MYCN基因表达抑制促TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的神经母细胞瘤(NB)为小儿常见恶性肿瘤。MYCN基因高扩增NB细胞对TRAIL诱导凋亡多有抵抗。我们以MYCN基因高扩增NB细胞株为研究对象,抑制其MYCN基因的表达,探讨其对TRAIL诱导凋亡有无增强作用。方法构建MYCN siRNA,转染NB细胞株SK-N-BE(2),抑制MYCN基因表达后,Western-blot法检测SK-N-BE(2)细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bid、DR4、DR5表达的变化,ELISA法检测细胞凋亡。结果转染MYCN siRNA的SK-N-BE(2)细胞中MY-CN基因表达显著降低(P<0.05)。MYCN基因表达抑制后,SK-N-BE(2)细胞DR5、Bid表达增高(P<0.05),Bcl-2、Bcl-xL表达降低(P<0.05),DR4表达无变化(P>0.05),TRAIL诱导细胞凋亡显著增强(P<0.05)。结论 MYCN基因表达抑制后,可调控Bcl家族中相关蛋白、DR5的表达,促进TRAIL诱导NB细胞凋亡。     

神经母细胞瘤的凋亡研究

研究临床神经母细胞瘤凋亡情况,了解其与预后的关系。方法取神经母细胞瘤石腊切片,运用原位DNA末端标记法,检测凋亡细胞,计算凋亡细胞占肿瘤细胞百分比,求得凋亡指数。结果预后好的神经母细胞瘤大于预后差的神经母细胞瘤的凋亡指数。若凋亡指数大于9％,提示自发性消退。结论凋亡指数对神经母细胞瘤判断预后、指导治疗有重要价值。     

熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响

目的实验研究熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株（SH—SY-5Y）,对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响,探讨熊果酸对儿童神经母细胞瘤的治疗的作用。方法以终浓度为4uM／L、8uM／L、12uM／L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH—SY-5Y,WST-1法检测SH—SY-5Y细胞增殖情况,流式细胞术检测SH—SY-5Y细胞凋亡情况,采用RealtimePCR方法检测MYCNmRNA的表达情况。结果熊果酸对SH—SY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强;熊果酸对SHSY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性,随剂量的增加,促进凋亡效果逐渐加强;熊果酸对SH—SY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性,随剂量的增加,抑制效果逐渐加强。12uM／L作用72h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98．3％,MYCN基因mRNA表达抑制率达52．37％。结论应用熊果酸在体外环境作用SH—SY-5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCNmRNA的表达。     

RNA干扰抑制神经母细胞瘤细胞MYCN基因的初步研究

目的对RNA干扰抑制神经母细胞瘤细胞（LAN-5）MYCN基因表达进行初步研究。方法体外化学合成针对MYCN基因的小干扰RNA（siRNA），经脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染神经母细胞瘤细胞，以无关siRNA和未转染的细胞为对照，采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测siRNA的抑制效果。结果脂质体转染siRNA效率可达84.83％，化学合成的siRNA可抑制神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA表达，转染72h后抑制率达58．3％。结论化学合成的siRNA可以有效抑制神经母细胞瘤MYCN基因的表达，为神经母细胞瘤基因治疗开辟了新的途径。     

化疗对神经母细胞瘤MYCN基因表达及其影响

目的：观察ＭＹＣＮ（Ｎ－ｍｙｃ）基因在神经母细胞瘤中的扩增及定位情况，探讨化疗对其表达的影响。方法：１７例神经母细胞瘤病例，按Ｅｖａｎｓ临床分期，其中６例术前接受化疗，用ＭＹＣＮ基因探针进行核酸原位杂交。ＭＩＡＳ－３００图像分析系统对切片进行灰度扫描并作ｔ′检验。结果：１７例神经母细胞瘤标本中ＭＹＣＮ基因的位杂效检测阳性者１１例（６４．７％）。ＭＹＣＮ基因定位于神经母细胞瘤细胞核内。临床分期对ＭＹ     

雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株生长抑制及诱导凋亡的研究

目的 研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长抑制及诱导凋亡的作用.方法 雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,并设立对照组,以CCK-8检测细胞生长活性,流式细胞法(FCM)检测细胞周期,DNA梯度条带(DNA Ladder)和罗丹明123-碘化丙啶(Rhodamine 123/PI)染色法分析细胞凋亡.结果 雷帕霉素处理后,神经母细胞瘤细胞呈浓度依赖性生长抑制.20μM雷帕霉素处理12 h后,细胞周期出现G2/M期、S期阻滞,G2/M期(24.22±2.89)%、S期(22.05±0.96)%的细胞百分比明显高于对照组.罗丹明123-碘化丙啶检测细胞凋亡率(54.35±5.39)%也明显高于对照组,并有明显的凋亡条带出现.结论 雷帕霉素具有抑制神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长、诱导其凋亡的作用.     

三氧化二砷对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响

目的：三氧化二砷(As2O3 )通过诱导细胞凋亡和诱导细胞分化效应治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)患者已取得很好疗效。与APL细胞相似,神经母细胞瘤(NB)细胞也是分化成熟受阻,该文对As2O3 在体外对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响及可能的机制进行探讨。方法：比色法观察As2O3 对神经母细胞瘤SK N SH细胞增殖的影响;Giemsa染色观察细胞形态学改变;Annexinⅴ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学染色方法检测bcl 2蛋白表达变化。结果：As2O3 明显抑制SK N SH细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应,并出现细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测4. 0μmol/LAs2O3 作用SK N SH细胞72h后,早期凋亡细胞比例( 9. 9±0. 8 )%,与对照组( 3. 7±0. 2 )%相比明显增多,差异有显著性(P< 0. 05 );分别以1. 0, 2. 0,4. 0μmol/L的As2O3 处理SK N SH细胞72h后,bcl 2表达随As2O3 浓度增加呈降低趋势,bcl 2表达阳性率分别为(26. 3±8. 0)%, (15. 0±4. 5)%和(4. 8±3. 2)%,与对照组(73. 6±6. 1)%相比,差异有显著性(P<0. 01)。结论：As2O3 可在体外抑制神经母细胞瘤细胞增殖,诱导凋亡,bcl 2参与了其调节作用。     

MYCN与神经母细胞瘤相关性研究进展

神经母细胞瘤是起源于神经嵴细胞的恶性肿瘤,发病率居儿童恶性肿瘤第四位,仅次于白血病、脑瘤、淋巴瘤。MYCN 是MYC家族成员,参与多种生理和病理过程,包括细胞生长和凋亡、新生血管形成和肿瘤浸润与转移等,MYCN 在肿瘤的发生发展过程中所起的作用正日益受到重视。本文对MYCN与神经母细胞瘤的关系作一综述。     

三氧化二砷诱导神经母细胞瘤细胞调亡机理的研究

基于三氧化二砷(ａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅ,Ａｓ2Ｏ3)可与细胞重要酶类的疏基结合使酶失活,引起细胞代谢紊乱,造成细胞损伤的特点,本实验在研究Ａｓ2Ｏ3对神经母细胞瘤(ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＮＢ)细胞系ＳＪＮＳＨ生长的影响及其作用机制时,初步探讨了抗氧化剂谷胱甘肽(ＧＳＨ)与细胞凋亡及ｂｃｌ2基因调控的关系,现报告如下。材料和方法1.材料:ＮＢ细胞株ＳＪＮＳＨ由日本三重大学惠赠;Ａｓ2Ｏ3由上海第二医科大学附属瑞金医院血液研究所惠赠。2.凋亡细胞形态学观察:于6孔培养板内放入盖玻片,每孔加3ｍｌＲＰＭＩ1640培养基,3…     

小白菊内酯诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法检测不同浓度小白菊内酯对SK-N-SH细胞增殖抑制的影响,同时计算IC50,根据IC50选取实验组小白菊内酯浓度(10、15μmol/L);流式细胞仪分析对照组及实验组肿瘤细胞凋亡率;EMSA检测NF-κB的活性;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达.结果 小白菊内酯抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长,并呈浓度依赖关系.用10、15μmol/L小白菊内酯处理细胞48 h后凋亡率分别为(35.63±0.98)％,(53.32±1.08)％,与对照组(6.42±1.26)％比较,差异显著(P＜0.01).EMSA结果表明,小白菊内酯处理组细胞NF-κB活性降低.Western Blot结果显示,小白菊内酯使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低.结论 小白菊内酯促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡,可能与抑制NF-κB活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关.     

IFNγ联合TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的探讨IENγ（γ干扰素）对TRAIL（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）诱导神经母细胞瘤细胞株SMS-KCNR（KCNR）细胞凋亡的影响及其发生机制。方法应用RT-PCR方法检测IFNγ作用前后KCNR细胞Caspase8的表达；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测IFNγ、TRAIL、IFNγ＋TRAIL及IFNγ＋Caspase8抑制剂（zIETD-FMK）＋TRAIL对KCNR细胞生长及凋亡的影响；应用比色法测定Caspase8相对活性。结果KCNR细胞不表达Caspase8，IFNγ作用48h后的KCNR细胞Caspase8表达明显增加；KCNR细胞对TRAIL不敏感，IFNγ诱导表达Caspase8的KCNR细胞对TRAIL敏感；IFNγ＋TRAIL组Caspase8相对活性明显高于TRAIL组及抑制剂组；zIETD-FMK能阻断Caspase8的活化而抑制TRAIL对KCNR细胞的诱导凋亡作用。结论IFNγ通过诱导Caspase8表达而逆转KCNR细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受。     

ATRA诱导神经母细胞瘤SMS-KCNR分化与N-myc癌基因表达

目的 观察全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导神经母细胞瘤（ＮＢ）细胞分化时Ｎ－ｍｙｃ癌基因的变化以及与时间的关系。方法 用不同浓度的ＡＴＲＡ处理ＮＢ细胞系ＳＭＳ－ＫＣＮＲ,用相差显微镜观察细胞形态学改变。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测ＮＢ细胞分化前后Ｎ－ｍｙｃ癌基因的ｍＲＮＡ表达水平。结果 用１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ的ＡＴＲＡ处理２４～１２０ｈ,ＮＢ细胞的胞体减小,神经突起延长。在加ＡＴＲＡ２４ｈ后,     

苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达

目的：神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路。方法：以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞, MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测MYCN基因mRNA表达受抑制情况。结果：苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强。1.00 mg/mL作用72 h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%。结论：应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

Bmi-1和N-Myc共同超表达在神经母细胞瘤发生中的作用

目的 研究癌基因Bmi-1和N-Myc在神经母细胞瘤发生中的作用.方法 以神经母细胞瘤细胞系SHEP1细胞为模型,采用逆转录病毒转染法转染目的基因Bmi-1和/或N-Myc,免疫印迹法检测转染效果.软琼脂实验观察获得稳定高表达Bmi-1和/或N-Myc的各组细胞的致瘤性,流式细胞术观察Bmi-1和/或N-Myc转染细胞对凋亡因子(TRAIL和抗Fas抗体)的敏感性.结果 软琼脂实验显示对照组和单纯转染Bmi-1或N-Myc组均未见克隆形成,而Bmi-1和N-Myc共转染组可见克隆形成.流式细胞术发现,经各种凋亡因子作用后,与对照组相比,单纯转染N-Myc组细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),而Bmi-1和N-Myc共转染组与单纯转染N-Myc组相比,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).结论 Bmi-1可以通过抑制N-Myc所致的神经母细胞瘤细胞对凋亡因子的敏感性,从而与N-Myc共同参与神经母细胞瘤的发生,是本病发生的关键环节.     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).