单人行大鼠原位肝移植手术难点及技巧的探讨

目的探讨单人建立稳定大鼠原位肝移植模型的手术难点及技巧。方法对200只成年雄性SD大鼠,采用改良的Kamada二袖套法,单人及双人裸眼下行大鼠原位肝移植各50对。结果单人与双人操作组供体手术时间、受体手术时间、无肝期分别为（27.22±1.03）min和（26.47±1.16）min、（50.58±3.10）min和（48.18±3.70）min、（11.60±0.11）min和（11.28±0.08）min。单人与双人操作组手术成功率、1周存活率、1个月存活率分别为90%和94%、88%和88%、84%和86%。结论改良的二袖套法,单人操作简便,成功率高,无需助手协助,可为大鼠原位肝移植实验提供稳定可靠的动物模型。     

Construction and demonstration of acute rejection model after orthotopic liver transplantation in rats

目的 建立大鼠原位肝移植急性排斥模型.方法 通过改良的二袖套法,以Lewis (RTl1)大鼠作为供体,Brown Norway(BN Rtln)大鼠作为受体,进行原位肝移植.实验组(n=15),术后未进行特殊的干预;对照组(n=15),术后1-7 d用FK506 0.2 mg·kg-1·d-1灌胃.术后观察两组受体的生存情况,检测肝功能、细胞因子变化、肝组织急性排斥反应和肝细胞凋亡.结果 实验组平均生存时间(9.17±1.17)d,明显短于对照组的(50.17±8.50) d(P＜0.05);术后实验组在肝功能各指标水平、细胞因子(IL-2,IFN-γ)表达水平、肝组织排斥活动指数(RAI)和肝细胞凋亡数方面明显高于对照组,而实验组的细胞因子(IL-4,IL-10)浓度明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 以近交系Lewis大鼠为供体、BN大鼠为受体进行肝移植,发生的急性排斥反应强烈而且稳定,是较为理想的大鼠肝脏移植急性排斥模型.     

大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立及论证

目的建立大鼠原位肝移植急性排斥模型。方法通过改良的二袖套法,以Lewis(RTl 1)大鼠作为供体,Brown Norway(BN Rt1n)大鼠作为受体,进行原位肝移植。实验组(n=15),术后未进行特殊的干预;对照组(n=15),术后1-7d用FK506 0.2mg.kg-1.d-1灌胃。术后观察两组受体的生存情况,检测肝功能、细胞因子变化、肝组织急性排斥反应和肝细胞凋亡。结果实验组平均生存时间(9.17±1.17)d,明显短于对照组的(50.17±8.50)d(P<0.05);术后实验组在肝功能各指标水平、细胞因子(IL-2,IFN-γ)表达水平、肝组织排斥活动指数(RAI)和肝细胞凋亡数方面明显高于对照组,而实验组的细胞因子(IL-4,IL-10)浓度明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论以近交系Lewis大鼠为供体、BN大鼠为受体进行肝移植,发生的急性排斥反应强烈而且稳定,是较为理想的大鼠肝脏移植急性排斥模型。     

胆道相对热缺血-再灌注损伤对大鼠肝移植早期胆汁成分的影响

目的 探讨胆道相对热缺血-再灌注损伤对大鼠肝移植早期胆汁成份的影响.方法 将24只SD大鼠随机分为假手术组(A组)、胆道相对热缺血0 min组(B组)和60 min组(C组).建立大鼠自体原位肝移植胆道外引流模型,检测各组术后第0、1、3、5、7天胆汁中总胆汁酸(TBA)浓度、磷脂(PL)浓度、TBA/PL值,及各亲水性、疏水性胆盐的摩尔分数.结果 在术后早期同一时点,A、B两组的TBA浓度、PL浓度、TBA/PL值、各亲水性及疏水性胆盐的摩尔分数均无统计学差异(P＞0.05).与A、B组相比,C组术后早期胆汁中TBA浓度及PL浓度下降(P＜0.05),TBA/PL值升高(P＜0.05),但均在7 d内恢复正常;C组术后早期疏水性胆盐TC、TDC、TCDC的摩尔浓度升高(P＜0.05),亲水性胆盐T-β-MC的摩尔分数下降(P＜0.05),均在3 d内恢复正常.结论 胆道相对热缺血-再灌注损伤使肝移植术后早期胆汁中胆盐比例增高,特别是疏水性胆盐比例增高,胆汁毒性增强;术后第7天时胆汁成分即可恢复正常,胆汁毒性消失.     

白细胞介素-10联合抗CD40L单克隆抗体对大鼠小肠移植早期排斥反应的研究

目的探讨重组大鼠白细胞介素-10(rIL-10)联合抗大鼠CD40L单克隆抗体对抑制大鼠小肠移植早期排斥反应的作用,为小肠移植免疫提供实验依据。方法将30只雄性SD大鼠和Wistar大鼠(各15只),建立(SD→Wister)大鼠小肠移植模型,随机分为A、B、C3组各10只。A组为生理盐水对照组;B组应用rIL-10;C组应用rIL-10联合抗CD40L单克隆抗体。3组均于术后第2天开始注射。术后第5、7天从3组随机各取5只,取小肠移植物,行组织病理学检查;采受体大鼠的外周血检测IL-2、干扰素-γ(INF-γ)表达水平。结果组织病理学检查:与A组相比,B、C组早期排斥反应明显延迟,且C组早期排斥反应较B组轻;外周血血清学检测:B、C组受体大鼠血清IL-2、INF-γ较A组明显降低,且C组较B组均有不同程度的下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 rIL-10联合抗大鼠CD40L单克隆抗体能有效抑制大鼠小肠移植的早期排斥反应。     

活体肝脏移植供者安全性评估

目的 评估供肝手术方式对供体的安全性.方法 86例供体接受了活体肝移植供肝手术:左叶供肝58例(A组);右叶供肝28例(B组).收集并分析供者住院及出院1、3、6个月CT、B超及肝功能随访资料.结果 86例供体手术顺利,康复出院.A、B两组平均手术时间[(7.40±0.88) h vs. (8.00±0.84) h]、平均失血量[(457.41±40.74) ml vs. (518.96±40.74) ml]和平均术后住院时间[(18.62±0.92) d vs. (10.16±0.99) d]均有统计学差异(P<0.05).两组供体肝功能指标可有轻度波动,1周内均恢复正常.CT显示供肝者残留肝恢复至(或超过)正常肝体积的时间:A组6～11个月,B组10～14个月(P<0.05).A、B组术后恢复期分别有30.7%和 32.3%供肝者出现一过性腹部不适、疼痛等;A、B组术后8个月分别有88.5%和85.6%的供肝者恢复术前工作或劳动.结论 健康成人捐献部分肝脏是安全、可行的.     

雷帕霉素对肝脏缺血再灌注中线粒体DNA聚合酶γ的调控作用

目的 研究大鼠肝缺血再灌注损伤中mtDNA聚合酶γ的表达情况,以及雷帕霉素对其的调控作用.方法 SD大鼠60只,制作大鼠肝脏缺血再灌注模型,分四组:A组:肝脏缺血30 min无干预组;B组:缺血50 min无干预组;C组:缺血50 min雷帕霉素干预组;D组:假手术组.分别于术后24 h、第3天、第5天处死各组大鼠,取肝组织进行病理检测;采用RT-PCR检测mtDNA聚合酶γmRNA的表达.结果 C组肝组织病理损害和mtDNA聚合酶γmRNA表达明显低于B组(P＜0.01),术后A组、B组mtDNA聚合酶γmRNA的表达逐渐降低,C组则一直维持在同一水平.结论 雷帕霉素能够减轻肝脏缺血再灌注损伤,抑制HIRI中mtDNA聚合酶γmRNA的过度表达,从而对肝脏缺血再灌注损伤起保护作用.     

供体腹主动脉行肝动脉重建对猪肝移植血流动力学和心肌肌钙蛋白Ⅰ的影响

目的 观察以供体腹主动脉重建肝动脉对受体血流动力学和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)的影响.方法 将健康广西巴马小型猪12头随机分为供、受体两组,每组6头,受体再随机分为A组(肝动脉吻合组)和B组(腹主动脉吻合组)),每组3头.供、受体动物均接受静脉全身麻醉,气管插管后行机械通气.供体动物行快速肝脏切取术取出供肝.受体动物置入Swan-Ganz导管,行背驮式肝移植术,A、B组采用不同的肝动脉重建方式,A组在不阻断腹主动脉下采用肝动脉端端连续吻合,B组在阻断腹主动脉后以其腹主动脉侧壁和供肝腹主动脉行端侧吻合.检测开腹前5 min (T0)、无肝期30min (T1)、新肝期30 min (T2)、肝动脉重建后10 min (T3)、术毕时(T4)、术后1 h(T5)6个时间点的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、中心静脉压(CVP)、肺动脉压(PAP)、肺动脉楔压(PCWP)、心排量(C0)等血流动力学参数和cTnI.结果 在T0～T2时,组间各指标无差别;在T3时点,B组HR、CO低于A组,MAP、CVP、PAP、PCWP高于A组,cTnI组间无差别;在T4、T5时,B组MAP低于A组,CVP、PAP、PCWP、cTnI高于A组,HR、CO组间无差别.结论 采用完全阻断腹主动脉和以腹主动脉行端侧吻合的肝动脉重建方式加重了血流动力学的变化和心肌损伤.     

大鼠异位辅助性肝移植术后PFP mRNA的表达

目的建立稳定的脾窝异位辅助性肝移植大鼠模型,观察术后移植肝病理学变化,并应用RT-PCR法,研究外周血中PFP mRNA的表达与急性排斥反应的关系。方法采用健康清洁成年Wistar和SD大鼠。实验分为3组：A组：空白对照组n=30;B组：肝移植术后免疫抑制组,n=30;C组：肝移植术后非免疫抑制组,n=30。各组在术后第1、3、5、7、10d随机取6只动物肝脏和外周血,将肝脏作病理学检查,并应用RT-PCR方法监测外周血的穿孔素mRNA的表达。结果外周血PFP mRNA表达能随病理变化,以数值的形式反应术后的急性排斥反应变化过程。通过检测未发现A组PFP mRNA表达,而B、C组均有表达,对比各时间观察的穿孔素表达水平发现B组与C组比较有显著差异（P〈0.05）。结论 （1）通过各时间点的监测,发现外周血PFPmRNA表达水平与移植肝的病理变化趋同,因而应用半定量RT-PCR检测外周血穿孔素mRNA表达可作为早期诊断肝移植急性排斥反应一种较好的方法。（2）免疫抑制剂的应用,可以有效地减少炎性细胞的浸润,降低穿孔素mRNA的表达,对减轻急性排斥反应作用明显。但仍无法较完全地控制肝细胞坏死和出血。     

利伐沙班对原位肝移植大鼠血液流变学的影响

目的 探讨利发沙班对肝移植大鼠血栓形成的预防作用.方法 成年大鼠40只,随机分为A、B、C、D四组,均开腹行原位肝移植.于术前1 d、手术中、术后1、2、3 d,A组分别口服利伐 沙班1次,剂量为5 mg/kg,B组分别静脉输注低分子右旋糖酐20 ml,C组分别皮下注射低分子肝素 200 U/kg,D组为空白对照组,只作肝移植,不用抗凝药物.术前、术后2 h和术后3 d检测血液流变学.结果 与D组比较,A、B、C组大鼠肝移植前后血液流变学均有明显改善.A、B、C三组血液流变学指标差异无统计学意义.D组有1只大鼠死亡.结论 利伐沙班能有效预防大鼠肝移植术后血液的高凝状态.