紫杉醇联合他莫昔芬对人乳腺癌细胞MCF-7的作用

为探究紫杉醇联合他莫昔芬对人乳腺癌细胞的影响并初步研究其作用机制,体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,MTT法检测紫杉醇、他莫昔芬单独及联合使用对MCF-7细胞株的增殖抑制作用,计算两药单独作用时的半数抑制浓度(inhibito-ry concentration 50,IC50)以及联合使用时针对靶细胞的联合指数(comb...     

沉默UHMK1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨干扰乳腺癌细胞系中UHMK1的表达对乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰乳腺癌细胞株MDA-MB-231中UHMK1的表达,分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测shRNA的干扰效率.应用MTT实验检测细胞活力...     

肝癌组织中PKM2表达及与放疗敏感性的关系

目的检测肝癌组织中M2型丙酮酸激酶(M2 pyruvate kinase,PKM2)的表达,并分析其与放疗敏感性的关系。方法回顾性分析80例肝癌患者的临床资料,患者均实施肝脏穿刺活检,且均符合三维适形放疗指征。检测肝癌组织中PKM2蛋白的表达,对比不同PKM2蛋白表达患者放疗前后血清AFP水平,对比不同PKM2蛋白表达患者的放疗效果和敏感性。探讨肝癌组织中PKM2表达与放疗敏感性的关系。结果肝癌组织中PKM2蛋白阳性率为87.50%;放疗前后肝癌组织中PKM2蛋白阳性者血清AFP水平均高于阴性者(P<0.05),且放疗后肝癌组织中PKM2蛋白阳性和阴性者血清AFP水平均低于放疗前(P<0.05);PKM2蛋白阳性者缓解率(放疗敏感率)低于阴性者(P<0.05);临床分期Ⅲ期、Ⅳ期,低分化,PKM2蛋白阳性均是放疗不敏感的独立危险因素(OR=3.274、5.328、5.942、7.135,P<0.05)。结论肝癌组织中PKM2阳性率高,且与血清AFP水平、放疗敏感性均密切相关,PKM2蛋白阳性等均是放疗不敏感的独立危险因素。     

Hsa-miR-133a对人乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-133a(miR-133a)对人乳腺癌细胞侵袭、迁移和增殖的影响,并初步分析miR-133a影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能机制.方法 用脂质体介导的转染方法将miR-133a阻遏物(miR-133a inhibitors)转染人乳腺癌细胞株MCF-7,以inhibitor negative control (inhibitor NC)作为阴性对照.通过MTS试剂盒和Transwell侵袭实验检测细胞增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞迁移能力;再利用生物信息学方法预测miR-133a的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-133a inhibitors组与inhibitor NC组间细胞增殖活性差异无显著性(P>0.05);(2)划痕后miR-133a inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验显示转染miR-133a inhibitors后,MCF-7细胞的侵袭及迁移能力均明显增强(P<0.01,P<0.05);④生物信息学方法预测miR-133a的靶基因中,部分发挥了促进细胞侵袭、迁移的生物学功能.结论 (1)MiR-133a对人乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用,可能成为乳腺癌治疗的潜在候选靶点;(2)MiR-133a可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.     

异丙酚下调PKM2抑制人肺腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨异丙酚对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 MTT法检测异丙酚(60、100、120μmol/L)处理的人肺腺癌细胞系A549、Anip973的抑制率或增殖;将si-NC组(转染si-NC)、si-PKM2(丙酮酸激酶M2)组(转染si-PKM2)、pc DNA3. 1组(转染pc DNA3. 1)、pc DNA3. 1-PKM2组(转染pc DNA3. 1-PKM2)用脂质体法转染至Anip973细胞,部分组用120μmol/L异丙酚处理;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;RT-qPCR检测细胞中PKM2的mRNA的表达;Western blot检测细胞中PKM2、E-cadherin、MMP-2的蛋白表达。结果异丙酚(60、100和120μmol/L)呈浓度依赖性抑制人肺腺癌细胞A549、Anip973增殖(P <0. 05),Anip973细胞对异丙酚的敏感性较强,最适浓度为120μmol/L;异丙酚可抑制Anip973细胞迁移和侵袭,并下调PKM2、MMP-2蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达;敲减PKM2具有与异丙酚相同的抑制Anip973细胞的增殖、迁移和侵袭作用,下调MMP-2蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达的作用;过表达PKM2可减轻异丙酚对Anip973细胞增殖、迁移和侵袭及E-cadherin、MMP-2蛋白表达。结论异丙酚可抑制肺腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭,其机制与下调PKM2表达相关。     

4-羟基他莫昔芬通过雌激素受体GPR30激活ezrin蛋白促进人乳腺癌MCF-7细胞迁移*

 目的：观察4-羟基他莫昔芬（OHT）对人乳腺癌细胞株MCF-7迁移的影响并探讨其机制。方法：贴壁培养雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7,细胞划痕愈合实验观察OHT对MCF-7细胞迁移的影响,Western blotting检测c-Src/p-Src和ezrin/p-ezrin蛋白的表达。结果：（1）与对照组相比,单独给予MCF-7细胞雌二醇（E2）和OHT都能促进细胞迁移,OHT不能抑制E2对MCF-7细胞的促迁移效应。（2）OHT促进MCF-7细胞迁移最大效应浓度约为5 μmol/L,在6 h即能观察到明显促迁移效用。（3）OHT和雌激素受体G蛋白偶联受体30（GPR30）激动剂G1都能明显增加p-Src和p-ezrin蛋白表达。（4）分别用G15和PP2阻断GPR30和Src后,OHT激活ezrin作用都能被阻断。结论：OHT可能通过结合GPR30后激活Src蛋白,进而磷酸化激活ezrin,介导细胞骨架重构并促进MCF-7细胞迁移。     

雌激素对人乳腺癌细胞株MCF-7 KLK 6 mRNA和蛋白表达水平的影响

 目的： 探讨雌激素与其拮抗剂三苯氧胺对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7组织激肽释放酶6（KLK 6）mRNA和蛋白（hK6）表达水平的影响。方法: 取生长良好的MCF-7细胞，在不同浓度的雌激素（17-βE2）和三苯氧胺存在下培养72 h后，收集细胞，分别采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和流式细胞术，检测KLK6 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果: 实时荧光定量RT-PCR表明，当17-βE2浓度在10-12 mol/L时，与乙醇对照组无明显差异(P>0.05), 17-βE2浓度在10^-10 mol/L和10-8 mol/L时，KLK6 mRNA的相对含量显著少于乙醇对照组；流式细胞术分析表明, 代表hK6含量的相对荧光强度（AFI）显著低于乙醇对照组（P<0.01）。三苯氧胺（10^-6 mol/L）作用组KLK6 mRNA 的相对含量显著高于对照组（P<0.01）；hK6含量与对照组相比差异显著（P<0.01）。结论: 雌激素对MCF-7 KLK6 mRNA和蛋白表达水平有一定的下调作用，而三苯氧胺作用相反。     

毛钩藤碱对缺氧乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察毛钩藤碱对缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取MCF-7细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测毛钩藤碱的细胞毒性作用;采用细胞划痕实验测量细胞迁移率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力;采用Western blot法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平;采用RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA水平。结果:自32μmol/L开始,随着毛钩藤碱浓度的升高,MCF-7细胞存活率明显降低(P0.05),IC_(50)为62.82μmol/L;在缺氧条件下,MCF-7细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05),HIF-α、Snail和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显下降(P0.05),HIF-1α的mRNA水平也显著升高(P0.05);除缺氧MCF-7细胞中HIF-α的mRNA水平未受影响外,上述效应均被毛钩藤碱(16μmol/L)明显抑制(P0.05)。结论:毛钩藤碱可在体外抑制缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭,这可能与毛钩藤碱下调HIF-1α、Snail和MMP-9蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平有关。     

LINC00847促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究体外LINC00847表达对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 应用shRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中LINC00847的表达后,qRT-PCR法检测shRNA的干扰效率.确认干扰效率后分别使用MTT法、克隆形成实验和Transwell小室实验检测干扰LINC00847后MCF-...     

PKM2是TCRγδ的配体吗?

目的检验M2型丙酮酸激酶(PKM2)是否是肿瘤细胞表面TCRγδ识别的配体。方法用Western blot的方法验证OT3肽(合成的TCRγδ中δ链的CDR3区肽)与PKM2结合,用Western blot及免疫组化法观察PKM2在肿瘤细胞及组织中的表达,用流式细胞术及激光扫描共聚焦显微镜术验证PKM2在肿瘤细胞的定位,用固相化PKM2体外扩增γδT细胞和PKM2刺激γδT细胞分泌IFN-γ的实验检验PKM2的功能。结果 (1)PKM2可与OT3肽结合,肿瘤细胞总蛋白提取物中含有大量PKM2,提示以OT3为探针,从肿瘤细胞总蛋白提取物中钓取到PKM2是合理的,用此方法筛选OT3结合蛋白的方法是可行的;(2)PKM2普遍表达于肿瘤细胞及组织,但不表达于肿瘤细胞膜;(3)PKM2在体外不能扩增γδT细胞,无刺激γδT细胞产生IFN-γ的功能。结论 PKM2不表达于肿瘤细胞表面,对γδT细胞不具有刺激活化的功能,PKM2不具备TCRγδ的配体特性。     

Gli2基因沉默对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)基因对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法构建靶向Gli2基因的shRNA慢病毒载体,转染到SW480细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;实验设干扰组、阴性对照组和空白组。用MTT法、倍增时间与集落形成实验检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测细胞的迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blot法检测细胞间Gli2、cyclin D和MMP-2基因和蛋白的表达。结果SW480细胞转染慢病毒72 h后可见明显的绿色荧光蛋白表达,干扰组较阴性对照组与空白组Gli2表达降低,细胞增殖减慢,集落形成能力减弱,倍增时间延长,迁移、侵袭能力减弱,cyclin D1和MMP-2表达下降(P0.05)。结论沉默Gli2的表达能够抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力,机制可能与cyclin D1和MMP-2的下调有关。     

靶向COL1A1基因的shRNA对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭与迁移的影响

目的探讨Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭与转移的影响。方法设计2条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞。用Western blot法筛选抑制效率最高的细胞进行细胞平板集落形成实验、细胞黏附实验、细胞迁移及侵袭实验,观察COL1A1基因对MDA-MB-231细胞黏附、运动及侵袭能力的影响。结果转染pshRNA-COL1A1-2干扰载体的MDA-MB-231细胞COL1A1蛋白表达降低最明显,抑制率达66.98%±2.08%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。pshRNA-COL1A1转染组细胞的集落形成率显著低于空白对照组和阴性质粒pshRNA-scramble转染组(P<0.05);细胞黏附实验中pshRNA-COL1A1转染组细胞的吸光度值较对照组明显降低(P<0.001);转染pshRNA-COL1A1质粒组细胞的穿膜细胞数也显著低于空白对照组和阴性质粒pshRNA-scramble转染组(P<0.001)。结论 COL1A1基因沉默可在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的黏附、侵袭和迁移。     

布托啡诺调控PBX3基因抑制乳腺癌细胞系MCF7增殖、迁移和侵袭

目的探讨布托啡诺(butorphanol)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及相关的分子机制。方法用MTT法检测不同浓度布托啡诺对人乳腺癌细胞系MCF7的抑制作用;用Transwell迁移及侵袭实验检测不同浓度布托啡诺对人乳腺癌MCF7细胞迁移及侵袭的影响;RT-qCR与Western blot法分别检测乳腺癌细胞系、正常乳腺上皮细胞以及布托啡诺对MCF7细胞中PBX3 mRNA及蛋白表达的影响;观察转染si-PBX3或si-con后,MCF7细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化;PBX3过表达验证布托啡诺对乳腺癌增殖、迁移及侵袭的作用机制。Western blot检测cyclin D1和MMP-2蛋白表达。结果PBX3在乳腺癌细胞系中的表达上调,沉默PBX3表达可明显抑制MCF7细胞增殖、迁移及侵袭,同时抑制cyclin D1和MMP-2的表达;不同浓度的布托啡诺干预能显著抑制MCF7细胞增殖、迁移及侵袭且具有浓度依赖性,还可抑制PBX3、cyclin D1和MMP-2的表达;过表达PBX3可逆转布托啡诺对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论布托啡诺可通过抑制PBX3降低乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

Bmi-1 regulates epithelial-to-mesenchymal transition to promote migration and invasion of breast cancer cells

Breast cancer is a highly invasive and metastatic disease. Recent studies report that breast cancer cells that have undergo epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) obtain malignant characteristic, however, the molecular mechanism underlying this transition are poorly understood. Here, we found that over-expression associated with the process of breast cancer and that high B-cell-specific moloney murine leukemia virus insertion site 1 (Bmi-1) levels predict shorter survival of breast cancer patients. We demonstrate that Bmi-1 regulates EMT and the migration of breast cancer cells. RNA interference-mediated knockdown Bmi-1 expression restored E-cadherin expression and cell-cell junction formation in breast cancer cells, suppressing cell migration and invasion. In contrast, the over-expression of Bmi-1 decreased the expression of the epithelial mark (E-cadherin) but increased the mesenchymal makers (N-cadherin and vimentin) in breast cancer cells.     

Rab23在人乳腺癌细胞Bcap-37侵袭迁移中的作用

目的 探讨过表达和敲除Rab23对人乳腺癌Bcap-37细胞侵袭迁移能力的影响.方法 应用Western blot法检测乳腺细胞HBL-100及乳腺癌细胞Bcap-37、MDA-MB-231、MCF-7中Rab23的表达情况.慢病毒转染乳腺癌细胞Bcap-37,筛选出稳定过表达和敲除Rab23的Bcap-37细胞.划痕愈合试验、Transwell实验检测过表达和敲除Rab23后Bcap-37细胞侵袭迁移能力的变化.结果 Western blot法结果显示,Rab23在乳腺和乳腺癌细胞系中均有表达,且Bcap-37细胞表达水平最高,与HBL-100细胞相比,差异有统计学意义(P＜0.01);与空载体Bcap-37细胞比较,过表达Rab23的Bcap-37细胞侵袭迁移能力明显增强(P＜0.01);敲除Rab23的Bcap-37细胞侵袭迁移能力明显减弱(P＜0.01).结论 Rab23在乳腺癌细胞Bcap-37的侵袭迁移中发挥着重要作用.     

MST1过表达抑制宫颈癌细胞系SiHa的增殖、迁移和侵袭

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)对子宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法Western blot检测正常宫颈上皮细胞H8与宫颈癌细胞SiHa中MST1的表达;构建p J3H-HA-MST1质粒并转染SiHa细胞系,Western blot检测MST1、Ki-67和MMP9的蛋白表达;MTS、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 SiHa细胞的MST1蛋白表达水平明显低于H8细胞(P0.05);SiHa细胞转染MST1质粒后,MST1蛋白表达明显升高,而Ki-67和MMP9蛋白表达水平显著下降(P0.05),SiHa细胞的增殖被明显抑制(P0.05),同时细胞的迁移和侵袭能力也显著降低(P0.01)。结论 MST1过表达可以抑制宫颈癌细胞SiHa的增殖、迁移和侵袭能力。     

转染胃动蛋白2基因抑制人胃癌细胞系MKN28增殖、迁移和侵袭

目的检测胃癌、癌旁组织和胃癌远端胃黏膜组织中胃动蛋白2(GKN2)的表达;分析GKN2转染人胃癌MKN28细胞系后对增殖、迁移和侵袭的影响。方法免疫组织化学技术检测胃癌、癌旁组织和胃癌远端胃黏膜中GKN2蛋白的表达;将GKN2基因真核表达载体(Xhol_GKN3SP-h GKN2-TEV-SBP_Xhol)转入人胃癌MKN28细胞,经G418筛选后获得稳转细胞株,Western blot确定GKN2在MKN28细胞中表达;MTT法测定MKN28细胞增殖;Transwell迁移实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭。结果 GKN2在胃癌组织中的表达少于胃癌远端胃黏膜和癌旁胃组织(P<0.05)。GKN2转染人胃癌MKN28细胞后吸光度值(A值)显著低于未转染组和空载体组(P<0.05)。与未转染组及空载体组相比,GKN2过表达致使迁移细胞数(P<0.05)和侵袭细胞数均明显下调(P<0.05)。结论 GKN2表达减低与胃癌的发生有关;GKN2过表达显然可阻抑人胃癌MKN28细胞的增殖、迁移和侵袭。     

SHP-1对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响及机制初步探讨

目的探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响。方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列;然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞干扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变化;通过Transwell小室实验检测干扰SHP-1对细胞侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实SHP-1在人乳腺癌细胞株MCF-7中有表达以及SHP-1SiRNA的干扰效率;干扰SHP-1后,MMP-9的表达量上调;Transwell小室实验证实,与MCF-7阴性干扰对照及空白对照细胞相比,siRNA组的侵袭能力显著增强（P〈0.001）。结论乳腺癌MCF-7中SHP-1的表达水平高低和该细胞侵袭能力高低呈负相关,其侵袭可能和MMP-9的表达呈正相关。