反转录病毒介导的HSV-tk基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

目的：进行Ｃ６大鼠脑胶质瘤的基因治疗实验研究。方法：采用反转录病毒介导的基因转移和ＡＣＶ体内治疗方法进行研究。结果：构建了带有ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ＧＩＮａＴＫ，应用脂质体转移方法将ＧＩＮａＴＫ导入反转录病毒包装细胞ＰＡ３１７，成为产病毒细胞ＰＡ３１７ＴＫ，用带有ＨＳＶ－ｔｋ基因的复制缺陷型反转录病毒感染Ｃ６细胞，命名为Ｃ６ＴＫ细胞，对ＧＣＶ和ＡＣＶ的敏感性分别高于亲本４５０倍和１０倍；成功地建立了大鼠脑胶质瘤模型，并证实转染细胞Ｃ６ＴＫ的成瘤效应未改变，存活期约为１５天；而经ＡＣＶ治疗后，含有Ｃ６ＴＫ细胞的肿瘤生长明显被抑制，大鼠生存期延长为５７．８±８．０７天，尤其是采用ＰＡ３１７ＴＫ细胞混和治疗组和原位治疗组，肿瘤基本消失，大鼠生存期显著延长，混和治疗组存活１２０天以上，原位治疗组存活至７１．４±３６．１天。ｔ检验，Ｐ值均小于０．００１。结论：ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗大鼠脑胶质瘤疗效显著。     

胸苷激酶基因治疗人多形性胶质母细胞瘤BT325并诱导BT325和9L肿瘤细胞的凋亡

目的：了解转单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ＴＫ）前后胶质瘤细胞对更昔洛韦（ＧＣＶ）的药物敏感性；钙通道阻滞剂尼莫地平是否增强ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗的肿瘤杀伤作用，以及该治疗方法能否诱导胶质瘤细胞凋亡。方法：用带有ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因的重组逆转录病毒载体，转染人多形性胶质母细胞瘤株ＢＴ３２５。用ＭＴＴ法测定ＧＣＶ对转染ＨＳＶ－ＴＫ基因ＢＴ３２５瘤细胞的杀伤作用。结果：０．１ｕｇ／ｍｌ的ＧＣＶ对转ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＢＴ３２５瘤细胞有杀伤作用，加入尼莫地平后，０．０１ｕｇ／ｍｌ的ＧＣＶ即有杀伤作用。同时发现该治疗方法可以引起胶质瘤细胞的凋亡。结论：ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗对胶质瘤有很强的杀伤作用，并可以引起肿瘤细胞的凋亡；尼莫地平有协同作用，这可能使尼莫地平做为一种增敏剂在脑肿瘤该治疗中使用。     

胸苷激酶基因治疗人多形性胶质母细胞瘤BT325并诱导BT325和…

了解转单纯疱疹病毒胸苷激基因前后胶质瘤细胞对更昔洛韦的药物敏感性；钙通道阻滞剂尼莫地平是否增强ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗的肿瘤杀伤作用，以及该治疗方法能否诱导胶质瘤细胞凋亡。方法：用带有ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因的重组逆转录病毒载体，转染人多形性胶质母细胞瘤株ＢＴ３２５。     

胸苷激酶基因治疗人脑胶质瘤SHG44的研究

构建了含有ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，并成功地转移至人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞。体内实验证实，ＡＣＶ可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ的肿瘤形成，并可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ肿瘤的生长。原位基因转移治疗ＳＨＧ４４肿瘤效果明显。提示其可作为脑肿瘤治疗的一种新方法。     

TNF—α／Vp16系统对胶质瘤基因治疗的实验研究

目的 在体外水平（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）建立对胶质瘤有杀伤作用的ＴＮＦ－α基因／Ｖｐ１６系统,研究该系统的有效性及可行性。方法 用逆转录病毒载体将ＴＮＦ－α基因转染人胶质瘤细胞株ＳＨＧ－４４,经生长抑制试验,比较转ＴＮＦ－α基因前后ＳＨＧ－４４细胞对Ｖｐ１６的敏感性。结果 生长抑制试验表明,转染ＴＮＦ－α基因后的ＳＨＧ－４４细胞对Ｖｐ１６的敏感性是转基因前细胞的１０倍（Ｐ〈０．０１）,ＩＣ５０为０．８     

逆转录病毒载体介导中国单疱病毒TK基因转导脑胶质瘤细胞

目的：研究载中国单疱病毒胸苷激酶基因逆转录病毒重组体（ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ）和羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）体外转染和杀伤脑胶质瘤效果，探索应用该系统基因治疗脑胶质瘤。方法：ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ重组体病毒感染胶质瘤细胞，Ｇ４１８筛选转染阳性胶质瘤细胞克隆。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测抗Ｇ４１８胶质瘤细胞中的ＴＫｃ基因表达。药物敏感实验观察ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ的毒性反应。结果：１．０ｍｇ／ｍｌＧ４１８筛选１０～１４天获抗性胶质瘤细胞克隆；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示抗Ｇ４１８细胞ＴＫｃ基因明显表达；ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ高度敏感，其ＥＤ５０为：Ｃ６ＴＫｃ０．０２μｇ／ｍｌ，Ｕ２５１ＴＫｃ０．００６μｇ／ｍｌ，Ｕ８７ＴＫｃ０．００４μｇ／ｍｌ，ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ的敏感性是非转基因胶质瘤细胞的５００倍以上。结论：载中国ＴＫｃ基因逆转录病毒重组体可有效转染脑胶质瘤细胞并使其对ＧＣＶ高度敏感，该系统可望用于脑胶质瘤的基因治疗。     

STAT3信号通路及其肿瘤分子靶向治疗的研究进展

肿瘤分子靶向治疗是针对可能导致细胞癌变的环节,如细胞信号传导通路、原癌基因和抑癌基因、细胞因子及受体、抗肿瘤血管形成、自杀基因等,从分子水平来逆转这种恶性生物学行为,从而抑制肿瘤细胞生长,甚至使其完全消退的一种全新的生物治疗模式.     

逆转录病毒载体介导中国单疱毒TK基因转导脑胶质瘤细胞

研究载中国单疱病毒胸苷激基因逆转录病毒 且体和羟甲基无环鸟苷体外转染和杀伤脑胶质瘤效果，探索应用该系统基因治疗脑胶质瘤。方法：ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ重组体病毒感染胶质瘤细胞，Ｇ４１８筛选转染阳性胶质瘤细胞克隆。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测抗Ｇ４１８胶质瘤细胞中的ＴＫｃ基因表达。     

GFP,TH双基因在NIH-3T3细胞及帕金森病大鼠脑内的表达

目的以绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）作为一个标记,观察ＧＦＰ标记的ＨＴＨ１基因修饰的ＮＩＨ－３Ｔ３细胞在体外及植入脑内后的生长情况,判断ＧＦＰ基因能否作为一种新的筛选标记基因。方法构建同时表达ＧＦＰ和ＨＴＨ１双基因的多基因表达载体ＧＣ－ＧＦＰ－Ｐ－ＨＴＨ１－ＳＮ。并转染ＮＩＨ－３Ｔ３细胞,且移植入Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ病模型大鼠纹状体内。结果用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫组化、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ等方法均检测到ＧＦＰ、ＨＴＨ１在体外和脑内的表达。结论ＧＦＰ可作为一个筛选标记基因,可对目的基因或植入细胞的其他功能性产物的表达进行观察和检测。     

人类野生型p53基因对9L胶质肉瘤的抑制作用

目的：观察人类野生型ｐ５３基因对ｐ５３突变的大鼠胶质肉瘤细胞９Ｌ的抑制作用。方法：在体外用逆转录病毒载体转移人野生型ｐ５３基因到９Ｌ胶质肉瘤细胞中，经Ｇ４１８筛选后，体外培养和大鼠体内接种；观察瘤细胞形态和肿瘤重量变化，用免疫组化法检测人ｐ５３蛋白的过度表达。结果：人野生型ｐ５３基因在体内体外均可明显抑制９Ｌ瘤细胞的生长，皮下肿瘤抑制率６２．９３％，脑内肿瘤抑制率为８５．１８％。转ｐ５３基因后肿瘤分化程度提高，部分肿瘤有非肿瘤性纤维母细胞增生和大量浆细胞浸润，瘤细胞生长状态欠佳。结论：转移异源性ｐ５３基因可以重建ｐ５３的肿瘤抑制功能；并可能增强免疫系统对表达异源性ｐ５３蛋白的瘤细胞的识别，激发抗肿瘤免疫反应。因此产生双重的抗肿瘤作用，有潜在的临床应用价值。     

人脑胶质瘤免疫抑制因子研究

实验表明人脑胶质瘤原代培养细胞及４个人脑恶性胶质瘤体外细胞系细胞培养上清液（Ｓｕ－ｐｅｒｎａｔａｎｔ，ＳＮ）显著抑制植物血凝素ＰＨＡ－Ｐ刺激的正常人或胶质瘤患者自体和异体外周血淋巴细胞增殖。我们发现用抗转化生长因子－β_２（ＴＧＦ－β_２）单克隆抗体可显著降低胶质瘤ＳＮ的免疫抑制活性。４个人脑胶质瘤体外细胞系应用抗ＴＧＦ－β_２单抗免疫组化染色呈阳性反应，３例正常脑组织呈阴性反应。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交实验表明上述４个人脑胶质瘤体外细胞系均表达６ｋｂ的ＴＧＦ－β_２ｍＲＮＡ，而４例人胎脑则无表达。这些结果提示人脑胶质瘤细胞可以自体分泌免疫抑制因子抑制患者的免疫功能，而这抑制因子的主要成份是ＴＧＦ－β_２。     

星形细胞瘤细胞谱系分型的研究

目的：探讨星形细胞瘤（ＡＳＡ）细胞谱系型别及其与生物学行为和病理学分级的关系。方法：免疫组化方法６０例人脑ＡＳＡ的Ａ２Ｂ５、ＧＦＡＰ及ＧＣ抗原表达和谱系分型。结果：４５例ＡＳＡ为１型谱系星形细胞瘤（Ｔ１ＬＡ）；１５例ＡＳＡ含较高密度的Ａ２Ｂ５＋细胞。为２型谱系星形细胞瘤（Ｔ２ＬＡ）。复发性肿瘤Ａ２Ｂ５标记指数显著高于非复发性病例，而ＧＦＡＰ标记指数呈现相反的结果。Ｔ２ＬＡ复发率显著高于Ｔ１ＬＡ（Ｐ＜０．０２）。１２例ＡＳＡ含有低密度的ＧＣ＋细胞。结论：Ｔ１ＬＡ比Ｔ２ＬＡ常见；以Ａ２Ｂ５和ＧＦＡＰ对ＡＳＡ进行谱系分型，有利于其诊断和复发性估计。ＧＣ标记利于识别星形－少枝混合性胶质细胞瘤。     

腺病毒介导HSV-tk和反义IGF-1联合基因治疗鼠脑胶质瘤

目的　研究腺病毒介导 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 联合基因治疗大鼠脑胶质瘤,并对其机制作初步分析。方法　利用腺病毒为载体观察联合 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 离体杀伤 Ｃ６细胞的效果, 并在大鼠脑内接种 Ｃ６ 细胞第８ 天进行 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 的原位治疗, 观察大鼠生存期变化。结果　 Ｇ Ｃ Ｖ 对转染反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 基因和ｔｋ 基因的 Ｃ６ 细胞较转染ｔｋ 基因的 Ｃ６ 细胞敏感。联合应用 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 原位治疗脑肿瘤比单用任何一种治疗方法效果明显, 免疫组化发现联合基因治疗组肿瘤有大量 Ｃ Ｄ＋４ 、 Ｃ Ｄ＋８ 淋巴细胞浸润。结论　反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 基因可增强 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 杀伤肿瘤的作用。     

胶质母细胞瘤紫杉醇增敏放射的体外实验研究

目的：通过体外实验评价紫杉醇对胶质母细胞瘤的放射增敏作用。方法：应用人胶质母细胞瘤细胞系ＢＴ３２５。（１）细胞暴露于不同浓度紫杉醇，分别于６、１２、２４、４８、７２小时收集标本、作流式细胞术细胞周期分析。（２）细胞经紫杉醇和（或）照射处理后，绘制细胞生长曲线，计算出１０％存活率时的放射增敏比（ＳＥＲ）。结果：细胞暴露于紫杉醇后发生了Ｇ２－Ｍ期阻滞，当紫杉醇作用时间较长或浓度较高时，Ｇ２－Ｍ期细胞的比率也较高，紫杉醇＋照射组的细胞生长受到显著抑制；１、１０、１００ｎｍｏｌ紫杉醇在１０％存活率时的ＳＥＲ分别为１．１、１．９、３．０。结论：紫杉醇能将细胞阻滞在对射线最敏感的Ｇ２－Ｍ期；紫杉醇能增强胶质母细胞瘤的放射生物学效应，值得进一步研究     

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因和更昔洛韦系统的灵长类动 …

目的 在灵长类动物中观察单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ＴＫ）及更昔洛韦（ＧＣＶ）系统的短期和长期毒副作用。方法 恒河猴７只，其中１只设为正常对照，其余６只动物于右侧额叶白质内注射ＨＳＶ－ＴＫ的包装细胞悬液，细胞注射后７天起，其中３只动物经外周浅静脉滴注ＧＣＶ，剂量５ｍｇ／ｋｇ；ｄ，共１４天；另外４只不用 不同时间点处死，取注射针道周围的脑组织进行ＨＳＶ－ＴＫ序列原位杂交，并取全身各脏器进行     

基因工程重组TGF-α-PE40融合蛋自治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的评价基因工程重组ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白在体外、体内对人脑胶质瘤的治疗作用。方法体外使用改良ＭＴＴ法测定ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白对体外培养的恶性胶质瘤细胞生长抑制作用，同时检测各细胞株表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的表达情况；体内利用Ｕ２５１裸鼠移植瘤模型观察不同剂量的融合蛋白对移植瘤体积增长的影响。结果　ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白对体外培养恶性胶质瘤细胞有明显的生长抑制作用，其作用依赖于肿瘤细胞ＥＧＦＲ的表达；对裸鼠移植瘤，２５０ｕｇ／ｋｇ组用药后２１日内瘤体积无明显增长，抑瘤率为４６．４％。结论ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白可以选择性地抑制表达ＥＧＦＲ的胶质瘤的生长。     

ING4基因抗肿瘤作用的研究进展

ING4（inhibitor of growth family member 4）基因是近年发现的肿瘤抑制基因，广泛参与肿瘤发生、发展的多个过程，包括肿瘤血管的生成，细胞对缺氧状态的适应，细胞间接触抑制的丢失，及抑制肿瘤细胞侵袭转移、细胞凋亡与生长周期调节等。本文就近年来有关对ING4基因抗肿瘤作用的研究进展进行综述。     

大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织P53基因表达与细胞损伤

目的　探索防治蛛网膜下腔出血（ Ｓ Ａ Ｈ）引起的脑血管痉挛（ Ｃ Ｖ Ｓ）的新途径。方法　利用大鼠 Ｓ Ａ Ｈ 模型，设立对照组、 Ｓ Ａ Ｈ 组、放线菌素酮治疗组（ Ｃ Ｈ Ｘ 组）。经 Ｄ Ｉ Ｇ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 对不同时间大鼠脑组织 Ｐ５３基因进行检测。结果　对照组、 Ｃ Ｈ Ｘ 组 Ｐ５３基因表达相近， Ｓ Ａ Ｈ 组 Ｐ５３基因表达增高。显微镜下见 Ｃ Ｈ Ｘ 组病理形态学变化近似正常， Ｓ Ａ Ｈ 组神经细胞损伤严重。结论　大鼠 Ｓ Ａ Ｈ 后 Ｃ Ｖ Ｓ所致的脑缺血，脑组织 Ｐ５３基因表达明显增高。大鼠 Ｓ Ａ Ｈ 模型 Ｐ５３基因表达与脑神经元细胞损伤明显相关。放线菌素酮通过抑制 Ｐ５３基因表达从而抑制其诱导的损伤。     

多发性硬化症脑脱髓鞘病灶TGF—β1和bFGF的表达

目的进一步认识细胞的转化生长因子（ＴＧＦ）β１和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在中枢神经系统脱髓鞘病中的作用。方法采用ＨＥ染色以及抗蓖麻凝集素１标记小胶质细胞和巨噬细胞、抗胶质细胞原纤维酸性蛋白标记星形胶质细胞、抗人ＴＧＦβ１和抗人ｂＦＧＦ的免疫组织化学方法对３例多发性硬化症尸检病人脑组织中的脱髓鞘病灶进行研究。结果在急性期病灶中主要为巨噬细胞、小胶质细胞和血管内皮细胞呈ＴＧＦβ１免疫反应阳性，而慢性静止病灶中则主要为星型胶质细胞。ｂＦＧＦ主要在慢性病灶中的星型胶质细胞中表达。结论ＭＳ脑脱髓鞘病灶星形胶质细胞中表达ＴＧＦβ１和ｂＦＧＦ可能与脱髓鞘病灶的恢复有关，而脑血管内皮细胞表达ＴＧＦβ１可能与急性期炎性细胞浸润有关。     

短暂性全脑遗忘综合征（附3例报告）

本文报道了３例典型ＴＧＡＳ，并结合文献讨论了ＴＧＡＳ的临床特征、诊断与鉴别诊断要点、ＴＧＡＳ的常见病因及病位、ＴＧＡＳ的治疗和预防以及ＴＧＡＳ与中风的关系。ＴＧＡＳ常见病因为缺血，故对脑血管病的危险因素应积极预防。