binding phospho-protein-50) on microfila-ment cytoskeleton content and distribution in cultured Hela cells, and to investigate the relationship between the changes in microfilament cytoskeleton localization and EBP50 after PDGF (platelet-derived growth factor) stimulation, and to further clarify the molecular mechanism by which EBP50 suppresses tumor cell proliferation and migration. Methods:pBK-CMV-HA-EBP50 wild type recombinant plasmid and pBK-CMV-HA empty vector were transfected into Hela cells. G418 at 350 mg/L was used to screen for cell clones stably expressing EBP50. Western blot was carried out to detect EBP50 expression. Similarities and differences in microfilament cytoskeleton content and distribution in Hela cells transfected with pBK-CMV-HA-EBP50 wild type recombinant plasmid and pBK-CMV-HA empty vector were also treated with PDGF (10 ng/mL and 20 ng/mL, 37 ℃, 15 min) and stained by rhodamine-labeled phalloidin to observe the distribution of microfilament cytoskeleton in the two groups. EBP50 protein distribution in PDGF-stimulated Hela cells was detected by immunofluorescence. Results:Western blot results confirmed that the EBP50 cDNA fragment could express EBP50 in cultured Hela cell lines and that cell lines stably expressing EBP50 were successfully obtained. Western blot and fluorescence results showed that in the cell line transfected with empty vector, the microfilament cytoskeleton was thick, loose, multidirectional and displayed crossing arrangements. The content of microfilament cytoskeleton in the cell line transfected with pBK-CMV-HA-EBP50 was different from that found in the cell line transfected with empty vector. EBP50 expression enhanced microfilament cytoskeleton polymerization into compact thin filaments. Under the stimulation of PDGF, EBP50 migrated to the cell membrane from the cytosol together with microfilament cytoskeleton and co-localized there. Conclusion:EBP50 can change the distribution of microfilament cytoskel-eton in cultured Hela cells and can also bind the microfilament cytoskeleton to the cell membrane under the stimulation of PDGE EBP50 may play a role in the proliferation and migration of tumor cells by influencing the distribution and localization of microfilament cytoskeleton.     

α-常春藤皂苷诱导肝癌Bel-7402细胞铁死亡的作用机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)诱导肝癌Bel-7402细胞发生铁死亡(ferroptosis)的可能机制。方法:采用梯度浓度的α-常春藤皂苷处理肝癌Bel-7402细胞24 h,MTT法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC50)。将细胞分为空白对照组、α-常春藤皂苷（25 μmol/L）组和α-常春藤皂苷（50 μmol/L）组。谷胱甘肽试剂盒测定分组后细胞内GSH含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸的反向转运体亚基xCT、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运蛋白1(DMT1)的表达,DCFH-DA探针用以检测细胞活性氧(ROS)水平。利用铁死亡抑制剂进行细胞功能恢复试验,测定了同时使用Ferrostatin-1和α-常春藤皂苷后的细胞活力、GSH含量、铁死亡相关蛋白表达水平以及ROS水平。结果:随α-常春藤皂苷浓度增加Bel-7402细胞的存活率显著降低,24 h对应Bel-7402细胞的IC50为40.32 μmol/L。α-常春藤皂苷能减少细胞内GSH含量,下调xCT和GPX4的表达,上调DMT1的表达和升高ROS水平。Ferrostatin-1可有效抑制α-常春藤皂苷诱导的细胞铁死亡,主要表现为细胞活力、GSH含量恢复以及ROS生成减少。结论:α-常春藤皂苷可通过抑制GPX4和xCT的表达,促进DMT1的表达,诱导ROS大量生成并导致肝癌Bel-7402细胞铁死亡。     

雷帕霉素对胰腺癌细胞株SW1990生长和凋亡的影响

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对胰腺癌细胞株SW1990生长和凋亡的影响及其可能的机制。方法:用5、10、20、30、40和50nmol/L RAPA作用SW1990细胞24、48和72h,MTT法检测细胞的生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡和细胞周期,Western印迹法检测SW1990细胞中bcl-2、bcl-xL、bax和survivin蛋白的表达。结果:MTT和FCM检测结果显示,随着RAPA浓度的增加和作用时间的延长,SW1990细胞的生长抑制率和细胞凋亡率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);各浓度RAPA作用细胞24h后,随着浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞于G1期,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western印迹法检测结果显示,50nmol/L RAPA作用SW1990细胞后,bax表达明显增加,bcl-2、bcl-xL、survivin、bcl-xL/bax和bcl-2/bax表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RAPA可显著抑制SW1990细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与凋亡调控基因bcl-2、bcl-xL、bax和survivin表达水平变化有关。     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的调节作用.方法:用不同浓度的NS-398作用BEL-7402细胞后,MTT法测定细胞增殖抑制情况,FCM法和TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况.结果:NS-398 可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,诱导其凋亡.免疫细胞化学法检测结果显示,与未处理组相比,NS-398作用可使BEL-7402细胞中COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论:NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关.     

布洛芬抑制人肝癌细胞BEL-7402生长及机制的初步研究

背景与目的：近来发现,临床上常用的非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)可以降低多种癌症的发病率。布洛芬(ibuprofen)作为一种常用的NSAIDs,对肝癌是否具有抑制作用,国内外鲜有报道。本研究初步探讨布洛芬抑制肝癌细胞BEL-7402的作用,并研究其相关机制。方法：肝癌细胞BEL-7402分为对照组和不同浓度布洛芬处理组,药物处理0、24、48和72 h后用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞的周期分布;细胞分析仪检测各组细胞活力及细胞凋亡;蛋白[质]印迹(Western blot)检测各组细胞增殖性核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中前列腺素E₂(PGE₂)蛋白表达水平。结果：布洛芬组中BEL-7402细胞增殖受到抑制,且抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。2.0 mmol/L布洛芬组48 h细胞活力明显低于对照组［(47.87±5.23)% vs (88.93±5.49)%］,G₀/G₁期细胞比例明显高于对照组［(80.04±3.61)%vs (62.36±8.33)%］,细胞早期凋亡率明显高于对照组［(36.65±10.07)% vs (9.81±6.80)%］,差异有统计学意义(P<0.05)。布洛芬作用于细胞48 h后,PCNA、Cyclin D1、Bcl-2以及COX-2蛋白表达与对照组相比显著减少(P<0.05);细胞培养上清液中PGE₂蛋白表达量与对照组［(23.98±4.89) ng/L vs (68.70±9.43) ng/L］相比,显著降低(P<0.01)。结论：布洛芬能够抑制肝癌细胞BEL-7402增殖与活力,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2及PGE₂表达有关。     

丹参多酚酸盐通过线粒体途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

目的：研究丹参多酚酸盐(salvianolate)体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用及其可能机制。方法：不同质量浓度丹参多酚酸盐(0.5、1、2 mg/ml)与肝癌细胞共培养24 h后,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡,线粒体膜电位试剂盒(JC-1)检测线粒体膜电位变化;比色法测定1.0 mg/ml丹参多酚酸盐作用后肝癌细胞内caspase8、caspase9 及caspase3的活性,流式细胞仪检测培养体系内加入caspase9抑制剂(zLEHDfmk)或caspase3抑制剂(zDEVDfmk)后细胞凋亡率的变化,Western blotting检测肝癌细胞内线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl2表达水平。结果：丹参多酚酸盐显著诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡(P<0.05),同时线粒体膜电位随着药物浓度的升高而加剧下降(P<0.05)。1.0 mg/ml 丹参多酚酸盐处理肝癌细胞24 h后caspase-9与caspase-3的活性明显升高(P<0.05),而caspase-8的活性无明显变化(P>0.05);当培养体系内加入caspase-9或caspase3活性抑制剂后,丹参多酚酸盐诱导肿瘤细胞凋亡的作用明显降低(P<0.05)。Western blotting检测显示,丹参多酚酸盐处理组前凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达降低。结论：丹参多酚酸盐(0.5~2.0 mg/ml)剂量具有促进肝癌细胞凋亡的作用,且有剂量依赖的趋势,其机制与线粒体凋亡途径有关。