99mTc标记的新型肺癌多肽分子探针及其生物学分布

目的探讨99mTc标记特异性靶向肺癌小分子多肽的标记方法,观察99mTc-多肽在正常动物体内的动力学特性及体内生物学
分布特点。方法采用NHS-MAG3双功能螯合法进行99mTc标记小分子多肽（cNGQGEQc）,纸层析法测定标记率,通过体外稳定
性实验、半胱氨酸置换实验及血清蛋白结合实验评价99mTc-多肽的放化特性,测定标记物静脉注射后在新西兰大白兔不同时相
血液放射性清除曲线;分别测定经尾静脉注射7.4 MBq标记物后的小鼠体内各脏器质量数和放射性计数,计算各脏器每克组织
百分注射剂量率（%ID/g）;经耳缘静脉注射37 MBq标记物,应用SPECT显像法观察标记物在大白兔体内的放射性动态分布
变化。结果99mTc 标记多肽的标记率>90%,室温下和血清中37 ℃下放置12 h 放化纯度分别为91%和85%;半胱氨酸置换率
<7%;血清蛋白结合率<5%。99mTc标记多肽在兔体内血放射性清除迅速;在小鼠体内清除较快,主要通过肾脏排泄,其余脏器内
放射性均较低（P<0.05）。结论99mTc标记基于肺癌特异性靶向多肽的标记方法简单,标记率高,具有良好的体内外稳定性,具有
比较理想的体内分布动力学特性。
     

99mTc标记的新型肺癌多肽分子探针及其生物学分布

目的探讨99mTc标记特异性靶向肺癌小分子多肽的标记方法,观察99mTc-多肽在正常动物体内的动力学特性及体内生物学分布特点。方法采用NHS-MAG3双功能螯合法进行99mTc标记小分子多肽(cNGQGEQc),纸层析法测定标记率,通过体外稳定性实验、半胱氨酸置换实验及血清蛋白结合实验评价99mTc-多肽的放化特性,测定标记物静脉注射后在新西兰大白兔不同时相血液放射性清除曲线;分别测定经尾静脉注射7.4 MBq标记物后的小鼠体内各脏器质量数和放射性计数,计算各脏器每克组织百分注射剂量率(%ID/g);经耳缘静脉注射37 MBq标记物,应用SPECT显像法观察标记物在大白兔体内的放射性动态分布变化。结果99mTc标记多肽的标记率>90%,室温下和血清中37℃下放置12 h放化纯度分别为91%和85%;半胱氨酸置换率<7%;血清蛋白结合率<5%。99mTc标记多肽在兔体内血放射性清除迅速;在小鼠体内清除较快,主要通过肾脏排泄,其余脏器内放射性均较低(P<0.05)。结论99mTc标记基于肺癌特异性靶向多肽的标记方法简单,标记率高,具有良好的体内外稳定性,具有比较理想的体内分布动力学特性。     

CD45单抗介导的188Re-亲和素二步法预定位靶向淋巴瘤的实验研究

目的建立CD45单抗介导的188Re-亲和素二步法预定位方法,观察其在荷瘤小鼠体内的生物学分布特点,评价其在淋巴瘤
治疗应用中的可行性。方法CD45单抗及亲和素的188Re标记采用直接标记法,纸层析法测定标记率及放化纯度。取人Raji细
胞移植瘤Nod-Scid小鼠6只,随机分为2组,实验组为二步法预定位组,对照组为188Re-CD45单抗组。注药后0.5、1、6和23 h分
别进行SPECT显像;同时于注药后24 h分别处死2组荷瘤小鼠,取脏器组织及肿瘤,称重,测量放射性计数,经放射性衰变校正
后计算各脏器%ID/g和靶/非靶（T/NT）比值。结果188Re-CD45单抗的标记率（82.52±2.92）%,放化纯度>90%;188Re-亲和素标记
率平均为（80.83±3.48）%。荷瘤小鼠SPECT显像及体内生物分布结果示：在实验组整个显像期间血池内放射性均较低,肝脏和
脾脏内见较多放射性浓聚,注射后1 h移植肿瘤见显影,随着时间的延长瘤内放射性分布增多,1~6 h肿瘤显影渐清晰,并持续到
23 h;注射标记物后24 h,肿瘤摄取（%ID/g）为（1.34±0.52）%,肾脏和肝脏摄取（%ID/g）分别为（6.77±2.32）%和（2.81±1.25）%,其
他脏器内的%ID/g保持在较低水平,24 h肿瘤/血液比值为（4.28±0.82）,肿瘤/肌肉比值为（8.00±0.88）。而对照组则可见肝脏、脾
脏和肾脏内有明显放射性聚集,肿瘤部位显影模糊,20 h血池内仍见有较多放射性分布,肿瘤部位见少量放射性集聚;注射标记
物后24 h,肿瘤/血液比值为（0.58±0.06）,肿瘤/肌肉比值为（3.21±0.24）。结论与188Re-CD45单抗组相比较,CD45单抗介导的
188Re-亲和素二步法预定位组在淋巴瘤荷瘤小鼠体内具有较好的特异性和靶向性,明显提高肿瘤的T/NT比值,标记物注射后1 h
即可使肿瘤显影。
     

131I-rhTSH在荷人分化型甲状腺癌裸鼠模型的体内分布和放射免疫显像

目的：以重组人促甲状腺素（recombinant human thyrotropin,rhTSH）为靶向探针,测定131I标记rhTSH的标记率、放化纯度和比活度,并探讨其在荷人分化型甲状腺癌（differentiated thyroid carcinoma,DTC）裸鼠模型中的体内分布情况和放射免疫显像（radioimmunoimaging,RII）。方法：采用氯胺T法,利用131I标记rhTSH,Sephadex G25M 柱纯化放射性标记物,纸层析法测定其标记率、放化纯度、室温稳定性及血清稳定性,并计算其放射性比活度,进而研究该放射性标记药物在荷K1裸鼠模型中的生物分布及RII情况。结果：131I-rhTSH标记率为（93.04±1.13）%,放化纯度为（97.71±1.14）%,比活度为（4.92±0.06）MBq/μg;131I-rhTSH放于室温1、6、12、24 h后所测得的放射性化学纯度分别为（92.94±0.34）%、（91.81±0.64）%、（91.38±1.20）%、（90.43±0.74）%;而与血清孵育1、6、12、24 h后所测得的放射性化学纯度分别为（92.59±0.73）%、（91.33±0.98）%、（91.01±0.73）%、（89.58±1.33）%。荷K1裸鼠模型的体内分布及单光子发射型计算机断层成像（single photon emission computed tomography,SPECT）显示分子探针131I-rhTSH可以在肿瘤组织中靶向聚集,在24 h 时肿瘤/肌肉（T/NT）比达最高,且肿瘤显影最清晰。结论：成功制备了分子探针131I-rhTSH,在荷人DTC裸鼠模型中有较好的靶向作用,为DTC的进一步诊治奠定基础。     

GLP-1受体激动剂exendin-4的放射性标记及生物分布实验研究

目的 确立131I标记胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂exendin-4多肽的最佳标记条件,并研究131I-exendin-4在正常小鼠体内的生物分布。 方法 131I标记exendin-4多肽采取氯胺-T方法标记,利用纸层析法计算标记产物的标记率及放化纯度,测定131I-exendin-4的体外稳定性及脂水分配系数,研究131I-exendin-4在注射后的1、3、6、12和24 h时在正常小鼠体内的分布特征,对经尾静脉注入131I-exendin-4的小鼠进行SPECT多时相显像,并观察小鼠体内放射性分布变化。 结果 exendin-4的131I标记率在85%以上,放化纯度大于97%,131I-exendin-4在人血清和生理盐水中仍保持较好的体外稳定性,131I-exendin-4的脂水分配系数为-1.002。正常小鼠静脉注入131I-exendin-4后,双肾的放射性分布明显较其他组织器官的放射性增高,1 h和12 h肾脏的每克组织百分注射剂量率(%ID/g)分别为(51.54±13.51)%ID/g和(11.61±0.94)%ID/g,胃、肺的摄取相对较高,3 h后除肾脏外的其他各脏器器官的放射性均较快下降。正常小鼠静注131I-exendin-4后的SPECT多时相显像示随着时间的延长,双肾及膀胱的放射性浓聚影增加,而其他器官未见明显放射性浓聚影分布。 结论 131I标记exendin-4的标记率较高(大于85%),体外稳定性良好,131I-exendin-4为水溶性物质,可通过泌尿系统排泄,体外分布特性比较理想。      

131I标记多肽K237用于前列腺癌荷瘤裸鼠显像的实验研究

目的研究将放射性核素131I标记多肽K237用于前列腺癌荷瘤裸鼠显像的可行性。方法按Iodogen法用131I标记多肽K237,用薄层层析法(TLC)测定标记率及放射化学纯度,经Sephadex G25柱凝胶过滤法分离纯化,获得标记率大于95%的131I-K237注射液。体外培养前列腺癌LNCap细胞株,构建LNCap荷瘤裸鼠动物模型,经尾静脉注射131I-K237,于特定时间处死、取肿瘤及主要脏器,测定各组织的放射性百分注射剂量率,研究荷瘤裸鼠体内131I-K237的生物分布。对荷瘤裸鼠尾静脉注射5.55Mbq131I-K237 1、2、4和8h后,分别用SPECT/CT仪显像,考察最佳显像时间。结果131I标记多肽K237的标记率为(73.7±3.2)%,经Sephadex G25柱分离纯化后,放射化学纯度为(96.7±0.6)%;LNCap前列腺癌荷瘤裸鼠体内131I-K237分布显示:30min和1、2、4、8、12、24h的T/NT比值分别是2.08和2.28、2.45、2.68、3.04、3.97、4.41。荷瘤裸鼠显像结果表明,1h时即可见肿瘤隐约显影,4h肿瘤显影最清晰。结论131I-K237的制备与显像操作简易,用于前列腺癌荷瘤裸鼠显像效果理想,有望成为一种新的针对前列腺癌的肿瘤显像剂。     

PET显像剂18F-AlF-NOTA-PRGD2的肿瘤靶向性

目的研究新型PET受体靶向显像剂18F-AlF-NOTA-PRGD2用于肿瘤显像的可行性。方法18F-AlF-NOTA-PRGD2采用
18 氟-氟化铝（18F-AlF）与NOTA-PRGD2在100 ℃下通过鳌合反应标记制备而得。荷脑胶质瘤U87MG裸鼠经尾静脉注射
18F-AlF-NOTA-PRGD2后行体内放射性生物学分布和PET/CT、microPET/CT显像研究。结果18F-AlF-NOTA-PRGD2采用一步
法成功标记,反应时间15~20 min,标记产率为17%~25%。体内放射性生物学研究显示该显像剂能靶向肿瘤病灶,静脉注射后
1 h和2 h肿瘤摄取量分别达4.14±1.44、2.80±1.18% ID/g（t=1.910,P=0.070）,肿瘤/脑比值分别达2.95±0.61、5.21±2.62（t=-1.686,
P=0.167）。PET/CT和microPET/CT显像均可清楚显示该显像剂在荷瘤鼠体内的放射性分布情况,肿瘤显像清楚,体内分布良
好,但microPET/CT图像质量明显优于PET/CT。结论18F-AlF-NOTA-PRGD2标记简单、易行,在荷瘤鼠体内具有优良的肿瘤靶
向性,可发展成为PET肿瘤显像剂。     

~(188)Re标记VEGF多肽片段的荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的 探讨188Re标记VEGF189外显子6编码的多肽(QKRKRKKSRYKS)的方法、标记物在荷瘤裸鼠体内的分布及显像.方法 以S-acetyl-MAG3为双功能螯合剂,正交设计法寻找188Re标记多肽QKRKRKKSRYKS的最佳条件;研究标记物在荷卵巢癌SKOV3裸鼠的体内分布,并在不同时间行SPECT平面显像.结果 采用SPSS 13.0进行分析.结果 188Re标记QKRKRKKSRYKS在最佳标记条件下的标记率为(73.1±5.5)%,HPLC纯化后放射化学纯度>95%,且受体结合活性良好;标记物室温下放置24 h,其放射化学纯度为(91.76±1.36)%;尾静脉注射标记物后,0.5 h荷瘤裸鼠肿瘤部位开始出现放射性浓聚,1 h浓聚更为明显,肿瘤放射性摄取为(1.846±0.511)%ID/g,肿瘤/对侧肌肉组织比值达(2.43±0.30).此外,肝脏、小肠、肾脏及膀胱等部位也可见明显的放射性浓聚,但3 h后肿瘤部位的放射性浓聚影基本消退.结论 188Re-MAG3-QKRKRKKSRYKS能明显聚集于肿瘤组织.     

重组人纤溶酶原Kringle5的标记及其肿瘤显像

目的探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle5(K5)用于肿瘤显像的可行性.方法采用基因工程方法制备的重组人纤溶酶原Kringle5(rhK5),以Iodogen法制备125Ⅰ-rhK5和125Ⅰ-rhK5,进行荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像研究.结果125Ⅰ-rhK5和131Ⅰ-rhK5的标记率为86%和84%,放化纯度为96%和95%.竞争结合实验表明,rhK5标记后其生物活性没有改变;荷瘤裸鼠体内分布显示,12 h肿瘤肌肉组织比可达4.94±0.89;131Ⅰ-rhK5肿瘤显像示肿瘤部位放射性浓聚随时间逐渐增加,3 h可见肿瘤清晰显影.结论Iodogen法制备125Ⅰ-rhK5和131Ⅰ-rhK5纯度高、稳定性好.131Ⅰ-rhK5可进行肿瘤的显像,为肿瘤的显像和治疗奠定了基础.     

IgG三羰基锝[99mTc(CO)3(H20)3+]标记方法及其在动物体内的生物学分布

目的 探索利用fac[99mTC(CO)3(H20)3]+中间体标记IgG的方法,了解99mTc(CO)3(H20)3-IgG在体内外的稳定性,并研究其在小鼠体内的生物分布情况.方法 自行合成fac-(99mTc(CO)3(H20)3]+中间体,并采用聚酰胺薄膜层析法测定其放化产率,利用放化中间体fac-[99mTc(CO)3(H20)3]+直接进行IgG的放射性标记,用纸层析法测定标记率及放化纯度.并分别观察99mTc标记IgG在人血清白蛋白(HSA)及生理盐水(NS)中的稳定性.取9只小白鼠,分别经尾静脉注人99mTc 标记IgG(3.7x104 Bq/100μl),于注药后2,4和12h分别先进行SPECT显像,然后处死小鼠分离各脏器,称重后测定放射性计数,计算各脏器每克组织百分注射剂量(%ID/g),结果fac-[99mTc(CO)3(H2O)3]+中间体的放化产率为82.48%,室温放置4h保持稳定.99mTc(CO)3(H20)3-IgG的标记率为57.04%,放化纯度均大于90%,在HSA中温育24h放化纯度保持稳定,而在NS中温育24h放化纯度则降为20%.体内生物分布显示99mTc(CO)3(H20)3-IgG在体内主要分布于肝、脾、肾,可较长时间存留于血池中.结论 利用放化中间体fac-[99mTc(CO)3(H20)3]+直接进行IgG放射性标记,具有良好的体内、外稳定性,在小鼠组织中分布特点符合IgG体内的放射性分布规律,可满足进一步的单抗及多肽标记的实验要求.     

抗ProGRP(31-98)单克隆抗体D-D3的131I标记及其体内生物学分布研究

目的 探讨抗胃泌素释放肽前体(ProGRP)(31-98)单克隆抗体D-D3的131I标记方法 及其在健康昆明小鼠体内的生物学分布规律与特点.方法 采用氯胺-T法用131I标记单克隆抗体D-D3,利用纸层析法测定其标记率、放化纯度和稳定性.取健康昆明小鼠50只,随机分为10组,每组5只,自昆明小鼠尾静脉注射131I-D...     

^125I标记抗人ADAMl51多克隆抗体在荷胃癌裸鼠体内的生物分布和放射免疫显像

目的研究^125I标记抗人ADAMl5多克隆抗体（^125I-anti-ADAMl5抗体）在荷人胃癌裸鼠体内的生物分布。方法以氯胺T法制备^125I-anti-ADAMl5抗体并测定其在生理盐水和人血清中的稳定性。经荷胃癌裸鼠模型尾静脉注入^125I-anti-ADAMl5抗体后1、4、8、24和48h对裸鼠进行SPECT平面显像,采用感兴趣区（ROI）技术进行半定量分析,计算肿瘤与非瘤组织的放射性计数比值（T／NT）和肿瘤与裸鼠全身的放射性计数比值。于48h显像后处死荷瘤裸鼠,取心、肺、甲状腺和肿瘤等多个脏器组织称重并测量其放射性计数,计算各组织的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）。结果^125I-anti-ADAMl5抗体标记率为（75．16d-9．43）％,纯化后放射化学纯度可达（99．44d-O．21）％。经尾静脉注入^125I-anti。ADAMl5抗体后,随时间的延长,T／NT逐渐增高。在48h时肿瘤清晰显影,T／NT可达3．84±0．43。结论^125I-anti-ADAMl5抗体在荷胃癌裸鼠体内具有肿瘤靶向定位能力,能获得良好的放射免疫显像图像。     

泛耐药鲍曼不动杆菌的体外联合药敏分析

目的评价美罗培南与多西环素、环丙沙星、舒巴坦及头孢哌酮/舒巴坦联合用药对泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌效应。
方法采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对50株临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓
度,并计算部分抑菌浓度（FIC）指数判定联合效应。结果美罗培南与多西环素联用后,其MIC50显著下降,FIC指数分布：FIC≤
0.5 占38%,0.52 为0。美罗培南与环丙沙星联用后,其MIC50下降不明显,FIC 指数分布：
FIC≤0.5 为0,0.52 为0。美罗培南与舒巴坦联用后,其MIC50明显下降,FIC指数分布：
FIC≤0.5为26%,0.52为0。美罗培南与头孢哌酮/舒巴坦联用后,其MIC50有所下降,FIC指
数分布：FIC≤0.5为10%,0.52为0。结论美罗培南与多西环素、舒巴坦或者头孢哌酮/舒巴
坦联合,对泛耐药鲍曼不动杆菌均表现为协同和相加作用,没有无关作用和拮抗作用,具有良好的体外抗菌活性;而美罗培南与
环丙沙星联合表现出的相加作用和无关作用比例相当,对泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性较差。
     

131I-RP215McAb分子探针的制备、鉴定及荷人肺腺癌裸鼠放射免疫显像

目的 制备靶向肺腺癌细胞表面碳水化合物相关抗原(carbohydrate antigen 215,CA215)的核素分子探针131I-RP215单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),鉴定其理化性质并探讨其在荷瘤裸鼠模型中的体内分布情况和放射免疫显像特点.方法 采用氯胺T法对McAb RP215进行131I标记,Sephadex G25M柱纯化标记抗体,并鉴定其理化特性,观察该抗体标记物在荷A549裸鼠模型中的生物分布及放射免疫显像情况.结果 131I-RP215 McAb标记率为(91.03 ±2.36)％,纯化后的放化纯度为(93.15±1.40)％,比活度(3.37±0.42) MBq/μg;具有较好的稳定性及免疫活性.荷瘤裸鼠体内生物分布及SPECT显像结果显示,131 I-RP215 McAb能够在肿瘤组织中选择性浓聚,131I-RP215 McAb作用24h时,肿瘤/肌肉比达最高,且瘤体显影最清晰.结论 成功制备了特性理想的131I-RP215 McAb分子探针,在荷人肺腺癌裸鼠模型中有较好的显像效果.     

抗钠泵α2亚单位截断性片段多肽抗体的制备与鉴定

目的采用多肽制备技术和免疫学技术制备抗钠泵α2亚单位截断性片段及其抗体,为检测和研究钠泵α2亚单位的组织学
分布及其功能研究提供实验基础。方法根据NCBI-Genebank 获得大鼠钠泵α2 亚单位M1~M2 膜外区截断性片段目的多肽
（LAAMEDEPSNDN）,采用9-氟甲氧羰基（Fmoc）固相合成法合成目的多肽,并采用碳化二亚胺法制备出多肽与孔戚血蓝素复
合物,免疫新西兰大白兔,免疫4次后获得抗血清,测定其效价。随后采用protein A纯化IgG抗体,并将其用于大鼠主动脉血管
平滑肌细胞钠泵α2 亚单的组织学检测。结果（1）人工合成的大鼠钠泵α2 亚单位截断性片段长13 氨基酸残基
（LAAMEDEPSNDN-C）,理论相对分子质量：1408.48,质谱实测相对分子质量：1407.90;高效色谱分析纯度HPLC纯度>85.5%;
（2）ELISA法检测免疫后兔子的抗血清效价均大于1∶512 000,蛋白A亲和纯化获得亲和纯化抗体浓度为0.965 mg/ml,按照1∶
1000稀释（终浓度1 μg/ml）,ELISA检测抗体效价为1∶256 000;（3）该抗体按照1∶100~1∶200稀释可用于免疫细胞学检测。结
论成功制备高效价抗钠泵α2亚单位截断性片段抗体可用于钠泵α2亚单位的ELISA和免疫细胞化学实验,为钠泵α2亚单位的
组织细胞学检测和功能研究提供新的实验基础。
     

晚期糖基化终产物受体在脂多糖介导小鼠肺微血管内皮细胞骨架变化中的作用

目的建立一种可以得到高纯度肺微血管内皮细胞的分离方法,并分别观察野生型小鼠及晚期糖基化终产物受体
（RAGE）敲除小鼠细胞在脂多糖（LPS）刺激下细胞骨架F-actin变化情况。方法取6~8周龄野生型C57小鼠及RAGE 基因敲除
小鼠的肺,经I型胶原酶消化后,尼龙细胞筛过滤,然后采用免疫磁珠法分离原代小鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）,经形态学及
免疫荧光法鉴定后,以LPS（1 mg/L）刺激不同时间后用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架F-actin的变化情况。结果镜下可见原
代培养的PMVECs 呈梭形或多角形,经细胞抗Ⅷ因子相关抗原（ⅧF-Ag）染色鉴定纯度高,LPS刺激后野生型小鼠PMVEC骨架
重排,形成应力纤维,而RAGE 敲除小鼠PMVEC 骨架破坏不明显。结论采用免疫磁珠法可以获得高纯度的小鼠肺微血管内
皮细胞,且RAGE参与了LPS介导的小鼠肺微血管内皮细胞骨架破坏。
     

131I标记多肽K237的最佳条件及标记肽的体外生物活性

目的探索131I标记多肽K237,获得放射化学纯度高于95%的131I-K237的最佳条件,研究标记产物的体外稳定性及生物学活性。方法应用Iodogen法对K237进行131I标记,采用正交实验筛选最佳标记条件。用高效液相色谱仪(HPLC)联合薄层层析法(TLC)测定标记率及放射化学纯度,SephadexG25层析柱分离纯化131I-K237。将分离纯化的131I-K237(放射化学纯度大于95%)分别放置于室温及37℃水浴箱,于不同时间测定其放射化学纯度以观察其稳定性。应用cck-8法进行人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖抑制实验,分别计算K237及131I-K237对HUVEC的抑制率,判定131I-K237的生物活性。结果最佳标记条件中,K237100μg与Iodogen 50μg,在37℃条件下反应时间40 min,标记率可达70%以上。稳定性实验结果表明,131I-K237在体外放置24 h后,其放射化学纯度>90%。131I-K237和K237对HUVEC细胞增殖的抑制率差异无统计学意义(P>0.05),说明K237被131I标记后,其生物学活性未改变。结论 Iodogen法131I标记多肽K237简单高效,标记产物的生物活性得到保留,未受明显破坏。