miR-30a影响MSCs的细胞周期及其对DCs的抑制作用

目的:间充质干细胞(MSCs)是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的多功能干细胞。已经有研究表明,miR-30a在一些免疫相关疾病的MSCs中的表达发生变化。但对于miR-30a如何调控MSCs影响其免疫调节功能还未有报道。本研究探究了miR-30a对MSCs的表型、活力、凋亡、周期和免疫调节功能的影响。方法:用混合酶法分离人脐带来源的间充质干细胞;用流式细胞仪分析了高表达miR-30a对MSCs表型的影响;用CCK-8法检测了miR-30a对MSCs的活力的影响;用Annexin V/PI双染法检测了高表达miR-30a后细胞凋亡的情况;用Q-PCR和蛋白质免疫印迹的方法检测了miR-30a对周期蛋白Cyclin E2(CCNE2)的影响;通过Targetscan预测软件分析miR-30a与CCNE2的靶向关系,并通过荧光素酶检测试验进行验证;另外通过MSCs与树突状细胞(DCs)共培养探讨了高表达miR-30a的MSCs对DCs的成熟的影响。结果:高表达miR-30a不影响MSCs的表型、活力和凋亡,但能抑制CCNE2的表达,使细胞周期阻滞在G0/G1期;进一步通过检测DCs的CD40和CD86表达发现,与普通MSCs相比,高表达miR-30a的MSCs能明显抑制DCs的成熟。结论:miR-30a可能通过抑制CCNE2表达影响MSCs的细胞周期,且miR-30a能增强MSCs对DCs的免疫抑制作用。     

趋化因子受体CXCR4在骨髓间充质干细胞中的表达

目的体外研究趋化因子受体CXCR4在骨髓间充质于细胞中的表达情况。方法体外培养大鼠骨髓基质细胞,构建CXCR4腺病毒表达载体,采用Western blotting对骨髓基质细胞的CXCR4受体表达水平进行检测。结果骨髓间充质干细胞能高表达CXCR4蛋白。结论CXCR4蛋白在骨髓间充质干细胞高表达,为进一步研究SDF-1／CXCR4轴介导BMSCs在肝脏选择性归巢打下基础。     

过表达GATA-4的小鼠骨髓间充质干细胞改善小鼠心肌梗死后的心功能

目的探讨过表达GATA-4的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对小鼠心肌梗死后心功能的影响。方法通过慢病毒载体携带GATA-4感染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的小鼠BMSCs。将过表达GATA-4-BMSCs,空载体-BMSCs(NC-BMSCs)及BMSCs用于低氧培养诱导细胞凋亡。48 h后,用流式细胞计量术检测细胞凋亡率;用Western blot检测caspase-3、caspase-9和β-actin及细胞色素C的表达。给心肌梗死模型小鼠尾静脉注射上述细胞,用心脏彩超检测48 h心功能;用TUNEL技术检测心肌梗死局部凋亡细胞数量。结果过表达GATA-4-BMSCs组与BMSCs组、NC-BMSCs组比较具有较强的抗凋亡能力(P0.05)。GATA-4-BMSCs组的caspase-8和cytochrome C表达量最低(P0.05)。过表达GATA-4-BMSCs对射血分数及左室短轴缩短率改善幅度最大(P0.05)。48 h后,过表达GATA-4-BMSCs组心肌梗死局部凋亡细胞数量减少(P0.05)。结论过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强BMSCs抗凋亡,有效改善小鼠心肌梗死后的心功能。     

过表达CXCR4/CXCR7影响人脐带间充质干细胞迁移和增殖

目的探讨SDF-1/CXCR4及SDF-1/CXCR7对人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)迁移和增殖活性的影响。方法用Ad-EASY腺病毒质粒系统分别构建表达CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染h UC-MSCs后用FCM分别检测细胞膜的CXCR4和CXCR7受体的表达,Transwell法检测细胞迁移,MTT检测h UC-MSCs增殖活性,以及在H2O2诱导细胞毒性作用对细胞存活的影响。结果成功构建表达人源的CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染后h UC-MSCs细胞膜上的CXCR4/CXCR7受体阳性表达率分别达到93.7%和78.5%(P0.01),高表达CXCR4和CXCR7均显著增强SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移,其中CXCR7效应稍弱;高表达CXCR7而不是CXCR4显著提高SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖活性和氧化应激状态下的细胞存活率(P0.05)。结论 CXCR4/CXCR7均参与介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移作用,同时CXCR7还介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖和H2O2处理损伤的保护。     

共表达EGFP和CXCR4的大鼠骨髓间充质干细胞的构建及其迁移能力

目的 构建携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)及CXCR4慢病毒载体并实现其在大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)中的表达,观察转CXCR4基因后对rMSCs迁移能力的影响。方法 RT-PCR扩增大鼠CXCR4编码区片段,将其插入慢病毒载体质粒PNL-IRES2-EGFP,获得的PNL-CXCR4-IRES2-EGFP与包装及包膜质粒用脂质体法共转染293T细胞,包装生产慢病毒。所获慢病毒转染rMSCs后,用RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光组织化学和流式细胞术检测转CXCR4基因rMSCs组、转空载体rMSCs组中CXCR4表达情况。利用Transwell方法检测两组rMSCs在SDF-1作用下的迁移能力。结果 双酶切和测序证实,PNL-CXCR4-IRES2- EGFP构建正确,转CXCR4基因rMSCs组CXCR4表达明显增多,在SDF-1α作用下迁移能力明显增强。结论 成功构建带有EGFP和大鼠CXCR4的慢病毒载体,并获得CXCR4-rMSCs基因工程细胞,为深入研究SDF/CXCR4轴在rMSCs向损伤组织定向迁移中的作用奠定了基础。     

miR-148a 通过DNMT1 调控MSCs 向心肌分化的内在作用机制研究

目的:验证DNA 甲基转移酶1(DNMT1)是miR-148a 直接调控的靶基因,探究miR-148a 通过靶向DNMT1 调控骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌分化的作用机制。方法:MSCs 细胞经5忆鄄氮胞苷(5’-aza)诱导向心肌分化后,使用miRNA芯片筛选出诱导前后表达差异的miRNAs。Targetscan 软件分析异常表达的miR-148a 的靶基因,将野生型或突变型DNMT1 的3’-UTR 区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(DNMT1-wt 或DNMT1-mut)并分别与miR-148a mimics(miR-148a 模拟物)或scramble(miR-148a 阴性对照)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基DNMT1,qRT-PCR 和Western blot 分别检测转染miR-638 mimics 和scramble 后,对DNMT1 的mRNA 和蛋白表达的影响。构建miR-148a 慢病毒质粒,分别在转染到MSCs 后的第1、7、14 和28 天后检测miR-148a 对GATA 结合因子4(Gata-4)基因上游DNA 调控序列CpG 甲基化水平的影响、qRT-PCR 和Western blot 分别检测转染miR-148a 慢病毒质粒后对心肌特异蛋白:球蛋白重链(MHC) 和心脏肌钙蛋白T(cTnT)、MSCs 分化特征蛋白CD90 和CD29 表达的影响,以及对心肌特异转录因子心脏特异性同源盒基因(Nkx2.5)和Gata-4表达的影响。结果:miRNA 芯片筛选5’-aza 诱导MSCs 向心肌分化后表达异常的miRNAs,包括miR-146a-5p、miR-148a、miR-539 等,其中miR-148a 表达明显上调。Targetscan、荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR 验证DNMT1 是miR-148a 直接调控的靶基因。miR-148a 慢病毒感染MSCs 细胞,证实在转染的不同时间,Gata-4 上游基因甲基化水平发生改变,且随着转染时间延长,Gata-4 甲基化水平呈不断降低趋势,MSCs 细胞内MHC 和cTnT 表达提高,CD90 和CD29 表达降低,Nkx2.5 和Gata-4 表达提高,MSCs 细胞出现向心肌分化。结论:miR-148a 可通过靶向调控DNMT1 而调控MSCs 细胞的向心肌分化。     

雌激素对小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的抑制作用及其机制研究

目的:检测雌激素浓度与小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)凋亡的相关性,初步探讨雌激素调节mBMMSCs凋亡的分子机制。方法:构建雌性C57BL小鼠去势模型,模拟绝经期妇女低雌激素体质。分别取去势和假手术组小鼠以及正常小鼠mBMMSCs进行原代分离、培养和鉴定。利用流式细胞术(FCM)比较去势和假手术两组细胞的凋亡差异,以及不同雌激素浓度培养条件对正常C57BL小鼠mBMMSCs凋亡的影响。参考文献中芯片结果,利用实时定量PCR方法检测miR-21在去势组及假手术组mBMMSCs中的表达差异,以及不同雌激素浓度培养条件下正常小鼠mBMMSCs中miR-21的表达差异。结果:成功构建了去势小鼠模型。利用FCM证实去势小鼠骨髓间充质干细胞在体外培养的过程中较假手术组更易凋亡。正常小鼠mBMMSCs体外培养过程中,随着雌激素浓度的升高,其凋亡减少。去势鼠来源mBMMSCs中miR-21表达量低于假手术组来源mBMMSCs。高浓度雌激素培养液培养的mBMMSCs中miR-21表达高于低浓度雌激素培养液培养的mBMMSCs。结论:雌激素对mBMMSCs的凋亡具有抑制作用,miR-21可能参与这一过程。     

去卵巢对SD大鼠MSCs生物学特性的影响

目的：通过比较正常与双侧卵巢切除法复制的骨质疏松症(OP)模型大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的形态学、生长曲线及细胞周期的差异,观察去卵巢对SD大鼠MSCs生物学特性的影响。方法：20只10月龄SD大鼠随机分成模型组和假手术组,每组10只;以双侧卵巢切除法复制OP模型;造模12周后,采用全骨髓贴壁法提取正常和OP大鼠MSCs;差速贴壁原理纯化MSCs;分别采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)观察并比较正常与OP大鼠MSCs的形态学差异;MTT法检测正常与OP大鼠MSCs生长曲线;流式细胞仪检测正常与OP大鼠MSCs细胞周期。结果：OP大鼠MSCs细胞形态变得宽大、扁平,细胞内部细胞器减少,细胞活力下降,并有向脂肪细胞分化的现象发生;与正常组比较,OP大鼠细胞的增殖能力下降。结论：去卵巢导致大鼠MSCs形态变得宽大、扁平,体外增殖能力下降。     

miR-195对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

BACKGROUND:Previous studies have found that the expression level of miR-195 in differentiated human bone marrow mesenchymal stem cells (hBMMSCs) is significantly higher than that in undifferentiated hBMMSCs. However, miR-195 effect during this differentiation process and possible mechanism remain unclear. OBJECTIVE:To explore the effect of miR-195 on osteogenic differentiation of hBMMSCs and possible mechanism. METHODS:hBMMSCs were isolated and cultured in vitro. Alkaline phosphatase activity, Runx2, osteopontin and SMAD7 protein expression and miR-195 expression level during osteogenic differentiation of hBMMSCs were determined by alkaline phosphatase kit, western blot and real-time PCR, respectively. miR-195-downexpressed hBMMSCs were constructed by lipofection transfection, and were used to investigate the effect of miR-195 was on osteogenic differentiation of hBMMSCs. Dual luciferase reporter assay was used to identify whether the 3’UTR of SMAD7 mRNA was a binding target of miR-195. In addition, we transfected hBMMSCs with SMAD7 cDNA (pcDNA-SMAD7), and investigated the effect of SMAD7 on osteogenic differentiation of hBMMSCs. RESULTS AND CONCLUSION:The isolated and cultured hBMMSCs had good osteogenic differentiation ability in vitro. Expression level of miR-195 was increased with the increasing of induction time, and the expression level of SMAD7 was reversed. miR-195 promoted osteogenic differentiation of hBMMSCs. Luciferase assay confirmed that miR-195 targeted SMAD7 directly, and overexpression of SMAD7 inhibited the osteogenic differentiation of hBMMSCs. Taken together, miR-195 promotes osteogenic differentiation of hBMMSCs by targeting SMAD7.     

miR-150 基因缺失对小鼠繁殖和血液学指标的影响

目的:探讨miR-150 基因缺失对小鼠繁殖和血液学指标的影响。方法:采用miR-150ko 小鼠观察该小鼠的窝产仔数和离乳率及生长曲线,测定其生殖指标;以全自动血球计数仪和自动生化分析仪测定2 月龄miR-150ko 小鼠和正常对照C57BL/6J 小鼠血液细胞学和血清生化参数。结果:miR-150ko 小鼠窝产仔数与离乳率与C57BL/6J 正常对照小鼠相比均显著下降;miR-150ko 小鼠外周血白细胞计数、中间细胞数、中性粒细胞数、中间细胞百分比、中性粒细胞百分比与C57BL/6J小鼠相比显著升高;而血小板计数、淋巴细胞百分比显著下降;miR-150ko 小鼠的血清葡萄糖、总胆固醇水平较正常对照小鼠显著增高。结论:miR-150 基因缺失可影响到小鼠的繁殖功能,并对某些血液细胞学指标及血糖、胆固醇水平产生影响。     

miR-150对降植烷诱导的狼疮鼠肺出血的影响

本研究旨在观察miR-150在降植烷诱导的狼疮鼠中对肺出血的发生和严重程度的影响并初步探讨其可能的机制。实验选用8周龄C57/B6小鼠和miR-150基因缺陷小鼠,腹腔注射降植烷(pristane),在注射后的第7天、第10天、第14天观察肺脏大体病理变化,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化并进行病理评分。发现注射降植烷第10天和(或)第14天后C57/B6组和miR-150缺陷小鼠组均发生不同程度的肺出血,后者的严重程度大于前者。肺组织病理评分显著升高;miR-150缺陷组与C57/B6组比较血浆TNF-α表达升高,右肺上叶组织湿干比值(W/D)也显著升高。提示在降植烷诱导的狼疮鼠模型中miR-150参与了肺出血的发病过程,miR-150有望成为预测狼疮肺出血的生物标记物。     

Higher expression of miR-150-5p promotes tumorigenesis by suppressing LKB1 in non-small cell lung cancer

Lung cancer is one of the most malignant tumors that can form in the human. MicroRNAs (MiRNAs) play significant role in tumor progression. Human lung cancer tissues and cell lines were used to determine miR-150-5p respectively, and Liver Kinase B1 (LKB1) expression using quantitative real-time PCR (qRT-PCR). The data analysis website Kaplan-Meier Plotter (database obtained from The Cancer Genome Atlas) was used to perform a survival analysis with LKB1 levels. Using the appropriate assays, the function of miR-150-5p was also detected in cellular proliferation, migration and cell apoptosis as well as cell cycle. Results revealed that miR-150-5p was upregulated in non-small cell lung cancer (NSCLC) tissue and cell lines. In NSCLC, miR-150-5p promoted cellular proliferation and migration, but decreased cellular apoptosis. Conversely, miR-150-5p inhibition suppressed cellular growth. These results further revealed a network of cellular signaling for miR-150-5p to target LKB1. Ectopic expression of LKB1 can mitigate the tumor-promoting function of miR-150-5p. Collectively, these results indicated that miR-150-5p may promote lung cancer by inhibiting the suppressor gene LKB1 in NSCLC.     

CDK3 is a major target of miR-150 in cell proliferation and anti-cancer effect

MiR-150, a member of small non-coding RNAs, has been proven to dysregulate in different types of tumor and bear on carcinogenesis and cancer prognosis by regulating the expression of a series of gene including utrophin. Given that utrophin can compensate for dystrophin's absence and be regarded as a promising therapeutic target for Duchenne Muscular Dystrophy (DMD), we further detected the deep role of miR-150 in dystrophic muscle. Using a range of bioinformatic, molecular and cell biology techniques, we declared that miR-150 directly targets cyclin-dependent kinase 3 (CDK3) and leads to the regulation of CDK3 gene expression in both muscle-derived and non-muscle cells. The results indicated the expression of miR-150 was upregulated in mdx muscle and closely related to the lower level of CDK3. Transient transfection of miR-150 into cultured C2C12 cells led to significant decrease in cell proliferation, which is partly mediated via the 3′-UTRs of CDK3 mRNA. Targeting of CDK3 could also play a role, at least in part, in the anti-cancer activity suggested for miR-150 in previous studies. Consistently, the analysis of tumor and matched normal lung tissues indicates that miR-150 downregulation in lung tumors correlates with higher CDK3 levels. In addition, miR-150 transfection experiments with cancer-derived cell lines reveal that miR-150-mediated CDK3 suppression directly induces to growth inhibition. Collectively, our results highlight a novel activity for CDK3 in myoblast cell proliferation and confirm CDK3 as a key target that further enhances the tumor suppressor function proposed for miR-150.     

miR-451通过Akt负向调控糖尿病肾病患者组织上皮间质转分化

目的研究微小RNA-451(miR-451)对糖尿病肾病组织上皮间质转分化(EMT)的影响。方法取健康人肾脏组织和糖尿病患者肾脏组织,RT-qPCR检测肾组织mi-451、Akt和EMT相关基因(E-钙黏素、波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白)的表达;Western blot和免疫组织化学染色(IHC)检测Akt和EMT相关蛋白的表达。结果糖尿病肾病肾脏组织中miR-451和E-钙黏素mRNA表达量显著低于正常肾组织(P<0.05);Akt、vimentin和α-SMA mRNA表达量显著增多(P<0.05);Akt、vimentin和α-SMA蛋白表达量显著增高(P<0.05);E-钙黏素蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论糖尿病肾病时miR-451很可能通过Akt负向影响肾脏上皮间质转分化。     

miR-150在胎盘表达与复发性流产的关系研究

目的探讨miR-150通过靶向血管内皮生长因子(VEGF)表达调控胎盘血管生成参与复发性流产的关系。方法选择华中科技大学同济医学院附属梨园医院妇产科单胎晚期妊娠分娩的产妇40例为对照组(年龄23~29岁,平均年龄26.72岁),同期选择于该院妇产科3次或更多次自然流产的妇女40例为病例组(年龄23~29岁,平均年龄26.18岁)。测定两组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。设立HTR-8/SVNEO细胞组、miR-150mimics组、miR-150 inhibitor组,测定3组细胞活力、凋亡水平、血管形成水平、miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。建立正常小鼠组、miR-150 mimics小鼠组、miR-150 inhibitor小鼠组模型,测定3组小鼠平均流产数、胎鼠质量、胎盘质量、胎盘毛细血管数目、miR-150 mRNA及VEGF表达水平。结果病例组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平高于对照组胎盘组织,VEGF表达水平低于对照组胎盘组织(P <0.05)。miR-150 mimics组光密度(OD)值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05);miR-150 inhibitor组OD值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05),miR-150 inhibitor组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平高于正常小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量低于正常小鼠组(P <0.05)。miR-150inhibitor小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平低于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均胎盘毛细血管数目水平、VEGF表达水平低于正常小鼠组(P <0.05),miR-150 inhibitor小鼠组平均胎盘毛细血管数目、VEGF表达水平高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。结论复发性流产患者胎盘组织中miR-150表达水平升高,VEGF表达水平降低;miR-150靶向抑制胎盘中VEGF表达水平进而抑制胎盘中血管的生成可能是复发性流产的发病机制之一。     

miR-130b促进小鼠胚胎发育过程中大脑皮质神经元的迁移

目的通过胚胎在体电转染技术,在胚胎小鼠大脑皮质神经元中过表达miR-130b,探讨其对神经元迁移的影响。方法利用miR-130b过表达载体,在昆明小鼠E15.5胚胎大脑中电转染,并于E17.5处死母鼠,取胚胎进行冰冻切片,于荧光显微镜下观察阳性神经元的迁移情况。结果过表达miR-130b的小鼠胚胎,大脑皮质神经元的迁移速率上升,最终迁移到达MZ层的神经元占总阳性神经元的75.1%,远高于对照组的22.1%;且停留在VZ/SVZ层的神经元(7.9%)远低于对照组(69.3%)。结论 miR-130b在神经发育过程中能够促进神经元的迁移。在未来的研究中需要进一步探索其深层机制。     

miR-147对老龄小鼠巨噬细胞表达促炎性细胞因子的影响

目的探讨miR-147对老龄化小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法腹腔注射LPS,用ELISA方法检测老年小鼠和年轻小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。分离的老年和年轻小鼠腹腔巨噬细胞经LPS刺激,用实时定量PCR方法检测miR-147的表达水平。在巨噬细胞中过表达和抑制表达miR-147,用ELISA方法检测细胞培养上清中IL-6和TNF-α的表达水平。结果腹腔注射LPS后,老年小鼠血清中促炎性细胞因子IL-6和TNF-α均显著高于年轻小鼠(P0.05)。分离出的腹腔巨噬细胞经LPS刺激后,年轻小鼠细胞中miR-147的表达水平显著上调(P0.05),而在老年小鼠中没有明显变化。巨噬细胞中过表达miR-147后,IL-6和TNF-α的表达水平均显著下降(P0.05),而抑制miR-147的表达,两者均显著上升(P0.05)。结论老年小鼠巨噬细胞中miR-147的表达异常可能是老龄化小鼠表达促炎性细胞因子异常的重要机制。     

miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞系HepG2放疗敏感性

目的探究miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞放射敏感性的作用机制。方法用分次放疗放射递增法诱导建立放射抵抗型细胞株(RR-HepG2);RT-qPCR检测HepG2和RR-HepG2在不同放射剂量下miR-150-5p的表达水平;细胞克隆实验检测相同放射剂量下两种细胞的放疗敏感性;流式细胞计量术和Western blot检测过表达miR-150-5p对HepG2凋亡的影响;双荧光素酶报告基因法检测miR-150-5p与SIRT1的关联;细胞克隆实验和Western blot检测过表达SIRT1后,细胞的放疗敏感性和凋亡蛋白的变化。结果与亲代HepG2比较,相同放射剂量下,RRHepG2组miR-150-5p的表达量均显著降低(P<0. 05);放射处理后,与control、agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,敏感性高(P<0. 05),Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高;双荧光素酶报告基因法验证miR-150-5p靶向调控SIRT1。与agomiR-NC组比较,野生型(WT) agomiR-150-5p荧光素酶活性显著降低,SIRT1蛋白水平显著降低(P<0. 05);与anta-agomiR-NC比较,野生型(WT) anta-agomiR-150-5p荧光素酶活性显著升高,SIRT1蛋白水平显著升高(P<0. 05);放射处理后,与agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0. 05);与agomiR-150-5p+vector组比较,agomiR-150-5p+SIRT1组的细胞存活分数显著升高,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0. 05)。结论 miR-150-5p靶向SIRT1,下调其表达,提高肝癌细胞放射敏感性,可为临床肝癌放射治疗增敏提供靶点。     

miR-146a对小鼠巨噬细胞IL-18表达的影响

目的:探讨miR-146a对小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7以及小鼠原代腹腔巨噬细胞Thl/Th2类细胞因子表达的影响。方法:体外培养的小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞和腹腔新鲜分离的巨噬细胞分别瞬时转染miR-146a mimics、阴性对照mimics(NC mimics)、抑制性miR-146a(miR-146a inhibitor)和抑制性miR-146a阴性对照(NC in-hibitor)。转染后,利用real time PCR定量检测IL-18、IL-5和IL-10的表达情况。结果:RAW264.7细胞和原代腹腔巨噬细胞在转染miR-146a mimics后IL-18的表达水平明显降低(P<0.05),转染miR-146a inhibitor后IL-18的表达水平明显升高(P<0.05),但对IL-5和IL-10的表达,两种转染形式均没有影响。结论:巨噬细胞RAW264.7及原代巨噬细胞表达的miR-146a能够负向调控Thl类细胞因子IL-18的表达,但是不能调控Th2类细胞因子IL-5及IL-10的表达。