广西人感染猪链球菌病的病原学及分子生物学鉴定分析

目的:用细菌分离培养和分子生物学方法鉴定猪链球菌,为确定疫情、及时治疗及控制提供依据.方法:疑似患者血液、脑脊液,死亡患者的肝、脾、肾等尸检组织进行分离培养、API 20 Strep生化鉴定、药敏试验及PCR检测.结果:从11份血液、4份脑脊液标本中分离出5株猪链球菌,API 20 Strep生化鉴定为猪链球菌Ⅱ型;经PCR检测5株菌均具有猪链球菌种特异性基因16St‘RNA(spe)基因、猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J)和猪链球菌溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp),1例死亡患者尸检组织标本和2例患者(1例为死亡病例)的脑脊液标本,具有猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J),脾脏组织和1份脑脊液标本具有猪链球菌溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp),全部确定为猪链球菌2型,并携带强毒力基因.药敏试验表明,猪链球菌2型对万古霉素、氯霉素、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、克林霉素敏感.结论:广西6起疫情均为人感染猪链球菌2型所致.     

人感染猪链球菌病的病原分离与PCR方法的快速检测

目的研究人感染猪链球菌的生物学特征，并建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法将疑似猪链球菌感染患者的血液进行增菌培养，对所分离的病原菌进行染色形态观察、API 32 Strep生化鉴定；同时从该疑似患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16SrRNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型，而从血液中分离的病原菌，经API 32 Strep生化鉴定，也证实为猪链球菌2型。结论人感染猪链球菌的病原学及PCR检测符合猪链球菌2型，同时该PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

四川省人感染猪链球菌病的病原分离与鉴定

目的分离和鉴定猪链球菌,为诊断和治疗提供科学依据。方法用无选择性的血琼脂平板对患者血液、脑脊液、尸检组织和病死猪内脏进行分离培养,并对分离到的细菌进行染色形态观察;用PCR技术检测猪链球菌种基因、荚膜多糖编码基因、溶菌酶释放相关蛋白基因和溶血素基因;用VITEK2compact微生物生化鉴定仪定型。结果从4例患者血液、2例患者脑脊液、2例患者尸检组织和7例病死猪中分离到27株链球菌,经鉴定27株菌均为猪链球菌2型,猪链球菌种基因和猪链球菌三种毒力基因阳性。结论此次疫情为猪链球菌2型引起。     

宁波市首例人感染猪链球菌2型的实验室鉴定

目的:对首例人感染猪链球菌2型菌株进行鉴定,了解病原学及毒力。方法:将疑似猪链球菌感染患者血液、脑脊液进行增菌培养,对所分离的病原菌进行染色形态观察、APIStrep20生化鉴定;合成引物检测菌株的16SrRNA、cps2J、mrp、ef、sly、gapdh基因片段;制作cps2J、mrp、ef、sly长片段产物,进行基因序列测定。结果:从患者血液和脑脊液中分离的病原菌,经API20Strep生化鉴定编码为4641453,确认为猪链球菌2型,16SrRNA扩增结果进一步证实该菌为猪链球菌2型,基因测序结果与Genebank中注册05ZYH33的猪链球菌2型序列同源性在99%以上。结论:根据流行病学调查、临床表现和实验室鉴定结果,本起人感染猪链球菌的病原为猪链球菌2型,带有多种毒力基因其分子生物学特征典型。     

PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立

目的建立一种快速、特异且敏感的猪链球菌菌型的检测方法。方法从疑似猪链球菌感染患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16 Sr RNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型。结论PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

贵州省死亡病例1型猪链球菌的分离及分子生物学特征分析

目的 对来自贵州省1例疑似人感染猪链球菌患者的血液标本进行细菌分离鉴定,了解该菌株的分子生物学特征,为病例的快速确诊提供病原学依据。方法 采用血培养法对疑似感染猪链球菌患者的血液进行细菌分离培养,对分离菌株采用细菌16S rRNA 基因通用引物进行PCR扩增和DNA序列测定,将测序结果通过GenBank数据库的BLAST程序进行在线比对,再用猪链球菌种特异的16S rRNA 基因进行猪链球菌种的鉴定,进一步分别采用PCR检测常见强致病性血清型1、2、7和9型特异的cps 1j、cps 2j、cps 7h和cps9h基因以鉴定其血清型,并对菌株毒力基因gapdh、mrp、sly和ef进行检测。结果 血培养分离出1株链球菌可疑菌株,序列比对结果显示该分离菌株16S rRNA基因与猪链球菌的同源性最高,进一步的猪链球菌特异性PCR检测显示分离菌株16S rRNA基因为阳性,血清型特异PCR检测结果显示cps 1j基因为阳性,而cps 2j、cps 7h和cps 9h基因为阴性,毒力基因检测结果显示分离菌株gapdh,sly和ef毒力基因为阳性,而mrp为阴性。结论 本次从疑似感染猪链球菌死亡病例分离的菌株为猪链球菌1型,其毒力特征为gapdh、sly和ef基因阳性,mrp基因阴性,该病例为1型猪链球菌感染所致,且菌株毒力较强。     

一例人感染猪链球菌病流行病及病原学调查

目的通过对衢州市衢江区一例人感染猪链球菌病病人进行流行病学调查,实验室检测包括对分离株进行病原学及分子生物学鉴定,为疫情预测和制定防治措施提供依据。方法将患者脑脊液进行增菌培养,并对分离的菌株进行涂片染色形态观察、rapid ID 32STREP试条生化鉴定、PCR技术检测分离株的种属特异性基因、毒力基因。结果从患者的脑脊液中分离出病原菌,经rapid ID 32 STREP试条鉴定为猪链球菌Ⅱ型,并从该分离株检测到种属特异性基16SrRNA及EF、Cps2J毒力基因,MRP毒力基因未检出。结论该患者是由SS2引起的,需要相关部门加大对猪链球菌病的防控力度。     

东阳市一起人感染猪链球菌病疫情的流行病学和病原学分析

[目的]通过对一起人感染猪链球菌病的调查,了解人感染猪链球菌病的流行病学及病原学特点,熟悉必要的预防控制方法。[方法]通过现场调查、观察和实验室检测等方法,对患者脑脊液进行细菌培养,增菌、分离、染色、镜检。对分离株进行了生化反应、药敏试验、PCR检测等并做比较。[结果]根据所得生化结果可以判定患者分离株为猪链球菌Ⅱ型。PCR检测从患者的分离株中检出猪链球菌属特异基因tuf和种特异性16SrRNA基因,以及猪链球菌Ⅱ型特异性荚膜多糖编码基因Cps2J、猪链球菌溶菌酶释放相关蛋白编码基因mrp、溶血素基因sly、甘油醛-3-磷酸脱氢酶编码基因gapdh和细胞外蛋白因子编码基因ef共5种毒力基因。[结论]从一起人感染猪链球菌病中了解此类病的特点,提示疾控部门应采取相关措施做好此类疾病的预防,易感人群应及时做好个人防护。     

安徽省一例人感染猪链球菌病例的病原学特征分析

目的通过对安徽省一例人感染猪链球菌患者血液标本分离的菌株进行鉴定分型,了解菌株的分子特征。方法采用Vitek2 compact全自动细菌鉴定仪对分离菌株进行生化鉴定,玻片凝集法进行血清型鉴定,PCR法检测菌株5种毒力基因和多位点序列分型(MLST),PubMLST数据库获得ST型别。结果分离菌株经生化和血清型鉴定,确定为猪链球菌2型,毒力基因cps2J、sly、ef、gadph的PCR检测结果均为阳性,mrp检测结果为阴性,MLST为ST7型。结论分离病原菌为cps2J+/sly+/ef+/gadph+/mrp-ST7型猪链球菌2型,该型别人源猪链球菌在安徽省属首次报道,具有较强毒力,疫源地应加强防控,防止病例的再次出现。     

2005—2018年福建省人感染猪链球菌分离株特征分析

目的 探讨2005—2018年福建省分离到的猪链球菌的分子流行病学特征。方法 通过对2005—2018年疫情分离的猪链球菌菌株进行相关常规分离培养、生化鉴定及药物敏感实验、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry, MALDI-TOF MS）及聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测猪链球菌相关的16S rRNA基因和部分毒力基因荚膜多糖（capsularpolysaccharide2J,cps2J）、溶菌酶释放蛋白（muramidase-releasedprotein,mrp）、溶血素（suilysin,sly）、胞外因子（extracellular protein factor,ef），同时检测猪链球菌7个管家基因（aro A、cpn60、dpr、gki、mut S、rec A、thr A）分析菌株相关的多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST）型别。结果 10株菌株经...     

聚合酶链式反应诊断2型猪链球菌

目的从分子水平鉴定四川省2005年不明原因疾病病原菌的属、种、型及毒力基因,为诊断和治疗提供科学依据。方法聚合酶链式反应(PCR)检测链球菌属特异性基因(TUF)、猪链球菌种特异性基因(Species)、2型和毒力特异性基因(CPS2J)以及毒力基因溶菌酶释放相关蛋白基因(MRP)和溶血素基因(SLY);同时与VITEK2等全自动生化鉴定仪鉴定结果进行比对。结果所试103份标本中,98份均具有所检测的5个基因,确定为猪链球菌2型;另5份标本排除猪链球菌可能。73株纯培养细菌用VITEK2全自动生化鉴定仪鉴定有68株菌被鉴定为猪链球菌2型,3株菌被鉴定为猪链球菌1型,2株菌不能鉴定。结论2005年四川省不明原因疾病疫情为猪链球菌2型感染人造成。PCR检测5个特异基因鉴定猪链球菌2型,其结果优于VITEK2全自动生化鉴定仪。     

上海市闵行区首例人感染猪链球菌2型病例流行病及病原学调查

目的调查分析上海市闵行区1例猪链球菌2型感染病例的流行病学和病原学特征,为上海地区少见和输入性人畜共患急性传染病疫情预警和防控措施制定提供依据。方法通过询问患者病史、流行病学史以及现场环境调查,查找感染来源与感染途径,并对脑脊液进行病原培养分离猪链球菌、对分离的菌株进行Vitek2GP鉴定、PCR技术检测种属特异性基因、毒力基因。结果患者临床表现为高热伴头痛、恶心、呕吐、颈部僵直,血液检测显示C-反应蛋白显著增高、淋巴细胞百分比增高,血小板计数呈下降趋势,头部CT检查显示双侧筛窦、双侧上颌窦炎症,脑脊液白细胞计数、免疫球蛋白明显升高。患者分离株种属特异性16SrRNA基因、毒力因子cps-2J和ef均呈阳性。结论该病例为人感染猪链球菌2型脑膜炎病例;预后良好无后遗症与其及时的诊断治疗以及含毒力因子种类有关;医疗机构应尽早识别早期感染病例,明确诊断,及时治疗,避免发生重症和死亡病例;农业、卫生、市场管理等部门应完善动物疫情通报,建立主动哨点监测。     

猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究

目的 克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础.方法 用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的 基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly.重组载体经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌(E.coli Rosetta).IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白,鉴定目的 蛋白的免疫学活性以及溶血活性.结果　PCR扩增的sly基因长度约为1500 bp,经测序分析,插入载体的sly基因序列准确并保持了正确的读框.经IPTG诱导的目的 蛋白表达量约占总蛋白的30%,亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%以上.Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的人血清发生特异性结合.溶血试验表明重组蛋白溶血素能使猪红细胞发生溶解,溶血价为256.结论 成功构建了表达载体pET30b-sly,该载体可在大肠埃希菌中表达,表达蛋白具有免疫反应原性及溶血活性.     

人源和猪源猪链球菌的同源性研究

目的 进一步鉴定菌种;评价人源株与猪源株猪链球菌的同源性。方法 对分离自猪无菌部位、患者血液和脑脊液的７株猪链球菌Ⅱ型和标准猪链球菌Ⅱ型,用菌体脂肪酸分析和随机引物基因扩增技术进行菌种的表现型和基因型分类。对其结果进行聚类分析和主成分分析。结果 随机引物基因扩增技术分析提示,被检的７株猪链球菌Ⅱ型与标准株一致,均为猪链球菌Ⅱ型;人源株与猪源株同源;分离自病人血液和脑脊液的菌株同源。这些结果在菌体脂     

湖南省1例猪链球菌2型菌株的PCR检测

目的从分子水平鉴定湖南省一例疑似猪链球菌病病原菌的种、型及毒力基因,为流行病学和临床提供诊断分析依据。方法采用猪链球菌2型多重PCR快速诊断试剂盒以及另外合成的四对引物进行聚合酶链反应。结果用三重PCR试剂盒检出该菌携带cps2以及mrp基因,用合成的16srRNA、cps2j、mrp以及sly引物进行PCR扩增电泳后均显示阳性条带。结论2006年8月湖南省一例疑似猪链球菌病例确为猪链球菌2型感染,并且该菌携带多种毒力基因。     

快速PCR检测猪链球菌2型方法的研究及应用

目的建立可同时检测猪链球菌2型5种特异基因的快速PCR方法。方法根据已有的5对猪链球菌2型特异基因引物,运用高效聚合酶及优化反应程序,建立针对猪链球菌2型的16sRNA基因、荚膜多糖基因(cps-2J)、溶菌酶释放蛋白相关基因(mrp)、细胞外因子基因(ef)和溶血素基因(sly)的快速PCR方法。结果此法可在一台PCR仪上30min同时扩增猪链球菌2型的5种特异基因,敏感性和特异性与普通PCR无差别。对35株猪链球菌2型菌株的检出率为100%。结论所建立的检测方法具有便捷、快速的优点,可应用于人畜间猪链球菌2型突发疫情的实验室快速诊断。     

人感染2型猪链球菌快速多重PCR检测方法的建立

目的：用多重PCR从临床标本中同时检测猪链2型特异性及5个毒力相关基因，建立SS2实验室快速诊断及应急检测的核酸鉴定方法。方法：根据已报告的引物序列设计并合成8对引物（含1对内对照引物），经过PCR反应条件的优化与组合，采用同一PCR反应条件与循环程序，直接从临床标本或培养物中同时一次性扩增属特异性（tuf）、种特异性（16S rRNA）、荚膜多糖（cps2J）、溶菌酶释放蛋白（mrp）、细胞外蛋白因子（ef）、溶血素（sly）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（gapdh）等基因；并对方法的特异性和敏感性进行评估。结果：运用所建立的方法可直接从临床疑似猪链感染患者的脑脊液、血液、双相培养液和血培养物中一次性扩增出上述8对引物的目的基因，并经基因序列分析、细菌分离培养和生化鉴定进一步证实。其敏感性为78cfu（克隆形成单位）。结论：所建立的方法具有敏感、特异、快速、简便的特点，可应用于SS2感染应急检测、流行病学监测和实验室快速诊断。