miRNA-29s在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中微小RNA-29s（miR-29s）的表达水平及临床意义。方法 收集2012年1月至2015年12月收治的94例手术切除的NSCLC组织及71例癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测上述组织中miR-29a、miR-29b和mi-29c的表达,比较NSCLC组织及癌旁正常组织中miR-29s的表达水平,Pearson相关分析NSCLC组织中miR-29a、miR-29b和miR-29c表达的相关性,分析NSCLC组织中miR-29s的表达与NSCLC临床病理特征（性别、年龄、TNM分期、组织学类型、分化程度、淋巴结转移及CEA水平）的关系,根据随访资料分析不同miR-29s表达水平与预后的关系。结果 QPCR结果显示,NSCLC组织中miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达水平依次为0.413±0.025、0.609±0.039和0.161±0.013,均低于癌旁正常组织,差异有统计学意义（P＜0.05）;NSCLC组织中miR-29a与miR-29b呈正相关（r=0.637,P=0.000）,miR-29a与miR-29c呈正相关（r=0.775,P=0.000）,miR-29b与miR-29c呈正相关（r=0.586,P=0.000）;NSCLC组织中miR-29s表达均与TNM分期有关,miR-29a与肿瘤大小及分化程度有关,miR-29b与分化程度有关,miR-29c与肿瘤大小有关。miR-29a（≥0.354）、miR-29b（≥0.586）和miR-29c（≥0.118）高水平者的中位总生存时间依次为16.4、16.4和16.7个月,均高于低水平者的11.5、9.8和10.5个月,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 miR-29s在NSCLC组织中表达降低,且均与TNM分期及预后有关,可能与NSCLC发生、发展有关,对NSCLC诊断及病情评估有一定价值。     

miR-138-5p在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 探讨微小RNA-138-5p（miR-138-5p）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测102例NSCLC组织和98例癌旁组织中miRNA-138-5p表达， 分析miRNA-138-5p表达与NSCLC临床病理特征（性别、年龄、TNM分期、肿瘤直径和淋巴结转移）的关系；Kaplan-Miere法绘制生存曲线，差异行Log-rank检验；Cox回归模型分析影响总生存（OS）的因素。结果 QPCR检测结果显示，NSCLC组织中miR-138-5p表达水平为0.42±0.11，显著低于癌旁组织的1.03±0.28，差异具有统计学意义 （P＜0.05）。miR-138-5p表达与TNM分期、肿瘤直径及淋巴结转移均有关（P＜0.05）。miR-138-5p高表达者的中位OS＞36个月，显著高于低表达者的26个月，差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox单因素分析显示除miR-138-5p表达外，淋巴结转移、肿瘤直径和TNM分期也与OS有关（P＜0.05）。结论 miR-138-5p在NSCLC中表达下调，其表达与NSCLC发生发展、预后有关， miR-138-5p可作为NSCLC诊断和预后预测新的靶点。     

微小RNA-30c在肾癌组织中的表达及其临床意义

目的   探讨微小RNA-30c（miR-30c）在肾癌组织中的表达及其临床病理特征和预后关系。方法   收集本院2012年1月至2015年12月经手术切除的95例肾癌组织和82例癌旁组织标本,采用实时定量PCR（QPCR）检测以上组织中miR-30c水平,分析miR-30c表达与肾癌临床病理参数（性别、年龄、TNM分期、淋巴结转移、远处转移和T分期）及预后的关系,采用Cox回归模型进行多因素分析。结果  QPCR检测发现95例肾癌组织中miR-30c的表达水平为0.561±0.378,低于82例癌旁组织的1.220±0.820（P＜0.05）。肾癌组织中miR-30表达与性别、远处转移和年龄均无关（P＞0.05）,而与TNM分期、淋巴结转移和T分期均有关（P＜0.05）,其中Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移及T3～T4期的miR-30c相对表达量分别为0.422±0.219、0.442±0.299和0.408±0.194,均低于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及T1～T2期的0.671±0.439、0.619±0.400和0.654±0.431（P＜0.05）;Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移及T3～T4期的miR-30c高表达率分别为21.43％（9／42）、16.13％（5／31）和19.44％（7／36）,均低于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及T1～T2期的41.51％（22／53）、16.13％（26／64）和40.68％（24／59）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。miR-30c低表达组的中位总生存期为37.0个月,短于高表达组（＞60.0个月）,差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox回归模型分析发现,TNM分期、淋巴结转移、远处转移、T分期及miR-30c表达均是影响预后的独立因素。结论   肾癌组织中miR-30c低表达,miR-30c参与肾癌的发生发展且与预后有关,其中miR-30c低表达者的预后较差,是影响预后的独立因素。     

miRNA-154在星形细胞瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨星形细胞瘤组织和血清中微小RNA-154（miR-154）的表达及其临床意义。方法 收集2011年1月至2015年12月手术切除的星形细胞瘤组织76例和癌旁组织36例,采用荧光实时定量PCR（QPCR）法检测上述组织中miR-154的表达水平并比较星形细胞瘤组织及癌旁组织中的表达差异。同时检测49例星形细胞瘤患者术前血清miR-154表达水平,并与52例健康体检者的血清标本作比较;分析29例患者手术前后血清miR-154的表达变化。分析星形细胞瘤组织miR-154表达与临床病理特征（年龄、性别、肿瘤分级和KPS评分）的关系,根据随访资料分析不同miR-154表达患者的预后情况。结果 76例星形细胞瘤组织中miR-154的表达水平为0.254±0.170,低于36例癌旁组织的1.087±0.073,差异有统计学意义（P＜0.05）;49例星形细胞瘤患者术前血清miR-154的表达水平为0.256±0.180,低于52例健康体检者的1.065±0.350,差异有统计学意义（P＜0.05）;49例星形细胞瘤患者血清miR-154与组织miR-154表达呈正相关（r=0.552,P=0.000）;29例患者术前血清miR-154的表达水平为0.243±0.173,低于术后的0.339±0.159,差异有统计学意义（P＜0.05）。星形细胞瘤组织中miR-154表达与性别、年龄及KPS评分无关,但与肿瘤分级有关。全组中位总生存期（OS）为15.7个月,其中miR-154高表达组的中位OS为16.6个月,高于低表达组的11.3个月,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 miR-154在星形细胞瘤组织和血清中表达降低,与肿瘤分级有关,且miR-154高表达者的预后较好,可能与星形细胞瘤的发生、发展有关,对星形细胞瘤的诊断和预后评估有一定价值。     

DNA甲基化调控miRNA-328的表达水平与乳腺癌预后的关系分析

目的 探讨DNA甲基化与微小RNA-328（miR-328）表达的关系及miR-328与浸润性乳腺癌临床病理特征和预后的关系。方法 回顾性分析1998年1月至2013年12月从TCGA乳腺癌芯片数据提取的1090例浸润性乳腺癌组织和104例癌旁组织的miR-328表达水平,分析从TCGA_BRCA_hMethyl450芯片数据中获取的775例浸润性乳腺癌组织和98例癌旁组织的miR-328启动子区CpG位点（cg16421621、cg04650403）甲基化率并计算启动子区甲基化与miR-328水平的相关性,从UCSC Genome Browser中的clinical_data_dictionary芯片数据中获取854例有完整临床病理资料及随访数据的乳腺癌标本,分析miR-328表达与临床病理特征及预后的关系,采用Cox回归模型分析影响预后的因素。结果 TCGA数据库1998年1月至2013年12月有miR-328表达量的1194例乳腺癌及癌旁组织中,1090例浸润性乳腺癌组织的miR-328水平为5.224±1.155,低于104例癌旁组织的6.246±0.923,差异有统计学意义（P＜0.01）;775例浸润性乳腺癌组织的miR-328基因启动子区域cg16421621和cg04650403的甲基化率分别为（0.415±0.201）%和（0.193±0.068）%,高于98例癌旁组织的（0.407±0.222）%和（0.094±0.079）%,差异有统计学意义(P＜0.01）;浸润性乳腺癌标本中miR-328的表达量与其启动子区域CG位点（cg16421621、cg04650403）甲基化率呈负相关（r=-0.127, P=0.005）。854例有完整信息的浸润性乳腺癌患者中,miR 328表达水平与淋巴结转移和肿瘤大小有关（P＜0.05）;miR-328低表达组（＜5.462）的中位总生存时间（OS）为7.25年,低于高表达组（≥5.462）的8.75年,差异有统计学意义（P<0.01）。Cox多因素回归分析显示,年龄、淋巴结转移与miR-328表达水平为影响OS的独立因素（P＜0.05）,miR-328高表达组的危险程度低于低表达组（P＜0.01）。结论 浸润性乳腺癌中miR-328表达受其基因启动子区甲基化调控;miRNA-328与浸润性乳腺癌的临床病理特征有关,并能作为影响浸润性乳腺癌预后的危险因素。     

非小细胞肺癌组织中miR-92a、miR-196b表达水平及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小核糖核酸-92a(miR-92a)、微小核糖核酸-196b(miR-196b)表达水平及其临床意义。方法以经手术治疗的120例NSCLC患者作为研究对象,根据随访期间患者复发转移情况将患者分为出现复发或转移的预后不良组(62例)和未出现复发和转移的预后良好组(58例),临床资料、癌组织标本和随访2年的资料进行NSCLC患者预后不良的单因素、多因素Logisitic回归分析以及ROC曲线分析,探讨癌组织中miR-92a、miR-196b的表达水平、相关性及其与预后的关系。结果经实时定量RT-PCR检测,预后不良组癌组织中miR-92a、miR-196b的相对表达量明显高于预后良好组(P<0.05),且miR-92a与miR-196b的表达存在明显的正相关性(P<0.05);单因素分析结果显示,两组在肿瘤TNM分期、术前淋巴结转移、癌组织miR-92a表达和癌组织miR-196b表达方面存在明显差异(P<0.05);多因素回归分析结果显示,TNM分期为Ⅲ期~Ⅳ期、术前有淋巴结转移、癌组织miR-92a≥3.0和癌组织miR-196b≥3.3是NSCLC患者出现预后不良的独立预测因素;ROC曲线分析结果显示,癌组织中miR-92a、miR-196b表达量单独预测NSCLC患者预后不良的ROC曲线下面积分别为0.718和0.736,均低于两指标联合预测的ROC曲线下面积0.804(P<0.05)。结论miR-92a、miR-196b在NSCLC预后不良患者癌组织中呈高表达,并互为正相关性;两者联合检测对于临床上预测NSCLC患者预后具有较好的应用价值,可作为预测NSCCL患者术后不良预后的分子标志物。     

晚期胃癌患者血浆微小RNA-7及其临床意义分析

目的 探讨晚期胃癌血浆微小RNA-7（miR-7）水平及其临床意义。方法 收集本院2013年6月至2016年6月的75例晚期胃癌患者及同期73例健康体检者的血浆标本,采用荧光实时定量PCR（QPCR）技术检测其miR-7水平,分析胃癌患者血浆miR-7水平与临床病理特征的关系,根据随访资料分析胃癌患者血浆miR-7水平与预后的关系。结果 QPCR检测发现,75例胃癌患者的miR-7水平为（0.351±0.258）,低于73例健康体检者的（1.088±0.464）,差异有统计学意义（P＜0.05）。胃癌患者血浆miR-7水平与性别、年龄、ECOG评分、肿瘤部位及病理类型均无关,与分化程度有关,其中低分化者的miR-7水平为0.254±0.155,低于高、中分化者的0.514±0.313,差异有统计学意义（P＜0.05）。全组的中位无疾病进展期（PFS）和生存期（OS）分别为6.6个月和10.5个月。miR-7高表达组（＞0.351）的中位PFS为7.1个月,优于低表达组（≤0.351）的5.8个月（P＜0.05）,两组中位OS的差异无统计学意义（10.3个月 vs. 10.6个月,P＞0.05）。结论 晚期胃癌血浆miR-7水平降低,且低水平的分化程度较低,miR-7高水平的中位PFS较好,该指标在胃癌的诊断及预后评估上有较好价值。     

miR-134靶向EGFR对非小细胞肺癌增殖的影响

目的 探讨微小RNA-134（miR-134）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测miR 134在NSCLC细胞株（A549、H252）和正常胚肺细胞株WI38中的表达情况;将A549和H252细胞分为3组,分别为空白对照组（不转染）、miR-NC组（转染不相关siRNA）和miR-134组（转染miR-134 mimics）。分别于转染后24、48、72、96h收集细胞,采用MTS法检测细胞的增殖情况;转染后96h用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-134与表皮生长因子受体（EGFR）3’UTR的结合情况,QPCR检测过表达miR-134的A549和H252细胞中EGFR的表达情况。结果 与WI38 细胞相比,miR-134在A549细胞中的表达下调85.91％,在H252细胞中下调78.13％（P＜0.05）。MTS检测显示,miR-134能显著降低A549和H252细胞的增殖能力,并呈时间依赖性。流式细胞仪检测显示,与空白对照组比较,miR-134组A549细胞的凋亡比例提高226.31％,H252细胞提高47.85％（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示miR 134能与EGFR3’UTR结合,显著降低荧光值（P＜0.05）。QPCR检测显示,与空白对照组比较,转染miR-134 mimics 后,EGFR在A549细胞中的相对表达量下调57.0％,在H252中下调35.0％,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 miR-134在NSCLC中低表达,能通过靶向EGFR抑制NSCLC细胞增殖,并诱导凋亡。     

卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的水平分析及临床意义

目的 探讨卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的表达水平,分析3者与卵巢癌临床病理特征的关系。方法 收集本院确诊的65例卵巢癌患者经手术切除的上皮性卵巢癌组织标本（卵巢癌组）,采用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）法检测miR-29c、miR-133b及miR-1水平,收集对应卵巢癌患者的临床病理参数（年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移）,同时选取32例正常卵巢上皮组织（正常组）和39例良性卵巢上皮囊肿组织（良性组）作对照,以正常组的各指标均数为界值,将卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平分为高水平组（＞正常组）和低水平组（≤正常组）,比较miR-29c、miR-133b及miR-1不同表达水平与卵巢癌临床病理参数的关系,同时分析卵巢癌组织中3者水平的关系。结果 卵巢癌组miR-29c水平高于正常组和良性组,而miR-133b和miR-1水平均低于正常组和良性组,差异有统计学意义（P＜0.05）;卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平均与分化程度有关,miR-29c水平与临床分期及淋巴结转移有关,而miR-133b亦与淋巴结转移有关,差异均有统计学意义（P＜0.05）;卵巢癌miR-29c水平与miR-133b和miR-1均呈负相关（r=-0.541、-0.361）,miR-133b与miR-1呈正相关（r=0.447）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 卵巢癌患者组织中miR-29c呈高表达,miR-133b及miR-1呈低表达,与临床病理学特征有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于辅助卵巢癌的诊断和病情评估。     

微小RNA-92a靶向PTEN／Akt信号通路对鼻咽癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-92a（miR-92a）通过靶向PTEN／Akt信号通路对鼻咽癌HONE1细胞增殖与凋亡的调控作用。方法 采用Lipofectamine脂质体法向HONE1细胞转染miR-92a抑制剂（miR-92a组）和阴性对照（NC组）,设不行转染的HONE1细胞为对照组。转染成功后用实时荧光定量PCR（QPCR）检测miR-92a在不同细胞组中的表达情况;MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率;Western blotting实验检测PTEN／Akt信号通路中PTEN和p-Akt蛋白的表达量。结果 转染48 h miR-92a组与对照组和NC组相比,miR-92a的表达量明显降低（P＜0.05）,而对照组和NC组的差异无统计学意义（P＞0.05）。miR-92a组转染24、48、72、96 h的细胞增殖率分别为（84.51±2.74）％、（77.21±3.55）％、（62.07±3.57）％和（49.25±4.15）％,其中72、96 h的细胞增殖率低于对照组和NC组（P＜0.05）;miR-92a组转染48 h的细胞凋亡率为（46.12±1.79）％,高于对照组的（6.99±0.72）％和NC组的（8.42±0.81）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-92a组转染48 h PTEN和p-Akt蛋白的表达水平分别为0.61±0.12和0.37±0.09,对照组分别为0.41±0.11和0.73±0.14,NC组分别为0.39±0.08和0. 68±0.07,与对照组和NC相比,miR-92a组细胞的PTEN表达升高,p-Akt表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 通过抑制miR-92a的表达来抑制鼻咽癌细胞增殖且促进其凋亡,可能是通过负调控PTEN／Akt信号通路来实现的。     

miR-449a Suppresses Tumor Growth,Migration, and Invasion in Non-Small Cell Lung Cancer by Targeting a HMGB1-Mediated NF-kB Signaling Pathway

MicroRNAs (miRNAs) have been reported to be involved in many human cancers and tumor progression. The dysregulation of miR-449a is found in many types of malignancies and is associated with tumor growth, migration, and invasion. However, its expression and function in non-small cell lung cancer (NSCLC) still remains unclear. In our study, miR-449a was found to be downregulated in both NSCLC tissues and cell lines, and low miR-449a expression was obviously associated with tumor differentiation, TMN stage, and poor overall survival (OS). Moreover, we demonstrated that miR-449a could inhibit tumor proliferation, migration, and invasion in NSCLC. We also confirmed that HMGB1 was a direct target gene of miR-449a in NSCLC with dual-luciferase reporter assay, and upregulation of HMGB1 could reverse the miR-449a-induced suppression of growth, migration, and invasion in NSCLC cells. Last, we found that miR-449a suppressed tumor initiation and development through the NF- B signaling pathway. These results indicate that miR-449a functions as a tumor suppressor in NSCLC by targeting the HMGB1-mediated NF- B signaling pathway in NSCLC.     

非小细胞肺癌组织中lncRNA HOTAIR的表达及临床意义

目的 探讨长链非编码lncRNA HOTAIR在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。方法 收集本院2010年1月至2013年1月经病理组织学确诊的91例NSCLC患者,取其经手术切除癌组织91例和配对癌旁组织标本62例,采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测以上标本的HOTAIR水平,分析NSCLC HOTAIR水平与临床病理特征（性别、年龄、TNM分期、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、病理类型及CEA水平）的关系,并分析不同HOTAIR水平的预后情况。结果 NSCLC组织的HOTAIR相对表达量为6.271±0.884,高于癌旁组织的1.027±0.134,差异有统计学意义（P＜0.05）;NSCLC组织中HOTAIR表达与性别、年龄、分化程度、病理类型及CEA异常均无关,而与TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移有关,其中Ⅱ+Ⅲ期、肿瘤大小＞3 cm及有淋巴结转移者的HOTAIR表达均高于对应项,差异均有统计学意义（P＜0.05）。91例NSCLC患者的中位总生存期（OS）为36.4个月,与性别、年龄、分化程度、病理类型及CEA水平无关,但与TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移及HOTAIR表达有关,其中HOTAIR高表达者中位OS为27.8个月,低于低表达者的36.4个月,差异有统计学意义（P＜0.05）。多因素分析显示,TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移及HOTAIR表达是影响NSCLC预后的独立因素。结论 HOTAIR在NSCLC组织中高表达,且与TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移及预后均有关,可能在NSCLC的发生发展中有一定作用。     

MiR-449a suppresses cell invasion by inhibiting MAP2K1 in non-small cell lung cancer

Increasing evidence reveals that deregulation of miRNAs contributes to carcinogenesis of the human non-small cell lung cancer (NSCLC). Our study discovered that the expression of miR-449a was markedly decreased in NSCLC cells with high metastatic capacity and tissues of positive lymph node metastasis. Moreover, our results showed that miR-449a could act as a tumor suppressor by inhibiting the invasion of NSCLC cells in vitro and in vivo. Mechanistically, miR-449a inhibited the expression of MAP2K1 by direct targeting its 3’UTR, and regulated the activity of MEK1/ERK1/2/c-Jun pathway through an auto-regulatory feedback loop. Furthermore, the histone methylation mediated the decreased expression of miR-449a through SUZ12. Taken together, the novel connection between miR-449a and MAP2K1 demonstrated here provided a new, potential therapeutic target for the treatment of non-small cell lung cancer.     

非小细胞肺癌组织中AKR1C3水平及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中醛酮还原酶1 C3（AKR1C3）表达及其临床意义。方法 收集2013年1月至2016年3月88例手术切除的NSCLC组织及83例癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测上述组织中的AKR1C3表达水平,分析AKR1C3表达与NSCLC临床病理参数（性别、年龄、TNM分期、肿瘤大小、组织学类型及淋巴结转移）的关系;根据随访资料分析AKR1C3表达与预后的关系,采用受试者工作特征曲线（ROC）评价AKR1C3表达在NSCLC早期诊断中的效能。结果 NSCLC组AKR1C3表达水平为0.187±0.175,低于癌旁正常组织的1.079±0.384,差异有统计学意义（P＜0.05）;AKR1C3诊断NSCLC的曲线下面积为0.982（95％CI：0.966～0.998）。AKR1C3表达与NSCLC性别、年龄、组织学类型及淋巴结转移无关,与肿瘤大小及TNM分期有关。肿瘤大小＞3 cm的AKR1C3表达量为0.095±0.055,低于肿瘤大小≤3 cm的0.340±0.201,而Ⅲ、Ⅳ期的AKR1C3表达量为0.094±0.058,低于Ⅰ、Ⅱ期的0.265±0.202,差异有统计学意义（P＜0.05）。全组NSCLC患者的中位总生存期（OS）为17.60个月。AKR1C3高表达者的中位OS为20.60个月,高于低表达者的11.90个月,差异有统计学意义（P＜0.05）;Ⅰ+Ⅱ期患者的中位OS为21.65个月,高于Ⅲ+Ⅳ期的16.20个月,差异有统计学意义（P＜0.05）;肿瘤大小≤3 cm者的中位OS为18.40个月,高于＞3 cm者的15.70个月,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 AKR1C3在NSCLC组织中表达降低,且与TNM分期、肿瘤大小及预后有关,可能与NSCLC发生发展有关,在NSCLC诊断及病情评估有一定价值。