整合素连接激酶在慢性移植肾肾病患者肾组织中的表达及意义

目的：探讨移植肾组织中整合素连接激酶（ILK）及Ⅳ型胶原的表达,及与转化生长因子-β1（TGF-β1）表达和慢性移植肾肾病（CAN）的关系。方法：用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测30例CAN患者移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原和TGF-β1的表达情况,分析三者间及与CAN病理分级之间的关系。10例正常肾组织作为对照。结果：CAN移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原、TGF-β1的表达比正常肾组织明显增加（P〈0.001）,并随CAN病理分级呈逐渐递增的趋势。移植肾组织中ILK的表达与TGF-β1、Ⅳ型胶原呈正相关（r分别为0.822、0.715,P〈0.001）。结论：研究结果显示ILK可能介导TGF-β1促进CAN细胞外基质（ECM）异常沉积发病机制,Ⅳ型胶原的异常沉积是CAN患者移植肾纤维化的重要表现,且ILK在CAN移植肾纤维化进程中起重要作用。     

高脂诱导大鼠肾组织整合素连接激酶表达及足细胞损害

目的 研究高脂诱导的大鼠肾小球足细胞损害及肾组织整合素连接激酶(ILK)的表达。 方法 36只Wistar大鼠分3组：高脂饮食组给予高脂饲料喂养;辛伐他汀组在高脂饲料喂养同时,予辛伐他汀10 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1干预;正常对照组予正常饮食。于实验第4、10周各处死6只鼠,留取血清及肾组织,采用酶法测定血清三酰甘油（TG）及总胆固醇(TC)水平;电镜观察足细胞结构变化;Western 印迹法检测肾组织ILK及结蛋白（desmin）的蛋白表达; RT-PCR检测ILK mRNA表达;免疫组化染色观察肾组织ILK的阳性分布。 结果 (1)与正常对照组比较,高脂饮食组及辛伐他汀组大鼠血脂水平升高,足细胞足突明显融合,结蛋白表达显著上调;辛伐他汀组上述指标均显著轻于高脂饮食组,组间两两比较,差异有统计学意义（P < 0.01）。(2)与正常对照组比较,高脂饮食组和辛伐他汀组大鼠肾组织ILK mRNA及蛋白表达显著增加;辛伐他汀组肾组织ILK mRNA及蛋白表达显著低于高脂饮食组,组间两两比较,差异有统计学意义（P < 0.01）。免疫组化染色显示ILK主要表达在足细胞和肾小管上皮细胞,各组ILK阳性染色与Western 印迹结果一致。(3)直线回归结果显示,肾组织结蛋白表达与ILK蛋白表达呈正相关（r = 0.93107,R2=0.8669,P < 0.01)。 结论 高脂饮食导致大鼠肾小球足细胞损害,该损害与ILK表达增高有关。辛伐他汀可抑制ILK表达,减轻高脂饮食大鼠足细胞的损害。     

整合素连接激酶在创面愈合中的作用

目的 观察整合素连接激酶(ILK)在大鼠创面中的表达,探讨其在创面愈合中的作用及机制.方法 健康SD大鼠20只,随机选取16只建立浅Ⅱ度烫伤模型,4只作为正常对照,烫伤后第1、5、10、15天分别随机选取4只大鼠,运用免疫组织化学检测创面中ILK的表达.7例人正常皮肤成纤维细胞,转化生长因子(TGF)-β1组给予TGF-β1刺激72 h,同一细胞培养相同时间作为对照,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组ILK和纤维连接蛋白(Fn)的表达.结果 烫伤后第5、10天大鼠烫伤创面中ILK的表达显著高于正常皮肤和愈合后(第15天,P<0.05).TGF-β1组细胞中ILK和Fn mRNA表达均显著强于对照组(P<0.05);对照组ILK与Fn mRNA表达强度呈正相关(r=0.57).结论 ILK可能同时通过参与整合素和TGF-β1信号通路,在创面愈合过程中发挥一定作用.     

依贝沙坦对单侧输尿管梗阻小鼠肾脏整合素连接激酶表达的影响及意义

目的研究依贝沙坦（Irb）对单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠肾脏整合素连接激酶（ILK）表达的影响,并探讨其与肾小管上皮间充质转化的关系。方法将雄性CD-1小鼠随机分为假手术对照组（C,n=20）、UUO组（UUO,n=40）和Irb治疗组（UUO＋Irb,n=40）,分别于术后1、3、7和14d处死小鼠。Masson染色观察肾间质纤维化。免疫组化检测小鼠肾组织ILK、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。Western印迹观察小鼠肾组织ILK蛋白表达。荧光实时定量PCR（real-time PCR）检测ILK、E-cadherin、α-SMA和纤连蛋白（FN）mRNA表达。结果与C组相比,UUO组术后1d ILK mRNA及蛋白表达均增高;术后3d FN mRNA表达上调,E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少,α-SMA mRNA及蛋白表达显著增加。与UUO组相同时间点比较,Irb治疗组ILK、FN及α-SMA表达均被显著抑制（P均＜0．05）;E-cadherin表达则增高（P＜0．01）。ILK蛋白表达与α-SMA蛋白表达呈正相关（r =0．707,P＜0．01）,与E-cadherin蛋白表达呈负相关（r=-0．919,P＜0．01）。结论Irb能减轻肾脏纤维化,抑制肾小管上皮细胞转分化,这可能与其抑制肾小管细胞ILK表达有关。     

整合素连接激酶和肾小管-间质纤维化

整合素连接激酶(Integrin-linkedkinase,ILK)是一种近期发现的Ser/Thr蛋白激酶。ILK能够通过与整合素β1亚单位的结合介导细胞与胞外基质的连接,以依赖于PI3K的方式激活,并通过磷酸化下游底物PKB/AKT、GSK3等使胞外信号得以向下游传递,参与多种信号传导通路,与肾间质纤维化的发生相关。     

整合素连接激酶和肾小管-间质纤维化

整合素连接激酶(Integrin-linked kinase,ILK)是一种近期发现的Ser/Thr蛋白激酶.ILK能够通过与整合素β1亚单位的结合介导细胞与胞外基质的连接,以依赖于PI3K的方式激活,并通过磷酸化下游底物PKB/AKT、GSK3等使胞外信号得以向下游传递,参与多种信号传导通路,与肾间质纤维化的发生相关.     

整合素连接激酶介导的高糖诱导肾小管上皮细胞纤连蛋白的表达

目的 观察在高糖刺激下纤连蛋白（FN）与整合素连接激酶(ILK) 在肾小管上皮细胞的表达情况，探讨糖尿病肾病小管间质纤维化的发病机制。 方法 以人肾小管上皮细胞株（HKC）细胞和链脲佐菌素（STZ）诱导的CD-1小鼠糖尿病动物模型为研究对象，采用Western印迹的方法检测细胞或肾组织ILK和FN蛋白的表达。通过基因转染的方法，将含无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞，观察抑制ILK活力对高糖诱导的HKC合成FN的影响。 结果 STZ注射后4周，CD-1小鼠血糖水平显著高于对照组[(20.3±2.7) mmol/L比 （6.1±1.4） mmol/L，P < 0.01]，同时，肾组织ILK和FN的表达量亦显著高于对照组，且ILK与FN表达量呈正相关(P < 0.01)。细胞培养实验证实，高糖能够刺激HKC上调ILK和FN蛋白的表达，并且呈时间和剂量依赖性。HKC细胞转染pCMV-kdILK质粒以抑制ILK的活力，能够显著地拮抗高糖刺激HKC表达FN的作用。 结论 高糖通过上调ILK蛋白增加肾小管表达并合成FN，抑制ILK能够拮抗高糖刺激HKC合成FN的作用。     

晚期糖基化终产物对足细胞整合素连接激酶的影响

目的:观察晚期糖基化终产物(AGEs)对足细胞整合素连接激酶的影响及可能机制。方法:不同浓度的AGEs干预小鼠足细胞,分别检测足细胞整合素连接激酶(ILK)的表达、足细胞黏附性和足细胞上清血管紧张素Ⅱ的浓度,然后预氯沙坦(100μmol)预处理足细胞后,观察足细胞ILK和黏附性的变化。结果:AGEs(80μg/ml)干预足细胞24 h可明显上调ILK的表达[(200±22)%vs.100%,P<0.05],降低足细胞的黏附性[(40±13)%vs.100%,P<0.05],同时升高细胞上清中血管紧张素Ⅱ的浓度[(11.2±0.8)vs.(7.0±0.7)pg/ml,P<0.05],而氯沙坦预处理可减轻AGEs介导的ILK的上调[(124±25)%vs.(200±22)%,P<0.05],足细胞的黏附性也明显改善[(75±13)%vs.(40±13)%,P<0.05]。结论:AGEs可能通过激活足细胞内的肾素-血管紧张素系统,上调足细胞ILK的表达,降低足细胞的黏附性。     

缬沙坦对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶表达的影响

目的：观察缬沙坦对糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶（ILK）表达的影响，探讨缬沙坦肾脏保护作用的可能机制。方法：30只Wistar雄性大鼠随机分为正常组（n=10）、模型组（n=10）和干预组（缬沙坦30mg·kg^-1·d^-1，n=10）。第8、16周每组各处死5只大鼠，观察大鼠肾脏病理改变以及免疫组化方法检测其肾小管上皮细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、ILK的表达并作半定量分析。结果：（1）DN大鼠肾小管上皮细胞ILK与TGF-β1同向表达增高，随病程进展递增；（2）缬沙坦干预后大鼠肾小管上皮细胞ILK表达较模型组显著降低。结论：（1）DN大鼠肾小管上皮细胞ILK与TGF-β1同向表达增高，提示ILK是肾间质纤维化发展的一个重要因素；（2）缬沙坦可能通过下调ILK来改善肾间质纤维化病变而发挥肾脏保护作用。     

人增生性瘢痕中整合素连接激酶表达及与血管生成的关系

目的 探讨不同生长期人类瘢痕中整合素连接激酶(ILK)表达及与血管生成的关系.方法 (1)将笔者单位2009年12月-2010年12月收治的15例烧伤瘢痕患者按瘢痕生长时间分为:小于6个月组、6～12个月组、大于12个月组,每组5例.采集各组瘢痕组织,用免疫组织化学法观察ILK的表达分布,实时荧光定量RT-PCR法检测ILK mRNA的表达水平.(2)取小于6个月组瘢痕组织,分离培养瘢痕微血管内皮细胞(MEC),免疫磁珠法纯化后用花青类荧光染料Cy3标记的凝血因子Ⅷ进行鉴定,以人皮肤Fb为对照.取对数生长期MEC,按随机数字表法分为3组:对照组,仅用含微血管生长添加剂的M131培养液培养;空质粒组,用空载质粒转染;ILK互补DNA转染组,用ILK互补DNA表达质粒转染.转染24h后,实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中ILK、激酶功能区受体(KD R)、fms样酪氨酸激酶1(Flt1)的mRNA表达情况.对数据进行单因素方差分析. 结果 (1)小于6个月组瘢痕组织表皮基底细胞、MEC及Fb胞质中均有ILK阳性表达,6～12个月组瘢痕组织中仅表皮基底细胞可见ILK阳性表达,大于12个月组瘢痕组织中ILK阳性表达不明显.(2)小于6个月组瘢痕组织中ILK mRNA表达水平(0.34±0.16)明显高于6～12个月组(0.17±0.06)及大于12个月组(0.07±0.13),F=37.007,P - 0.000.(3)纯化后MEC呈铺路石样密集生长,胞质中凝血因子Ⅷ呈阳性表达;人皮肤Fb中未见凝血因子Ⅷ表达.(4)ILK互补DNA转染组瘢痕MEC中ILK、KDR及Flt-1的mRNA表达水平分别为57.807±5.556、0.836±0.014、0.162±0.005,均显著高于对照组的0.018±0.003、0.028±0.020、0.023±0.004和空质粒组的0.042±0.005、0.039±0.0070.046±0.003(F值分别为87.110、11.241、18.199,P值均小于0.01).结论 ILK主要表达于小于6个月的早期瘢痕组织中,并可以通过调节瘢痕MEC中的KDR及Flt-1 mRNA表达来影响早期瘢痕的血管生成,在早期瘢痕增生过程中具有重要作用.     

前列腺癌组织中前列腺癌抗原-1的表达及临床意义

目的：探讨PCa组织中前列腺癌抗原-1（PCA-1）的表达及其临床意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术,检测45例PCa组织、30例前列腺高分级上皮样内瘤样病变组织（HG-PIN）、43例BPH组织和39例其他肿瘤组织标本中PCA-1 mRNA的表达。免疫组织化学检测不同前列腺组织中PCA-1蛋白的表达。结果：PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1 mRNA的阳性表达率分别为80.0%（36/45）和60.0%（18/30）,BPH组织及其他肿瘤组织中均未见PCA-1 mRNA的表达。PCA-1 mRNA表达与PCa的临床病理参数之间无明显相关性,差异均无统计学意义（P〉0.05）。PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1蛋白的阳性表达率分别为75.6%（34/45）和50.0%（15/30）,BPH组织及其他肿瘤组织中未见PCA-1蛋白阳性表达。结论：PCA-1仅在PCa组织中表达,且与PCa的临床病理参数无关,有可能作为特异性的肿瘤标志物对PCa进行早期诊断。     

前列腺癌组织中前列腺癌抗原-1的表达及临床意义

目的:探讨PCa组织中前列腺癌抗原-1(PCA-1)的表达及其临床意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测45例PCa组织、30例前列腺高分级上皮样内瘤样病变组织(HG-PIN)、43例BPH组织和39例其他肿瘤组织标本中PCA-1 mRNA的表达。免疫组织化学检测不同前列腺组织中PCA-1蛋白的表达。结果:PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1 mRNA的阳性表达率分别为80.0%(36/45)和60.0%(18/30),BPH组织及其他肿瘤组织中均未见PCA-1 mRNA的表达。PCA-1 mRNA表达与PCa的临床病理参数之间无明显相关性,差异均无统计学意义(P>0.05)。PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1蛋白的阳性表达率分别为75.6%(34/45)和50.0%(15/30),BPH组织及其他肿瘤组织中未见PCA-1蛋白阳性表达。结论:PCA-1仅在PCa组织中表达,且与PCa的临床病理参数无关,有可能作为特异性的肿瘤标志物对PCa进行早期诊断。     

核干因子在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨核干因子(NS)基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:利用RT-PCR及免疫组化方法对前列腺癌、良性前列腺增生(BPH)及高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)组织中NS基因的表达进行检测,并探讨NS蛋白表达水平与前列腺癌患者临床指标的关系。结果:前列腺癌中NSmRNA表达水平显著高于BPH中的表达水平,NS蛋白在前列腺癌中的强阳性、阳性及弱阳性表达率分别为48.8%、36.6%及12.2%,在BPH中分别为4.0%、32.0%及56.0%,在HGPIN中分别为5.0%、25.0%及60.0%,在前列腺癌中的表达水平显著高于BPH及HGPIN中的水平,具有统计学意义(P<0.05)。NS基因表达水平与前列腺癌的分化程度呈负相关,细胞分化程度越差,NS基因表达水平越高。结论:前列腺癌中高表达NS基因,NS基因在前列腺癌的不良分化和恶性增殖中可能起着重要作用。     

金属基质蛋白酶2和9在前列腺癌中表达的意义

目的探讨金属基质蛋白酶2(MMP2)和MMP9在前列腺癌中表达的意义及和临床的关系。方法采用免疫组化的方法对51例前列腺癌手术标本及10例前列腺增生手术标本进行MMP2、MMP9检测及分析。结果在10例前列腺增生病例中只有2例MMP2和MMP9表达阳性,与前列腺癌中的表达具有差异显著性;并且MMP2和MMP9的表达与前列腺癌的病理分级、Gleason评分及转移密切相关,但与血清前列腺特异性抗原(PSA)水平无关。结论MMP2和MMP9的表达可能在前列腺癌的发展及转移过程中起重要作用。     

凋亡抑制基因XIAP在前列腺癌细胞中的表达及与临床病理特征的关系

目的 :研究XIAP基因在前列腺癌细胞系和前列腺癌组织的表达情况 ,及其与前列腺癌临床病理特征的关系。　方法 :应用RT PCR检测前列腺癌组织、正常前列腺组织和前列腺癌细胞株PC 3,DU 14 5 ,LNCaP细胞XIAP基因的表达 ,并通过免疫组化SP法检测 5 6例前列腺癌组织标本XIAP蛋白的表达情况。　结果 :XIAP基因在前列腺癌组织和前列腺癌细胞株PC 3,DU 14 5 ,LNCaP细胞高表达 ,正常前列腺组织无表达。在前列腺癌组织和癌旁组织中 ,XIAP蛋白阳性检出率分别为 5 3.6 % (30 / 5 6 )和 2 1.5 % (12 / 5 6 ) (P <0 .0 1) ;不同分期、分级组XIAP阳性检出率相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :凋亡抑制基因XIAP与前列腺癌相关 ,在前列腺癌发生过程中具有重要的作用 ,有可能成为前列腺癌治疗的靶标。     

Kallikrein 10基因在前列腺癌组织中的表达及意义

目的：探讨Kallikrein10（KLK10）基因在不同前列腺组织中的表达情况。方法：采用荧光定量PCR方法检测3例正常前列腺组织、5例BPH组织、6例前列腺癌细胞株、35例前列腺癌组织中KLK10mRNA的表达水平。结果：正常前列腺组织、良性前列腺增生组织、前列腺癌细胞株、前列腺癌组织KLK10 mRNA表达相对值分别为0．521、0．487、0．021、0．018,组间比较差异有统计学意义（P〈0．01）。骨转移前列腺癌与未转移前列腺癌KLKIOmRNA表达相对值分别为0．003、0．023,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：KLK10在前列腺癌组织中表达下调,在转移性前列腺癌中表达更低。KLK10表达下调可促进肿瘤的发生与进展。     

前列腺癌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体表达的研究

目的 :研究粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)受体在前列腺癌组织和 4种肿瘤细胞株中的表达及其意义。　方法 :应用SP免疫组织化学方法研究 4 8例前列腺癌和 2 0例良性前列腺增生石蜡标本中GM CSF受体α亚单位表达 ;Western印迹方法检测慢性粒细胞性白血病细胞株K5 6 2 ,乳腺癌细胞株MCF 7,转移性前列腺癌细胞株PC 3M和急性早幼粒细胞性白血病细胞株HL 6 0GM CSF受体α亚单位的表达。　结果 :4 8例前列腺癌中GM CSF受体α亚单位表达阳性病例 38例 ,阳性率为 79.2 %。其中Gleason 2～ 4分者 15例 ,5～ 8分 14例 ,9～ 10分 9例 ,GM CSF受体的阳性率与前列腺癌Gleason评分相关 ;2 0例良性前列腺增生中GM CSF受体α亚单位表达 6例 ,阳性率为 30 .0 %。 4种肿瘤细胞株K5 6 2、HL 6 0、PC 3M和MCF 7均表达GM CSF受体α亚单位。　结论 :GM CSF受体表达是前列腺癌的重要特征 ,GM CSF可能参与前列腺癌的增殖过程。     

TLR4在前列腺癌中的表达及临床意义

目的：探讨TLR4在前列腺癌（PCa）中的表达情况及意义。方法：采用免疫组化法检测TLR4与Survivin蛋白在41例PCa及20例良性前列腺增生（BPH）组织中的表达,同时分析TLR4和Survivin蛋白表达与Gleason系统分级的关系。结果：TLR4与Survivin蛋白在BPH组织中的阳性表达例数分别为15例（75％）与0例（O）,在PCa组织中的阳性表达例数分别为18例（43．9％）与28例（68．3％）,TLR4表达与PCa的Gleason系统分级有显著相关性（P〈0．05）,随着Gleason评分增高,TLR4表达降低。Survivin蛋白的表达与Gleason系统分级无关（P〉O．05）。结论：TLR4表达与PCaGleason系统分级相关,其表达与PCa的发生发展密切相关,可成为估计肿瘤预后的一项指标。     

前列腺癌患者血浆内皮素-1的检测及其意义

目的:探讨内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)与前列腺癌(PCa)的关系及其临床意义。方法:应用放射免疫分析法对31例PCa患者血浆中ET-1水平进行检测,其中新发PCa且对内分泌治疗敏感者(non-HRPC)23例,激素难治性PCa(HRPC)8例;以26例良性前列腺增生(BPH)患者作为对照,并作对比分析。结果:血浆ET-1水平在BPH组、未经治疗的PCa组及对雄激素治疗不敏感PCa组3组之间相互比较,差异均无显著性(P>0.05);在高、中分化PCa中血浆ET-1水平差异无显著性(P>0.05),但显著高于低分化PCa(P<0.05);在骨转移癌和非骨转移癌之间差异无显著性;在PSA各分组之间的ET-1水平,差异无显著性(P>0.05)。结论:血浆ET-1水平检测,未能反映PCa的发生发展和预后。     

柯萨奇腺病毒受体在人PCa细胞Du145和LNCaP中的差异表达及意义

目的:探讨柯萨奇腺病毒受体(CAR)在PCa转移潜能获得机制中的可能作用。方法:用TransweⅡ技术鉴定两种PCa细胞株(Du145和LNCaP)的不同转移潜能,进而应用Western印迹法鉴定这两种细胞株中的CAR表达差异情况,并初步分析其在PCa转移过程中所发挥的作用。结果:Du145的体外侵袭潜能显著高于LNCaP细胞(P<0.05);同时,CAR在低转移细胞株LNCaP中高表达,而在高转移细胞株Du145中表达缺失(P<0.01)。结论:CAR在转移潜能不同的PCa细胞株之间确实存在着有意义的差异表达,而这种表达差异可能在影响PCa转移过程中发挥重要作用。