化痰方对慢性支气管炎大鼠核因子-κB和环氧合酶-2 mRNA表达的影响

近年来,研究发现核因子-κB(NF-κB)和环氧合酶-2(COX-2)与呼吸系统疾病关系密切,本实验建立了慢性支气管炎模型,欲探讨二者在本病发生发展过程中的作用,并观察化痰方的干预作用,力求对中药作用的靶点有进一步认识.     

化痰方对慢性支气管炎大鼠核因子-KB和环氧合酶-2mRNA表达的影响

近年来，研究发现核因子-KB(NF-KB)和环氧合酶-2(cox-2)与呼吸系统疾病关系密切，本实验建立了慢性支气管炎模型，欲探讨二者在本病发生发展过程中的作用，并观察化痰方的干预作用，力求对中药作用的靶点有进一步认识。     

桂枝汤苯丙烯类化合物对环氧合酶-2 及前列腺素抑制的作用

目的:对比桂枝汤中6种苯丙烯类化合物对环氧合酶-2( COX-2)及前列腺素合酶(PGES)的影响,为其抗炎、解热、镇痛作用“构效关系”提供相关实验依据.方法:将小鼠巨噬细胞RAW264.7以5×105个/mL,1.90 mL/孔接种于6孔培养板,用1 mg·L-1脂多糖(LPS)分别刺激0,1,2,4,8,12,24 h,提取其总RNA并用TaqMan real time PCR法检测COX-2及PGESmRNA表达情况,选择1 mg·L-1 LPS剂激4h作为实验条件,建立体外炎症模型.并用桂皮醇、邻甲氧基桂皮醇、桂皮醛、邻甲氧基桂皮醛、桂皮酸、邻甲氧基桂皮酸6种苯丙烯类化合物以0,12,19,32,54,90,150 mg·L-1进行干预,检测其对COX-2及mPGES-1 mRNA表达情况的影响.结果:COX-2与mPGES-1 mRNA表达随LPS刺激时间变化,COX-2于4h时达峰值后下降,而mPGES-1则一直呈上升趋势.mPGES-2与cPGES mRNA则并不随LPS刺激而变化.桂皮醛作用最强,在32 mg·L-1时显著抑制COX-2(P ＜0.05)和mPGES-1(P＜0.01);邻甲氧基桂皮醛次之,在54 mg·L-1时显著抑制COX-2(P ＜0.05)和mPGES-1(p＜0.05).其余4种化合物对COX-2和mPGES-1也均有一定的抑制作用,但其强度远弱于桂皮醛和邻甲氧基桂皮醛,在实验所设浓度范围内均无统计学意义.结论:抑制COX-2和mPGES-1,是桂枝汤苯丙烯类化合物抑制前列腺素E2( PGE2)分泌,进而发挥抗炎解热作用的重要机制.其作用强弱顺序为醛＞醇＞酸,结构中有邻甲氧基则作用减弱,其作用强弱似与丙烯基末端的氧化态关系密切,同时也受到甲氧基的影响.     

电针治疗大鼠慢性炎症痛时脊髓环氧合酶-2 mRNA和蛋白的表达变化

目的:观察多次电针对慢性炎症痛大鼠的镇痛作用和局部炎症组织的修复作用,以及对脊髓环氧合-酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA和蛋白表达的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,在佐剂性关节炎大鼠模型上,电针“阳陵泉”“昆仑”穴(频率2 Hz,强度≤1 mA,连续波,20 min/次,每天治疗1次)。用辐射热测痛法观察电针对慢性炎症痛大鼠辐射热痛敏分数的影响;用HE组织化学染色法观察电针对炎症组织的修复作用;用RT-PCR和免疫组织化学方法观察电针对慢性炎症痛大鼠脊髓COX-2 mRNA和蛋白表达的影响。结果:电针能显著减少慢性炎症痛大鼠痛敏分数的绝对值;电针治疗后大鼠关节腔内炎性渗出和滑膜中性粒细胞浸润基本消失,滑膜水肿减轻,滑膜囊表面修复;电针显著下调了炎症痛引起的大鼠脊髓COX-2 mRNA和蛋白的过度表达。结论:电针对慢性炎症痛大鼠有明显的镇痛作用;电针能较好地缓解局部炎症,促进炎症组织的修复;电针的镇痛作用可能与对脊髓COX-2 mRNA和蛋白表达的调节有关。     

白头翁加味汤调节溃疡性结肠炎大鼠血清白介素-4和肠黏膜环氧合酶-2的研究

目的:观察白头翁加味汤对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血清白介素-4(IL-4)以及肠黏膜环氧合酶-2(COX-2)的影响,探讨白头翁加味汤对UC的作用机理。方法:采用局部刺激法建立大鼠UC模型,将50只大鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、白头翁加味汤高剂量组和低剂量组。造模后给药7d,观察并计算疾病活动指数(DAI),检测各组大鼠血清IL-4以及肠黏膜COX-2。结果:与模型组相比,白头翁加味汤高、低剂量组DAI有明显改善((P<0.05),IL-4含量明显升高((P<0.05),COX-2含量明显降低((P<0.05)。结论:白头翁加味汤可能通过升高IL-4,减少COX-2的合成而减轻炎症反应,促进溃疡的愈合。     

丹参酮ⅡA抗乳腺癌细胞增殖的环氧合酶-2通路研究

目的探讨中药小分子单体化合物丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞增殖及环氧合酶-2表达的影响。方法以3种乳腺癌细胞系T47D、MCF-7、MDA-MB-231作为研究材料,采用MTT法检测不同浓度与不同作用时长下丹参酮ⅡA对3种细胞增殖的影响;采用Westernblot法检测经丹参酮ⅡA处理48 h后3种细胞中环氧合酶-2的蛋白水平;分别用带有荧光素酶标记的环氧合酶-2的启动子质粒及其转录因子核因子-κB、激活蛋白-1的位点质粒转染3种细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测经丹参酮ⅡA处理48 h后3种细胞中环氧合酶-2的转录水平以及转录因子核因子-κB、激活蛋白-1的活性。结果 MTT实验结果显示丹参酮ⅡA可抑制乳腺癌细胞系T47D、MCF-7、MDAMB-231的增殖,且抑制率与其浓度和作用时长呈正相关。Westernblot检测结果显示经丹参酮ⅡA处理48 h后,3种细胞中环氧合酶-2的蛋白水平均显著降低。荧光素酶检测结果显示经丹参酮ⅡA处理48 h后,T47D和MCF-7细胞中环氧合酶-2的转录水平显著降低(P均0.05),同时3种细胞中激活蛋白-1的活性均显著降低(P均0.05),核因子-κB的活性仅在T47D和MCF-7细胞中明显降低(P均0.05)。结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子核因子-κB、激活蛋白-1的活性,进而抑制环氧合酶-2的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。     

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型环氧合酶-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型的建立.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎湿热证组、清浊安中汤高、低剂量防治组,不同组用不同药物灌胃,连续20 d.采用“病证结合”方法,以2％水杨酸钠+高脂高糖+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型,并用清浊安中汤对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、免疫组化(SABC)法检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达.结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,COX-2蛋白表达为0.289±0.036;脾胃湿热证大鼠模型表现出的症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,COX-2蛋白表达大于脾虚组与正常组(P＜0.05),COX-2蛋白表达与炎症程度呈正相关,相关系数为0.662,P＜0.01,清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用.结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节COX-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一.     

柴胡龙骨牡蛎汤下调星形胶质细胞环氧合酶-2/前列腺素E2的表达

目的：探讨柴胡龙骨牡蛎汤对戊四氮（PTZ）诱导的小鼠海马星形胶质细胞环氧合酶-2（COX-2）/前列腺素E2（PGE2）表达的作用。方法:分离培养小鼠海马星形胶质细胞,免疫荧光鉴定胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）表达。将细胞随机分为对照组、PTZ组、PTZ+柴胡龙骨牡蛎汤低剂量（PTZ+CLMD 10 mg/L）组、PTZ+柴胡龙骨牡蛎汤高剂量（PTZ+CLMD 20 mg/L）组,酶联免疫吸附试验检测细胞培养液中COX-2和PGE2的浓度;蛋白质印迹法检测细胞内COX-2、PGE2受体（PTGER2）表达水平。结果:免疫荧光显示星形胶质细胞呈现GFAP阳性表达。与对照组比较,PTZ组COX-2和PTGER2蛋白表达水平明显上调,COX-2和PGE2浓度显著升高（P<0.01）;与PTZ组比较,PTZ+CLMD 10 mg/L组和PTZ+CLMD 20 mg/L组COX-2和PTGER2蛋白表达水平显著降低,COX-2和PGE2浓度也显著下降（P<0.01）。且高剂量的柴胡龙骨牡蛎汤效果更明显（P<0.01）。结论:柴胡龙骨牡蛎汤可抑制PTZ诱导的星形胶质细胞内COX-2/PGE2炎症反应通路。     

环氧合酶-2蛋白在新生鼠坏死性小肠结肠炎中作用的实验研究

目的：观察环氧合酶-2蛋白(COX-2)在新生鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)中的作用。方法：建立缺氧高氧损伤所致的新生鼠坏死性小肠结肠炎模型，用免疫组化方法检测正常和病变鼠不同时相点(1、3、4、6、7天)肠组织中COX-2蛋白的表达。结果：COX-2蛋白在正常新生鼠肠组织中呈低强度表达。在病变肠组织中表达强度明显增高，且不同时相点表达不同，1天表达增加，4天达高峰，而后渐下降，7天时下降至1天时水平。结论：环氧合酶-2与新生鼠坏死性小肠结肠炎的发生发展密切相关。     

中药安胃汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠转化生长因子-α、环氧合酶-2的mRNA表达的影响

目的:为熟知中药安胃汤对慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)的功效,本次研究通过对比来了解各药对CAG模型大鼠转化生长因子-αc(Transforming Growth Factor-α,TGF-α)、胃黏膜环氧合酶-2(Cycloxygenase-2,COX-2)的mRNA表...     

英连金化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎伴癌前病变大鼠COX-2、VEGF表达的影响

目的：观察英连金化浊解毒方对DYS大鼠COX-2、VEGF表达的影响。方法：将120只大鼠随机分为空白组、模型组、大、中、小剂量组及干预组,每组20只。模型组采用N-甲基-N-硝基N-亚硝基胍配合饥饱失常诱导造模,造模成功后分组治疗,治疗24周后,处死大鼠,观察对DYS的预防效果,同时检测COX-2、VEGF表达率。结果：英连金化浊解毒方大、中、小剂量组COX-2、VEGF表达率同模型组两两比较均降低,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论：英连金化浊解毒方（大、中、小剂量组）可能通过降低COX-2、VEGF表达,来抑制DYS的发生。     

复方苦参汤对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中iNOS和COX-2蛋白表达的影响

目的:观察复方苦参汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型结肠黏膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶2(COX-2)蛋白的作用机制.方法:将20只BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、模型组、复方苦参汤组和美沙拉嗪组,每组5只.先适应性喂养1周,在第8天,除正常组外,其余3组分别予3％葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用1周制...     

小柴胡汤对大鼠子宫内膜异位症COX-2表达的影响

目的探讨小柴胡汤治疗大鼠子宫内膜异位症的作用机制。方法建立大鼠内异症动物模型,将成模鼠随机分为对照组、小柴胡汤组、丹那唑组及联合用药组(小柴胡汤 丹那唑),分别给药进行治疗。采用免疫组化方法,观察分析各用药组在位、异位内膜环氧合酶-2(COX-2)的表达。结果小柴胡汤组和联合用药组大鼠异位内膜COX-2的表达水平明显低于其在位内膜,丹那唑组和对照组则正好相反,异位内膜COX-2的表达明显高于在位内膜。结论小柴胡汤治疗大鼠子宫内膜异位症的作用机制可能是通过下调异位内膜COX-2的表达,从而减少前列腺素的产生而实现的。     

枳术颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织COX-2和VEGF表达的影响

目的:观察枳术颗粒对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠的疗效,并探讨其作用机制。方法:选取已建立CAG模型的大鼠,分为模型组,胃复春(0.86 g·kg-1)组,枳术颗粒高、中、低剂量(20,10,5 g·kg-1)组。用蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测胃组织中环氧合酶-2(COX-2),血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜腺腔结构不完整,炎细胞浸润黏膜全层,体重增长率降低,COX-2,VEGF蛋白及mRNA表达显著增加(P0.01);与模型组比较,枳术颗粒高、中、低剂量组及胃复春组均显著增加CAG大鼠体重增长率(P0.01),下调大鼠胃组织COX-2,VEGF蛋白及mRNA表达(P0.01);与胃复春组比较,枳术颗粒高、中、低剂量组均显著增加CAG大鼠体重增长率(P0.01),高剂量组可下调大鼠胃组织COX-2,VEGF蛋白及mRNA表达,但无明显差异。结论:枳术颗粒可加快大鼠体重增长,使CAG大鼠胃黏膜组织得到改善和恢复。其作用机制可能为下调胃黏膜破坏因子COX-2,VEGF的表达,起到预防及治疗作用。     

基于网络药理学的四君子汤治疗2型糖尿病的作用机制研究

目的通过网络药理学预测四君子汤治疗2型糖尿病(T2DM)的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制;并选取AMPK信号通路中的Ins R、PI3K进行动物实验验证。方法通过中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献挖掘和本课题组已有研究收集四君子汤及其4味中药党参、白术、茯苓、甘草的化学成分,经口服生物利用度(OB)、类药性(DL)、半衰期(HL)3个条件筛选得到药物的有效成分,通过Swiss Target Prediction数据库进行有效成分靶点预测;同时从TTD、Drugbank和Dis Ge NET数据库对T2DM的靶点进行检索及筛选;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape3.2.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用网络,对该网络进行拓扑学分析筛选节点自由度(degree)≥平均自由度的节点得到核心有效成分-核心靶点网络,同时使用String数据库绘制核心靶点蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;对核心靶点基因利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG分析,构建核心有效成分-核心靶点-代谢通路网络图,探讨四君子汤治疗T2DM的潜在作用机制。采用系统对接网站进行相关度前3蛋白对相关度前5成分的分子对接。并进一步采用动物实验进行验证:选取SD大鼠,运用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM模型,5.65 g/kg四君子汤ig给药28 d,检测各组大鼠的空腹血糖(FBG)及口服葡萄糖耐量(OGTT),RT-PCR法检测AMPK信号通路中Ins R、PI3Km RNA的表达量。结果从四君子汤中筛选出113个化学成分,涉及治疗T2DM的47个靶点;根据节点自由度≥平均自由度,筛选出核心成分22个,核心靶点27个;GO分析结果表明其涉及血糖稳态、脂肪组织发育的正调控等7个生物过程,涉及类固醇激素受体活化、药物结合等4个分子功能,包括质膜、核常染色质2个细胞组成;KEGG分析结果表明其可能通过AMPK信号通路、PPAR信号通路、胰岛素抵抗等14个信号通路治疗糖尿病。分子对接60%成分具有强烈的结合活性,40%成分具有较强的结合活性。四君子汤可显著改善T2DM大鼠OGTT(P<0.001),同时降低FBG(P<0.01),显著升高Ins R、PI3K mRNA(P<0.001)的表达量,验证了网络药理学的部分预测结果。结论四君子汤通过多靶点、多通路治疗T2DM,为其分子机制的研究奠定一定的基础。     

芒果苷对自发性高血压大鼠相关血管形态学及MCP-1/CCR-2通路的影响

目的:观察自发性高血压大鼠(SHR)颈动脉、胸主动脉、肠系膜上动脉形态学变化,进一步深入研究芒果苷对SHR相关血管炎性因子表达及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/趋化因子受体-2(CCR-2)通路的影响。方法:SHR 40只,随机分为模型组,苯那普利组(10 mg·kg~(-1))与芒果苷低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg~(-1)),另选同周龄8只雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为正常组。连续灌胃8周后,每两周观察各组大鼠收缩压情况,苏木素-伊红(HE)染色观察颈动脉、胸主动脉、肠系膜上动脉形态学,免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胸主动脉MCP-1,CCR-2的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测胸主动脉MCP-1,CCR-2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组炎症细胞明显增多,收缩压显著高于WKY组血压(P 0. 01),胸主动脉中MCP-1,CCR-2蛋白和mRNA表达显著升高(P 0. 01);与模型组比较,苯那普利以及芒果苷高剂量组炎症细胞明显减少,内皮边缘有改善、纤维组织浸润明显好转,收缩压显著降低(P 0. 01),苯那普利及芒果苷低、中、高剂量组胸主动脉中MCP-1,CCR-2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P 0. 01)。结论:自发性高血压大鼠颈动脉、胸主动脉、肠系膜上动脉存在一定的炎症损伤。其机制可能是芒果苷通过抑制SHR血管中MCP-1/CCR-2通路表达,从而对血管产生抗炎作用。     

桂皮醛经JAK2/STAT3通路抑制VEGF诱导的内皮细胞增殖、迁移及成管

目的:为探讨桂皮醛对糖尿病视网膜病变新生血管的作用及机制,观察了桂皮醛对血管内皮生长因子(VEGF)诱导EA. hy926细胞增殖、迁移、成管以及Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法:将EA.hy926细胞分成空白组、模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和划痕实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞增殖和迁移作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(90,150μmol·L-1)组,采用管腔形成实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞成管作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+AG490 (50μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(90μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)+AG490(50μmol·L-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果:与空白组比较,模型组能够显著地促进EA. hy 926细胞增殖和迁移(P 0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组能显著抑制VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖和迁移(P 0. 01)。与空白组比较,VEGF对EA. hy 926细胞成管具有一定的促进作用,成管的节点数、交叉点数、网眼数和血管分支数均有增加,但无统计学差异。与模型组比较,桂皮醛(90,150μmol·L-1)组对成管的节点数、交叉点数和网眼数均有明显抑制作用(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,模型组p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(150μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P 0. 01),桂皮醛(90μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖、迁移、成管具有明显的抑制作用,该作用与抑制JAK2/STAT3通路的激活有关。