一起应用PFGE的鲍曼不动杆菌医院感染溯源调查

目的准确识别鲍曼不动杆菌引起的医院感染暴发,确定暴发来源并采取有效控制措施。方法对一起医院感染暴发中两个科室短期内分离到的6株鲍曼不动杆菌进行药敏测定及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果ICU病房3名患者痰标本分离株为泛耐药菌,对测定的19种抗生素均耐受,PFGE带型一致,提示ICU存在感染暴发;呼吸内科2名患者痰标本分离株为多重耐药菌,药敏结果相同,PFGE带型不相同;ICU病人气管插管内壁分离株的药敏结果和PFGE带型与其他菌株均不相同。结论 PFGE技术成功运用于鲍曼不动杆菌医院感染暴发识别及溯源,医院积极采取消毒隔离措施,避免了暴发扩散。     

25株多重耐药鲍曼不动杆菌同源性分析

目的：分析临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌（MDR-AB）中仅对黏菌素和碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌（CCOS-AB）菌株的同源性,为控制其流行暴发提供实验数据。方法收集并分析武汉市第一医院2012年1月至2013年12月临床分离的CCOS-AB菌株25株,采用琼脂稀释法测定其耐药性,随机引物多态性DNA扩增（RAPD）和琼脂凝胶电泳分析CCOS-AB菌株的同源性。结果电泳结果显示,25株CCOS-AB菌株分为12个克隆株,A型克隆包括2株,B型克隆包括5株,C型克隆包括6株,D型克隆包括2株,E型克隆包括3株,F、G、H、I、J、K、L型克隆各1株。结论该院2012-2013年期间CCOS-AB存在5型克隆株的院内流行,临床应加强院内感染控制。     

仅黏菌素敏感的多重耐药铜绿假单胞菌分子流行病学研究

目的从基因水平了解多重耐药铜绿假单胞菌中仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(COS-PA)的流行情况。方法①收集本院灼伤科2001年3月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌52株,其中COS-PA 32株。②收集外科重症监护病房(SICU)2003年1月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌57株,其中COS-PA 22株;收集SICU水池下水口非仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(non-COS-PA)1株。③采用多种引物随机扩增DNA多态性(RAPD)技术和统计学方法分析其流行情况。结果①灼伤科2001~2003这3年的COS-PA,经RAPD(引物ER IC2、325、272)分型均为同一型别(Burn-A型)。②SICU 2003年收集的COS-PA,经RAPD(引物325)分型为同一型别(SICU-A型);在SICU收集的non-COS-PA也多数呈同一型别(SICU-B型),自SICU水池下水口收集到的1株non-COS-PA也属于此型。③灼伤科及SICU经RAPD(引物325)联合分析证实,两个科室的COS-PA为不同型别,无同源性。结论灼伤科和SICU都存在科室内COS-PA流行,SICU还存在non-COS-PA流行。应严格消毒隔离措施,加强对铜绿假单胞菌在潮湿环境及患者中流行情况的严密监测。多种引物RAPD分析是判断铜绿假单胞菌流行情况的有利工具。     

仅黏菌素敏感的多重耐药铜绿假单胞菌分子流行病学研究

目的 从基因水平了解多重耐药铜绿假单胞菌中仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(COS-PA)的流行情况.方法 ①收集本院灼伤科2001年3月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌52株,其中COS-PA 32株.②收集外科重症监护病房(SICU)2003年1月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌57株,其中COS-PA 22株;收集SICU水池下水口非仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(non-COS-PA)1株.③采用多种引物随机扩增DNA多态性(RAPD)技术和统计学方法分析其流行情况.结果 ①灼伤科2001～2003这3年的COS-PA,经RAPD(引物ERIC2、325、272)分型均为同一型别(Burn-A型).②SICU 2003年收集的COS-PA,经RAPD(引物325)分型为同一型别(SICU-A型);在SICU收集的non-COS-PA也多数呈同一型别(SICU-B型),自SICU水池下水口收集到的1株non-COS-PA也属于此型.③灼伤科及SICU经RAPD(引物325)联合分析证实,两个科室的COS-PA为不同型别,无同源性.结论 灼伤科和SICU都存在科室内COS-PA流行,SICU还存在non-COS-PA流行.应严格消毒隔离措施,加强对铜绿假单胞菌在潮湿环境及患者中流行情况的严密监测.多种引物RAPD分析是判断铜绿假单胞菌流行情况的有利工具.     

鲍曼不动杆菌基因同源性研究

目的分析鲍曼不动杆菌的基因同源性,并对其进行分子分型。方法采用重复序列聚合酶链反应技术（rep—PCR）,分别以基因外重复回文序列（REP）和肠杆菌基因间重复一致序列（ERIC）为引物,对122株鲍曼不动杆菌基因组DNA进行扩增并分型。结果REP—PCR将鲍曼不动杆菌分为14种基因型（A～N）。其中H型含98株,为主要的流行型别,并可分为6个亚型;ERIC—PCR将菌株分为13种基因型（A’～M’）,其中L’型100株,为主要的流行型别,并可分为5个亚型。其余菌株在其他基因型中均为零星分布。结论在鲍曼不动杆菌基因同源性分析中,REP—PCR的分辨率较ERIC—PCR高;同时表明我院存在着某一基因型鲍曼不动杆菌的感染流行,估计该型菌株可能以克隆株的形式播散。     

ICU机械通气性鲍曼氏不动杆菌感染的同源性分析

目的:了解鲍曼氏不动杆菌引起机械通气性肺炎主要克隆株及流行状况。方法:运用随机引物扩增PCR(RAPD)技术对32株鲍曼氏不动杆菌进行指纹图谱与聚类分析。结果:32株鲍曼氏不动杆菌经RAPD分为5个基因型,Ⅰ至Ⅴ型分别占16株、1株、2株、4株和9株。结论:鲍曼氏不动杆菌在医院内存在克隆传播,Ⅰ型与Ⅴ型鲍曼氏不动杆菌是我院ICU病房机械通气性肺炎的主要基因型,临床应加强对这2型鲍曼氏不动杆菌的监控,以防止院内感染与爆发流行。     

IRS-PCR在分析不动杆菌DNA异质性中的应用

目的采用低频限制性位点聚合酶链反应技术（IRS-PCR）,对20株临床分离的不动杆菌DNA进行异质性分析。方法通过PCR扩增稀有限制区附近DNA序列,对20株临床分离的不动杆菌进行基因分型,并与RAPD方法的分型及生化表型结果进行比较分析。结果20株不动杆菌因生化性状不同分为溶血不动杆菌（10株）,洛菲不动杆菌（7株）及其他（3株）;IRS-PCR将该溶血不动杆菌分为5个基因型,洛菲不动杆菌分为4个基因型,其他不动杆菌分为2个基因型;RAPD方法,引物1扩增结果将溶血不动杆菌分为6个基因型,洛菲不动杆菌分为4个基因型,其他不动杆菌分为2个基因型;引物2扩增结果将溶血不动杆菌分为9个基因型,洛菲不动杆菌分为5个基因型,其他不动杆菌分为2个基因型。结论IRS-PCR可用于不动杆菌DNA异质性的分析,且较生化表型精细、准确,与RAPD技术比较两者分辨率相当,但IRS-PCR具有较好的稳定性和重复性,值得临床推广。     

对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌同源性及碳青霉烯酶基因型研究

目的探讨我省11个地区20家医院临床分离的对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌耐药性、同源性和碳青霉烯酶基因型。方法收集我省11个地区20家医院2004年12月至2005年12月临床分离的271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌。采用琼脂稀释法和浓度梯度法（Etest）测定亚胺培南耐药菌株对14种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）值；采用脉冲场凝胶电泳法（PFGE）分析亚胺培南耐药菌株的同源性；采用PCR扩增及克隆测序分析碳青霉烯酶基因型。结果271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌对多黏菌素E耐药率最低（11.8％），头孢哌酮／舒巴坦、氨苄西林／舒巴坦耐药率分别为55．4％和68．6％，米诺环素耐药率75．6％，其余抗茵药物耐药率均大于90．O％；PFGE分型发现271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌中235株属于3个克隆株。在多个城市的医院内流行，另有13株属于2个克隆株。分别在一个城市的医院内播散；271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌均携带OXA-51组基因，258株携带OXA-23组基因，未检测到金属酶基因。结论克隆播散是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌最主要的传播方式，OXA-23和OXA-66D类β-内酰胺酶基因是最主要的碳青霉烯酶基因型。     

重症监护室多重耐药鲍曼不动杆菌院内感染暴发的调查分析

目的对分离自重症监护室(ICU)患者及环境中的鲍曼不动杆菌进行同源性分析,判断ICU是否存在院内感染暴发流行。方法使用贝克曼Microscan Walkaway 40 plus鉴定及药敏分析仪对分离自ICU患者及环境中的鲍曼不动杆菌进行鉴定及抗菌药物敏感性试验,采用肠杆菌科基因组间重复序列(ERIC-PCR)对分离到的鲍曼不动杆菌进行同源性分析,结合流行病学调查结果,寻找导致院内感染暴发的原因。结果从ICU患者及环境中共分离出20株鲍曼不动杆菌,其中19株为多重耐药菌,1株为泛耐药菌。20株鲍曼不动杆菌共分为3型(A-C型),其中17株属于C型。结论本次ICU多重耐药鲍曼不动杆菌院内感染暴发流行由C型引起,含有多重耐药鲍曼不动杆菌的气溶胶可能是引起此次院内感染暴发流行的原因。     

急诊重症监护病房多药耐药鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查

目的调查急诊重症监护病房（EICU）短期出现的多药耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性,为医院感染的控制提供科学依据。方法 4株多药耐药鲍曼不动杆菌分离自EICU肺部感染患者痰标本,分离时间为2009年7月25日至8月7日。按《全国检验技术操作规程》要求操作,用全自动微生物分析仪进行细菌鉴定及药敏试验。用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对4株鲍曼不动杆菌进行基因分型,明确其是否为同一菌株的克隆。结果 4株鲍曼不动杆菌对包括碳青霉烯类在内的多种抗生素耐药,经DNA分型分别为A型和B型,非同一克隆株。结论本组鲍曼不动杆菌为多药耐药菌株,不具同源性,可以排除相互传播的可能性。     

重症监护病房铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA研究

目的建立随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测重症监护病房(ICU)铜绿假单胞菌医院感染。方法收集2005年1月~6月从各科ICU内分离出的21株铜绿假单胞菌,提取DNA后进行RAPD分型,同时进行抗生素敏感性试验。结果全部菌株均能产生指纹图谱,分型率100%。21株铜绿假单胞菌共分为14型,其中9株6型分布于脑外科,3株同型分布于神经内科,4株4型分布于呼吸科,5株3型分布于普外科。抗生素敏感性试验表明21株铜绿假单胞菌均为多重耐药菌株,对哌拉西林、头孢菌素类、喹诺酮类及阿米卡星等耐药,仅对亚胺培南/西司他丁、头孢哌酮/舒巴坦等敏感。结论ICU内存在铜绿假单胞菌感染局部流行,RAPD分型技术分型率高、简便快速。     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药机制的研究

目的 调查我院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药性变迁及其耐药机制。方法 用WHONET-5软件分析1999～2001年我院分离的鲍曼不动杆菌的耐药性变迁;等电聚焦电泳测定酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性,并用碱裂解法提取质粒;脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)确定耐药株的亲缘关系;对整合酶基因及碳青霉烯酶基因OXA-、IMP-、VIM-进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及序列分析。结果 1999～2001年,鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性分别为8．5％,1．8％及3．9％。存活的亚胺培南耐药株共9株,这9株菌同时对其他碳青霉烯类、头孢他啶、氨曲南、庆大霉素耐药,其中4株同时对环丙沙星耐药。接合试验证实亚胺培南的耐药基因不能转移,9株菌均不含质粒。9株菌均产多种β内酰胺酶：TEM-1酶,AmpC酶及pI为6．7、6．0的2个酶,后2个酶不被邻氯西林、克拉维酸抑制。所有9株菌均含I类整合酶基因。9株菌IMP-、VIM-型PCR均阴性;但用OXA-23特异引物扩增均阳性,经序列分析证明,100％与OXA-23同源。PFGE发现3个耐药克隆(A型5株,B型3株,C型1株),其中A克隆株与对照克隆株(同时耐头孢他啶、环丙沙星、庆大霉素,但亚胺培南敏感)同源关系密切。结论 产生OXA-23型酶是我院鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的主要机制之一,流行的亚胺培南耐药克隆是从院内多重耐药克隆株中演变而来,值得关注．     

RAPD技术在肠炎沙门氏菌同源性分析中的应用

目的 研究2004年广州市3起肠炎沙门氏菌食源性疾病分离的20株菌株和来源于从业人员健康体检的18株肠炎沙门氏菌的分子特征,为肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段。方法 采用随机引物扩增多态性DNA分析（randomly amplified polymorphic DNA analysis,RAPD）对38株肠炎沙门氏菌进行分子分型,结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图,对菌株进行基因多态性分析。结果 38株肠炎沙门氏菌的RAPD结果经聚类分析可分为3个聚类群,分属3个不同的克隆。结论 RAPD技术可用于肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学调查和溯源。     

Drug-resistant gene based genotyping for Acinetobacter baumannii in tracing epidemiological events and for clinical treatment within nosocomial settings

Background Acinetobacter baumannfi has emerged as an important pathogen related to serious infections and nosocomial outbreaks around the world. However, of the frequently used methods, pulsed-field gel electrophoresis （PFGE） and amplified fragment length polymorphism （AFLP） in Acinetobacter baumannfi genotyping lack the direct molecular proof of drug resistance. This study was conducted to establish a typing method based on drug resistant gene identification in contrast to traditional PFGE and AFLP in the period of nosocomial epidemic or outbreak. Methods From January 2005 to October 2005, twenty-seven strains of Acinetobacter species from Intensive Care Units, the Second Affiliated Hospital in Ningbo were isolated, including both epidemic and sporadic events. Susceptibility test, PFGE, AFLP and drug resistance gene typing （DRGT） were carried out to confirm the drug resistance and analyze the genotyping, respectively. PFGE was used as a reference to evaluate the typeability of DRGT and AFLP. Results Twenty-seven strains of Acinetobacter displayed multiple antibiotic resistance and drug resistant genes, and β-1actamase genes were detected in 85.2% strains. The result of DRGT was comparable to PFGE in Acinetobacter strains with different drug resistance though a little difference existed, and even suggested a molecular evolution course of different drug-resistant strains. AFLP showed great polymorphism between strains and had weak ability in distinguishing the drug resistance. Conclusion Compared to AFLP and PFGE, DRGT is useful to analyze localized molecular epidemiology of nosocomial infections and outbreaks, which would benefit clinical diagnosis and therapy.     

我院呼吸科鲍曼不动杆菌耐药及流行病学特征分析

目的 探讨呼吸科鲍曼不动杆菌耐药及流行病学特征.方法 收集2015年1-12月陆军军医大学第一附属医院呼吸科院内感染患者各类临床标本分离的69株鲍曼不动杆菌,通过医院电子病历系统获得患者临床特征,采用琼脂平板倍比稀释法检测细菌最低抑菌浓度,PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因,脉冲场凝胶电泳对鲍曼不动杆菌进行基因分型.结果 呼吸机使用、抗菌药物使用及住院时间是患者感染鲍曼不动杆菌的危险因素(P ＜0.001).除米诺环素外,鲍曼不动杆菌对其他抗菌药物均具有较高的耐药性.所有菌株含有OXA-51基因,51株携带OXA-23基因,13株携带VIM基因,2株携带IMP-4基因.69株鲍曼不动杆菌共分为9个型和19个亚型,其中D型和H型最为普遍流行.结论 我院呼吸科鲍曼不动杆菌耐药率较高,具有耐药基因水平传播和小规模暴发流行的特点.     

亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌的耐药机制与分子流行病学研究

目的：了解亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌分子流行病学特点,研究鲍曼不动杆菌的耐药机制。方法：收集我院亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌（imipenem resistant acinetobacter baumannii, IRAB）共17株,E-test进行药敏试验,PFGE技术分析耐药菌株同源性,改良Hodge试验筛选产碳青霉烯类耐药菌株,PCR扩增bla基因并进行基因序列的测序和分析。结果：17株亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌分别来自病人痰液、伤口、血液标本,药敏检测发现17株菌具有多重耐药性,PFGE分析表明17株菌可分为A、B、C、D4个克隆型,其中A型包括A1和A2两个亚型,改良Hodge试验和PCR基因扩增证实17株菌均含OXA-23型基因。结论：产OXA-23型碳青霉烯酶是本研究中鲍曼不动杆菌对亚胺培南等碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。     

衡阳地区鲍曼不动杆菌基因分型及医院感染分布情况

目的研究鲍曼不动杆菌医院感染分子流行病学的情况,为控制医院感染提供直接、可靠的参考依据。方法对衡阳地区2011年1月～12月临床送检18 000份标本中分离出的480例鲍曼不动杆菌的药敏试验结果等进行回顾性分析,了解鲍曼不动杆菌医院感染现状;建立随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对其中140株多重耐药鲍曼不动杆菌进行基因分型。结果 480例鲍曼不动杆菌标本主要来自ICU、呼吸内科、烧伤科等;标本分布以痰标本最高占65.0%,其次为伤口分泌物标本占20.0%,中段尿10.0%,其它类型标本占5.0%;480株鲍曼不动杆菌的多重耐药情况非常严重,对亚胺培南/美罗培南耐药率分别为36.0%和38.0%,对其它大多数抗菌药物的耐药率为80%以上;140株多重耐药鲍曼不动杆菌用RAPD分型方法分为8种类型:A～H,其中A、B、C 3型共占70.0%。结论鲍曼不动杆菌耐药性呈上升趋势,且具有多重耐药性;衡阳地区医院感染多重耐药鲍曼不动杆菌可能存在院内的克隆传播。