钙激活中性蛋白酶介导雌激素增强MCF-7乳腺癌细胞的存活力

目的 探讨雌激素(E2)对MCF-7乳腺癌细胞钙激活中性蛋白酶1(CANP-1)基因表达和CANP蛋白酶活性的影响、以及CANP活性在E2增强细胞存活力中的作用.方法 以MCF-7乳腺癌细胞为研究模型、采用RT-PCR法检测mRNA表达、蛋白印迹法观察CANP特异性底物FAK蛋白剪切、血清饥饿诱导细胞死亡、锥虫蓝染色及细胞计数法检测细胞存活力.结果 E2(10 nmoL/L)可明显刺激乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调,CANP抑制剂则可显著抑制E2诱导CANP-1基因上调;在无血清培养条件下,E2激活CANP活性及增加细胞存活力(14.3±4.9％,P＜0.05),而CANP抑制剂可显著抑制E2诱导CANP激活以及细胞存活力增强(19.2±3.9％,P＜0.05).结论 E2刺激MCF-7乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调并增强CANP活性,后者可能参与介导血清饥饿时E2增强MCF-7细胞的存活力.     

ER-α36过表达促进人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移能力

 目的 探讨雌激素受体新亚型ER-α36过表达对人雌激素受体阳性乳腺癌细胞侵袭转移潜力的影响及其机制。方法 以野生型乳腺癌细胞系MCF-7/W、转染pcDNA3.1空载体的细胞系MCF-7/pcDNA3.1和转染重组载体pcDNA3.1/ER-α36的细胞系MCF-7/ER-α36为研究对象,分别用细胞粘附实验观测肿瘤细胞与细胞外基质的粘附能力、Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭转移能力,用Western blot法检测NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达。结果 与MCF-7/W组细胞相比,MCF-7/ ER-α36细胞的2h细胞粘附率和24h穿膜细胞数显著增加(P<0.05)。NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白的相对表达量及MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1显著增高（P<0.05）。结论 ER-α36过表达能促进ER-α66阳性乳腺癌细胞的体外粘附能力和侵袭转移潜力,其机制可能与通过NF-κ B途径提高MMP-2、MMP-9的表达水平及打破二者与TIMP-1之间的平衡有关。     

钙蛋白酶抑制EGF诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞体外增殖

目的观察钙蛋白酶对表皮生长因子(EGF)诱导的雌激素受体(ER)阴性乳腺癌细胞增殖的影响。方法体外培养人乳腺肿瘤系MDA-MB-231,经10 ng/m L EGF处理后,用蛋白印迹法检测FAK和CANP1蛋白表达。用CANP抑制剂Calpeptin(CALP)预处理对EGF上述效应的影响;通过集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力。结果 EGF可诱导FAK蛋白表达上调及蛋白剪切反应(P0.01),也可诱导CANP1自身蛋白剪切(P0.05),上述效应可被CALP显著削弱或阻断(P0.05);EGF还可诱导MDA-MB-231细胞集落形成(P0.05),此效应也可被CALP预处理显著抑制(P0.05)。结论 CANP可能成为抑制ER阴性乳腺癌细胞增殖的一个潜在药物作用靶点。     

过量表达ErbB2促进MCF-7细胞体外生长和侵袭

目的：研究过量表达ErbB2对于MCF-7细胞生长和侵袭的作用。 方法： 构建带有ErbB2逆转录病毒，感染MCF-7细胞，检测ErbB2的表达。用转染后的细胞开展体外生长和侵袭实验。 结果： 转染后ErbB2在MCF-7细胞中过量表达。体外生长和侵袭实验显示，过量表达ErbB2的细胞增殖快、侵袭性强。 结论： 过量表达ErbB2促进MCF-7细胞的生长和侵袭；阻断ErbB2信号可能为高表达ErbB2的肿瘤治疗带来新的策略。     

雌激素调控ABCG2介导的乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性

目的探讨雌二醇(E2)对乳腺癌耐药蛋白ABCG2表达和乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性的影响。方法用雌激素受体激动剂E2及其拮抗剂TAM(同时也是GPER激动剂)、GPER特异性激动剂G1及其特异性拮抗剂G15分别或联合处理MCF-7细胞,Western blot和免疫荧光法检测MCF-7中ABCG2的蛋白表达量和细胞内定位;用盐酸阿霉素(Dox)处理经上述干预的细胞,流式细胞技术及CCK8法检测细胞对化疗药物敏感性的改变。结果 ABCG2在MCF-7的细胞膜及细胞质均有表达,E2可以上调ABCG2蛋白的表达量(P0.05),且使胞质内ABCG2向细胞膜移动,并且抑制细胞毒性作用,上述效应能被抑制剂TAM显著抑制(P0.05);TAM单独处理细胞后ABCG2蛋白表达量减少(P0.05),GPER特异性激动剂G1同样也抑制ABCG2蛋白的表达(P0.05),但两者对ABCG2胞膜定位的影响不显著,G1具有增强Dox化疗效能的作用,上述抑制作用均能被特异性抑制剂G15抑制。结论 E2同时激活ER及GPER时起到上调ABCG2的作用,抵抗化疗药物效果,但特异性激活GPER使ABCG2表达量明显减少,提高化疗疗效。     

CISD2在乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭的影响

目的检测CDGSH铁硫结构域2 (CDGSH iron sulfur domain 2, CISD2)在乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭的影响。方法选取46乳腺癌组织及10例对应的癌旁正常组织,免疫组织化学方法与Western blot方法检测乳腺癌和癌旁组织中CISD2蛋白的表达。应用化学合成小干扰RNA技术沉默人乳腺癌MCF-7细胞中CISD2基因的表达,Western blot实验验证基因沉默效率。采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后MCF-7细胞的增殖和侵袭情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中CISD2蛋白表达的平均光密度值明显上调, siRNA能够明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞CISD2的表达。CISD2基因沉默后,人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力和侵袭能力显著降低,P0.01。结论 CISD2可能是治疗乳腺癌的潜在靶点。     

下调血管内皮生长因子-C基因表达对乳腺癌MCF-7细胞侵袭抑制作用的研究

目的 探讨下调乳腺癌MCF-7细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-C基因的表达后对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法 脂质体介导重组质粒pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞株.荧光定量PCR及Western印迹检测转染后对乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C mRNA和蛋白质水平的影响.Transwell体外侵袭实验检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力.RT-PCR检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞中MMP-2、-9 mRNA表达变化.结果 转染后获得稳定表达的细胞株.转染后的乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%(P<0.05).Transwell体外侵袭实验显示,转染后重组质粒组与阴性质粒相比,穿膜数明显减少(29.0±1.9比59.0±2.1,P<0.05).RT-PCR显示,转染后乳腺癌细胞的MMP-2、-9 mRNA表达均明显受抑制,抑制率分别为55%、75%(P<0.05).结论 下调VEGF-C表达对乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力有显著抑制作用.     

钙中性蛋白酶2及Bax在肝纤维化大鼠肝组织中的表达变化及意义

 目的：探讨钙中性蛋白酶2（calpain 2）及Bcl-2相关X蛋白(Bax)在肝纤维化过程中的表达变化及其在肝纤维化过程中的可能作用。方法:  雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照4周、8周组和肝纤维化模型4周、8周组,每组各10只。肝纤维化组按3 mL/kg体重的剂量皮下注射40% CCl4植物油溶液,每隔3 d注射1次,造模时间分别为4周和8周;对照组大鼠皮下注射等量植物油溶液。采用TUNEL法检测肝组织中肝细胞凋亡情况;real-time PCR检测肝组织中calpain 2及bax mRNA的表达变化。免疫组织化学法及Western blotting检测肝组织中calpain 2及Bax蛋白的表达情况。 结果:  Real-time PCR检测发现肝纤维化4周和8周组大鼠肝组织中calpain 2及bax mRNA表达较相应的正常对照组显著增加。免疫组化及Western blotting检测显示肝纤维化4周组大鼠肝组织中calpain 2蛋白的表达与正常4周组比较无显著差异;随着肝纤维化程度的加重,肝纤维化8周时大鼠肝组织中calpain 2的表达显著增加;而肝组织中Bax的表达从肝纤维化4周时就显著增加,肝纤维化8周时达到高峰。此外,通过TUNEL法检测发现肝纤维化4周和8周组大鼠肝组织中肝细胞凋亡的数目较正常组大鼠显著增加。结论:  Calpain 2与Bax可能参与了肝纤维化的发生发展过程。     

MiR-21通过抑制RECK表达促进了胆管癌细胞QBC939的侵袭

 目的 研究miR-21在胆管癌组织及细胞系中的表达特征及其在胆管癌发生过程中的功能。方法 利用Real-Time PCR与Northern Blot方法分别分析miR-21在胆管癌组织及胆管癌细胞系QBC939中的表达水平;选择特异抑制剂Anti-miR-21 敲低QBC939细胞内源性miR-21的表达,研究其对细胞增殖及凋亡表型的影响;利用萤光素酶双报告基因以及流式细胞仪分析方法筛选并鉴定miR-21的靶基因;根据靶基因的功能研究miR-21对胆管癌细胞系QBC939体外侵袭能力的影响。结果 表达分析显示, miR-21在胆管癌组织及胆管癌细胞系QBC939中表达均明显上调;细胞表型分析显示,QBC939转染Anti-miR-21后,细胞增殖被抑制,同时凋亡细胞增加明显;靶基因分析显示,miR-21可以抑制RECK的表达,并可以通过两者之间的相互作用,参与QBC939细胞系的体外侵袭调控。结论 miR-21在胆管癌组织及细胞系中表达上调,促进了胆管癌细胞增殖并抑制细胞凋亡;RECK是miR-21在胆管癌细胞中的靶基因,通过抑制其表达,miR-21增强了胆管癌细胞的侵袭能力。     

雌激素下调人乳腺癌细胞系MCF-7高迁移率蛋白的表达

目的 探讨雌激素与其拮抗剂他莫昔芬对人乳腺癌细胞系MCF-7高迁移率族蛋白(HMGB1)表达的影响。方法 在培养的MCF-7细胞中分别加入无水乙醇、不同浓度的17-beta-雌二醇(E2)和他莫昔芬培养4 d后。用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测HMGB1 mRNA和蛋白水平。结果 17-beta-E2浓度在10-6和10-4 mol/L时,HMGB1 mRNA和蛋白的表达均显著低于对照组(P<0.05)。他莫昔芬浓度在10-6 和10-4 mol/L时,HMGB1 mRNA和蛋白的表达显著高于对照组（P<0.05)。结论 雌激素能够下调HMGB1的表达,而其拮抗剂他莫昔芬则相反。     

cyclin G2在乳腺病变组织中表达及其对MCF-7细胞的作用

目的 研究细胞周期蛋白G2(cyclin G2)在乳腺病变中的表达及意义,探讨cyclin G2对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 用免疫组化SP法检测cyclin G2在人乳腺不同病变中的蛋白表达,并进行显微图像分析;利用阳离子介导的脂质体法转染pDsRed2-cyclin G2融合基因至人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 (1)cyclin G2在乳腺增生症中的阳性表达率及表达强度与正常乳腺组织相当,而在导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)以及浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染了重组质粒pDsRed2-cyclin G2的MCF-7细胞凋亡率明显增高(P<0.01).结论 cyclin G2蛋白表达随着乳腺疾病恶性程度增加而降低,外源性转染cyclin G2至MCF-7细胞中可促进其凋亡,抑制细胞增殖.     

MicroRNA-25 regulates small cell lung cancer cell development and cell cycle through cyclin E2

Purpose: We intended to examine the underlying mechanism of microRNA-25 (miR-25) in regulating small cell lung cancer (SCLC). Methods: The miR-25 expression was measured by quantitative RT-PCR (qRT-PCR) in 5 SCLC cell lines and 9 human SCLC tissues. In SCLC cell line H510A cells, endogenous miR-25 was downregulated by stable transfection of antisense oligonucleotide of miR-25 (miR-25-as). Then the effects of miR-25 downregulation on SCLC growth, invasion and chemoresistance were assessed by MTT, migration and cisplatin assays, respectively. Furthermore, the effects of miR-25 downregulation on cancer cell cycle arrest, production of cell cycle proteins cyclin E2 and CDK2 were examined by cell cycle assay, western blot and luciferase assays, respectively. Finally, cyclin E2 was over-expressed in H510A cells to investigate its effect on miR-25 mediated SCLC regulation. Results: In both SCLC cells and human SCLC tumor tissues, miR-25 was overexpressed. Down-regulation of miR-25 in H510A cells significantly reduced cancer cell growth, invasive capability and resistance to cisplatin. Also, it induced G1 cell cycle arrest and downregulated cell cycle related proteins cyclin E2 and CDK2. Luciferase assay demonstrated cyclin E2 was directly targeted by miR-25. Overexpression of cyclin E2 in H510A cells reversed the cell cycle arrest and restored invasive capability impaired by miR-25 downregulation. Conclusions: Our study shows miR-25 is overexpressed in SCLC and acting as oncogenic regulator by regulating cyclin E2.     

Overexpression of p21, cyclin E and decreased expression of p27 in DMBA (7, 12-dimethylbenzanthracene)-induced rat ovarian carcinogenesis

Ovarian cancer is a common gynecological malignancy and a leading cause of death in women. Inactivation of the tumor suppressor gene and deregulation of cyclin E are frequent in human ovarian cancer. The objective of this study was to investigate the expressions and roles of cyclin E, p21 and p27 in 7, 12-dimethylbenzanthracene (DMBA)-induced ovarian tumors in rats. The expressions of cyclin E, p21 and p27 were evaluated by immunohistochemistry and western blot analysis. The expressions of cyclin E and p21 in ovarian tumors was higher than that in normal ovarian surface epithelium. In contrast, the expression of p27 in ovarian tumors was lower than that in normal ovarian surface epithelium. But there were no differences among the cancer types. Positive correlation was present between cyclin E and p21. p27 was negatively correlated with cyclin E and p21. These results suggest that the increased expression of cyclin E and p21, and the decreased expression of p27, occur in DMBA-induced rat ovarian carcinogenesis and result in tumor progression.     

Expressions of cyclin E, A, and B1 in Hodgkin and Reed–Sternberg cells: Not suppressed by cyclin-dependent kinase inhibitor p21 expression

p21 Is involved in the control of the mammalian cell cycle through the binding and inhibition of cyclin-dependent kinases. The cyclins are dependent on the phases of the cell cycle, and divided into two classes: mitotic cyclins (A, B1, B2) and G1 cyclins (C, D1, D2, D3, E). The product of the p21 gene is a potent downstream effector of the p53 tumor-suppressor gene function. The Hodgkin and Reed- Sternberg (H & RS) cells in Hodgkin's disease are reported to frequently express p53, p21, and nuclear proliferative activity (Ki-67). To clarify the relationship of p21, p53 and cyclins, we performed the immunohistochemistry of p53, p21, Ki-67, cyclin D1, cyclin E, cyclin A and cyclin B1, using 11 cases with Hodgkin's disease. In addition, we performed p53 gene sequencing of exon 5-8, and in situ hybridization of Epstein-Barr virus (EBV) EBER-1 region, whose products have reported to induce the expression of cyclin D. In this study, in all cases, Ki-67 was expressed in almost all H & RS cells, and p53 and p21 were expressed in H & RS cells. No p53 gene mutations were detected in any case, and p53 protein overexpression did not correlate with p53 gene mutations. The number of p21-positive H & RS cells was significantly related with that of the p53-positive cells. The cyclins E, A, B1 and D1 were also expressed in H & RS cells. Unexpectedly, the expression of the cyclins was not suppressed by p21 and p53 expression. In addition, the existence of EBV was not related to the expression of cyclins. It is considered that H & RS cells are, indeed, in cell cycle and commonly express the cell cyclins, and that the cell cycle of H & RS cells may not be specifically fixed in the G1, S, G2 or M phases.     

细胞周期蛋白E2在人鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:研究细胞周期蛋白E2(Cyclin E2)在人鼻咽癌(NPC)组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法和RT-PCR法检测NPC组织及鼻咽非肿瘤组织Cyclin E2蛋白和mRNA的表达。结果:Cyclin E2蛋白在NPC和鼻咽非肿瘤组织中的表达率分别为75%(45/60)和9.5%(2/21),两者相比有统计学意义(P<0.01);鼻咽癌组织中Cyclin E2蛋白的过表达对同年龄、性别的患者无统计学差异(P>0.05),但与淋巴结转移、分期和5年生存率有相关性(P<0.01)。鼻咽癌组与对照组相比,Cyclin E2 mRNA表达亦有统计学差异(P<0.01)。结论:Cyclin E2表达对判断鼻咽癌病变进展、生存率及转移有重要参考价值。     

沉默PKM2对乳腺癌他莫昔芬耐药MCF-7细胞系侵袭及迁移的影响

目的探讨PKM2下调对乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药MCF-7细胞系侵袭、迁移的影响。方法以浓度梯度法诱导获得乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7R);细胞增殖与凋亡试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Western blot检测细胞PKM2的表达;将表达针对PKM2的shRNA慢病毒干扰载体感染耐药细胞系,RT-q PCR、Western blot验证干扰效果,分别用Transwell侵袭实验、划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7R细胞对他莫昔芬的抵抗能力显著增强(P0.01),PKM2的表达水平明显升高(P0.01)。稳定干扰PKM2的耐药细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P0.01),PKM2干扰后可明显抑制MCF-7R细胞的侵袭、迁移能力(P0.01)。结论 MCF-7R细胞中PKM2表达明显高于MCF-7细胞,沉默PKM2可以抑制MCF-7R细胞的侵袭和迁移能力。     

细胞周期蛋白E对乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响

观察细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｅ的表达对乳腺癌细胞ＭＣＦ－７生长及其他周期相关基因的影响。方法构建正义和反义ｃｙｃｌｉｎ Ｅ ｃＤＮＡ真核表达载体,并采用ｌｉｐｏｆｅｃｔ ＡＭＩＮＥ转染,将其导入ＭＣＦ－７细胞,获得稳定表达正义及反义ｃｙｃｌｉｎＥ的细胞系,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测有外源性片片段的插入及表达,并作细胞生长曲线、四甲偶氮唑盐（ＭＴＴ）法和流式细胞计数分析;用     

胃癌中RUNX3、cyclin E和P21蛋白表达与患者生存的关系

目的：探讨胃癌RUNX3蛋白表达对细胞周期蛋白的影响及其与胃癌患者生存和生物学特性的关系。方法:应用免疫组化，分析RUNX3蛋白的表达；应用流式细胞术，分析cyclinE和P21蛋白表达；采用Kaplan-Meier限乘法计算生存率。结果:在56例胃癌中RUNX3蛋白、cyclinE和P21蛋白的阳性表达率分别为44.6%、64.3%和32.1%。胃癌细胞RUNX3蛋白表达与淋巴转移和远处转移有关(P<0.05)。胃癌细胞cyclinE的表达与浸润深度、淋巴转移和远处转移有关(P<0.05)。而胃癌细胞P21的表达与远处转移有关(P<0.05)。胃癌细胞中RUNX3和P21的表达之间呈明显正相关(r=0.57,P<0.05)，而与 cyclinE的表达之间无相关性(r=0.25,P>0.05)。用Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现，RUNX3和cyclinE的阳性表达与生存相关(P<0.05)，P21的阳性表达与生存无关(P>0.05) 。结论：RUNX3蛋白可能通过影响P21蛋白的表达影响胃癌的发生发展；检测RUNX3和cyclinE的表达可作为反映胃癌临床病理学特点和预后的指标。     

雌激素促进星形胶质细胞系U-87增殖和侵袭

目的探究雌激素与星形胶质细胞增殖和侵袭的相关性。方法体外培养星形胶质细胞系U-87,分别进行0、10^-12、10^-10、10^-8和10^-6mol/L雌激素处理,通过qPCR、Western blot、ELISA、CCK8法以及Transwell小室法分析相关基因、蛋白质表达以及细胞增殖和侵袭功能。结果相比对照组,雌激素呈浓度依赖性降低细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达,升高NGF、PGE2表达(P<0. 05),抑制水通道蛋白2(AQP2)的表达(P<0. 05);同时相比对照组,雌激素呈浓度依赖性促进星形胶质细胞的增殖和侵袭(P<0. 05),细胞活性显著提高。结论雌激素下调AQP2的表达,下调细胞因子的表达,升高NGF、PGE2表达,促进星形胶质细胞的增殖和侵袭。