2型糖尿病KKAy模型小鼠肾脏中TGF-β及其受体和细胞外基质蛋白表达的关系

探讨2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏细胞外基质蓄积的原因和TGF-β及其受体的关系.15只KKAy小鼠和18只C57BL/J小鼠,分成3组,分别于16、20和24周处死动物,常规测体重、肾功能、血脂和尿蛋白,取肾皮质常规切片、染色,观察肾脏病理改变.用免疫组化和免疫印迹法检测不同周龄的KKAy小鼠及参照组C57BL/J小鼠肾皮质TGF-β1及TGF-βⅠ、Ⅱ型受体的表达,并用RT-PCR方法检测肾皮质细胞外基质Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白(fibronectin, FN)mRNA水平.KKAy小鼠16周龄以后便开始出现明显的肥胖、高血糖、高胰岛素血症和蛋白尿,符合2型糖尿病早期肾病特点.其FN和Ⅳ型胶原mRNA表达都比同龄参照组C57BL/J小鼠高2～4倍,其中以16周时最为显著, FN为1.53±0.46比较0.63±0.16(P＜0.001); Ⅳ型胶原为5.08±1.92比较1.21±0.25(P＜0.01).KKAy小鼠肾小球内TGF-β1及TGF-βⅠ型受体的水平明显低于C57BL/J小鼠,而Ⅱ型受体表达却高于C57BL/J小鼠.2型糖尿病KKAy小鼠早期肾病时,肾皮质细胞外基质合成增加,与TGF-βⅡ型受体表达增加有关.     

组织蛋白酶B和胱抑素C在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及意义

目的： 观察糖尿病大鼠肾组织中组织蛋白酶B(CB)和胱抑素C(CC)的表达并探讨其在糖尿病肾病中的可能作用。方法: 将Wistar大鼠分成健康对照组(C组,n=30)和糖尿病组(M组,n=35),糖尿病组给予STZ 55 mg/kg腹腔内注射,72 h后随机血糖>16.7 mmol/L为造模成功。分别在第4、8、16周各处死10只,在处死前留取24 h尿量测24 h尿白蛋白,留取血清标本测血肌酐,留取肾脏标本做免疫组化和实时荧光定量PCR测CC、CB、Ⅳ型胶原(colⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的表达情况。结果: C组的各项指标各时点均未见到有显著变化,与第4周相比,第8周M组大鼠内生肌酐清除率(Ccr)和24 h尿白蛋白显著升高(P<0.01),免疫组化和PCR结果显示CB、CC、colⅣ、FN在第8周出现明显上调(P<0.01或P<0.05),CB在16周下调(P<0.01),而CC显著上调(P<0.01)。相关分析显示CB的表达与24 h尿蛋白、colⅣ、FN蛋白表达和mRNA表达呈负相关（P<0.01）。结论: 糖尿病大鼠肾组织存在CB和CC平衡的失调,这可能是引起糖尿病肾病细胞外基质沉积的原因之一。     

TGF-β1对Heymann肾炎肾小球细胞外基质的影响

目的 探讨TGF-β1对不同病变阶段主动型Heymann肾炎肾小球细胞外基质的影响。方法 建立主动型Heymann肾炎模型，在主动型Heymann肾炎第4、6、8和12周，用RT-PCR法检测TGF-β1 mRNA在病变肾组织内的表达，并用免疫组化SP法检测纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原在Heymann肾炎病变各阶段大鼠肾小球内的表达，再用计算机图像分析系统进行定量分析。结果 自主动型Heymann肾炎模型诱发后第4周开始，TGF-β1 mRNA即有表达，至第8周最明显，第12周有所下调。主动型Heymann肾炎大鼠肾小球内纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原的含量，随TGF-β1表达的上调和病变的进展而增多。结论 TGF-β1可能通过刺激主动型Heymann肾炎大鼠肾小球上皮细胞产生过量细胞外基质，从而介导了主动型Heymann肾炎病变的发生和发展。     

三七皂苷R1 抑制TGF-β1 / Smad3 信号传导对糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化和炎症细胞因子的调节作用研究

目的:探讨三七皂苷R1(NGR1)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏纤维化和炎症细胞因子的调节作用及其机制。方法:采用高脂饲喂联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立DN大鼠模型。将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、NGR1低中高剂量组(5、10、20 mg/kg)和阳性对照组(二甲双胍,Metformin,MET,500 mg/kg)。检测大鼠肾脏功能;HE染色检测大鼠肾脏组织病理学改变;ELISA检测炎症细胞因子血清含量;Western blot和免疫组织化学检测肾脏纤维化相关蛋白表达水平;RT-PCR和Western blot检测大鼠TGF-β1/Smad3信号通路表达情况。结果:与模型组相比,NGR1中高剂量组肾脏肥大指数、尿蛋白、血清肌酸酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平具有统计学意义(P0.05或P0.01);肾脏病理学改变也有明显改善;TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ的血清含量也明显下调(P0.05或P0.01);肾脏Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)、纤联蛋白(FN)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达水平降低,而基质金属蛋白酶9(MMP-9)增加(P0.05或P0.01),α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)肾脏表达水平也明显降低;最后,肾脏TGF-β1/Smad3信号通路表达水平也降低(P0.05或P0.01)。结论:NGR1可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路来调节糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化和炎症细胞因子表达水平。     

核黄素对STZ诱导的大鼠糖尿病肾病的治疗作用

目的:探讨核黄素对STZ诱导的大鼠糖尿病肾病的治疗作用及机制。方法:将雄性Sprague-Daw-ley大鼠随机分为3组,即正常对照组、糖尿病模型组、核黄素治疗组,采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病大鼠模型,收集各组血、尿及肾组织,生化方法检测24h尿蛋白量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量,并计算肾脏脏器系数(KW/BW);Western blotting检测不同组别肾皮质TGF-β1、纤溶酶原活化抑制因子-1(PAI-1)蛋白质水平;光镜观察肾组织形态改变。结果:与糖尿病模型组大鼠比较,核黄素治疗组大鼠尿蛋白量显著降低(P0.01),肾组织及血清SOD、CAT活性升高(P0.01),肾组织MDA含量显著降低(P0.01),核黄素治疗组肾皮质TGF-β1及PAI-1蛋白表达明显低于糖尿病模型组。结论:核黄素对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏有一定的保护作用,其机制可能与其降低肾组织TGF-β1、PAI-1蛋白表达有关。     

氯化两面针碱减轻糖尿病肾病模型大鼠的肾脏损伤

目的观察氯化两面针碱对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用,并探讨其可能作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病模型组(DN)、氯化两面针碱(NC)20和40 mg/kg干预组。在建模成功后灌胃氯化两面针碱,1次/d,一共给药7周。试剂盒检测血清中的胰岛素与胰高血糖素;过碘酸希夫(PAS)染色法观察肾脏组织病理形态学;原位末端标记法检测肾小球细胞凋亡;免疫印迹法检测肾组织中磷酸化Smad2与Smad3表达水平、TGF-β1与Smad7蛋白表达水平。结果 DN组大鼠的胰岛素含量低于对照组(P0.05),胰高血糖素含量高于对照组(P0.05);给予氯化两面针碱干预后,大鼠血清中的胰岛素含量增加,胰高血糖素含量下降;低剂量组肾脏的PAS染色呈弱阳性,可见弥漫性肾小球硬化,药物高剂量组无基底膜增厚及肾小管病变;肾组织中磷酸化Smad2与Smad3表达降低(P0.05),TGF-β1与Smad7蛋白表达降低(P0.05)。结论氯化两面针碱对糖尿病肾病大鼠肾脏具有一定程度的保护作用,其可能是通过抑制TGF-β/Smad信号通路发挥作用。     

5/6肾切除大鼠血清瘦素水平变化及其与肾小球硬化关系

目的:观察5/6肾切除大鼠血清瘦素(leptin)水平及其与肾小球硬化指数(GSI)、肾小球局部转化生长因子-β1(TGF-β1)表达、细胞外基质(ECM)的关系。方法:选用SD雄性大鼠14只,其中8只通过5/6肾切除法制造慢性功能衰竭模型,另6只为假手术组作为正常对照。术后第6周末各组大鼠进行血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及leptin的测定,处死大鼠,取出肾组织进行病理组织形态学观察,并采用免疫组织化学方法检测肾小球TGF-β1、Ⅳ型胶原(ColⅣ)及纤维连接蛋白(FN)表达。并对血清leptin水平与GSI、TGF-β1、ColⅣ及FN之间的关系进行相关性分析。结果:5/6肾切除大鼠血清瘦素(leptin)水平显著高于假手术组(14.88±1.46ng/mlvs10.84±2.67ng/ml,P<0.01),并与GSI、TGF-β1、ColⅣ及FN呈显著正相关(P<0.01)。结论:高瘦素血症可能是引起肾小球硬化的机理之一。     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠肾组织中PPARγ、TGF-β1表达的影响

目的:探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达和罗格列酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其可能机制.方法:将大鼠随机分成3组,正常对照组(n=6)、阿霉索肾病组(n=7)、罗格列酮治疗组(n=7),12周后测大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、血脂和血肌酐、尿素氮,用免疫组化检测肾组织NF-κB p65的核转位及ELISA(夹心法)检测肾组织NF-κB p65的活性,RT-PCR测肾皮质PPARγ mRNA及TGF-β1 mRNA的表达及免疫印迹检测肾皮质PPARγ、TGF-β1蛋白表达,并进行相关分析.结果:与阿霉素肾病组相比,罗格列酮治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄减少,血清白蛋白升高,血甘油三酯和胆固醇下降,差异显著(P＜0.01),肾脏病理损害减轻;肾组织NF-κB p65活化和TGF-β1 mRNA和蛋白的表达均明显受抑制,而肾皮质PPARγ mRNA和蛋白表达显著增强,差异显著(P＜0.01);阿霉素肾病组和罗格列酮治疗组大鼠肾组织中NF-κBp65活性与PPARγ mRNA表达呈直线负相关(r=-0.8305,P＜0.01);肾组织中PPARγ mRNA与TGF-β1mRNA表达呈直线负相关(r=-0.7938,P＜0.01).结论:罗格列酮作用于阿霉素肾病大鼠后,可能通过上调PPARγ表达,部分抑制肾组织NF-κB p65活性,进而抑制肾组织中TGF-β1表达,从而使系膜基质沉积减少,肾组织病变减轻.     

糖尿病大鼠肾组织Smurf2表达及其与SnoN蛋白降解的关系

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)和核转录共抑制因子SnoN在糖尿病(DM)大鼠肾组织的动态表达,并初步探讨Smurf2在DM大鼠肾组织SnoN蛋白表达变化中的作用。方法:链脲佐菌素(STZ)尾静脉注射复制DM大鼠模型,随机分为DM2、4、8、12、16和24周组,每组均设鼠龄匹配的正常对照组(n=6)。生化方法测血糖、血肌酐(Scr)及24h尿蛋白量,计算肾脏指数;HE染色观察胰腺和肾组织病理学改变;免疫荧光染色检测胰腺组织胰岛素、肾组织Smurf2和SnoN的表达;Westernblotting检测肾皮质Smurf2、SnoN、转化生长因子β1(TGF-β1)和磷酸化Smad2(p-Smad2)蛋白的表达;RT-PCR检测肾皮质Smurf2和SnoN的mRNA。结果:(1)DM各组血糖、血Scr、24h尿蛋白量和肾脏指数均高于正常对照组,正常胰腺组织胰岛素表达强,DM大鼠胰岛素表达则明显减弱;(2)Smurf2和SnoN蛋白均主要表达于肾小管上皮细胞,从DM2周始各DM组Smurf2、TGF-β1和p-Smad2蛋白表达均多于正常对照组,DM4周起各DM组SnoN蛋白均少于正常对照组,DM各组SnoNmRNA与正常组相比无显著差异,Smurf2mRNA随病程进展逐渐增多;(3)Smurf2和SnoN蛋白的表达量呈显著负相关(r=-0.88,P0.01)。结论:在糖尿病肾病发病过程中SnoN蛋白的表达减少可能与Smurf2介导其泛素化降解有关。     

转化生长因子胞内信号蛋白Smad2/3在糖尿病大鼠肾脏表达的动态观察及意义研究

目的:动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中TGF-β1及其下游信号分子Sm ad2/3在肾脏的表达及定位变化,探讨TGF-β1-Sm ad2/3信号通路在糖尿病肾病(DN)肾纤维化发病机制中的作用。方法:链脲菌素诱导大鼠糖尿病肾病,以免疫组化、W estern b lotting及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察糖尿病肾病发生发展过程中大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2/3蛋白及mRNA表达,并以RT-PCR方法观察结缔组织生长因子(CTGF)、胶原-3(COL-Ⅲ)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)mRNA表达。结果:TGF-β1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管表达明显多于正常组(P<0.05);Sm ad2/3蛋白主要以胞浆表达阳性为主,部分呈胞核表达阳性;Sm ad2/3蛋白及mRNA从2周起表达明显多于正常对照组(P<0.05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势。16周DN组大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2、CTGF、COL-Ⅲ、PAI mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:TGF-β1-Sm ad2/3信号转导通路参与了糖尿病肾病肾脏纤维化形成的信号转导过程,伴随着Sm ad2/3信号蛋白表达的增多及入核增加,CTGF、COL-Ⅲ、PAI-1等基因转录增加,导致肾脏细胞外基质的大量沉积,这是细胞因子TGF-β1导致糖尿病肾病肾纤维化进展可能的信号转导途径之一。     

厄洛替尼减轻STZ诱导的糖尿病肾病模型大鼠的肾损伤

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂厄洛替尼(erlotinib)对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法:采用大剂量(55 mg/kg)链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导大鼠糖尿病肾病模型,以1周后血糖值16.7 mmol/L的大鼠为造模成功的标准。将糖尿病大鼠随机分为2组[STZ组和STZ+erlotinib(100 mg·kg~(-1)·d~(-1))组],并以正常大鼠为对照组(control组)。Erlotinib处理4周后,检测大鼠空腹血糖、血清肌酐和24 h尿蛋白含量的变化;HE染色和Masson染色观察肾脏组织病理学改变;Western blot检测各组肾脏组织中EGFR、p-EGFR、转化生长因子β1(TGFβ1)、Smad2/3、p-Smad2/3、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)和纤连蛋白(fibronectin)的蛋白水平;活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测各组肾脏组织中ROS和MDA水平。结果:与control组相比,STZ组血糖、24 h尿蛋白和血清肌酐水平均显著升高(P0.01),肾组织形态学出现异常变化;与STZ组相比,STZ+erlotinib组的血糖、24 h尿蛋白水平和血清肌酐水平显著降低(P0.05),肾小球结构恢复正常,肾小球系膜细胞增生程度明显减弱。厄洛替尼明显抑制了STZ大鼠肾组织中p-EGFR、TGFβ1、p-Smad2/3、ColⅣ和fibronectin蛋白水平,也明显抑制了STZ大鼠肾组织中ROS和MDA水平。结论:厄洛替尼可能通过抑制EGFR/TGFβ1-Smad2/3信号通路的激活来抑制糖尿病肾病肾组织的纤维化和氧化应激反应,从而减轻肾损伤。     

辛伐他汀与P38信号通路对Ⅳ型胶原及纤维连接素表达的影响

目的:研究P38信号通路(P38MAPK)与Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白及纤维连接素(FN)mRNA表达的关系,探讨P38MAPK在糖尿病肾病中的作用,以及辛伐他汀(SI)在防治糖尿病肾病中的作用机制。方法:在体外模拟糖尿病状态,分别以高葡萄糖(HG)、糖基化终末产物(AGE)或过氧化氢(H2O2)孵育大鼠肾小球系膜细胞(RMC),以Westernblot或RT-PCR检测P38MAPK和ColⅣ及FN在RMC中蛋白或mRNA的表达。检测并比较有无P38MAPK特异性抑制剂(SB203580)或SI预处理时,以上3种因素对P38MAPK和ColⅣ蛋白及FNmRNA在RMC中表达的影响。结果:HG、AGE或H2O2均可单独激活P38MAPK,增强磷酸化P38MAPK、ColⅣ及FN在RMC中的表达。SB203580可显著抑制ColⅣ蛋白及FNmRNA的表达;SI可抑制P38MAPK的活化并减少ColⅣ蛋白及FNmRNA的表达。结论:P38MAPK是ColⅣ及FN的上游信号分子,表明P38MAPK可能是糖尿病肾病发生的始动信号之一。SI可能是通过抑制P38MAPK磷酸化进而抑制ColⅣ蛋白及FNmRNA的表达,具有防治糖尿病肾病的作用。     

血、尿Smad2和TGF-β1与IgA肾病尿蛋白及内生肌酐清除率之间关系的研究

目的检测分析血、尿Smad2、TGF-β1与IgA肾病患者尿蛋白定量及内生肌酐清除率(CCR)之间的关系。方法分别采集50例IgA肾病患者(IgAN组)及50例无肾脏疾病者(对照组)血和24h尿标本,采用免疫比浊法检测尿蛋白、酶联免疫吸附法检测血、尿肌酐,并计算患者CCR;采用Westernblot方法观察血、尿Smad2和TGF-β1表达情况。结果IgAN组与对照组相比,24h尿蛋白(P<0.01)、血肌酐(P<0.01)水平均高于对照组,CCR(P<0.01)低于对照组,出现肾功能轻度损伤。血、尿Smad2及TGF-β1水平均较对照组增高(P<0.01)。尿Smad2、TGF-β1与尿蛋白定量之间的存在一定正相关性(r分别为0.351,0.474,P<0.05)。但血清Smad2、TGF-β1与尿蛋白定量无明显相关性(P>0.05),血尿Smad2、TGF-β1与CCR无明显相关性(P>0.05)。结论IgAN患者血尿Smad2及TGF-β1均增高,尿液Smad2及TGF-β1与尿蛋白定量有一定相关性。     

碘普罗胺对大鼠肾小球脏层上皮细胞的影响

目的探讨碘普罗胺诱导的大鼠对比剂肾病(CIN)发生的机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为正常对照组和对比剂肾病组(CIN组),各12只。CIN组采用尾静脉注射碘普罗胺的方法建立大鼠CIN模型;对照组尾静脉注射等量溶剂。所有大鼠均在注射后24 h处死。采用全自动生化分析仪测定24 h尿蛋白排泄量,免疫组化法测定肾小球上皮细胞细胞周期调控蛋白P21、P27、TGF-β1的阳性表达率,并用半定量评分法对各组大鼠的肾小球与肾小管间质的病理改变进行计量分析。应用TUNEL检测肾小球上皮细胞凋亡情况。结果与对照组相比,CIN组大鼠肾小球上皮细胞P21、P27、TGF-β1的阳性表达率显著增高,P21[(12.86±0.98)%vs(0.46±0.21)%,P=0.004 5],P27[(21.76±2.75)%vs(9.57±1.86)%,P=0.007 1]和TGF-β1[(12.85±5.54)%vs(7.63±0.84)%,P=0.003 7)];CIN组24 h尿蛋白显著性增加[(23.44±5.22)mg/d vs(2.13±0.52)mg/d,P=0.007 0];CIN组大鼠肾小球上皮细胞的病理损害更加严重和凋亡率明显增高[(52.5±6.4)%vs(4.2±0.3)%,P=0.007 5)],差异均有统计学意义。病理积分与24 h尿蛋白排泄量及P21,P27和TGF-β1的表达量呈正相关(r=0.765、0.701、0.842、0.651,P0.01)。结论碘普罗胺可通过上调肾小球上皮细胞的P27、TGF-β1的表达及尿蛋白的排泄量,加重肾小球上皮细胞的病理损害及凋亡。     

丹酚酸B对高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化及细胞外基质分泌的影响

目的:研究丹酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化及细胞外基质分泌的影响及其机制。方法:培养人肾小球系膜细胞(HGMCs),随机分为正常对照组、高糖组及高糖+丹酚酸B高、中、低剂量组,高糖组和丹酚酸B各组用含高浓度(33.3 mmol/L)葡萄糖的培养基培养72 h,丹酚酸B各组同时加人相应浓度丹酚酸B共同孵育。Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,ELISA法检测细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、纤维连接蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)的分泌水平,Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及Smad2和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化水平。结果:高糖孵育72 h后,肾小球系膜细胞α-SMA的蛋白表达水平明显升高,ColⅠ、ColⅢ、FN及LN蛋白的分泌水平显著增加(P 0.01),TGF-β1的表达及Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平也明显升高(P 0.01);与丹酚酸B共同孵育可明显降低α-SMA蛋白的表达水平,ColⅠ、ColⅢ、FN和LN的分泌明显减少,TGF-β1的表达及Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平显著下降(P 0.01或P 0.05)。结论:丹酚酸B可明显抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化,减少ColⅠ和ColⅢ等细胞外基质分泌,其机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路及p38 MAPK活化有关。     

肾康注射液通过TGF β1/Smad3信号通路抑制失血性休克大鼠肾损伤

目的探讨肾康注射液对失血性休克大鼠肾功能保护作用,初步探讨其作用机制。方法 SD大鼠45只,随机分为假手术组(Sham组)、失血性休克模型组(HS组)及肾康注射液治疗组(SK组),采用股动脉放血法建立失血性休克大鼠模型,HS组自体血液回输复苏,SK组予以腹腔注射肾康注射液,各组于HS发生后4h处死大鼠,观察各组大鼠血清中肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)浓度变化,HE、Masson染色观察肾脏组织病理学变化,Western blot检测各组大鼠肾脏组织中TGF-β1、smad3、p-smad3蛋白表达。结果 HS组大鼠肾功能损伤严重,血清中SCr、BUN浓度明显升高,病理学可见肾小球上皮细胞空泡变性,结构破坏严重,界线不清,大量炎性细胞浸润及胶原蛋白沉积,肾脏纤维化程度较高。经肾康注射液干预后,SK组肾功能明显减轻,血清中SCr、BUN浓度明显降低,病理学观察到肾小球上皮细胞结构完整,界线清楚,细胞排列基本有序,仅可见少量胶原蛋白沉积,纤维化程度较轻,同时,肾脏组织中TGF-β1、smad3、p-smad3蛋白表达明显受到抑制。结论肾康注射液改善失血性休克大鼠肾功能损伤,抑制肾脏纤维化,与其下调TGF-β1、smad3、p-smad3蛋白表达,调控TGFβ1/Smad3信号通路相关。     

RhoA/Rho激酶在2型糖尿病大鼠肝脏纤维化中的作用

目的阐明RhoA/Rho激酶在糖尿病大鼠肝纤维化中的作用。方法通过高脂饮食和小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组和法舒地尔干预组(法舒地尔10 mg/(kg·d),分两次腹腔注射)24周末。测定血糖、血脂、谷草转氨酶和谷丙转氨酶;Masson染色和羟脯氨酸测定评估肝胶原沉积;RT-PCR测定转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达;免疫组化测定TGF-β1蛋白表达;Western blot测定肝组织肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1磷酸化(p-MYPT1)水平。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠血糖、血脂和转氨酶显著增高,肝组织大量胶原沉积,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著上调(P0.01)。与糖尿病组比较,法舒地尔干预组大鼠转氨酶降低,肝胶原沉积明显减轻,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著下降(P0.01)。结论高血糖激活了肝组织RhoA/Rho激酶,通过调控TGF-β1/CTGF表达,在糖尿病肝纤维化中起着重要作用。     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠肾脏结构和功能的影响

目的：研究银杏叶提取物（GBE）对2型糖尿病（T2DM）大鼠肾脏结构和功能的影响。方法：SD大鼠随机分为正常对照组、高脂组、糖尿病组（高脂饮食+STZ造模）及糖尿病GBE治疗组（GBE 8 mg·kg-1·d-1），8周后处死大鼠,检测体重、肾重、尿量、24 h尿蛋白和N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平；电镜观察肾脏超微结构；RT-PCR法测定基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、Ⅳ型胶原的基因表达水平。结果：糖尿病组大鼠肾皮质TIMP-1、Ⅳ型胶原mRNA表达高于正常对照组，MMP-9 mRNA表达低于正常对照组，肾重指数、尿量、24 h 尿蛋白、NAG均高于对照组。电镜下见肾小球基底膜增厚，厚薄不均匀，足细胞突起肿胀，变短，并可见足突融合，球囊壁层细胞内线粒体扩张，肾小球内胶原纤维增多。而糖尿病GBE治疗组肾小球基底膜及足细胞病变明显较轻，肾皮质MMP-9表达高于糖尿病组，Ⅳ型胶原mRNA表达低于糖尿病组，尿量、24 h尿蛋白、NAG均低于糖尿病组。TIMP-1 mRNA表达无明显差异。结论：GBE可改善2型糖尿病大鼠肾脏的结构和功能，其作用机制与降低TIMP-1、Ⅳ型胶原mRNA表达，升高MMP-9 mRNA表达，阻止ECM的堆积有关。     

ACE2内源性激动剂DIZE对糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的:观察血管紧张素转换酶2(ACE2)内源性激动剂乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(DIZE)对糖尿病肾病(DN)大鼠的保护作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组和DIZE处理组(DIZE组)。DN组与DIZE组一次性腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg)建立糖尿病模型,12周后糖尿病肾病大鼠模型建立后给予DIZE 15 mg·kg~(-1)·d~(-1)或等量生理盐水皮下注射4周处理。16周末称量体重和肾重,计算肾质量体质量比(KW/BW),收集血、尿标本,检测血糖(GLU)、24 h尿蛋白(24UP)及血清肌酐(SCr)等指标。通过PAS染色观察各组肾脏病理变化;ELISA法检测大鼠AngⅡ、Ang-(1-7)、TGF-β1及VCAM-1水平的变化;通过免疫组化观察collagenⅠ和FN蛋白表达的变化;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测大鼠肾组织collagenⅠ和FN mRNA含量的变化;Western blot观察各组大鼠ACE2蛋白表达的变化。结果:DIZE显著提高了糖尿病大鼠ACE2的表达(P0.05),降低了糖尿病大鼠血浆AngⅡ含量(P0.05),提高了Ang-(1-7)的水平(P0.05)。与NC组大鼠相比,DN组与DIZE组大鼠的24UP、SCr和KW/BW明显升高(P0.05),collagenⅠ和FN mRNA水平及蛋白表达量增加,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1明显上升(P0.05)。DIZE组与DN组大鼠相比,24UP和SCr水平降低(P0.05),GLU和KW/BW无明显差异,collagenⅠ和FN mRNA含量及蛋白表达量减少,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1水平降低(P0.05)。结论:ACE2内源性激动剂DIZE显著提高了ACE2的活性,增加了Ang-(1-7)的含量,从而降低了肾脏纤维化及炎症水平,并对糖尿病肾病大鼠起到保护性作用。