类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析

目的 应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用.方法 采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest软件分析图像,比较两种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定,并用Western blot验证部分表达差异蛋白质.结果 ①采用窄范围的pH 4～7 IPG胶条进行2-DE分析,正常人及RA患者滑膜细胞蛋白胶图上分别平均显示852、837个点.有49个蛋白点在正常、RA滑膜细胞间有2倍以上的显著性量变.②分别在胶图上共选取40个表达水平存在明显差异的蛋白质点进行质谱鉴定,鉴定出23个在RA患者滑膜细胞中表达上调蛋白质.Western blot验证Enolaseα、Annexin Ⅰ、Cathepsin D、SOD2、Peroxiredoxin 2在RA滑膜细胞中表达显著升高.结论 正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异.这些差异蛋白可能参与类风湿关节炎的发病.     

FasL基因关节腔内转染对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的观察FasL基因关节腔内转染对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用。方法 SD大鼠分为正常转染对照组、正常转染组、模型转染对照组、模型转染组。向模型转染对照组、模型转染组动物右后足趾皮内注射0.1 mL弗氏完全佐剂致炎,诱导佐剂性关节炎。观察大鼠关节炎指数,大鼠滑膜细胞增生、炎性细胞浸润情况,检测滑膜细胞凋亡水平。结果模型转染组与模型转染对照组比较大鼠关节炎指数(AI)显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);模型转染对照组、正常转染组与正常转染对照组比较,大鼠滑膜细胞凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05),模型转染组与正常转染对照组、模型转染对照组比较,大鼠滑膜细膜凋亡指数间差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FasL基因关节腔内转染可诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡,降低佐剂性关节炎大鼠的关节炎指数。     

痹肿消汤对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达的影响

目的:分析痹肿消汤(bizhongxiao decoction,BZXD)对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达谱的影响,为阐明痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)作用机制提供新线索。方法:70只SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、痹肿消汤治疗组(BZXD组),采用皮下注射牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂制成实验性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型。应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分别分离正常组、模型组、BZXD组大鼠关节滑膜的总蛋白后,胶体考马斯亮蓝染色,扫描2-DE胶获取电子图像,Pdquest图像分析软件比较分析此3组双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质。结果:成功复制了CIA大鼠模型;建立了正常组、模型组和BZXD组大鼠滑膜的2-DE图谱,其平均蛋白质点数分别为947±39,994±41,1031±52,其匹配率为92%,91%,94.2%;模型组的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是(0.896±0.217)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdo-decylsufate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方向的偏差为(1.102±0.104)mm。比较分析模型组和BZXD组大鼠滑膜的2-DE图谱,发现此2组间有328个差异点,BZXD组有174蛋白质点表达上调,147个蛋白质点表达下调,7个蛋白质点只在模型组表达。模型组与正常组之间有193个差异点,123个在模型组表达上调,70个表达下调。结论:建立了CIA大鼠关节滑膜的双向凝胶电泳图谱,识别了328个差异表达的蛋白质,对这些差异蛋白质的鉴定将为痹肿消汤治疗RA的作用机制提供新的实验依据。     

应用蛋白质组学技术筛选鉴定锌指蛋白139调控的胃癌转移相关蛋白质

目的以胃癌SGC7901细胞原位移裸鼠模型为对象,通过荧光双向差异凝胶电泳（2D-DIGE）结合液质联用（LC-MS）质谱
分析技术鉴定ZNF139 调控的胃癌转移相关蛋白质。方法合成针对ZNF139 的小干扰RNA（ZNF139-siRNA）,以
ZNF139-siRNA转染人胃癌细胞株SGC7901,G418筛选。以ZNF139-siRNA质粒转染的胃癌细胞、阴性质粒转染的胃癌细胞
及普通胃癌细胞分别进行裸鼠胃癌原位移植。造模成功后取出原位移植瘤及腹腔转移淋巴结。荧光双向差异凝胶电泳
（2D-DIGE）技术分别分离ZNF139-siRNA 各组原位移植瘤及腹腔转移淋巴结蛋白质;选定差异点,胶内酶解后,液质联用
（LC-MS）质谱分析技术鉴定蛋白质。蛋白印迹（Western blot）技术验证差异蛋白质的表达。结果转染ZNF139-siRNA质粒后
SGC7901细胞中ZNF139的表达受到有效抑制。与阴性质粒组及空白组比较,阳性质粒组原位移植瘤生长更慢（P<0.05）,且腹
腔淋巴结转移率更低（P<0.05）。蛋白质组学结果发现在阳性质粒组原发灶中Fascin、hnRNPA2/B1表达下调,ANXA1表达上
调;阳性质粒组转移淋巴结中ANXA5表达下调（P<0.05）。Western blot验证结果与蛋白质组学结果相符。结论ZNF139可能
通过调节Fascin、hnRNPA2/B1、ANXA1、ANXA5促进胃癌淋巴结转移。
     

白藜芦醇对佐剂性关节炎大鼠血管内皮因子表达的影响

目的：探讨白藜芦醇( Res)对佐剂性关节炎( AA)模型大鼠关节滑膜组织的抗炎作用和对血管内皮生长因子( VEGF)表达水平的影响。方法60只SD大鼠随机分正常组(10只)和模型组(50只),模型组左后足趾皮内注射弗氏完全佐剂建立AA模型,模型组在建模后12 d再分5组：模型对照组、Res低剂量组(5 mg/kg )、Res中剂量组(15 mg/kg)、Res高剂量组(30 mg/kg)、阳性药塞来昔布组(5 mg/kg),给药16 d后处死大鼠,对各组大鼠踝关节滑膜组织行病理切片、HE染色和VEGF免疫组化染色。观察滑膜增生、血管翳形成、炎症渗出、关节软骨和骨破坏等情况。 Western blot法检测VEGF蛋白的表达情况。结果 Res治疗组的关节病理学评分明显低于模型对照组,免疫组化染色以及Western blot结果显示, Res 能降低滑膜组织 VEGF 表达水平。结论 Res 有改善大鼠关节滑膜炎症、抑制滑膜组织VEGF表达的作用,这可能与Res治疗AA关节炎有关。     

原花青素对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的:研究原花青素(PC)对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞Bc1-2、Bax表达的影响。方法:采用大鼠佐剂性关节炎(AA)模型,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠滑膜细胞Bcl-2、BaxmRNA的水平,免疫印迹法(Westernblotting)检测各组大鼠滑膜细胞Bcl-2、Bax蛋白表达,分析滑膜细胞caspase-3酶原的裂解,比色法测定大鼠滑膜细胞caspase-3的相对活性。结果:正常大鼠滑膜细胞Bcl-2和Bax均有表达,模型组大鼠Bcl-2、Bax表达均高于正常组。PC(6,30mg/kg)治疗组可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达,上调BaxmRNA和蛋白表达;而caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少,药物组大鼠caspase-3与对照组相比活性升高。结论:PC可通过下调滑膜组织中Bcl-2表达、上调Bax表达,诱导caspase-3活化,从而诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗佐剂性关节抗炎的机制之一。     

LASP1下调和ferritin上调在rhBMP-2 诱导的比格犬BMSCs成骨分化中起重要作用

目的建立稳定的比格犬骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导成骨分化模型;鉴定参与比格犬BMSCs细胞成骨分化过调控的
蛋白质,探讨其可能的调控机制。方法分离培养比格犬BMSCs细胞,rhBMP-2诱导细胞成骨分化7 d,基于蛋白质双向凝胶电
泳的蛋白质组学分析成骨分化组与对照组差异表达的蛋白质,对感兴趣的蛋白质LASP1、ferritin 轻链和重链表达情况用
Q-PCR、Western blot 进行验证。结果成功诱导比格犬BMSCs成骨分化;蛋白质组学分析获得rhBMP-2 诱导上调的蛋白质9
个,下调的蛋白质11 个。荧光定量PCR技术和Western blot 对LASP1 和ferritin 表达情况进行了验证,发现rhBMP-2 诱导7 d
后,LASP1 显著下调而ferritin 显著上调,与蛋白质组学结果一致。结论LASP1 在调节细胞骨架活性方面发挥重要功能,而
ferritin 是细胞铁离子稳态维持的重要分子,提示这两种蛋白质在rhBMP-2 诱导的比格犬BMSCs成骨分化过程中发挥重要
作用。
     

寒湿痹片对类风湿性关节炎模型大鼠踝关节组织病理改变的影响

目的:观察寒湿痹片对Mtb诱导的大鼠佐剂性关节炎踝关节组织病理改变的影响。方法:将SD大鼠50只,随机分成正常组、模型组、寒湿痹片高剂量组、寒湿痹片低剂量组、来氟米特组,每组10只。除正常组外,其余各组用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)与矿物油混匀,一次性经尾根部皮下注射,诱导SD大鼠实验性类风湿关节炎的发生,观察各组大鼠踝关节滑膜、软骨、关节腔、周围软组织炎症反应等组织病理改变情况,进行综合评分。结果:与模型组比较,寒湿痹片能显著抑制炎症细胞的浸润和滑膜增生,减轻软骨损伤程度(P0.01)。结论:寒湿痹片对实验性类风湿关节炎的滑膜增生及关节炎症具有显著的抑制作用。     

芍药内酯苷干预抑郁模型大鼠蛋白质组学研究

目的:观察芍药内酯苷干预抑郁模型大鼠蛋白质组学的变化。方法:将30只SD大鼠分为空白对照组、抑郁模型对照组、芍药内酯苷组,模型大鼠应用慢性轻度不可预见性应激制作抑郁大鼠模型,其中空白对照组和抑郁模型对照组大鼠给予蒸馏水灌胃,芍药内酯苷组给予芍药内酯苷灌胃。21 d后进行大鼠行为学测试,应用双向凝胶电泳法进行电泳、固定、凝胶染色、图像获取和分析,最后对蛋白质进行质谱分析鉴定。结果:与正常组、芍药内酯苷组比较,模型组大鼠水平穿越格数、垂直运动次数、中央格停留时间差异均有统计学意义(P0.05),模型组大鼠行为评分明显降低。在正常组、模型组、芍药内酯苷组中共挖取7个差异蛋白点,经过串联质谱分析,7个蛋白被鉴定。7种蛋白质依次为:胶质纤维酸性蛋白、吡哆醛/吡哆醇维生素B6磷酸酶、copine6、动力蛋白激活蛋白亚基2、钙网蛋白、烯醇式磷酸酶E1、过氧化物还原酶3。结论:大鼠行为学测试说明芍药内酯苷对慢性轻度不可预见性应激抑郁大鼠具有显著的抗抑郁作用,而双向凝胶电泳分析结果提示了芍药内酯苷对抑郁模型大鼠蛋白质组学的干预影响。     

芍药内酯苷干预抑郁模型大鼠蛋白质组学研究

目的:观察芍药内酯苷干预抑郁模型大鼠蛋白质组学的变化。方法:将30只SD大鼠分为空白对照组、抑郁模型对照组、芍药内酯苷组,模型大鼠应用慢性轻度不可预见性应激制作抑郁大鼠模型,其中空白对照组和抑郁模型对照组大鼠给予蒸馏水灌胃,芍药内酯苷组给予芍药内酯苷灌胃。21 d后进行大鼠行为学测试,应用双向凝胶电泳法进行电泳、固定、凝胶染色、图像获取和分析,最后对蛋白质进行质谱分析鉴定。结果:与正常组、芍药内酯苷组比较,模型组大鼠水平穿越格数、垂直运动次数、中央格停留时间差异均有统计学意义(P<0.05),模型组大鼠行为评分明显降低。在正常组、模型组、芍药内酯苷组中共挖取7个差异蛋白点,经过串联质谱分析,7个蛋白被鉴定。7种蛋白质依次为:胶质纤维酸性蛋白、吡哆醛/吡哆醇维生素B6磷酸酶、copine6、动力蛋白激活蛋白亚基2、钙网蛋白、烯醇式磷酸酶E1、过氧化物还原酶3。结论:大鼠行为学测试说明芍药内酯苷对慢性轻度不可预见性应激抑郁大鼠具有显著的抗抑郁作用,而双向凝胶电泳分析结果提示了芍药内酯苷对抑郁模型大鼠蛋白质组学的干预影响。     

滁菊总黄酮调控类风湿性关节炎模型大鼠滑膜组织Wnt通路SFRP4表达

目的: 研究中药滁菊中主要活性成分总黄酮对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)模型大鼠滑膜组织Wnt通路分泌型卷曲蛋白4(secreted frizzled-related protein 4, SFRP4)基因及SFRP4下游基因β-catenin和C-myc表达的调控作用。方法: 采用大鼠关节炎评分法和足爪肿胀评分法评价滁菊总黄酮(Chuju total flavonoids, CJTF)对RA模型大鼠的治疗作用;RT-PCR和Western印迹分别检测CJTF灌胃治疗对模型大鼠滑膜组织Wnt通路中SFRP4, β-catenin和C-myc基因mRNA和蛋白表达的调控作用。结果: 经CJTF灌胃治疗后, 模型大鼠关节炎评分、足爪肿胀评分均明显下降。模型大鼠滑膜组织中SFRP4基因mRNA和蛋白表达明显上调, 而其下游基因β-catenin和C-myc基因mRNA和蛋白表达明显下调。结论: CJTF对RA模型大鼠有明显的治疗作用, 其机制与以SFRP4为靶点, 抑制RA模型大鼠滑膜组织Wnt通路的激活有关。     

下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方
法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6 例分别等量混合成2 组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳（2-DE）进行分
离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）
进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting 对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,
筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11 个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋
白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-
糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可
能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。
     

电针对急性痛风性关节炎大鼠踝关节髓样细胞表达激发受体表达的影响

目的探讨电针对急性痛风性关节炎（AGA）大鼠受试踝关节滑膜组织髓样细胞表达激发受体（TREM）-1表达的影响。方
法将40只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、电针组,每组各10只;正常组常规喂养,其余采用尿酸钠溶液注射法
建立AGA模型。造模前2 d,正常组与模型组按20 ml/kg予以生理盐水灌胃,西药组按1 mg/kg予以秋水仙碱溶液灌胃,电针组
选取受试侧三阴交、解溪、昆仑,频率1.5~2 Hz,电压9V,电流强度1~3 mA,疏密波,留针20 min,1次/d,连续9 d。分析各组大鼠
关节功能障碍,采用ELISA 法检测受试踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子TNF-α、白细胞介素IL-1β的含量,采用免疫组化及
Western blot 法检测TREM-1表达。结果与正常组比较,模型组大鼠功能障碍指数显著增高（P<0.01）,TNF-α和IL-1β含量显著
增高（P<0.05）,受试踝关节滑膜组织TREM-1表达明显增加（P<0.05）;与模型组比较,西药组和电针组大鼠功能障碍指数显著
降低（P<0.01）,TNF-α和IL-1β含量显著降低（P<0.05）,受试踝关节滑膜组织TREM-1表达明显降低（P<0.05）;西药组与电针组
比较,均无统计学意义（P>0.05）。结论电针治疗AGA的机制可能是通过抑制TREM-1的表达。
     

Screening disease-associated proteins from sera of patients with rheumatoid arthritis: a comparative proteomic study

Background Rheumatoid arthritis （RA） is an autoimmune disease characterized by chronic inflammation at the synovial membrane. Although great progress has been made recently in exploring the etiology and pathogenesis of RA, its molecular pathological mechanism remains to be further defined and it is still a great challenge in determining the diagnosis and in choosing the appropriate therapy in early patients. This study was performed to screen candidate RA-associated serum proteins by comparative proteomics to provide research clues to early diagnosis and treatment of RA. Methods Sera isolated from 6 RA patients and 6 healthy volunteers were pooled respectively and high-abundance proteins were depleted by Plasma 7 Multiple Affinity Removal System. The protein expression profiles between the two groups were then compared by two-dimensional gel electrophoresis （2-DE） and the proteins over/under-expressed by more than 3-fold were identified by mass spectrometry analysis. To validate the differential expression levels of the identified proteins between the two groups, ELISA was performed in two of the identified proteins in individual sera from 32 RA patients and 32 volunteers. Results Eight proteins which over/under-expressed in sera of RA patients were identified. Among them, chain A of transthyretin （TTR） was under-expressed, while serum amyloid A protein, apolipoprotein A （ApoA）-IV, ApoA-IV precursor, haptoglobin 2, ceruloplasmin （Cp）, immunoglobulin superfamily 22 and HT016 were over-expressed. ELISA test confirmed that Cp expressed remarkably higher while TTR obviously lower in RA group compared with volunteer group. Conclusion There were 8 identified proteins differentially expressed between RA group and volunteer group, which might be candidate RA-associated proteins and might be promising diagnostic indicators or therapeutic targets for RA.     

火针对类风湿性关节炎大鼠踝关节JNK、p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的 观察火针对类风湿性关节炎（RA）模型大鼠踝关节c-junN末端激酶（c-jun N-terminal kinease,JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）表达的影响,探讨火针治疗RA的作用机制。方法 采用雄性SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、火针组、药物（甲氨蝶呤,MTX）组,每组各10只。模型组、火针组、药物组大鼠分别给予建立佐剂性关节炎模型,正常组不造模。火针组点刺腰部夹脊穴和阿是穴,共治疗2次。分别于实验第1、2、4、6、8天检测大鼠右后足足跖肿胀度。实验第9天取血测大鼠血清TNF-α和IL-1β,取踝关节滑膜组织做关节组织病理学切片观察及局部滑膜组织蛋白JNK、p38的免疫组化,Western blot法测定局部滑膜组织JNK、p38的蛋白表达的影响。结果 实验第2天,模型组、火针组、药物组足跖肿胀度均与正常组有明显差异(P<0.01),实验第8天,火针组的足跖肿胀度明显低于模型组 (P<0.05);模型组大鼠血清TNF-α和IL-1β（P<0.05）含量高于正常组,滑膜细胞增生及炎性细胞浸润明显增多,而火针组、药物组较模型组血清TNF-α和IL-1β（P<0.05）含量有降低,滑膜细胞增生及炎性细胞浸润减少;与正常组比较,模型组大鼠局部滑膜组织JNK、p38的表达均有所升高（P<0.05～0.01）,与模型组比较,火针组、药物组JNK水平均表现为明显下降（P<0.05）,这种改变在相应的免疫组化镜下图片中均有所体现。结论 火针治疗可以有效地调节丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号系统中JNK、p38蛋白活性的表达,降低MAPK活性,这可能是火针治疗RA起效的作用机制之一。      

RNA干扰沉默STAT3对胶原诱导大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的: 研究小干扰RNA(siRNA)干扰沉默信号转导和转录激活因子3(STAT3)对大鼠类风湿关节炎(RA)的治疗作用,评价其有效性,为RA的基因治疗提供实验依据。方法: 采用鸡Ⅱ型胶原诱导方法建立大鼠 RA(CIA)模型,实验分为正常组(非关节炎大鼠)、模型组(不给予治疗的关节炎大鼠)、阴性对照组(给予乱码RNA的关节炎大鼠)和治疗组(给予STAT3特异干扰siRNA的关节炎大鼠),实验中siRNA均由慢病毒颗粒包载。实验期间观察大鼠一般情况,每7 d检测大鼠关节病变程度并记录,实验第35天处死大鼠后观察其关节病理切片并进行评分;Western blotting法检测大鼠滑膜组织中STAT3蛋白表达水平;RT-PCR法检测大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA表达水平。结果: 与模型组和阴性对照组比较,治疗组大鼠临床及形态学表现均明显减轻。与正常组比较,模型组和阴性对照组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05或P<0.01),治疗组差异无统计学意义(P>0.05);模型组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论: 局部注射siRNA阻断STAT3的表达可明显改善RA大鼠关节的组织病理学表现,其机制可能与STAT3 mRNA和蛋白表达水平降低有关。     

蛋白质组学方法筛选维甲酸耐药相关蛋白

目的比较维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异蛋白表达谱,分析、筛选维甲酸耐药相关蛋白。方法双向凝胶电泳分离维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的全蛋白,经PDQuestv 7．1分析软件筛选出差异表达的蛋白质点,质谱分析获得差异蛋白质的肽质量指纹图谱,以此通过Mascot软件查询SWISS-PROT蛋白数据库,进行差异蛋白质的鉴定,获得候选维甲酸耐药相关蛋白。采用蛋白质印迹试验及半定量RT-PCR在蛋白水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证。结果获得了分辨率高、重复性好的APL细胞的双向电泳图谱,维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的pH4-7双向凝胶电泳图谱显示平均蛋白点分别为890±45和912±56。在二者间分析到57个差异蛋白点,23个蛋白点在RA耐药细胞株MR2中上调,34个蛋白点下调。25个差异蛋白点经质谱鉴定,17个获得成功鉴定,对应于13个不同分子,其中一个是未知功能的新蛋白FLJ00279,其余分属于癌蛋白（DJ-1）,转录相关蛋白（MYC启动子结合蛋白1）,分子伴侣[热应激蛋白（HSP）HSPT0、HSP60及蛋白质二硫键异构酶],代谢类蛋白（抑制素、磷酸丙糖异构酶1及钙网蛋白）和信号转导（Rho GDP dissociation inhibitor beta）以及细胞骨架蛋白（ACTG1蛋白、β-5-微管蛋白抑制素及角蛋白10）。癌蛋白DJ-1、calreticulin、HSP60及ACTG1在RA耐药细胞株MR2中为高表达,其余为低表达。蛋白印迹试验结果与双向电泳结果一致且展现了DJ-1和calreticulin在多个异构体上有差异表达。但半定量RT-PCR显示HSP70和HSP60的蛋白质表达差异与其mRNA水平变化无相关一致性。两种实验结果提示翻译后蛋白的修饰或剪切介导了蛋白的表达差异。结论应用双向凝胶电泳连接质谱的蛋白质组学方法筛选到新蛋白FLJ00279以及功能已知的DJ-1、calreticulin、HSP70、HSP60、抑制素及MYC启动子结合蛋白1等维甲酸耐药相关蛋白,虽然它们与维甲酸耐药的直接关系还需进一步证实,但为从多因素角度上认识维甲酸耐药机制提供了新的线索。     

CCL28-CCR10通路在类风湿关节炎单核细胞迁移中的作用

目的：观察类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者关节中单核/巨噬细胞趋化因子受体CCR10的表达,探讨趋化因子CCL28与其受体CCR10在RA单核细胞迁移中的作用及机制。方法：采用免疫组织化学法分析8例RA患者、4例骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者和4例正常对照者滑膜组织中CCR10的表达并进行细胞染色评分(0～5分),流式细胞术检测26例RA患者和20例健康对照者外周血、15例RA患者滑液CD14⁺单核细胞中CCR10阳性细胞比例,Transwell迁移实验检测CCL28对RA和健康对照单核细胞的趋化性,Western blotting检测CCL28干预RA单核细胞的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路磷酸化。结果：CCR10表达在RA滑膜衬里层细胞及衬里下层的巨噬细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞;RA滑膜衬里层细胞和衬里下层巨噬细胞的CCR10表达明显高于OA和正常对照的滑膜(P均&l...