染矽尘大鼠肺匀浆TGF-β1和TNF-α的变化

目的探讨染矽尘大鼠肺匀浆TGF-β1和TNF-α的变化.方法采用一次性气管内注入矽尘方法建立动物模型.称量法测定脏器系数,过氧化氢方法测定胶原含量.采用ELISA测定肺匀浆TGF-β1和TNF-α蛋白浓度.结果实验过程中,实验组TGF-β1在染尘后第7天显著低于对照组(P＜0.01),而第14天显著高于对照组(P＜0.05),其他时点,差异无显著性.TNF-α在染矽尘后第14天显著升高(P＜0.05),而在14 d后显著性降低(P＜0.01).TGF-β1与肺胶原含量呈显著相关(r=0.435,P=0.009),而TNF-α与肺胶原含量之间无相关(r=0.108,P＞0.05).结论矽尘可导致大鼠肺TGF-β1和TNF-α的变化,TGF-β1可能介导矽肺的肺胶原合成.     

染尘大鼠Ⅰ和Ⅲ型胶原与相关细胞因子含量的变化关系

目的探讨IL-1β、TNF-α及TGF-β1在染尘矽肺大鼠肺组织内的变化和对Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响。方法将50只大鼠随机分为对照组、染尘组,各组于1、7、14、21、28d5个时间点分别取5只大鼠,采用气管暴露法建立大鼠矽肺模型;分别进行HE常规染色、天狼猩红染色并用Image-pro Plus Version 4.5 for WindowsTM图像分析系统进行Ⅰ、Ⅲ型胶原定量分析;肺组织内IL-1β、TNF-α、TGF-β1测定采用悬浮芯片蛋白测定法。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原分别在第14天和第7天开始急剧增高;染尘组肺组织IL-1β的浓度在第1天达到高峰;TNF-α的表达量持续增加,在第14天出现峰值;TGF-β1第14天表达量增加并达峰值;回归分析结果显示IL-1β表达水平下降和TNF-α表达水平升高可能直接或间接导致Ⅰ型胶原的增加;IL-1β表达水平下降、TGF-β1表达水平升高可能直接或间接导致Ⅲ型胶原的增加。结论矽尘可以诱导肺组织过度表达Ⅰ、Ⅲ型胶原,并且IL-1β、TNF-α及TGF-β1可以直接或间接地增加胶原含量。     

大鼠血清硅元素水平与转化生长因子-β1及肿瘤坏死因子-α的比较

目的探讨血清硅元素水平在矽肺发病机制中的意义和用于矽肺早期诊断的价值。方法采用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测矽肺模型大鼠血清中硅元素水平,同时采用免疫组织化学-SP法观察转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠矽肺模型肺组织的表达。结果矽肺模型大鼠染尘后血清硅元素水平明显增高,1d内增长高峰为16h;其后的7、14、21和28d,其水平亦显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠染尘后肺组织TGF-β1表达与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表达高峰是染尘后的第7天;TNF-α表达与对照组比较,在染尘后的7、14、21和28d显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),表达高峰为染矽尘后的第21天。结论矽肺模型大鼠血清硅元素水平早期即明显升高且早于TGF-β1、TNF-α的表达,血清硅元素水平变化可以作为矽肺的早期诊断指标。     

坎地沙坦对染尘大鼠肺纤维化的影响

目的 观察坎地沙坦对染尘大鼠矽肺形成过程中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肺纤维化及细胞因子的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为模型组、干预组、对照组,每组32只.干预组每天灌胃坎地沙坦10 mg/kg,模型组和对照组同法给予等量生理盐水;灌胃1周后,模型组和干预组水合氯醛腹腔注射麻醉,将0.5 ml矽尘混悬液(浓度为50 mg/ml)缓慢注入气管,对照组大鼠气管内注入0.5 ml灭菌生理盐水.染尘后第2天,各组大鼠恢复先前的处理后第3、7、14、28天各处死大鼠8只.计算肺脏系数并进行肺组织HE及Masson染色观察;用免疫组化方法测定肺组织血管紧张素转化酶(ACE)表达水平;用ELISA测定肺泡灌洗液中转化生长因子β1(TGF-β1)及AngⅡ含量.结果 干预组大鼠第3、7、14、28天肺泡炎症和纤维化程度均较模型组明显减轻,干预组大鼠肺脏系数明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,模型组和干预组肺泡灌洗液中TGF-β1和Ang Ⅱ含量均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,干预组肺泡灌洗液中TGF-β1和Ang Ⅱ含量均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).模型组和干预组肺组织ACE表达明显高于对照组,干预组肺组织ACE表达明显低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 早期使用坎地沙坦干预能够明显减轻染尘大鼠的肺组织炎症和肺纤维化程度,降低肺泡灌洗液中的TGF-β1和AngⅡ含量,下调肺组织中ACE表达.     

NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号轴在矽肺肺纤维化大鼠模型中的表达及意义

目的探讨NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号轴在矽肺肺纤维化大鼠模型中的表达情况及意义。方法选择健康SPF级Wistar雄性大鼠80只,随机分为4组,分别为高(100 mg/ml)、中(50 mg/ml)、低(25 mg/ml)浓度SiO2染尘组和正常对照组,每组20只。各组分别在SiO2染尘后7 d、14 d、28 d、56 d处死5只大鼠,观察肺组织肺泡炎程度及肺纤维化程度,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织中IL-1β、IL-18、TGF-β1含量,Western Blot法检测大鼠肺组织中NLRP3、Caspase-1蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,各染尘组大鼠7 d、14 d、28 d、56 d的肺泡炎评分、纤维化程度明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与正常对照组比较,各染尘组大鼠7 d、14 d、28 d、56 d的IL-1β、IL-18、TGF-β1浓度明显升高(P<0.01);与正常对照组比较,各染尘组大鼠肺组织中NLRP3、Caspase-1蛋白表达在7 d、14 d、28 d、56 d均升高(P<0.01);低、中、高浓度SiO2染尘组内NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18和TGF-β1表达量在7 d、14 d和28 d间两两比较,差异均有统计学意义(P<0. 05),均呈随着染尘时间的增加而升高的时间-效应关系。结论NLRP3及其下游因子Caspase-1、IL-1β、IL-18、TGF-β1在矽肺肺纤维化大鼠模型肺组织中高表达,提示NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号轴可能与矽肺肺纤维化有密切的关系,在矽肺形成过程中发挥了作用。     

染矽尘大鼠肺组织过氧化物还原酶Ⅰ蛋白表达的变化

目的 检测染矽尘大鼠肺纤维化过程中过氧化物还原酶Ⅰ (peroxiredoxin,Prx Ⅰ)蛋白表达的变化,探讨Prx Ⅰ在肺纤维化中的作用.方法 通过非气管暴露法复制大鼠矽肺模型,90只雄性Wistar大鼠随机分成对照组(60只)和实验组(30只).对照组经气管灌注1ml生理盐水,实验组同法灌注二氧化硅粉尘悬液(50 mg/ml).经不同处理后第1、2、3、4、6和8周分别处死对照组10只和实验组5只大鼠,取出肺组织常规病理观察;用免疫组化及免疫蛋白印迹法(Western blot)检测不同时间点PrxⅠ蛋白的动态变化.结果 PrxⅠ蛋白主要分布于染矽尘大鼠肺泡间隔、肺泡上皮细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞和血管及气管周围的平滑肌细胞的细胞质中,呈棕黄色颗粒.对照组PrxⅠ蛋白弱表达,各时间点染矽尘组Prx Ⅰ蛋白的表达均高于对照组,染尘1、2周时表达明显上调,3～8周时PrxⅠ蛋白表达下降,染矽尘组PrxⅠ蛋白表达与对照组的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PrxⅠ蛋白的变化可能是游离二氧化硅致大鼠肺纤维化发生发展的重要原因之一.     

五味子乙素对染矽尘大鼠肺组织转化生长因子β1信号转导通路分子mRNA表达的影响

目的 观察五味子乙素(sehisandrin B,Sch-B)对染矽尘大鼠肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)信号通路分子mRNA表达的影响,探讨其防治矽肺纤维化的作用及机制.方法 将96只Wistar大鼠随机分为对照组、染矽尘组、Sch-B干预组,每组32只,气管暴露法一次性染尘建立大鼠矽肺模型,染矽尘组和Sch-B干预组每只大鼠气管内注入1 ml(50 mg/ml)SiO2混悬液,对照组注入1 ml灭菌生理盐水.染尘后第1天开始灌胃干预,Sch-B组给予Sch-B(80mg·kg-1/d-1),染矽尘组和对照组给予等体积的橄榄油.不同处理3、7、14和28 d后,各组处死8只大鼠,对肺组织HE染色观察病理改变;用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定大鼠肺组织中TGF-β1、转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)和Smad4基因表达.结果 染矽尘组肺损伤明显,在3和7 d时表现为明显的肺泡炎,可见肺泡间隔水肿,大量炎性细胞浸润,在14d时,肺泡间隔明显增宽,成纤维细胞和胶原基质明显增多;在28 d时,肺泡结构破坏,肺泡壁明显增厚,肺组织以胶原沉积和肺纤维化改变为主.Sch-B组肺泡炎和肺纤维化程度均较染矽尘组明显减轻.染矽尘组3、7、14、28 d时大鼠肺内TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的mRNA表达(TGF-β1:1.03±0.31、1.33±0.39、1.08±0.26、0.82±0.16,TGF-βRⅡ:0.65±0.11、0.80±0.16、0.83±0.24、0.62±0.15,Smad4:0.87±0.15、0.68±0.11、0.78±0.19、0.30±0.08)均明显高于对照组(TGF-β1:0.59±0.22、0.55±0.25、0.56±0.20、0.55±0.12,TGR-βRⅡ:0.28±0.13、0.31 ±0.15、0.34±0.15、0.27±0.09,Smad4:0.23±0.11、0.40±0.12、0.39±0.12、0.18±0.06),差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),其中TGF-β1在第7天时达高峰后开始下降.Sch-B干预组各时间点TGF-β1和Smad4(TGF-β1:0.68±0.28、0.88±0.25、0.75±0.11、0.61±0.14,Smad4:0.25±0.12、0.45±0.09、0.44±0.07、0.21±0.04)均低于染矽尘组,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).与染矽尘组相比,Sch-B干预组TGF-βRⅡmRNA表达无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Sch-B能减轻染矽尘大鼠肺组织的纤维化程度,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1和Smad4的mRNA表达上调,从而干扰TGF-β1/Smad4信号通路对靶基因的激活来实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effects of schisandrin B (Sch-B) on expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and signal transduction molecule mRNA in rat lungs exposed to SiO2,and explore the intervention mechanism of Sch-B on pulmonary fibrosis induced by SiO2. Methods Ninety six Wistar rats were randomly divided into control (normal saline) group, SiO2 group and SiO2 plus Sch-B group.The rats were exposed to SiO2 by direct tracheal instillation to establish the silicotic animal models. SiO2 group and SiO2 plus Sch-B group were treated with 1ml SiO2 (50 mg/ml) for each rat From the first day after model establishment, SiO2 plus Sch-B group were orally given Sch-B (80 mg/kg) a day, control group and silica group were orally given olive oil. On the 3rd, 7th,14th and 28th days after treatment, 8 rats in each group were sacrificed and samples were collected. The histo-pathological examination of lung was performed by HE staining. The expression levels of TGF-β1 、TGFβR Ⅱ and Smad4 mRNA in the lung tissues were detected by RT-PCR. Results The results of histo-pathological examination showed that in SiO2 group, lung tissues were injured obviously; the alveolar inflammation with alveolus interval edema and inflammation cell infiltration appeared on the 3rd and 7th days; the alveolus interval became thicker, became thicker, fibroblast and collagen matiix increased markedly on 14th day; the alveolar structure was damaged, alveolar wall thickened obviously,collagen aggradation and pulmonary fibrosis displayed on 28th day. The alveolar inflammation and pulmonary fibrosis in SiO2 plus Sch-B group were significantly less than those in SiO2 group. The expressions levels of TGF-β1、TGFβR Ⅱ and Smad4 mRNA (TGF-β1: 1.03±0.31 、1.33±0.39、1.08±0.26、0.82±0.16,TGF-βR Ⅱ:0.65 ±0.11、0.80 ±0.16、0.83 ±0.24、0.62 ±0.15, Smad4: 0.87 ±0. 15、0.68 ±0.11、0.78 ±0.19、0.30 ±0.08) in SiO2group were significantly higher than those in the control group (TGF-β1:0.59±0.22、0.55 ±0.25、0.56±0.20、0.55 ±0.12,TGR-βR Ⅱ:0.28 ±0.13、0.31 ±0. 15、0.34 ±0.15、0.27 ±0.09,Smad4:0.23 ±0.11、0.40 ±0. 12、0.39 ±0.12、0.18±0.06)(P＜0.01 or P＜0.05), but the expression level of TGF-β1 mRNA was the highest on the 7th day. The expression levels of TGF-β1 and Smad4 mRNA (TGF-β1: 0.68 ±0.28、0.88 ±0.25、0.75 ±0.11、0.61 ±0. 14,Smad4:0.25 ±0.12、0.45 ±0.09、0.44 ±0.07、0.21 ±0.04) in SiO2 plus Sch-B group were significantly lower than those in SiO2 group (P＜0.01 or P＜0.05),but there were no significant differences of the TGFβR Ⅱ mRNA expression levels between SiO2 group and SiO2 plus Sch-B group. Conclusion Sch-B can reduce the pulmonary fibrosis induced by SiO2 through inhibition of the mRNA express of TGF-β1 and Smad4 in the lung tissue, modulating the TGF-β1/Smad4 signal transduction pathway and inhibiting the target gene activation.     

矽肺模型大鼠血清中细胞因子消长规律的探讨

目的检测矽肺模型大鼠血清中细胞因子IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β的规律,探讨细胞因子在肺纤维化过程中的作用。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分成对照组和实验组,每组30只;实验组经气管灌注1 ml游离二氧化硅粉尘悬液(100 mg/ml),对照组同法灌注等量生理盐水;分别于第1、7、14、21、28天,各组6只大鼠心脏取血,处死,并取肺组织。肺组织行HE染色,观察肺部炎症、纤维化等病理变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β的含量。结果染尘大鼠血清IL-1含量均高于对照组,但不同时间,差别不明显;染尘第1、7、14天的IL-8含量均高于对照组,随着染尘时间增加,IL-8含量则渐回归正常;染尘第1、7天;TNF-α含量低于对照组;第14、21、28天TNF-α含量则高于对照组(P<0.05),染尘不同时间TNF-α含量也不同(F=30.724,P=0.001);血清TGF-β的波动则较明显,如染尘第1、7天其含量高于对照组,第14天则低于对照组,第21、28天又高于对照组(P<0.05),染尘不同时间的TGF-β含量也不同,差异具有统计学意义(F=33.236,P=0.001)。结论细胞因子IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β在染尘不同时间血清中的含量不同,其分泌的变化可能与染尘大鼠肺纤维化发生、发展有关。     

染矽尘小鼠肺组织中转化生长因子β1表达的逆转录聚合酶链反应检测

目的　探讨染矽尘小鼠肺组织转化生长因子 β1(TGF β1)基因的表达在矽肺发病中的意义。方法　采用暴露式气管内注入法给小鼠一次性染矽尘 (0 .2g/kg体重 ) ,染尘后第 1、3、5、7、14、2 8天 ,每组各处死 8只小鼠 ,取肺组织 ,用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)方法测定小鼠肺组织TGF β1基因的表达。结果　染尘后第 3天 ,小鼠肺组织中TGF β1基因表达开始升高 (1.2 0± 0 .15 ) ;第 7天达高峰 (1.74± 0 .19) ,与对照组 (1.0 1± 0 .16 )和染尘第 5天 (1.35± 0 .15 )比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;第 14天开始下降 ,但直到第 2 8天仍高于对照组。染矽尘小鼠肺组织羟脯氨酸含量随染毒后时间的延长 (1～ 2 8d)呈现持续上升的趋势。结论　TGF β1在矽肺早期的发生、发展过程中可能有重要作用。     

两种矽肺造模方法比较

目的 比较两种矽肺造模方法的优劣,并探讨一次性气管滴注法造模的最佳时间。方法 口鼻暴露染尘小鼠20只,气管滴注染尘小鼠20只,分别于染尘后第7、14、21、28天处死;对照组小鼠5只,正常饲养28d处死。检测各时间节点小鼠肺湿重、脏器系数、肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,并观察肺组织病理改变。结果 口鼻暴露法染尘21、28d小鼠肺湿重及脏器系数,7、14、21、28d小鼠肺纤维化评分,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),染尘28d小鼠肺组织形成矽结节;气管滴注染尘后第14、21、28天小鼠肺湿重、脏器系数,第28天小鼠HYP含量,第7、14、21、28天小鼠肺纤维化评分,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),染尘后第21天形成多个矽结节,第28天矽结节融合成大片状。结论 暴露法染尘28d小鼠开始形成矽结节,滴注法染尘后第21天小鼠即可完成矽肺造模。     

原花青素对矽尘致大鼠肺组织转化生长因子-β1和热休克蛋白47表达的抑制作用

目的探讨原花青素(proanthocyanidins,PC)对染尘大鼠肺纤维化进程的具体作用。方法 SPF级SD大鼠96只,随机分为对照组、矽肺组、PC低剂量组、PC高剂量组,每组24只;采用气管内注射SiO2悬液方法复制大鼠矽肺模型。染尘后第2天PC低剂量组按50 mg/(kg.d)灌胃给予PC,PC高剂量组按500 mg/(kg.d)灌胃给予PC,矽肺组和对照组则给予等容生理盐水。给药开始后第14、28、60天时每组随机处死8只大鼠;应用免疫组化法观察肺组织TGF-β1、HSP47的表达,并检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与对照组比较,大鼠在染尘14、28和60 d时,血清中SOD的活力明显下降,60 d时尤为显著;此外,肺组织中TGF-β1和HSP47的表达增加,且随染尘时间增加呈现上升趋势。应用高剂量PC干预后,血清中SOD活性增加(P<0.05),在染尘60 d时,上升到251.36 U/ml(矽肺组为181.32 U/ml);PC干预组肺组织中TGF-β1和HSP47表达的升高趋势(P<0.05)亦见恢复,染尘60 d时,PC高剂量组肺组织中TGF-β1和HSP47的表达分别为24....     

染矽尘小鼠肺组织中转化生长因子β1表达的免疫组织化学检测

目的　观察染矽尘小鼠肺组织转化生长因子 β1(TGF β1)蛋白水平的改变 ,研究其在矽肺发病中的意义。方法　采用暴露式气管内注入法给小鼠一次性染矽尘 (0 .2g/kg)。染尘后第 1、3、5、7、14、2 8天每组各处死 8只小鼠 ,取肺组织 ,用免疫组织化学技术检测TGF β1在小鼠肺组织蛋白水平的表达。结果　对照组小鼠肺组织中免疫组化染色呈弱阳性 (± ) ,可见少量TGF β1蛋白 ;染尘组小鼠肺TGF β1表达明显增强 ,免疫组化染色结果为 +～ +++,染尘后第 7～ 14天达高峰。染尘组小鼠肺出现TGF β1表达阳性肺泡巨噬细胞 ,第 5天达高峰 ,其阳性肺泡巨噬细胞百分率为 93.4 %± 2 .8% ,与对照组 (42 .2 %± 12 .0 % )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　TGF β1在矽肺早期的发生、发展过程中可能有重要作用。     

NK及NKT细胞在矽尘致大鼠肺纤维化外周血中的动态变化

目的探讨NK及NKT细胞在矽尘致大鼠肺纤维化外周血中的动态变化及临床意义。方法无特定病原体级健康成年Wistar大鼠70只,随机分成两组,每组各35只,实验组采用非暴露式经气管染尘法制备矽肺动物模型,对照组注入等体积的生理氯化钠溶液,分别于染尘后第l、3、7、14、28天各处死7只,采集外周血,用流式细胞术检测大鼠外周血中NK(CD3-/CD56+)及NKT(CD3+/CD56+)细胞的百分率。结果 NK细胞在实验组外周血的频率从染尘后的第1天开始就有所上升,于染尘后的第14天达到高峰,明显高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);NKT细胞在实验组外周血的频率从染尘后的第1天开始与对照组比较明显下降,差异有统计学意义(P0.05);随后呈现上升趋势,并于第14天达到高峰,但仍低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 NK及NKT细胞在矽尘所致的肺纤维化中起一定的作用,可以作为阐明矽肺的免疫机制的1项免疫指标。     

川芎嗪对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的观察川芎嗪对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法将大鼠随机分为对照组、染矽尘组、川芎嗪组,采用一次性气管内注入矽尘法建立矽肺动物模型,川芎嗪组每日腹腔注射川芎嗪注射液50mg/kg。染尘后按不同时间点取大鼠肺组织制作石蜡切片,采用天狼猩红染色结合偏振光显微镜观察Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,ImageProPlus图像分析系统进行定量分析。结果染矽尘后第3天,Ⅲ型胶原开始增生,染矽尘后第7天,Ⅰ型胶原开始增生,直至染矽尘后第28天,这两种胶原进行性增加。与对照组相比,各时间点染矽尘组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原面积百分比均有不同程度增加,而川芎嗪组Ⅰ型胶原面积百分比在第7、14、28天,Ⅲ型胶原面积百分比在第28天时明显低于染矽尘组。结论矽尘可以诱导大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,两型胶原出现增生的时相有所不同;川芎嗪可以抑制矽尘诱导的Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成。     

铀矿尘对大鼠肺组织及血浆中转化生长因子-β1和一氧化氮水平影响

目的探讨铀矿尘致大鼠肺纤维化过程中,肺组织和血浆中转化生长因子-β1(TGF-β1)、一氧化氮(NO)水平变化。方法 60只成年Wistar大鼠,随机分为铀矿尘组与对照组。采用一次性非暴露式气管灌注法,铀矿尘组一次性气管内灌注质量浓度为20 g/L铀矿粉尘悬液1 ml,对照组一次性气管内灌注生理氯化钠溶液1 ml。每组分别于染尘后第7、14、21、30及60天随机处死6只动物,取周围血及肺组织。肺组织形态学观察采用HE染色法;肺组织及血浆中TGF-β1水平的测定采用酶联免疫吸附法(ELISA法);肺组织及血浆中NO水平的测定采用硝酸还原酶法。结果实验观察期内铀矿尘致大鼠肺组织纤维增生病变;铀矿尘在致肺组织纤维化过程中,可引起肺组织及血浆中TGF-β1及NO水平增高,且在染尘后第30、60天时其肺组织和血浆中TGF-β1及NO水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);肺组织与血浆中TGF-β1及NO水平变化存在直线正相关(rTGF=0.887,P<0.05;rNO=0.958,P<0.05)。结论在铀矿尘致大鼠肺纤维化过程中,其肺组织和血浆中TGF-β1和NO的水平可见明显增高,肺组织与血浆中TGF-β1及NO水平变化存在直线正相关。     

RNA干扰CD36表达对潜在转化生长因子-β1活化和矽肺纤维化的抑制

目的 观察大鼠矽肺模型中RNA干扰CD36基因表达对潜在转化生长因子-β1(L-TGF-β1)的活化及矽肺纤维化的抑制作用.方法 将Wistar大鼠分为生理盐水组、SiO2模型组(10 mg SiO2)、CD36 shRNA表达的重组慢病毒(SiO2+Lv-shCD36)组和对照慢病毒(SiO2+Lv-shCD36-NC)组,每组24只.染尘后7、21、28 d处死动物,貂肺上皮细胞增殖抑制实验检测肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)的活性;HE和VG染色观察肺组织病理变化;碱裂解法测定肺羟脯氨酸含量.结果 染尘7d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺泡巨噬细胞CD36 mRNA的表达明显低于生理盐水组、SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).SiO2+Lv-shCD36组大鼠BALF中TGF-β1活化量和活化率均明显低于模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).染尘28 d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺组织可见细胞性矽结节,而模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组大鼠肺组织可见纤维细胞性矽结节.染尘21d和28 d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺羟脯氨酸含量明显低于SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠矽肺模型中通过RNA干扰CD36基因表达能够对L-TGF-β1的活化和矽肺纤维化具有一定的抑制作用.     

双氢青蒿素对矽肺大鼠肺组织TGF-β1、 Smad2/3、Col-Ⅰ蛋白表达的影响

目的观察双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对矽肺大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、DHA组,每组20只。模型组和DHA组给予1 ml二氧化硅(SiO_2)混悬液造模,对照组给予1 ml生理盐水造模,造模后第2天开始灌胃给药,DHA组每只大鼠给予DHA 75 mg/kg灌胃,模型组和对照组给予1 ml/100 g生理盐水灌胃,每周给药6 d,连续给药4周,并于第7、14、28天处死大鼠取肺组织,检测肺脏器系数,观察肺组织病理学变化,免疫印迹(Western blot)法检测TGF-β1、Smad2/3、Col-Ⅰ的蛋白表达。结果与对照组相比,DHA组肺系数升高,差异具有统计学意义(PSymbol|@@0.01);与模型组相比,DHA组肺系数降低,差异有统计学意义(PSymbol|@@0.05);苏木素-伊红(HE)染色法显示DHA组肺泡内的巨噬细胞和中性粒细胞低于模型组。Western blot实验结果显示,与模型组相比,DHA组TGF-β1、Smad2/3、Col-Ⅰ蛋白表达降低,差异具有统计学意义(PSymbol|@@0.05)。结论 DHA可以降低矽尘大鼠肺系数,减轻大鼠肺组织炎症,减少肺泡内巨噬细胞和中性粒细胞浸润,抑制TGF-β1、Smad2/3、Col-Ⅰ蛋白的表达,起到抑制肺纤维化作用,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

铀矿尘致大鼠肺纤维化中转化生长因子β1的表达

目的探讨铀矿尘诱导肺组织纤维化过程转化生长因子-β1(TGF-β1)在肺组织中的表达以及TGF-β1含量的变化。方法36只大鼠随机等分为铀矿尘组和对照组。采用一次性非暴露式气管内滴注染尘方法,铀矿尘组每只大鼠气管内滴注20mg/ml的粉尘悬液1ml,对照组气管内滴注生理盐水1ml,分别于处理后第14、30d及60d每组随机处死6只取样,观察肺组织病理形态改变以及肺组织中TGF-β1的表达,测定肺匀浆和血浆中TGF-β1含量的改变。结果铀矿尘组在染尘后第14d时肺组织主要表现为炎症改变,第30d时出现纤维增生同时TGF-β1表达增强,第60d时表现为大量的纤维增生并伴有TGF-β1强表达。肺匀浆和血浆中TGF-β1含量在第14d时高于对照组,第30d及60d时肺匀浆和血浆中TGF-β1含量显著高于对照组(P0.01)。结论铀矿尘诱导肺组织纤维化过程中存在TGF-β1高表达,肺匀浆和血浆中TGF-β1含量明显增加。     

矽肺大鼠血清和支气管灌洗液CC16及SP-D的变化

目的探讨不同剂量的矽尘和不同染尘时间对大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中克拉拉细胞蛋白(Clara cell protein,CC16)和肺泡表面活性蛋白D(surfactant protein D,SP-D)表达水平的影响,探讨矽肺的早期诊断新指标。方法制作矽尘致大鼠肺纤维化模型,矽尘剂量和染尘时间各组不同,测定大鼠BALF中羟脯氨酸(HYP)含量、BALF和血清中CC16及SP-D含量以及肺组织中CC16表达的免疫组化染色分析。结果 BALF中CC16的含量在染尘后第3天(49.65 ng/mg)、第7天(47.10 ng/mg)、第14天(46.15 ng/mg)、第21天(41.63 ng/mg)、第28天(38.02 ng/mg),均较对照组(分别为61.27 ng/mg,60.67 ng/mg,61.20 ng/mg,60.61 ng/mg,56.76 ng/mg)显著降低(P<0.05),并出现下降趋势;血清中CC16的含量在第7天(9.8 ng/ml)、第14天(9.36 ng/ml)、第21天(9.0 ng/ml)、第28天(8.78 ng/ml)也较对照组(11.04 ng/ml,10.84 ng/ml,10.88 ng/ml,10.96 ng/ml)显著降低(P<0.05)。大鼠血清中SP-D的含量较对照组显著下降(P<0.05),BALF中SP-D含量随染尘时间变化出现抛物线趋势。肺组织CC16免疫组化显示Clara细胞损伤严重,CC16表达降低。只有50 mg/ml染尘组BALF的HYP高于对照组(P<0.05)。结论在矽尘引起肺组织病变过程中CC16和SP-D具有肺组织特异性,可能作为矽肺的一个早期标志物。     

牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ和Ⅲ型胶原合成及比例的影响

目的 探讨牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织不同时相Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及比例的影响.方法 将Wistar大鼠144只随机分为对照组（生理盐水,普饲）、矽肺组（普饲）和牛磺酸组（牛磺酸饲料）给予气管内注入1 ml矽尘混悬液（50 mg/ml）,每组48只.分别在第1、3、7、14、21、28天时,用高效液相色谱法测定其血浆中牛磺酸含量;取肺组织制作石蜡切片,天狼猩红法染色,偏振光显微镜观察各组动物肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成及比例的变化,图像分析系统对其进行定量分析.结果 第7、14、21和28天,矽尘组Ⅰ型胶原含量分别比对照组增加3.84%、3.77%、3.73%、9.83%,差异有统计学意义（P＜0.01）.第7、21和28天时,牛磺酸组Ⅰ型胶原含量分别比矽尘组降低2.39%、1.62%和7.13%;与对照组比较,第14、21和28天Ⅰ型胶原含量分别增加2.12%、2.11%和2.70%,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.第28天时,牛磺酸组Ⅲ型胶原含量比矽尘组减少2.62%,差异有统计学意义（P＜0.05）.矽尘组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例第7天开始增加,第28天时达到最大比值1.87,牛磺酸组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例从第7天开始增加,且增加幅度高于矽尘组,第28天时增加幅度低于矽尘组.结论 牛磺酸对矽尘诱导大鼠肺组织不同时相的Ⅰ、Ⅲ型胶原合成抑制作用不同.