用流式细胞术结合单克隆抗体CD71,Ki-67和PCNA研究儿童急性淋巴细胞白血病的细胞增殖(英文)

为研究儿童急性淋巴细胞白血病的细胞增殖动力学,我们用流式细胞术结合单克隆抗体CD71,Ki-67和增殖性细胞核抗原(PCNA)检测了21例初诊急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童骨髓细胞的增殖性抗原表达情况。结果表明:白血病细胞的CD71标记指数(LI)与正常细胞相比无显著差异,且个体间异质性较大;白血病细胞的Ki-67和PCNA的LI明显高于正常细胞,每例标本的PCNA LI均高于Ki-67LI,两者间有明显相关关系。本实验结果提示白血病细胞的增殖活力明显高于正常细胞,单克隆抗体Ki-67和PCNA是检测白血病细胞增殖活力的有效生物学指标,且PCNA的敏感性高于Ki-67。     

咖啡因对辐射诱导细胞凋亡和G2／M期阻滞的影响

用形态学,DNA电泳和流式细胞仪等方法观察γ射线诱发BAF3细胞G_2/M期阻滞和凋亡的作用,以及咖啡因对其的影响。结果显示,5Gyγ射线照射后6小时引起细胞G_2/M期阻滞,G_2/M期比例为49.10％,12小时升至52.00％,无细胞凋亡发生。照前分别加入1mmol/L及5mmol/L咖啡因,照后12小时G_2/M阻滞程度降低,比例降至39.42％和15.49％,形态学检测细胞凋亡比例为8.33±1.53％和18.33±1.76％,流式细胞仪检测细胞凋亡比例为18.78％和43.81％,DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯状图谱。结论提示,G_2/M期阻滞抑制能促进辐射诱导的细胞凋亡。     

急性白血病Ki-67的表达研究

目的检测急性白血病Ki-67的表达,探讨细胞增殖在白血病发生中的作用.方法运用免疫组织化学技术检测Ki-67在25例急性白血病患者骨髓组织切片上的Ki-67表达,以良性血液病患者作为正常对照组.结果 25例急性白血病Ki-67表达水平[(34.18±17.20)%]明显高于对照组[(12.17±6.23)%,P<0.01];急性淋巴细胞性白血病的Ki-67表达[(31.19±14.25)%]与急性非淋巴性白血病[(36.28±11.87)%,P>0.05]无差异;缓解的白血病患者Ki-67水平接近对照组.结论增殖作用增强可能在白血病发生发展中起重要作用,Ki-67可作为细胞增殖的良好标志.     

急性淋巴细胞性白血病DNA含量与细胞增殖活性的临床意义

目的　探讨DNA检测对急性淋巴细胞性白血病 (ALL)诊断和治疗的临床意义。方法　应用流式细胞术检测了 35例急性淋巴细胞性白血病患者骨髓细胞DNA含量 (DI)、倍体和细胞增殖活性 (PI)。结果　ALL异倍体检出率为 5 1 4 % ( 18 35 ) ,其中亚二倍体 8例 ,超二倍体 10例 ;ALL组骨髓细胞G0 G1%高于对照组 (P <0 0 5 ) ,而S %、PI值明显低于对照组 (P <0 0 5 )。结论　DNA含量检测和倍体分析对急性淋巴细胞性白血病的诊断、治疗是很有价值的临床生物学指标 ,有助于白血病的准确、客观诊断和判断预后     

儿童急性淋巴细胞白血病细胞诱导前后增殖性抗原的表达研究

用免疫荧光法结合流式细胞术对TPA和rIL-2体外诱导的儿童急性淋巴细胞白血病细胞进行诱导前后的CD25,CD34,CD71,Ki-67和PCNA等细胞增殖性抗原的表达检测,发现CD25和CD71的表达改变不明显,CD34,Ki-67和PCNA在诱导后的白血病细胞中,其表达率明显降低。我们认为TPA和rIL-2能诱导白血病细胞增殖活力的降低,对其增殖性抗原CD34,Ki-67和PCNA的检测是观察白血病细胞向成熟细胞分化的敏感性生物学指标。     

CD3~+CD56~+NKT样细胞在急性白血病患者体内表达的研究

目的探讨CD3+CD56+NKT样细胞在急性白血病患者治疗前后体内的表达情况。方法分别取急性白血病(急性髓系白血病43例,急性淋巴细胞白血病12例,急性混合细胞白血病5例)及非恶性肿瘤(10例)患者骨髓血2ml送流式细胞仪检测,比较白血病患者治疗前后及非恶性肿瘤患者体内CD3+CD56+NKT样细胞的表达情况。结果急性白血病患者初治组与非恶性肿瘤患者对照组间比较,急性白血病患者骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比对照组低(P0.01);急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比治疗前高(P0.01),且与缓解程度及时间呈正相关;急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例与非恶性肿瘤对照组比较无统计学意义(P0.05);不同类型白血病之间,急性早幼粒细胞白血病治疗后CD3+CD56+NKT样细胞比例明显较其他类型高(P0.05),急性髓系白血病(除M3外)与急性淋巴细胞白血病之间比较CD3+CD56+NKT样细胞比值结果比较无统计学意义(P0.05)。结论急性白血病患者CD3+CD56+NKT样细胞反映了机体的免疫功能,化疗后CD3+CD56+NKT样细胞明显增多可能是预后较好的标志之一。     

急性白血病患者T、B淋巴细胞的检测与分析

目的:探讨不同类型的急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞等在疾病的不同时期的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测95例初诊白血病患者[急性淋巴细胞白血病(ALL)43例,急性髓系白血病(AML)52例]诱导治疗前后及50例正常对照者外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞、NK细胞及Treg细胞百分比。结果:初诊白血病各组CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、NK细胞阳性率和CD4~+/CD8~+比值均明显低于正常对照组(P0.05),治疗后完全缓解患者的上述指标均明显高于治疗前(P0.05)。初诊白血病各组患者Treg细胞阳性率均高于正常对照组(P0.01),AML和ALL治疗组完全缓解患者Treg细胞阳性率较治疗前有所降低(P0.05)。AML初诊组CD3-CD19~+细胞阳性率明显低于正常对照组(P0.01),ALL初诊组CD3-CD19~+细胞阳性率高于正常对照组(P0.01);治疗后AML组缓解患者CD3-CD19~+细胞阳性率高于治疗前(P0.05),ALL组缓解患者CD3-CD19~+细胞阳性率明显低于治疗前(P0.01);ALL治疗后未缓解者CD3-CD19~+细胞阳性率明显低于治疗前(P0.01);ALL治疗后未缓解者的其余各项指标及AML治疗后未缓解者各项指标与治疗前比较无统计学差异。结论:初诊白血病各组T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞的变化明显,完全缓解组的上述指标基本恢复正常,说明T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞、NK细胞水平检测在评价急性白血病严重程度、疗效及判断患者预后有一定的临床价值。     

儿童肿瘤及急性白血病中ICAM-1(CD54)的表达及在CIK细胞免疫治疗中的临床意义

本研究旨在探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1,CD54)在初诊儿童肿瘤及急性白血病细胞上的阳性表达率,以了解其分布规律及其临床意义。采用免疫组织化学方法检测46例儿童实体瘤的病理组织切片ICAM-1的阳性率,通过流式细胞仪检测60例儿童急性白血病细胞上ICAM-1的阳性率。儿童实体瘤包括淋巴瘤10例,肝母细胞瘤3例,神经母细胞瘤6例,横纹肌肉瘤2例,尤文氏肉瘤6例,纤维肉瘤2例,原始神经外胚层肿瘤5例,肾母细胞瘤11例,骨肉瘤1例;急性白血病包括急性淋巴细胞白血病(ALL)20例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL)40例(M1 6例、M2 7例、M3 7例、M4 15例、M5 5例)。结果表明,儿童肿瘤组中3例肝母细胞瘤ICAM-1全部阳性,而在淋巴瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤及尤文氏肉瘤阳性率不高,纤维肉瘤、肾母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤患儿中未见ICAM-1表达。急性白血病组中ALL的ICAM-1阳性率为55%,ANLL的M1、M2、M3型ICAM-1的阳性率为65%,M4、M5型为50%。结论:ICAM-1在儿童肿瘤、急性白血病细胞上的表达呈一定变异性,其在肝母细胞瘤及ANLL(M1、M2和M3)上阳性率高,而在纤维肉瘤、肾母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤等中不表达。     

儿童和成人急性淋巴细胞白血病中Ki-67和Bcl-2表达的临床意义

为了观察Ki-67和Bcl-2在儿童和成人ALL中的表达，探讨其与ALL免疫学分型和临床疗效的关系，用链霉菌抗生物素蛋白-碱性磷酸酶（SAP）免疫组织化学染色的方法，对18例儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）和43例成人声ALL患者的骨髓或外周血进行Ki-67抗原和Bcl-2蛋白的检测。结果表明：Ki-67抗原在儿童ALL中的表达略低于成人ALL，但差异无显著性（P〉0．05）；而Bcl-2蛋白在儿童ALL中的表达显著低于成人ALL（P〈0．05）；在儿童和成人ALL上各免疫表型中，T细胞、伴有髓系抗原标记的急性淋巴细胞白血病（My^＋ALL）的Ki-67阳性表达率显著高于成人（P〈0．05）；儿童和成人ALL的完全缓解率（CR）在Ki-67和Bcl-2两项同时低表达组中最高，仅一项低表达组中次之，两项均高表达组中最低。结论：对儿童和成人ALL患者进行增殖相关抗原Ki-67和抗凋亡蛋白Bcl-2的检测，能反映患者肿瘤细胞的增殖活性和凋亡抑制情况，硒-67和Bcl-2的表达与白血病ALL类型和临床疗效密切相关。     

急性白血病患者周期蛋白D1mRNA表达及其临床意义

目的　检测急性白血病患者周期蛋白 (cyclin)D1mRNA的表达 ,并探讨其与临床的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 6 5例急性白血病患者及 5名正常人骨髓细胞cyclinD1mRNA。结果　正常骨髓未检测到cyclinD1mRNA表达 ;急性白血病患者阳性率 2 6 2 % ,急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病之间差异无显著性 ;复发组患者的cyclinD1mRNA阳性率 (6 3 6 % )明显高于初治组 (2 1 4% )及缓解组 (8 3% )。结论　急性白血病患者中有cyclinD1mRNA过度表达的情况 ,且与临床复发关系较为密切。     

神经毡蛋白-1在急性髓系白血病细胞中的表达和作用

本研究旨在探索神经毡蛋白(neuropilin-1,NRP-1)和NRP-2在髓系白血病细胞中的表达及抑制NRP-1基因表达后对白血病细胞生长和迁移的影响.采用RT-PCR观察NRP-1和NRP-2 mRNA在24例急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(MNC)及7种髓系白血病细胞系中的表达;以小干扰RNA(siRNA)干扰NRP-1基因在HEL细胞的表达,用MTT和细胞迁移试验观察细胞增殖、迁移的变化.结果显示NRP-1在24例AML患者骨髓MNC中表达,其阳性率为100%,显著高于正常对照组67%(p=0.03).79%AML患者表达NRP-2,67%正常人表达NRP-2,两者无明显差异(p=0.6).NRP-1的表达与AML患者骨髓、外周血原始细胞比例呈正相关(r=0.5,r=0.4,p＜0.05).NRP-1和NRP-2 mRNA分别在6/7和3/7种髓系白血病细胞系表达.用siRNA转染HEL细胞24小时后NRP-1 mRNA和蛋白表达水平明显降低,当有VEGF165作用时,对照组细胞增殖明显增加,而干扰组无变化(MTT值对照组vs干扰组0.6±0.01 vs 0.49±0.02,p＜0.001).转染24小时后干扰组细胞迁移显著降低,其迁移细胞数干扰组vs对照组为500±17 vs 123±7(p＜0.001).结论NRP-1在AML患者骨髓MNC中表达增高,并在髓系白血病细胞的增殖和迁移中起重要作用.     

β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达及其意义

为了探讨β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达及其意义,应用流式细胞术和免疫组织化学染色两种方法,检测了20例初治急性白血病患者骨髓细胞β-连环蛋白的表达水平,同时用免疫组织化学染色方法检测了上述细胞的细胞增殖指数Ki-67的表达水平.结果表明：与对照组相比,β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达明显升高（P＜0.05）,并出现由胞浆向胞核转位;Ki-67在急性白血病骨髓细胞的表达也明显升高（P＜0.05）,β-连环蛋白的表达与Ki-67的表达有明显的正相关（Pearson相关系数r=0.845）.结论：β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达明显增高,并与细胞增殖有关,提示β-连环蛋白可能通过促进细胞异常增殖参与急性白血病的发病.     

Pretreatment of cytokinetics in acute myelogenous leukemia. Age-related prognostic implications.

To determine the clinical and biologic relevance of cellular kinetics in leukemia, DNA flow cytometric analysis was performed on bone marrow biopsy specimens from 148 previously untreated adult patients with acute myelogenous leukemia. The proportion of cells in synthesis, second growth, and mitosis (S + G2M) ranged from 4% to 33% with a median of 14%. The overall incidence of complete remission was not affected by the pretreatment cell cycle distribution. As in earlier studies, there was a marked decline in remission rate with advancing age from 73% for patients age less than or equal to 50 yr to 50% for those greater than 50 (P less than 0.01). Although not affecting remission induction overall, an increasing proportion of cells in S + G2M phase was favorable in patients under the age of 50 yr, but was associated with a progressive decline in remission rate in older patients (P = 0.01). This age-related divergent effect of cell cycle kinetics on initial response to therapy was confined to the less favorable subgroup of patients with karyotypic abnormalities, whereas patients with normal diploid cytogenetics had a consistently higher response rate regardless of proliferative activity. A positive correlation was also observed between percent of S + G2M cells and the proportion of diploid metaphases in young patients, contrasting with a negative correlation in the older age group. Our observations strongly suggest that the well-recognized prognostic effect of age on remission induction is not entirely host-mediated, but is at least partly an expression of disease-intrinsic differences between young and older patients.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞周期及CD34+细胞增殖特征的研究

目的　探讨骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓细胞周期分布及CD34 细胞增殖特征。方法　碘化丙锭细胞核染色分析MDS、MDS转化的急性髓系白血病 (MDS AML)和原发性AML患者骨髓G0 /G1期、S期和G2 /M期细胞比例 ;免疫荧光双标法分析 3组患者骨髓CD34 细胞中增殖性抗原Ki6 7的表达。结果　与正常组相比 ,MDS患者和原发性AML患者骨髓单个核细胞 (BMM NC)G0 /G1期细胞比例呈明显增高趋势 [(92 .4 8± 4 .4 8) %、(96 .71± 2 .75 ) %对 (86 .94± 6 .77) % ](P<0 .0 5 ) ,而MDS组与正常组相比 ,S期和G2 /M期比例呈明显降低趋势 [(6 .79± 3.98) %、(0 .86±0 .82 ) %对 (11.97± 7.0 0 ) %、(1.10± 0 .98) % ](P值均 <0 .0 5 )。MDS AML患者与原发性AML相比 ,G0 /G1期细胞为 (91.16± 7.0 9) %对 (96 .71± 2 .75 ) % ,S期为 (7.90± 6 .70 ) %对 (2 .87± 2 .4 9) %、G2 /M期为 (0 .96± 0 .99) %对 (0 .4 3± 0 .4 2 ) % ,S G2 /M期为 (8.84± 7.0 9) %对 (3.34± 2 .83) % (P值均 <0 .0 5 )。MDS患者骨髓CD34 Ki6 7 细胞明显高于正常组 [(1.13± 1.10 ) %对 (0 .2 4±0 .2 2 ) % ](P <0 .0 1) ,MDS低危组患者CD34 Ki6 7 细胞为 (0 .5 4± 0 .4 9) % ,明显低于高危组 [(1.6 9± 1.6 6 ) % ](P <0 .0     

蛋白酶体抑制剂可增加足叶乙甙对白血病细胞系M-07e和TF-1的凋亡诱导效应

近年来的研究显示泛素—蛋白酶体通路在细胞凋亡调控中发挥了重要的作用。本实验就蛋白酶体抑制剂Z—LLL—CHO与经典的凋亡诱导剂足叶乙甙(VP16)对白血病细胞系M—07e及TF—1的联合效应进行了初步研究。应用MTT法及台盼蓝拒染法显示Z—LLL—CHO及VP16联合作用于M—07e及TF—1细胞。可增强两种药物单独的细胞杀伤效应。流式细胞术检测提示单独应用Z—LLL—CHO及VP16均可使S G2／M期细胞比例增加，两联合应用导致细胞凋亡峰比例的显增高。通过对M—07e细胞裂解物做免疫印迹检测．发现在Z—LLL—CHO及VP16单独作用中均导致Bcl—2蛋白被酶解为22kD的片段，而联合作用时Bcl—2的酶解现象具有叠加效应。结论：Z—LLL—CHO与VP16联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性。细胞周期S G2／M期比例的增加及Bcl—2酶解片段的增加是导致蛋白酶体抑制剂Z—LLL—CHO及VP16对白血病细胞系联合效应的可能机制。     

急性白血病细胞端粒酶活性与细胞周期的关系

本研究探讨急性白血病细胞端粒酶活性与细胞周期的关系。采用聚合酶链反应 酶联免疫吸附法 (PCR ELISA)检测了 14 8例急性白血病病人和 36例正常对照的细胞端粒酶活性 ,其中急性非淋巴细胞白血病 (ANLL) 92例 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 5 6例 ;同时对 16例急性白血病患者和 4例正常对照用流式细胞术测定了细胞周期。结果发现 :①急性白血病患者细胞的端粒酶阳性率为 71.6 % (10 6 14 8) ,显著高于对照组 5 .6 % (2 36 ) ,其中复发组患者端粒酶阳性率为 88.9% (32 36 ) ,初治组 81.3% (6 1 75 ) ,二者显著高于完全缓解组 35 .1% (13 37) ,P <0 .0 5。ANLL 92例 ,端粒酶阳性率为 71.7% (6 6 92 ) ,ALL 5 6例 ,端粒酶阳性率为 71.4 % (40 5 6 ) ,二者之间无显著性差异。②端粒酶阳性组与阴性组细胞周期各期细胞数无显著性差异。结论 :端粒酶激活在急性白血病中极为普遍 ,且端粒酶阳性率的高低与急性白血病病期相关 ,它可能是急性白血病发展过程中白血病细胞增殖旺盛的分子标志。端粒酶活性的表达与各期细胞数无明显相关 ,提示端粒酶活性的表达还受其它生物学因素的调控。     

急性白血病骨髓基质细胞肿瘤坏死因子α分泌活性及其意义

目的：探讨急性白血病（ＡＬ）骨髓基质细胞肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）分泌活性。方法：应用体外骨髓基质细胞培养法及ＴＮＦα生物活性检测法，对ＡＬ患者２０例及正常对照者１０名的骨髓基质细胞培养上清中的ＴＮＦα活性水平进行检测，并同步检测了患者血清、骨髓白血病细胞培养上清中的ＴＮＦα活性。结果：ＡＬ骨髓基质细胞形成能力较差，但其ＴＮＦα活性明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）；少部分急性髓系白血病（ＡＭＬ）骨髓白血病细胞能自发分泌ＴＮＦα；患者血清中的ＴＮＦα活性显著高于正常对照（Ｐ＜０．００１）。结论：ＡＬ患者骨髓基质细胞存在量和质的异常，ＴＮＦα的异常分泌可能是导致ＡＬ增殖的一个重要因素