肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠肺损伤的影响

目的观察结扎肠系膜淋巴管对不同时期重症失血性休克大鼠肺组织自由基、炎症介质的影响，探讨肠淋巴途径在休克大鼠急性肺损伤（ALI）中的作用。方法78只雄性Wistar大鼠被随机分为假手术组、休克组和结扎组。休克组与结扎组复制重症失血性休克模型。结扎组于休克复苏后行肠系膜淋巴管结扎术，于休克90min、液体复苏后0、1、3、6、12和24h各处死6只大鼠，制备肺组织匀浆，检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）以及髓过氧化物酶（MPO）活性。结果休克组大鼠输液复苏后各时间点肺组织匀浆MDA、TNF—α、IL-6以及MPO活性均有不同程度的升高，3～12h持续在较高水平，均显著高于假手术组，肺组织匀浆SOD活性显著低于假手术组（P〈0．05或P〈0．01）；结扎组输液复苏后3，6、12和24h肺组织匀浆MDA、TNF-α、IL-6以及MPO活性均显著低于休克组，SOD活性高于休克组（P〈0．05或P〈0．01）。结论肠系膜淋巴管结扎可干预重症失血性休克大鼠ALI，其机制与减少肺中性粒细胞扣押，降低TNF—α、IL-6、自由基释放与SOD消耗等因素有关。     

肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠肺组织一氧化氮及其表达的影响

目的 观察结扎肠系膜淋巴管对不同时期重症失血性休克大鼠肺组织一氧化氮（NO）及其表达的影响，探讨肠淋巴途径在休克大鼠急性肺损伤（ALI）中的作用。方法 雄性Wistar大鼠78只，按随机数字表法分为假手术组（n=6）、休克组（n=42）和结扎组（n=30）。休克组与结扎组复制重症失血性休克模型，结扎组于休克复苏后行肠系膜淋巴管结扎术；休克组于休克后90min、输液复苏后0h，休克组及结扎组于输液复苏后1、3、6、12和24h各时间点处死大鼠，制备肺组织匀浆，检测NO及其合酶的变化；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定各组大鼠肺组织诱生型一氧化氮合酶（iNOS）．mRNA表达。结果 休克组大鼠复苏后3h肺组织NO含量、NOS活性及iNOSmRNA表达开始升高，复苏后6～12h持续在较高水平，均显著高于假手术组、休克后90min及复苏后0h（P〈0．05或P〈0．01）；结扎组仅于3h和6h增高，且结扎组复苏后6、12和24h肺组织NO含量、NOS活性以及iNOSmRNA表达均显著低于休克组相同时间点（P〈0．05或P〈0．01）。结论 肠系膜淋巴管结扎可降低重症失血性休克大鼠肺组织NO生成及iNOSmRNA表达，从而减轻肺损伤。     

肠淋巴途径在大鼠休克致肝脏炎症反应中的作用

目的 观察结扎肠系膜淋巴管对重症失血性休克不同时期大鼠肝脏炎症介质、自由基的变化,探讨阻断肠淋巴途径对休克大鼠肝脏炎症反应的影响.方法 78只雄性Wistar大鼠被随机分为假手术组(n=6)、休克组(n=42)和结扎组(n=30).休克组与结扎组复制重症失血性休克模型,结扎组于休克复苏后行肠系膜淋巴管结扎术.于休克90 min、输液复苏后0、1、3、6、12和24 h各处死6只大鼠,制备肝组织匀浆,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及髓过氧化物酶(MPO)水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝组织诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达.结果 休克组大鼠输液复苏后不同时间点肝组织TNF-α、IL-6、NO、NOS、MDA、MPO以及iNOS mRNA均有不同程度的升高,6～12 h持续在较高水平,均显著高于假手术组,肝组织SOD活性显著低于假手术组(P＜0.05或P＜0.01);结扎组输液复苏后3、6、12和24 h肝组织TNF-α、IL-6、NO、NOS、MDA、MPO以及iNOS mRNA均显著低于休克组相应时间点.SOD活性高于休克组相应时间点(P＜0.05或P＜0.01).结论 肠系膜淋巴管结扎可减少肝脏中性粒细胞扣押,降低TNF-α、IL-6释放,抑制iNOS mRNA表达及NO生成,减少自由基损伤与SOD消耗,从而减轻肝脏的炎症反应.     

创伤性休克对大鼠肠淋巴液和血液中内毒素肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6的影响

目的探讨大鼠肠淋巴液在创伤性休克过程中发生细菌移位和炎症反应的可能。方法复制创伤性休克大鼠模型并从肠淋巴干收集淋巴液,比较创伤性休克前后肠淋巴液及血液中内毒素(ET)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的变化。结果淋巴液中ET、TNF-α、IL-6浓度在休克中明显升高(P均<0.05),复苏后除IL-6持续升高至2h外,ET、TN-α均降至正常水平。结论创伤性休克大鼠休克期可从肠淋巴液观察到细菌移位现象,并可能导致TNF、I-L6水平升高,触发全身炎症反应。     

构建肠系膜微淋巴管内皮细胞培养技术并观察休克淋巴液环境中内皮细胞的形态变化

目的:建立肠系膜微淋巴管内皮细胞的培养技术,观察不同体积分数的休克淋巴液对大鼠肠系膜微淋巴管内皮细胞形态的影响。方法:实验于2004-02/07在河北北方学院病理生理学教研室及实验中心细胞培养室完成。选择健康雄性Wistar大鼠,体质量分别为220～300g和50～80g。实验方法:①无菌条件下制备大鼠重症失血性休克模型,引流肠系膜淋巴液或收集门静脉血;同时另取大鼠,引流正常淋巴液或正常门静脉血。②从动物种类、培养基、植块方法、胎牛血清浓度等方面对植块培养法进行改良,进行肠系膜微淋巴管内皮细胞原代培养并传代。实验分组:分为6组:胎牛血清组:培养液为DMEM 体积分数为0.1的胎牛血清;正常淋巴液组:培养液为DMEM 正常淋巴液;休克淋巴液组:培养液为DMEM 体积分数为0.04,0.06,0.08,0.10的休克淋巴液;正常血浆组:培养液为DMEM 正常血浆;休克血浆组:培养液为DMEM 休克血浆;无血清对照组:培养液为DMEM。实验评估:①光镜下观察大鼠肠系膜微淋巴管内皮细胞原代培养及传代情况。②光镜、扫描电镜及透射电镜下观察不同体积分数的休克淋巴液及不同作用时间(4,8,12h)对肠系膜微淋巴管内皮细胞形态及超微结构的影响。结果:①光镜下肠系膜微淋巴管内皮细胞原代培养及传代情况:内皮细胞呈扁平的梭形或多边形,大小均匀,胞核清晰,呈卵圆形。细胞生长融合形成单层后,呈典型的鹅卵石或铺路石样镶嵌状排列生长。②光镜下在休克淋巴液中肠系膜微淋巴管内皮细胞形态:体积分数为0.04的休克淋巴液作用4h时细胞逐渐收缩、变圆直至脱落漂浮,随着休克淋巴液体积分数增加及作用时间延长,细胞损伤逐渐加重,体积分数为0.08的休克淋巴液作用4h时核旁出现空泡,体积分数为0.10的休克淋巴液作用12h时细胞裂解成碎片。其他各组作用12h肠系膜微淋巴管内皮细胞形态无显著改变。③扫描电镜下在休克淋巴液中肠系膜微淋巴管内皮细胞形态:体积分数为0.04的休克淋巴液作用4h部分细胞逐渐收缩离壁,细胞间隙增大、细胞边缘的突起拉长、缩短、断裂,作用8,12h可见凋亡小体。其他各组作用12h肠系膜微淋巴管内皮细胞形态无显著改变。④透射电镜下在休克淋巴液中肠系膜微淋巴管内皮细胞形态:体积分数为0.04的休克淋巴液作用4h细胞膜形态不规整,胞浆内质网等膜性细胞器扩张,核形态不规则,作用8h线粒体呈球形扩张,细胞核逐渐出现固缩、似细胞凋亡改变,核周腔变宽;体积分数为0.08的休克淋巴液作用时间8h细胞内出现囊泡,内质网不同程度扩张,线粒体主要表现为浓缩、深染等改变,细胞膜边界不清,出现起泡、破碎等现象。其他各组作用12h肠系膜微淋巴管内皮细胞形态无显著改变。结论:成功建立了肠系膜微淋巴管内皮细胞的培养技术;休克淋巴液可导致肠系膜微淋巴管内皮细胞形态及超微结构损伤。     

肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠的器官保护作用

目的 观察肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠肠、肝、肺组织细胞因子表达以及组织病理学的影响.方法 24只SD大鼠被随机均分成对照组、失血性休克组、失血性休克+肠系膜淋巴管结扎组.采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠肠、肝、肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达;苏木素一伊红(HE)染色观察各组织的病理学改变.结果 失血性休克大鼠肠、肝、肺组织TNF-α mRNA和IL-6 mRNA表达均较对照组明显升高(TNF-α mRNA:肠0.54±0.07比0.37±0.05,肝1.014-0.06比0.56±0.07,肺0.94±0.07比0.62±0.06;IL-6 mRNA:肠0.89±0.12比0.50±0.09,肝1.07±0.10比0.57±0.12,肺1.09±0.09比0.67±0.06,P均<0.01);肠系膜淋巴管结扎可明显降低肠、肝、肺组织TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达(TNF-α mRNA:肠0.47±0.05比0.54±0.07,肝0.81±0.07比1.01±0.06,肺0.80±0.05比0.94±0.07;IL-6 mRNA:肠0.66±0.07比0.89±0.12,肝0.83±0.13比1.07±0.10,肺0.73±0.11比1.09±0.09,P<0.05或P<0.01).组织病理学观察显示,肠系膜淋巴管结扎可明显减轻失血性休克引起的肠黏膜绒毛坏死、脱落;减轻肝细胞变性、坏死;减轻肺水肿和炎性细胞浸润.结论 肠系膜淋巴管结扎可降低失血性休克大鼠肠、肝、肺组织细胞因子TNF-α、IL-6的表达及病理损伤程度,对器官功能起保护作用.     

氨基胍在兔重度失血性休克中的治疗价值

目的 研究氨基胍（AG）在重度失血性休克中的治疗效果。方法 采用兔失血性休克-复苏模型,分为休克组、AG组（复苏时应用AG）,观察休克前后血浆内皮素（ET）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、一氧化氮（NO）的变化,观察动物24h、48h存活率。结果 动物失血性休克后,血浆ET、TNFα、IL-6、IL-8、NO水平明显升高;复苏后,AG组动物血浆中上述物质水平明显低于休克组,该组动物的存活率明显高于休克组。结论 ET、TNFα、IL-6、IL-8、NO在失血性休克的发展过程中起着重要作用,AG作为诱导型一氧化氮合酶抑制剂,有助于改善重度失血性休克的预后。     

休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞炎症介质表达的影响

目的 观察休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)自由基及一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,进一步探讨休克淋巴液损伤PMVECs的机制.方法 原代培养大鼠PMVECs至第3代进行研究.无菌条件下复制大鼠重症失血性休克模型(动脉压40 mm Hg维持90 min,1 mm Hg=0.133 kPa).引流正常大鼠和休克大鼠肠系膜淋巴液及门静脉血,与PMVECs孵育6h,同时以胎牛血清(FBS)和无血清的DMEM培养液作为对照.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α和IL-6的mRNA表达;检测培养上清液中丙二醛(MDA)、NO、TNF-α和IL-6的含量.结果 体积分数为4%终浓度的休克淋巴液作用6 h后,PMVECs中iNOS、TNF-α和IL-6的mRNA表达以及培养上清液中MDA、NO、TNF-α和IL-6水平均显著高于空白对照组、正常淋巴液组、休克血浆组、正常血浆组和无血清对照组;且休克血浆作用PMVEC 6 h后的iNOS、TNF-α和IL-6的mRNA表达及培养上清液中NO水平均显著高于空白对照组、正常淋巴液组、正常血浆组和无血清对照组(P<0.05或P<0.01).结论 4%终浓度的休克淋巴液可致大鼠PMVECs中iNOS、TNF-α和IL-6的mRNA表达增强,促进自由基释放,从而诱导细胞损伤.     

不同液体复苏方案对细菌移位的影响

目的　对失血性休克应用不同的液体复苏方案 ,探讨其对肠道细菌或内毒素移位的影响。期望找到能保护肠黏膜屏障功能的更好的液体复苏方案。方法　将 33只SD大鼠随机分为 3组 ,制成大鼠失血性休克模型 ,分别应用不同的液体复苏方案 (高渗盐明胶、平衡液、生理盐水 ) ,复苏后 4h取肠系膜淋巴结、肝组织及外周血进行细菌培养 ,改良鲎试验定量测定血浆内毒素含量 ,光镜观察回肠黏膜组织形态。结果　高渗盐明胶组、平衡液组与生理盐水组在肠系膜淋巴结和肝组织细菌移位发生率及血浆内毒素含量方面均有显著性差异 ( P <0 0 1)。 3组外周血细菌培养结果之间有显著性差异 ,P <0 0 5。高渗盐明胶组的回肠黏膜组织形态更接近于正常。结论　高渗盐明胶溶液用于失血性休克的液体复苏能更好地减少肠道细菌或内毒素移位     

L-精氨酸和氨基胍在失血性休克中的治疗作用

目的：研究L-精氨酸（L-NNA）和氨基胍（AG）在失血性休克中的治疗效果。方法：大鼠40例随机分为休克组、L-NNA组、AG组和对照组，每组各10例。观察休克前后血浆内毒素（ET）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-6、IL-8、一氧化氮（NO）的变化。以及动物12h、24h、48h的存活率。结果：大鼠失血休克后，血浆ET、TNF-a、IL-6、IL-8、NO水平明显升高；复苏后，L-NNA组、AG组动物血浆中上述物质水平明显低于休克组，该两组动物存活率高于休克组，而L-NNA和AG组间存活率无明显差异。结论：内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8、NO在失血性休克的发展过程中起重要的作用，L-NNA和AG作为一氧化氮合酶（NOS）抑制剂，有助于改善失血性休克的预后。     

Hematopoietic failure after hemorrhagic shock is mediated partially through mesenteric lymph

OBJECTIVE: To determine whether hemorrhagic shock-induced bone marrow failure is mediated by the gut through the production of toxic mesenteric lymph and whether shock-induced bone marrow failure could be prevented by division of the mesenteric lymphatics. DESIGN: Prospective, controlled study. SETTING: University surgical research laboratory. SUBJECTS: Male Sprague-Dawley rats. INTERVENTIONS: Rats were divided into five groups: unmanipulated controls (n = 12), hemorrhagic shock with laparotomy (n = 8), hemorrhagic shock with mesenteric lymph duct ligation (n = 10), sham shock with laparotomy (n = 6), and sham shock with mesenteric lymph duct ligation (n = 7). At either 3 or 6 hrs after resuscitation, bone marrow was obtained for determination of early (cobblestone forming cells) and late (granulocyte-macrophage colony forming unit and erythroid burst forming unit) hematopoietic progenitor cell growth. Parallel cultures were plated with plasma (1% and 2% v/v) from all groups to determine the effect of lymphatic ligation on hematopoiesis. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Bone marrow cellularity, cobblestone forming cells, granulocyte-macrophage colony forming unit, and erythroid burst forming unit growth in rats subjected to hemorrhagic with lymph duct ligation were similar to those observed in sham-treated animals and significantly greater than in rats subjected to shock and laparotomy without lymphatic duct ligation. Plasma from rats subjected to shock without lymph ligation was inhibitory to hematopoietic progenitor cell growth. In contrast, this shock-induced inhibition was not observed with plasma obtained from shocked rats that underwent mesenteric lymph ligation. CONCLUSIONS: Hemorrhagic shock suppresses bone marrow hematopoiesis as measured by a decrease in early and late progenitor cell growth. This suppression appears mediated through mesenteric lymph as the effect is abrogated by mesenteric lymph duct ligation. These data clearly demonstrate a link between the gut and bone marrow failure after hemorrhagic shock     

Mesenteric lymph duct ligation provides long term protection against hemorrhagic shock-induced lung injury

Recently we have shown that ligation of the main mesenteric lymph (MLN) duct prior to an episode of hemorrhagic shock (HS) prevents shock-induced lung injury. Yet, ligation or diversion of intestinal lymph immediately prior to injury is not clinically feasible. Diversion of intestinally derived lymph after injury to protect against secondary insults is possible, but it is not known how long the protective effects of lymph ligation would last. Thus, we tested whether ligation of the MLN duct seven days prior to HS would still be protective. Male Sprague-Dawley rats were subjected to laparotomy with or without MLN duct ligation. Seven days later, half of the sham and actual MLN duct ligated animals randomly were selected to undergo HS (30 mmHG for 90 min). The other half of the animals was subjected to sham shock. Lung permeability, pulmonary myeloperoxidase (MPO) activity, and bronchoalveolar fluid (BALF) protein content were used to determine lung injury. Lymphatic division 7 days prior to HS continued to prevent shock induced lung injury as assessed by a lower Evans Blue dye concentration, BALF protein and MPO activity. In addition, there was no evidence of Patent Blue dye in the previously ligated MLN duct. Since ligation of the main mesenteric lymphatic duct continues to protect against shock-induced lung injury 1 week after duct ligation, it is feasible that lymphatic ligation performed after an injury remains protective against certain secondary insults for at least 1 week.     

肠系膜淋巴管结扎对急性失血大鼠血黏度的影响

目的以肠系膜淋巴管结扎为手段，观察急性失血后，阻断肠淋巴液回流对急性失血大鼠血黏度的影响。方法20只Wistar雄性大鼠均分为失血组与结扎组。所有大鼠令身肌肉麻醉，经右侧颈总动脉匀速放血（失血量为全血量的1／4，≥5．8mL，全血量以体重1/13计），结扎组失血后行肠系膜淋巴管结扎，失血组仅在肠系膜淋巴管下穿线。记录24h存活情况。24h后，将存活大鼠再次全身麻醉，经左侧颈总动脉迅速放血6mL．将实验前后放出的全血进行全血黏度、血浆黏度、红细胞压积（Hct）等指标检测。结果急性失血后24h，失血组存活6只．结扎组存活9只，结扎组存活情况略好于失血组。与实验前相比，急性失血后24h，失血组与结扎组在各切变率下的全血黏度、全血相对黏度以及Hct均显著降低，失血组全血还原黏度降低、血浆黏度升高（P〈0．01～0．05）；结扎组在1s^-1、10．3s^-1、30．7s^-1、115s^-1、300s^-1等切变率下的全血黏度、全血相对黏度以及Hct均显著高于失血组，血浆黏度降低（P〈0．05）。结论结果提示大鼠急性失血后，出现全血黏度降低，但血浆黏度升高；肠系膜淋巴管结扎可改善急性失血导致的全血黏度和血浆黏度的变化。     

肠系膜淋巴管结扎对急性失血大鼠血液凝固性的影响

目的 观察结扎肠系膜淋巴管对急性失血大鼠血小板功能、体外血栓形成以及凝血功能的影响,探讨肠淋巴途径在急性失血时血液凝固性变化中的作用.方法 按随机数字表法将20只雄性Wistar大鼠分为失血组与结扎组,每组10只.采用经右颈总动脉匀速放血(失血量为全血量的1/4)的方法制备急性失血大鼠模型.结扎组失血后行肠系膜淋巴管结扎,失血组仅在肠系膜淋巴管下穿线但不结扎;记录24 h大鼠存活情况.失血后24 h将存活大鼠再次全麻,经左颈总动脉迅速放血6 ml.检测实验前后血小板黏附率、血小板聚集率、体外血栓形成率及凝血功能指标的变化,计算脑血流量.结果 急性失血后24 h,失血组存活6只(60%),结扎组存活9只(90%),结扎组存活率高于失血组,但差异无统计学意义(P>0.05).与实验前相比,两组血小板黏附率、血小板聚集率、纤维蛋白原(Fib)均显著升高,凝血酶时间(TT)显著延长,脑血流量显著降低;失血组活化部分凝血活酶时间(APTT)显著延长,血栓湿长、干长、湿重、干重和血栓形成率均显著增加(P<0.05或P<0.01).实验后结扎组血小板黏附率[(15.02±1.24)%],血小板聚集率(1 min、3 min及最大聚集率),血栓湿长、干长、湿重、干重,血栓形成率[(46.2±6.9)%],APTT[(21.04±5.53)s],Fib含量[(433.67±13.97)g/L]均显著低于失血组[分别为(18.54±1.18)%、(69.8±6.9)%、(26.35±6.26)s、(510.96±35.59) g/L],脑血流量[(485.1±41.4)ml·kg~(-1)·min-1]显著高于失血组[(417.8±42.2)ml·kg~(-1)·min-1,P<0.05或P<0.01].结论 急性失血可导致大鼠血液高凝、体外血栓形成增多,肠系膜淋巴管结扎可改善急性失血大鼠的血液高凝状态.     

肠道不完全性缺血-再灌注损伤对远位免疫器官的影响

目的观察肠不完全性缺血再灌注(I/R)损伤对远位免疫器官的影响。方法55只大耳白兔分为肠不完全性I/R组、假手术组、正常对照组。依据失血性休克过程中肠血流量变化规律,不完全性阻断肠系膜上动脉(SMA),复制肠不完全性I/R损伤模型,观察脾脏、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node,MLN)细胞增殖力变化,及细胞凋亡和caspase-3的改变,并行静脉血、脾脏、MLN细菌培养。结果肠缺血期,脾脏、MLN凋亡细胞略增加,再灌注后,凋亡细胞增加明显,3 d时仍见较多凋亡细胞;脾脏、MLN细胞caspase-3表达与凋亡改变趋势相同;肠不完全性I/ R损伤后脾脏、MLN细胞增殖力明显降低;静脉血、脾脏、MLN细菌培养阳性率明显增加。结论脾脏、MLN等免疫细胞功能障碍可能是肠I/R损伤后细菌移位的重要原因,其发生发展与肠I/R损伤后caspase-3激活所致的细胞凋亡有关。