The Effect of Ribvirin Against Influenza Virus A by Injected Into Albumen in Improved Chick Egg Model

目的 建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型.方法 设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度.结果 在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P＜0.05).感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P＜0.05).结论 在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制.     

银翘柴桂汤抗甲型流感病毒作用的实验研究

目的 观察甲型流感病毒FM1感染小鼠体内流感病毒复制量的不同,研究中药复方银翘柴桂汤体内抗甲型流感病毒的作用.方法 NIH小鼠分为正常对照组、病毒模型组、利巴韦林组及银翘柴桂汤组,除空白对照组外,将甲型流感病毒FM1稀释液滴鼻感染各组小鼠,建立流感病毒感染模型.病毒感染前1 d及感染后4 d,银翘柴桂汤组及利巴韦林组分别灌胃银翘柴桂汤和利巴韦林,病毒感染后第5天处死小鼠,解剖,提取肺组织总RNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法测定小鼠肺组织流感病毒复制量.结果 正常对照组无扩增曲线,Ct>30,流感病毒病原体检测阴性;银翘柴桂汤组、利巴韦林组及病毒模型组扩增曲线Ct分别为19.49±1.40、21.02±4.25、15.80±4.18,流感病毒病原体检测阳性.与病毒模型组病毒复制量(128 973.40±18.14)相比,利巴韦林组病毒复制量(33 327.29±19.56)降低,有显著差异性(P<0.05);银翘柴桂汤组病毒复制量(79 104.28±2.52)降低,有显著性差异(P<0.05).结论 建立的流感病毒感染模型可靠,银翘柴桂汤对流感病毒感染小鼠肺内流感病毒增殖具有明显抑制作用,有抗流感病毒作用.     

pSIREN/PB1 siRNA重组质粒抗甲型流感病毒研究

目的研究重组质粒pSIREN/PB1在鸡胚尿囊液中干扰甲型流感病毒复制的效果。方法设计1对编码PB1siRNA的寡核苷酸序列,经退火互补形成双链,再克隆至带有U6启动子的RNAi ready pSIREN-shuttle线性化载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,双酶切和测序鉴定重组质粒pSIREN/PB1。大量提取重组质粒pSIREN/PB1,用脂质体进行包裹后,按每只鸡胚90μg质粒量接种于10日龄鸡胚尿囊腔,4血凝单位甲型流感病毒液分别于质粒接种后0h、24h、48h接种于鸡胚尿囊腔,流感病毒接种48h后收集无色澄清尿囊液进行血凝实验检测流感病毒效价。结果甲型流感病毒PB1基因的siRNA编码序列成功克隆至pSIREN质粒载体。经酶切和测序分析,重组质粒pSIREN/PB1中的siRNA编码序列均完全正确。将脂质体包裹的pSIREN/PB1质粒和病毒液同时注射入鸡胚尿囊腔后,收获的甲型流感病毒效价最低。结论成功构建了表达甲型流感病毒PB1siRNA的重组质粒pSIREN/PB1,并且它可以抑制鸡胚中流感病毒复制。此研究进一步证实了RNA干扰对流感病毒复制的抑制作用,为开发流感基因防治新方法奠定了基础。     

抗感颗粒抗甲型流感病毒的实验观察

目的 观察抗感颗粒在鸡胚和BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用.方法 (1)鸡胚实验:将甲型流感病毒鼠肺适应株FM1接种9日龄鸡胚,再将不同剂量的抗感颗粒注入鸡胚,以血凝效价为指标,观察抗感颗粒对流感病毒的作用,设立流感病毒对照组和利巴韦林片对照组,每组6个鸡胚.(2)小鼠实验:将BALB/c小鼠随机分为病毒感染模型组、正常对照组、利巴韦林片组及抗感颗粒低、中、高剂量组,每组20只小鼠.用流感病毒感染小鼠后灌胃给药,以实验小鼠的生存情况、死亡保护率及延长生命率等指标观察抗感颗粒的抗流感病毒作用.结果 在鸡胚实验中,抗感颗粒高、中剂量组均能抑制流感病毒复制并达到显效结果,病毒血凝效价比流感病毒对照组分别低了5个、3个稀释度.在小鼠实验中,抗感颗粒各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状,减少小鼠死亡,死亡保护率为35.0%～55.0%;生存时间延长,延长生命率为73.0%～88.9%、最低有效剂量为3.00g/kg.结论 抗感颗粒对甲型H1N1流感病毒的增殖有抑制作用,对流感病毒感染引起的小鼠死亡有保护作用.     

金银花、连翘配伍提取物体外抗甲型流感病毒FM1株的实验研究

目的:观察金银花、连翘配伍提取物(JLT)体外抑制甲型流感病毒FM1株的作用。方法:采用血凝试验方法,测定不同质量浓度JLT体外和鸡胚内抑制流感病毒效价,分析JLT对病毒增殖的影响。结果:与病毒对照组比较,JLT组血凝效价降低,其抑制作用时间可从1 h持续到24 h,其对病毒的抑制作用随着药物质量浓度的降低而逐渐减弱;JLT在400 mg/mL、200 mg/mL及100 mg/mL时,对感染流感病毒鸡胚具有预防和保护治疗作用(P<0.001),而在400 mg/mL时的预防作用明显优于阳性对照组(P<0.05)。结论:JLT可有效抑制甲型流感病毒FM1株。     

裂解气相色谱法分析流感病毒和新城疫病毒的初步研究

应用裂解气相色谱法(PGC)分析了五株流感病毒和一株新城疫病毒感染的鸡胚尿囊冻干样品。正常鸡胚尿囊液样品与病毒感染样品间,流感病毒与新城疫病毒间以及甲型流感病毒与乙型流感病毒间存在着明显差异。但不同血清亚型的病毒样品具有特征相似的色谱图,相互间无明显差异。实验表明PGC作为鉴别或鉴定人类病毒的一种新方法是可行的。     

金刚烷胺与利巴韦林对不同甲型流感病毒株的体外作用敏感性比较

目的评价金刚烷胺和利巴韦林对不同甲型流感病毒株的体外抑制作用,为临床选择抗流感病毒药物提供实验依据。方法分别接种甲型流感病毒标准实验株[H1H1(A/PR/8/34、A/FM1/47),H3N2(A/Aichi/2/1968)]和临床分离株[H1N1(A/Guangzhou/GIRD02/2009、A/Guangzhou/GIRD166/2009),H3N2(A/Guangzhou/GIRD18/2009、A/Guangzhou/GIRD26/2009)],于狗肾细胞(MDCK),采用空斑试验观察金刚烷胺和利巴韦林对甲1和甲3型流感病毒不同实验株和分离株的敏感性。对测试毒株的MP基因进行序列测定和分析,了解金刚烷胺的药物敏感性。结果金刚烷胺在MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)为335μg/ml,对部分甲型流感病毒标准实验株[A/FM1/47(H1N1)、A/Aichi/2/1968(H3N2)]及临床分离株[A/Guangzhou/GIRD02/2009(H1N1)]有抑制作用(半数有效浓度IC50分别为14.9、20.1、16.8μg/ml)。利巴韦林的TC50为2.05mg/ml,对测试的所有毒株均有抑制作用(IC50为6.8～37μg/ml)。金刚烷胺耐药毒株均为单位点突变(第31位的丝氨酸S置换为天冬酰胺N,S31N)。结论甲型流感病毒对金刚烷胺较易出现耐药,而利巴韦林体外对金刚烷胺敏感株和耐药株均有显著的抑制作用,临床抗流感病毒治疗时可考虑应用。     

痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤及血凝滴度影响的研究

目的观察痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠肺组织损伤及肺组织匀浆病毒血凝滴度的影响.方法采用流感病毒FM1感染小鼠模型,设立正常对照组、模型组、利巴韦林阳性药物组、痰热清注射液大、中、小剂量组.观察各组小鼠肺指数、肺匀浆的血凝滴度、肺组织的病理改变.结果与模型组比较,痰热清注射液大、中、小剂量组小鼠肺组织匀浆病毒血凝滴度明显降低(P＜0.05);痰热清注射液大、中剂量组小鼠肺组织病理形态学明显改善;与模型组比较,痰热清注射液大中小剂量组小鼠肺指数显著降低(P＜0.05).结论痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠肺匀浆的血凝滴度具有明显的降低作用,对其所致肺损伤具有明显的改善作用.     

菊黄上清含片抗流感病毒的研究

目的: 研究菊黄上清含片在小鼠体内的抗流感病毒作用.方法: 以流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染小鼠,用高、中、低浓度菊黄上清含片药液灌胃小鼠,观察小鼠的生存时间、死亡率、肺指数和肺组织病变程度.结果: 菊黄上清含片对流感病毒FM1致小鼠肺病变有明显抑制作用,对流感病毒FM1感染小鼠具有显著的保护作用,明显抑制小鼠体内流感病毒FM1的增殖.结论: 菊黄上清含具有明显的抗流感病毒作用.     

芩石解毒颗粒治疗流行性感冒的实验研究

目的:通过观察芩石解毒颗粒对流感病毒性肺炎小鼠的治疗作用、对发热模型大鼠的解热作用、对流感病毒引起的细胞病变(CPE)的抑制作用来考察芩石解毒颗粒对流行性感冒的疗效。方法:(1)将小鼠随机分为空白组,模型组,芩石解毒颗粒高、中、低剂量组,连花清瘟组和利巴韦林组,于感染前一天开始灌胃给药,连续5 d,采用流感病毒鼠肺适应株FM115LD50滴鼻感染小鼠,感染后96 h解剖,取肺称重,进行病理检测,观察芩石解毒颗粒对流感病毒性肺炎小鼠的治疗作用;(2)选取体温36.6~38.3℃,且3 d内变化不超过0.3℃的大鼠50只,随机分为芩石解毒颗粒高、中、低剂量组,连花清瘟组,模型对照组,每组10只,采用背部皮下注射2,4-二硝基苯酚(DNP)致热法建立大鼠发热模型,观察给药后1 h、2 h、3 h、24 h的体温变化;(3)通过体外培养技术进行狗肾细胞(MDCK)培养,以甲型流感病毒株感染MDCK细胞,以利巴韦林为阳性对照药,比较观察芩石解毒颗粒对流感病毒引起的细胞病变的抑制作用。结果:肺炎小鼠实验显示芩石解毒颗粒可降低肺指数,改善肺部组织病变;解热实验显示芩石解毒颗粒具有解热作用;细胞实验显示芩石解毒颗粒对甲型流感病毒有一定疗效。结论:芩石解毒颗粒对流行性感冒具有良好的治疗作用。     

紫贻贝多糖抑制流感病毒在鸡胚中增殖的研究

目的:研究紫贻贝多糖(MEPS)对流感病毒在鸡胚中增殖的抑制作用。方法:采用血凝滴度测定研究MEPS对鸡胚培养甲型流感病毒的抑制作用。结果:与病毒对照组比较,MEPS各剂量组的血凝滴度降低差异有非常显著性(P<0.01)。结论:MEPS能明显抑制鸡胚培养流感病毒的增殖,具有开发成抗流感病毒生物制剂的前景。     

禽冠状病毒的分离鉴定及膜蛋白基因的克隆

目的分离鉴定禽冠状病毒,对该病毒的M基因序列进行分析。方法采用鸡胚传代分离培养病毒,用血凝特性、鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚矮小化、动物回归试验等方法鉴定病毒,用RT-PCR克隆病毒的膜蛋白基因并对其测序。结果分离病毒的生物学特性符合禽冠状病毒,膜蛋白基因与标准毒株膜蛋白基因为核苷酸序列同源性为91.9%,氨基酸的同源性为92.5%。结论本研究分离到1株禽冠状病毒,命名为IBV-HN05,该毒株可能是疫苗株的变异株。     

深圳市不同人群和鸡群感染禽流感病毒H9N2亚型状况研究

目的分析禽流感病毒H9N2亚型毒株在深圳市不同人群和鸡群中的感染状况。方法采用常规的鸡胚双腔法分离流感病毒；采用红细胞凝集抑制试验（H1）和中和试验测定流感病毒抗体。结果从深圳市农贸市场300只鸡只样本中分离到27株H9N2亚型流感病毒，其抗体阳性率为7％，但未能从人群中分离到H9N2亚型流感病毒。人群血清中其抗体阳性率与职业高度相关，与鸡只密切接触的人群明显高于非密切接触的人群。结论禽流感病毒H9N2亚型对人群和鸡群均易感，可通过近距离的密切接触传播；推测人所感染的H9N2可能主要来源于鸡只等家禽。     

一种兔圆小囊抗菌肽对新城疫病毒抑制作用

目的观察兔圆小囊抗菌肽对鸡新城疫病毒强毒株有无抑制作用。方法将NDV用圆小囊抗菌肽处理后再接种9日龄鸡胚，测定鸡胚尿囊液中的NDV血凝效价，并观察鸡胚病变。结果与对照组比较，兔圆小囊抗菌肽使鸡胚尿囊液中新城疫病毒的血凝效价降低，同时还能抑制因以上新城疫病毒所引起的鸡胚病变。结论兔圆小囊抗菌肽在体外对鸡新城疫病毒强毒株具有抑制作用。     

银翘散提取物对小鼠流感病毒肺炎治疗作用的实验研究

目的观察银翘散对流感病毒（IV）感染小鼠肺组织的影响。方法以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株（FM1）感染小鼠为模型,采用银翘散大、中、小三个剂量灌胃治疗。感染第5天对小鼠进行肺组织病理学观察和测定肺组织IV血凝滴度测定并计算肺指数。结果银翘散各给药组肺组织IV血凝滴度和肺指数明显降低,与病毒感染模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。银翘散大剂量组与利巴韦林组比较无显著性差异（P〉0.05）;银翘散各治疗组间比较,大、小剂量组差异显著（P〈0.05）。结论银翘散大剂量组能有效改善病理性肺组织,降低肺组织IV血凝滴度和肺指数,与利巴韦林对照组比较,其对IV小鼠肺炎的改善作用相当。     

鼠痘病毒的分离和鉴定

从一些病鼠中分离出鼠痘病毒SY株。经鸡胚绒毛尿囊膜接种、组织培养、电镜观察和血清学试验鉴定,符合鼠痘病毒的特征。     

Characterization of infectious laryngotracheitis viruses, antigenic comparison by kinetics of neutralization and immunization studies

Five isolates of infectious laryngotracheitis virus were compared by pock formation on the chorioallantoic membrane of embryonated eggs, plaque size in chicken embryo kidney tissue culture, and antigenic relationship using reciprocal kinetics of neutralization. The A4557-5 strain of infectious laryngotracheitis virus, which causes mild respiratory disease, produced pocks with a zone of edema on the chorioallantoic membrane. A virulent virus (Virus 1), isolated from an outbreak of severe disease characterized by a diphtheritic laryngotracheitis, produced the largest plaques in chicken embryo kidney cell culture. Other virulent viruses (Viruses 2, 3 and V154) did not have unique growth characteristics when grown on the chorioallantoic membrane or in chicken embryo kidney cell culture. All viruses were closely related antigenically as shown by kinetics of neutralization but viruses 2 and 3 were not homogeneous with the other three viruses when neutralized by anti-V154 chicken serum. Following aerosol infection, chickens infected with the A4557-5 virus were immune to challenge with virulent V154 virus. However, in comparison to SA-2 virus, this virus was a less effective immunizing agent when administered by the vent or drinking water methods.