原位杂交法检测非甲～庚型肝炎患者肝组织中TT病毒DNA

目的 证实在非甲－庚型病毒性肝炎患者肝组织中TT病毒（transfusion-transmitted virus,TTV)的存在。方法 采用地高辛素标记TTV DNA探针以原位杂交技术对51例血清学病毒标记非甲－戊型、免疫组化检测肝组织中HBsAg、HCV NS3Ag及HGV N55Aag阴性的病毒性肝炎患者石蜡包埋肝组织进行了检测。结果 各型病毒性肝炎肝组织中TTV基因的总检出率为27．5％,其中急性轻型肝炎的检出率为30．8％（4 ／13）,急性重型肝炎为1／8,亚急性重型肝炎为3／7,慢性肝炎为2／6,活动性肝硬化为2／9,慢性重肝肝炎为1／4,原发性肝癌为1／4。TTV DNA表达于肝细胞核或胞质内,以核型多见。在急性肝炎,TTV阳性细胞弥漫分布于肝小叶内,慢性肝炎于汇管区附近较为密集,而在肝硬化病例,阳性细胞在假小叶内多呈片族状不规则分布。结论 在不明原因病毒性肝炎患者血清及肝组织中TTV DNA的检出表明TTV为一种新型的肝炎病毒,TTV为一种嗜肝性病毒。     

应用非同位素原位杂交检测肝组织中丙型肝炎病毒…

为了研究丙型肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因的分布，我们应用地高辛标记的ＨＣＶ基因５’端非翻译区的探针（长度为３２个寡核苷酸）。对２４例急、慢性丙型肝炎患者活检的肝组织石蜡包埋切片进行了原位核酸杂交检测。结果显示：ＨＣＶ基因阳性的肝组织标本有１１例，检出率是４５．８％（１１／２４）。ＨＣＶ基因主要分布于肝细胞浆，偶见于肝细胞核内。此外在肝血窦的ｋｕｐｆｆｅｒ细胞，小血管内皮细胞和汇管区附     

合成肽作抗原酶免疫技术检测非甲—戊型肝炎病人血清中抗HGV

本文应用人工合成肽作为抗原建立了检测庚型肝炎病毒抗体的酶免疫技术，最适抗原包被浓度为４μｇ／ｍｌ。在特异性验证的基础上，检测了３４例非甲－戊５型肝炎病人血清和３２例丙型肝炎感染病人血清。     

合成肽作抗原酶免疫技术检测非甲－戊型肝炎病人血清中抗HGV

本文应用人工合成肽作为抗原建立了检测庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）抗体的酶免疫技术（ＥＩＡ），最适抗原包被浓度为４μｇ／ｍｌ。在特异性验证的基础上，检测了３４例非甲－戊５型肝炎病人血清和３２例丙型肝炎感染病人血清。结果表明，在ＨＧＶ感染高危人群中，诸如输血后肝炎－丙型肝炎中有较高的ＨＧＶ的感染率。本方法的建立为临床上难于作出诊断的庚型肝炎提供了敏感、特异、易于应用的新技术。     

原位杂交法检测肝组织中丁型和乙型肝炎病毒核酸

利用国外引进的重组质粒获得纯化基因片段，分别以随机引物法和ＰＣＲ法制备地高辛素标记的ＨＢＶＤＮＡ探针和ＨＤＶｃＤＮＡ探针。用原位杂交法检测了石蜡包埋的肝组织切片ＢＶＤＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ。４９例感染肝组织分为两组：丁肝组２３例；单纯乙肝组２６例，ＨＢＶＤＮＡ的检出率丁肝组（７８．２６％）与乙肝组（７６．９２％）无统计学差异；而ＨＤＶＮＡ的检出率丁肝组（６０．８７％）明显高于乙肝组（１５．３８％）。ＨＢＶＤＮＡ可见于受染肝细胞的胞核或胞浆内，而ＨＤＶＲＮＡ绝大部分见于肝细胞胞核。两种病毒核酸阳性细胞在肝组织中的分布特点大致相同：弥漫或散在地分布于肝小叶或假小叶内，或局灶性分布于小叶周边。ＨＤＶＲＮＡ阳性的肝组织都或多或少地同时存在ＨＢＶＤＮＡ。同一例肝组织中，ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞从数量和颗粒密度上似略高于ＨＤＶＲＮＡ。将乙肝组和丁肝组两组病人肝内ＨＢ－ｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ及血清ＨＢｅＡｇ作了比较，各指标阳性率虽有差异，但均无统计学意义。因此，未发现ＨＤＶ感染对ＨＢＶ的复制有明显抑制作用。此结果对以往用血清学或免疫组化方法对ＨＤＶ的研究有所补充和深入，亦可为研究其它类型病毒性肝炎之间的重叠感染所借鉴。     

应用非同位素原位杂交检测肝组织中丙型肝炎病毒基因的分布

为了研究丙型肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因的分布，我们应用地高辛标记的ＨＣＶ基因５＇端非翻译区的探针（长度为３２个寡核苷酸），对２４例急、慢性丙型肝炎患者活检的肝组织石蜡包埋切片进行了原位核酸杂交检测。结果显示：ＨＣＶ基因阳性的肝组织标本有１１例，检出率是４５．８％（１１／２４）。ＨＣＶ基因主要分布于肝细胞浆，偶见于肝细胞核内。此外在肝血窦的ｋｕｐｆｆｅｒ细胞、小血管内皮细胞和汇管区附近均有明显的ＨＣＶ基因阳性染色，而对照组均未发现ＨＣＶ基因阳性信号。     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

用直接法原位聚合酶链反应检测肝组织中HCV RNA

用直接法原位聚合酶链反应检测肝组织中ＨＣＶＲＮＡ杨志国许家璋徐俊杰乐美兆苏长青一、材料与方法１材料：取血清ＨＣＶＲＮＡ及／或抗ＨＣＶＩｇＧ阳性的丙型肝炎肝脏活检标本，经１０％福马林固定，石蜡包埋。２试剂：ＨＣＶＲＮＡ引物选自５′端非编码区，限定...     

肝炎基因诊断芯片检测肝炎患者血清及肝组织中HBVDNA、HCVRNA的临床研究

肝炎基因芯片是根据肝炎病毒的特征基因片段设计探针序列，将探针以微阵列形式排列在经过特殊处理的玻片上，从待测血液、组织标本中抽取微量肝炎病原体DNA（RNA），与探针杂交，用特有的荧光波长扫描芯片，通过计算机软件进行分析诊断。我们用病毒性肝炎基因诊断芯片，分别双盲检测40份乙型肝炎患者和健康人、丙型肝炎患者血清，99份肝炎后肝硬化肝组织蜡块标本，15份慢性乙型肝炎患者肝组织活检标本；同时用荧光微粒子定量法测定血清中乙型肝炎病毒标志物HBcAg，PCR法检测血清中HBVDNA、HCVRNA．用免疫组化法、原位分子杂交法分别检测肝组织HBcAg、HBVDNA。结果报道如下。     

利用双扩增聚合酶链反应检测非甲非乙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒RNA

利用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’－端序列合成两对引物，建立了灵敏、特异的ＨＣＶＲＮＡ双扩增聚合酶链反应检测方法。用此方法及第二代Ａｂｂｏｔｔ酶联抗－ＨＣＶ检测试剂盒，检测了４４例非甲非乙型肝炎患者血清及１０名抗－ＨＣＶ阴性健康人。在４４例患者中，４１例（９３％）ＨＣＶＲＮＡ阳性，３６例（８２％）抗－ＨＣＶ阳性，３３例（７５％）ＨＣＶＲＮＡ、抗－ＨＣＶ全部阳性。３例ＨＣＶＲＮＡ阴性，但抗－ＨＣＶ阳性，另外，有８例抗－ＨＣＶ阴性，ＨＣＶＲＮＡ阳性。１０名健康人ＨＣＶＲＮＡ均为阴性。结果表明，大部分（９２％）抗－ＨＣＶ阳性患者带有ＨＣＶ，但为了检测所有病毒血症患者，抗－ＨＣＶ检测是不够的，利用双扩增ＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ对于抗－ＨＣＶ阴性患者的诊断是非常有用的。     

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中丙型肝炎…

以国外引进的含丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ的质粒ＤＮＡ为模板，应用地高辛素作为标记物，经聚合酶链反应制备探针，建立原位杂交方法，对４１例石蜡包埋肝组织进行ＨＣＶ，ＲＮＡ测定。探针标记的ＨＣＶ基因片段位于５‘非编码区，其长度为２２１ｂｐ。结果：抗ＨＣＶ阳性组的ＨＣＶ ＲＮＡ阳性检出率为５６．５％，抗－ＨＣＶ阴性组为１６．７％。     

输血后肝炎患者、血透患者及非甲～戊型肝炎患者中庚型肝炎病毒感染的研究

我们用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）方法,对输血后肝炎患者（已排除甲～戊型肝炎病毒感染）１２４作者单位：５１０２６０广州医学院第二附属医院传染病科例,血液透析患者（含ＨＢＶ和ＨＣＶ标志物阳性者）８１例,急性非甲～戊型肝炎患者（无...     

肝病患者中庚型肝炎病毒感染的检测

目的探讨临床肝病病人中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）感染情况及临床特点。方法应用庚型肝炎病毒基因组５’ＵＴＲ两对寡核苷酸作为引物，建立逆转录套式聚合酶链反应，检测１６９例不同肝病患者血清标本中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ，并对其中１例ＰＣＲ扩增产物进行克隆及测序。结果１６９例各型肝病病人ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ总的检出率为９５％（１６／１６９）。在２９例有手术输血史患者中，３１０％（９／２９）ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ呈阳性，明显高于无手术输血史组（５％，Ｐ＜００１）。序列分析显示１株庚肝病毒５’ＵＴＲ部分基因片段与已知庚肝病毒株核苷酸同源性在８９１４％～９８９１％之间。结论ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染普遍存在于临床肝病患者中，病人感染ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的临床表现未发现有特殊性，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因子。     

186例病毒性肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

１８６例病毒性肝炎患者血清中庚型肝炎病毒ＲＮＡ的检测王瑞烈谢建媚秦小超曹赋应用逆转录－聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了１８６例住院的病毒性肝炎患者血清中庚型肝炎病毒ＲＮＡ。１材料和方法１．１检测对象为１９９６年５月～１９９７年２月住玉林地区红十字...     

用逆转录-套式聚合酶链反应检测我国不同临床型肝炎/肝病患者中庚型肝炎病毒感染

目的为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况。方法根据已发表的ＨＧＶ的５’端非编码区（５’－ＵＴＲ区）及螺旋酶区（ＮＳ３区）两段高度保守的基因序列分别设计两套引物，用逆转录－套式聚合酶链式反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果从北京、秦皇岛、河南等地采集各种肝病患者及职业献血员血清３５４份，ＨＧＶＲＮＡ阳性７９份，阳性率为２２．３％。其中已确定的临床型肝炎／肝病患者２５４例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为５０例，阳性率为１９．６％。原因不明的或非甲～戊型肝炎患者４３例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１３例，阳性率为３０．２％。丙型肝炎阳性的职业献血员５７例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１６例，阳性率为３０．２％。结论提示ＨＧＶ感染在我国多种人群中普遍存在，它不仅可能是引起非甲～戊型肝炎的重要病原之一，也可能是引起输血后肝炎的病原因子     

应用荧光原位杂交技术在组织标本中检测宫颈上皮病变的端粒酶RNA基因扩增

目的 用荧光原位杂交(FISH)技术检测端粒酶RNA基因(TERC)在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织中的扩增,探讨其用于SCC筛查及CIN诊断的可行性及实际意义.方法 选取手术切除及活检的子宫颈组织标本196例,有效样本150例,采用FISH技术在石蜡包埋组织芯片上检测TERC基因的扩增情况.结果 150例组织芯片样本中,正常宫颈鳞状上皮24例,CIN 78例(CIN Ⅰ级25例,Ⅱ级21例,Ⅲ级32例),SCC 48例.正常宫颈鳞状上皮组织中TERC基因无扩增,从CIN Ⅰ级到SCC组织中,TERC基因的扩增率依次为8.0%(2/25)、47.6%(10/21)、71.9%(23/32)和87.5%(42/48),差异有统计学意义(P＜0.05).组间两两比较:正常宫颈鳞状上皮与CINⅡ级、Ⅲ级、SCC组,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);CIN Ⅰ级与CINⅡ级、Ⅲ级及SCC组组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);CINⅡ级组与SCC组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).正常宫颈鳞状上皮与CIN Ⅰ级组、CINⅡ级与Ⅲ级组、CINⅢ级与SCC组,组间差异均无统计学意义(P＞0.05).高度癌前病变(CINⅡ～Ⅲ级)与低度癌前病变(CIN Ⅰ级)的TERC基因扩增结果:25例CIN Ⅰ级病变中,2例扩增,23例不扩增;53例CINⅡ～Ⅲ级病变中,33例扩增,20例不扩增.经公式计算,敏感性为62.3%、特异性为92.0%、准确度为71.8%、阳性预测值为94.3%、阴性预测值为53.5%.结论 在石蜡包埋CIN及SCC组织切片上应用FISH技术进行TERC基因检测,方法可行,结果可靠;可作为辅助CINⅡ级的诊断;TERC基因扩增可以预测CIN发展为癌的风险,具有一定的实用价值.

Abstract：

Objective To explore the feasibility and practical value of fluorescence in situ hybridization (FISH) detection of TERC gene amplification in cervical intraepithelial lesions (CIN) and squamous cell carcinoma (SCC). Methods Tissue microarray was constructed to cover 150 cases of various cervical conditions, including 24 cases of normal cervical mucosa, 78 cases of CINs ( CIN Ⅰ , 25 cases; CIN Ⅱ , 21 cases and CIN Ⅲ, 32 cases) and 48 cases of SCC. FISH was used to detect TERC gene amplification. Results TERC gene amplification was detected in 8% (2/25) CIN Ⅰ , 47.6% ( 10/21 )CIN Ⅱ, 71.9% (23/32) CIN Ⅲ and 87.5% (42/48) SCC. There were significant differences among these groups (P ＜ 0.05 ). The amplification rates of TERC gene in SCC, CIN Ⅲ and CIN Ⅱ were significantly higher than those of normal cervical epithelium and CIN Ⅰ ( P ＜ 0.05 ). Significant differences were also observed among CIN Ⅰ and CIN Ⅱ , CIN Ⅲ and SCC ( P ＜ 0.05 ), and between CIN Ⅱ and SCC(P ＜0.05). There were no significant differences between normal cervical epithelium and CIN Ⅰ , CIN Ⅱ and CIN Ⅲ, and between CIN Ⅲ and SCC (P ＞ 0.05 ). FISH detection of amplification of TERC gene in CIN Ⅰ and CIN Ⅱ -Ⅲ demonstrated the following statistics: sensitivity of 62. 3%, specificity of 92.0%,accuracy of 71.8%, positive and negative predictive values of 94.3% and 53.5%, respectively.Conclusions FISH detection is a reliable method in detecting TERC gene amplification using paraffin tissue sections. When histological evaluation becomes difficult, TERC amplification detectable by FISH may offer a diagnostic distinction of CIN Ⅰ from CIN Ⅱ. Moreover, TERC amplification may be used as a biomarker in predicting CIN progression to invasive cancer.