miRNA在免疫系统中的研究进展

microRNA(miRNA)是一类长度约21~25碱基的非编码蛋白质的单链小分子RNA,广泛存在于多细胞生物和病毒体内,主要通过核酸序列互补匹配结合到特定的靶mRNA上,抑制靶mRNA翻译过程或降解靶mRNA,是一种起负调控作用的分子。目前越来越多的研究显示,miRNA广泛参与了生物体多种生理过程,且相关研究报道也表明其表达及功能失调可能导致肿瘤发生、白血病以及病毒感染等多种病理现象。本文主要阐述目前在免疫系统中对miRNA研究的一些进展情况。     

miRNA在肝癌的形成发展及治疗应用

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其在中国的发病率及死亡率均高,严重危害着人们的健康,它的发生发展是由多因素影响的.目前肝癌形成过程中的分子机制仍没有完全揭露.微小RNA (microRNAs,miRNA)是一种小的非编码RNA,它广泛存在于正常的和病理的组织中,在转录后水平调控基因的表达,参与生物体细胞的分化、增殖和凋亡等...     

miRNA－1靶基因的生物信息学分析

目的：采用生物信息学的方法对miRNA－1的靶基因进行预测,并对其集合进行富集分析和生物学描述。方法分别采取TargetScan和PicTar对miRNA－1靶基因进行预测,取它们预测结果的合集。采用Cytospace的插件BiNGO和DAVID数据库,获得基因集合的基因本体注释和生物学通路信息并进行富集分析。结果获得miRNA－1预测的靶基因229个;分子功能富集在生物分子结合、酶调节和催化活动等;生物学过程富集在生物组装、代谢调控、应对刺激、生物合成和代谢等。生物学通路富集在富集于剪接体、囊泡运输中SNARE相互作用和小细胞肺癌。结论在高通量系统验证方法尚未建立的阶段,采用了生物信息学的方法,可以从miRNA－1调控网络中提出了进一步研究的线索。     

利用免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因的方法研究

目的:利用免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因,建立一种经济、有效、快捷的miRNA靶基因鉴定方法.方法:直接提取细胞总RNA后加入生物素标记的miRNA分子共孵育,而后利用免疫磁珠分离与miRNA结合的mRNA,或将生物素标记的miRNA分子瞬时转染HeLa或HepG2细胞,48 h后裂解细胞并在离心后应用链霉亲和素磁珠分离与miRNA特异性结合的mRNA.将分离获得的mRNA反转录获得cDNA,并以其为模板,以特异性引物和Oligo(dT)进行PCR扩增,而后经过克隆测序,通过生物信息学方法比对测序结果,鉴定miRNA的靶基因.结果:利用已知的let-7靶基因证实了上述方法的有效性,并通过该方法鉴定出let-7的一个新的靶基因.结论:建立了免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因方法,为miRNA靶基因的研究提供新的实验学方法.     

血清miRNA表达水平检测与原发性肝癌早期诊断的研究

目的对血清样品miRNA表达水平变化的实时定量PCR检测进行观察,同组织样品的miRNA的变化趋势进行比较,以评价血清miRNA在原发性肝癌早期诊断中的价值。方法通过荧光定量PCR检测miRNA-125a、-200a、-199a等3个有代表性的miRNA指标在正常和癌变样品中的变化,验证组织及血清两类样品中miRNA的变化趋势,分别取癌旁组织和癌组织以及正常人与癌症患者血清为材料。结果肝癌患者血清是正常对照血清中miRNA的含量的10%～15%,肝癌组织中的miRNA含量是癌旁组织的10%～20%,而且血清miRNA的变化趋势与组织miRNA较一致。结论血清miRNA可以反映原发性肝癌的发生,说明血清miRNA非常有可能成为一种新的生物标记物用于原发性肝癌的早期诊断。     

miR-100靶基因BAZ2A在肝癌迁移侵袭中的机制研究

目的:探讨miR-100和BAZ2A基因在肝癌细胞中的表达及对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法:以qRT-PCR检测和Western blot分析miR-100与BAZ2A在肝癌细胞中的表达情况;以miR-100 mimics转染肝癌细胞SMMC-7721,检测miR-100对BAZ2A表达的影响,细胞划痕实验和Transwell小室实验验证miR-100对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果:miR-100在肝癌细胞中呈低表达,BAZ2A表达与其呈负相关,上调miR-100可以降低BAZ2A的表达,抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。结论:miR-100可以通过抑制BAZ2A的表达来降低肝癌细胞的迁移侵袭能力,达到抗肿瘤的效果。     

针对帕金森病致病与相关基因的miRNA研究进展

帕金森病(Parkinson disease,PD)是一种中脑黑质致密部和纹状体多巴胺能神经元选择性减少的神经退行性疾病,目前有6个致病基因被证实可以引起遗传型单基因PD。mi R-7、mi R-153、mi R-205、mi R-34b/mi R-34c、mi R-494可以直接调控PD致病基因PARK1/PARK4、PARK2、PARK7和PARK8,mi R-34a、mi R-132、mi R-133b、mi R-320、mi R-433等可以调控多种与PD发病机制相关的基因,如与多巴胺能神经元发育有关的基因、与突触形成有关的基因、和与神经营养因子有关的基因等等。直接调控PD致病基因的mi RNA可能具有直接的治疗作用,而调节PD相关基因的mi RNA可能具有辅助治疗作用。mi RNA能够调控PD致病基因与相关基因的表达,是一种非常具有前景的治疗手段,为治疗PD提供了新思路。     

miRNA 表达与免疫细胞因子相关性在原发性肝癌早期诊断和预后中的作用

目的:检测miR-146a、miR-224、miR-34c、miR-200a、miR-148b、miR-375 六种miRNAs 在原发性肝癌中的表达变化及其与HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc 和IL-12、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α等炎症因子表达的相关性,以验证循环miRNA 是否可作为理想的血源性新型生物标志物用于原发性肝癌的早期检测。方法:收集肝炎、肝硬化患者及健康对照组静脉血,并收集原发性肝癌患者癌组织和癌旁组织。提取总RNA 后通过实时定量PCR 检测并比较各组miRNA 的相对表达水平,同时检测miRNA 表达水平变化与血清肿瘤标志物AFP、CEA、CA19-9、CA125 表达的关系;并检测miRNAs 表达水平变化与HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc 和炎症因子IL-12、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α表达相关性。结果:相对于健康组,miR-34c、miR-224、miR-146a 在PHC 组血清和组织中表达显著上调;miR-200a、miR-148b、miR-375 在PHC 组血清和组织中表达显著下调,差异具有统计学意义。HBsAg 与血清miR-375 和miR-146a 存在回归关系,miR-375 随HBsAg 表达水平升高而降低,而miR-146a 随HBsAg 表达升高而升高。IFN-γ与miR-146a 存在回归关系, miR-146a 随IFN-γ表达水平降低而升高,miR-375 和miR-146a 诊断能力大于CA19-9 和AFP。结论:miR-146a、miR-224、miR-34c、miR-200a、miR-148b、miR-375 在原发性肝癌血清和组织中存在表达差异,其中miR-375 和miR-146a 诊断能力优于AFP 和CA19-9,血清miR-375 和miR-146a 可能成为新的肝癌早期诊断标志。     

miRNA与肿瘤

microRNA又称miRNA,是真核生物细胞中固有的一类长度约为22个核苷酸且不编码蛋白的小分子RNA。miRNAs广泛参与动植物生命活动的调控,如生长发育、营养物质的代谢和激素的分泌等。近年的研究表明miRNA通过调控细胞增殖、凋亡和分化在肿瘤的发生和发展中起着重要的作用。研究miRNA与肿瘤的关系将为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。     

循环miRNA监测肝细癌的研究

肝癌是目前临床上最常见的恶性肿瘤之一,其早期诊断的困难导致了后期治疗的不理想化,因此肝癌的死亡率常年居高不下。现有的研究结果显示,多种miRNA的表达在正常人群和肝癌患者群体的组织甚至体液中的表达量有很大的差异。miRNA可能在肝脏肿瘤的发生发展中起到了至关重要的作用。本文就肝脏的生理功能、肝细胞癌的发生发展、常规诊断、miRNA与肝癌的关系等方面的研究作一综述。     

巨块肝癌分靶区与单靶区计划设计对比

目的：为了提高肿瘤的覆盖率,解决靠近敏感器官的肿瘤边缘剂量不足的问题,探讨对巨块肝癌进行分靶区治疗计划设计。方法：在治疗计划设计时把计划靶区（PTv）分成三个子靶区,分别为PTV1、PTV2和PTV3。PTV1和PTV3为计划设计区,PTV2是PTV1与PTV3之间的间隔区。选取2例巨块肝癌病例,采用相同的处方剂量和敏感器官限量,分别采用单靶区和分靶区进行计划设计,然后对这两种方法设计出来的结果进行对比和评估。结果：病例1,单靶区和分靶区计划设计下的肿瘤覆盖率分别为66．51％和99．00％。病例2,单靶区和分靶区计划设计的肿瘤覆盖率分别为56．85％和92．00％。结论：病例1和病例2通过分靶区计划设计,肿瘤覆盖率分别提高了32．49％和35．15％。分靶区计划设计大大提高了肿瘤的覆盖率,但增加了患者的治疗次数,延长了治疗时间。     

与肺癌相关的靶基因研究简介

肺癌是目前全世界发病率最高的恶性肿瘤,其病死率也居于前列。因此,肺癌的早期诊断及早期治疗对于降低肺癌患者的病死率以及改善患者生存质量至关重要。近年来有关肺癌早期诊断、治疗及预后的分子标志物的研究愈来愈受到关注。在肺癌中,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占绝大多数。针对晚期NSCLC,肿瘤分子靶向治疗日趋重要。因此,从分子水平研究肺癌的发病机制和诊断,对肺癌的防治有重大意义。近些年,对基因水平方面的研究也取得了很大进展。现对与肺癌相关的靶基因最新研究进行展综述如下。     

Trim72基因在肝癌转移中的功能研究

目的 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术验证与非小细胞肺癌转移相关的Trim72基因的敲除是否引起肝癌转移能力的变化.方法 建立稳定表达Cas9蛋白的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6(Cas9),随后利用针对Trim72基因的单导向RNA(sgRNA)进行特异性基因敲除获得Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,再通过体外Transwell实验和体内皮下瘤肺转移检测评估该细胞系的迁移和侵袭能力.结果 利用CRISPR-Cas9系统成功获得了Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系.Transwell实验结果表明,敲除Trim72基因后,Hepa1-6(Cas9)细胞系的体外迁移和侵袭能力增强;体内皮下瘤肺转移病理检查结果显示,Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系(实验组)所成皮下瘤的体内转移能力明显强于未转入相应sgRNA的Hepa1-6(Cas9)细胞系(对照组).结论 通过CRISPR-Cas9系统成功获得了敲除Trim72基因的Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,该细胞系表现出较Hepa1-6(Cas9)细胞系更强的侵袭和转移能力,说明Trim72基因可能在肝癌的侵袭和转移中起重要作用,有望成为肝癌基因治疗的潜在靶点.     

多囊卵巢综合征相关miRNA调控网络的构建及生物信息学分析

目的 利用生物信息学方法对多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢颗粒细胞差异表达的miRNA靶基因进行分析,通过构建miRNA-mRNA调控网络,为PCOS潜在发病机制研究提供新思路。方法 选择PCOS患者卵巢颗粒细胞miRNA表达数据集GES84376作为分析对象,并利用Limma分析差异表达miRNA。利用在线分析网站对差异表达的miRNA靶基因进行预测。应用DAVID网站进行生物信息学分析,并利用SRTING网站及Cytoscape软件构建miRNA-mRNA调控网络。结果 共筛选出251个miRNAs,其中3个miRNA显著上调（miR-3188、miR-4433及miR-3135b）。富集通路（KEGG）分析显示,miR-3188、miR-4433及miR-3135b的靶基因在mTOR信号通路、MAPK信号通路及PI3K/Akt信号通路中富集程度最高。通过STRING网站进行蛋白互作分析,其互作程度最高的前10位关键基因分别为：MAPK1、MDM2、FRS2、AGT、IGF1R、HDAC1、AGO1、AKT3、MTOR及CREB1。通过构建miRNA-mRNA调控网络图,结果显示...     

microRNA与肝癌

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率极高。microRNA(miRNA)是一类单链的非编码RNA,通常在转录后水平调控基因的表达。最近多项研究表明miRNA在肝癌中发挥着重要作用,已经成为肝癌诊断、治疗中的一个靶标。     

乙肝病毒X基因与肝细胞肝癌

肝细胞肝癌（HCC）是我国常见的恶性肿瘤，乙肝病毒（HBV）X基因与HCC的形成密切相关。本文就HBVX基因的结构。主要功能及其与HCC的关系等研究进展进行综述。     

miRNA在创伤愈合中的研究进展

微RNA(microRNA,miRNA)是近年来国内外生物医学领域的研究热点之一。作为一种含有21~25个核糖核苷酸的内源性非编码小分子单链RNA,miRNA通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对,从而参与基因转录后的表达与调控,在多种疾病的发生发展过程中发挥重要功能。近来,越来越多的研究揭示miRNA参与了创伤愈合的全过程,深入阐释miRNA在不同阶段的病理生理干预机制,对于开展特定功能的靶向治疗具有重要意义。本文主要综述了部分miRNA在创伤愈合不同阶段中的调控研究进展。     

使用热休克蛋白基因启动子调控靶基因在肿瘤局部表达

目的：利用人热休克蛋白基因启动子结合加热选择性诱导目的基因在肿瘤局部表达,建立肿瘤基因治疗新方法。方法：分离不同大小的人热休克蛋白70基因5’端调控顺序作为启动子,以绿色荧光蛋白（GFP）作报告基因,构建热诱导型GFP表达质粒,转染体外培养的肿瘤细胞,或将稳定转导GFP表达质粒的肿瘤细胞移植到大鼠皮窗内,或将热诱导型GFP腺病毒注射到肿瘤内,加热后直接利用荧光显微镜观察GFP表达水平。结果：400bp人热休克蛋白70基因5’端调控顺序背景表达水平低,加热后可被显著激活,能作为启子有效驱动下游目的基因的表达,GFP作报告基因使体内外肿瘤细胞内目的基因的表达水平仅通过荧光显微镜便能直接观察到。结论：利用热诱导型启子结合加热能选择性诱导目的基因在肿瘤局部表达,为肿瘤基因治疗提供了一种新方法。