多种特殊染色法在骨关节炎组织形态学研究中的应用比较

目的探讨多种特殊染色法在骨关节组织中的染色规律及其在骨关节炎形态学研究中的应用价值。方法 6月龄健康新西兰大白兔20只,随机分为正常组和造模组各10只,根据改良Hulth法造模,6周后膝关节取材。对标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。分别采用HE、番红-固绿、AB-PAS、甲苯胺蓝、Van Gieson染色和Mallory染色,观察骨关节组织的形态学变化,并对几种染色方法进行比较。结果 HE染色显示关节一般组织形态结构,可见模型组关节软骨和软骨下骨发生骨性关节炎病理变化;番红-固绿染色法中软骨和软骨下骨的界限(黏合线)以及潮线显示清晰,软骨基质中糖胺聚糖含量减少,纤维成分增多;AB-PAS染色显示骨关节炎软骨基质糖胺聚糖尤其是酸性糖胺聚糖含量减少;甲苯胺蓝染色显示骨关节炎软骨的酸性糖胺聚糖减少;Van Gieson染色和Mallory染色可显示骨关节组织中的胶原纤维,但组织结构界限不够清晰。结论在骨性关节炎的组织形态学研究中,通过常规HE染色,结合番红-固绿染色法和AB-PAS染色法,能较客观全面地获得关节组织形态学相关信息。     

人体正常膝关节钙化软骨层组成成分研究

目的 分析构成关节软骨钙化层有机成分中胶原蛋白类型与含量及无机成分中羟基磷灰石含量.方法 组织库获取20例自愿捐献的人体正常股骨髁新鲜标本,组织切片采用天狼猩红染色和免疫组织化学对胶原蛋白进行定性分析;用氨基酸分析和X-射线衍射法分别对胶原蛋白和羟基磷灰石进行定量分析.结果 天狼猩红染色见钙化软骨层与透明软骨层一样黄绿色淡染、弱双折光性;Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学分析,钙化软骨层呈强绿色荧光,潮线附近的胶原蛋白呈板层平行分布;氨基酸定量分析钙化软骨层Ⅱ型胶原蛋白含量占组织干质量的(20.16%±0.96%);X-射线衍射定量分析钙化软骨层中的羟基磷灰石含量占无机成分的(65.09%±2.31%).结论 在关节骨软骨复合组织中,钙化软骨层是位于透明软骨层与软骨下骨之间的界面连接结构,其细胞外基质主要由Ⅱ型胶原蛋白和羟基磷灰石组成.     

单染与复染在观察SIRT1基因敲除小鼠骨关节炎切片中的差异比较

目的通过SIRT1基因敲除建立相关小鼠膝关节骨关节炎模型,在此基础上观察各种不同单独染色或复合染色技术在观察软骨组织切片形态学中的差异。方法将小鼠膝关节组织标本分为2组:SIRT1-/-小鼠假手术组(n=6,A组),SIRT1-/-小鼠骨关节炎模型组(n=6,B组)。通过前交叉韧带横断加内侧半月板切除术建立膝关节骨关节炎模型,行HE染色、番红O-固绿染色、番红O-阿利新蓝染色、番红O染色、固绿染色、阿利新蓝染色,6种单独染色或复合染色方式观察膝关节软骨组织形态学变化。结果番红O-固绿染色、番红O-阿利新蓝染色在观察软骨细胞的细胞形态、软骨分层结构的情况、II型胶原纤维的显示、潮线及软骨下骨的改变中,效果更好;而番红O染色、阿利新蓝染色在观察软骨组织缺失方面有一定的优势。结论在观察SIRT1基因敲除小鼠膝关节骨关节炎软骨组织切片中,与单独染色相比,复合染色在获得软骨结构的各种信息方面优势更加明显。     

膝关节骨性关节炎并内翻畸形股骨髁软骨退行性变观察研究

目的 膝关节骨性关节炎并内翻畸形股骨内侧髁软骨退行性变及超微结构观察。方法 收集2018年11月至2021年10月行人工全膝关节置换术的55例膝关节骨性关节炎并内翻畸形患者的股骨髁,股骨内髁设为观察组,股骨外髁设为对照组。两组分别进行大体观察、HE染色、番红O-固绿染色及电镜下观察。结果大体观察：观察组股骨髁关节面不光滑,色泽灰暗,部分软骨剥脱有软骨下骨外露;HE染色观察：观察组软骨细胞排列不规整,潮线紊乱,软骨下骨板异常增厚,对照组股骨髁软骨退变程度较轻;番红O-固绿染色观察：观察组软骨层着色强度不均匀,番红染色在成簇状软骨细胞周围深染,软骨表面染色不均,软骨基质及细胞数量减少,软骨层与软骨下骨边界不清;扫描电镜下观察：观察组关节面凹凸不平,存在大量凸起、裂隙,对照组表面较为平整,可见软骨表面有散在均匀的软骨颗粒。结论 膝关节骨性关节炎并内翻畸形股骨内髁关节中钙化层和软骨下骨的改变对骨性关节炎发病机制及病情发展起着重要作用。     

脊神经后根切断对大鼠膝关节软骨退变的影响

目的：观察脊神经后根切断大鼠不同时期关节软骨的变化特点及规律,进一步验证部分感觉障碍可以引起关节软骨损伤。方法10周龄SPF级雄性Wistar大鼠33只随机分为实验组（18只）和对照组（15只）。切断实验组大鼠右侧L3、L4脊神经后根。对照组只切开皮肤及椎旁肌。观察大鼠行为学改变。于术后2周、6周和10周三个时间点取右后肢股骨下端,制作组织石蜡切片。常规HE染色、番红O／固绿染色观察关节软骨的组织学改变及特点。结果术后随时间推移,实验组大鼠右侧后肢经历一过性瘫痪、协调运动障碍及主动运动的变化过程。右后肢股骨髌面逐渐变浅变宽。关节软骨依次出现表面粗糙、细胞排列紊乱、细胞减少、潮线复制、漂移和中断等变化。实验组关节软骨ACC／TAC值随时间推移呈逐渐增大（t＝5.25～8.13,P ＜0.05）。结论脊神经后根切断可引起关节软骨损伤及退行性改变。     

mTOR在SD大鼠TMJOA髁突软骨中表达变化的实验研究

  目的  明确mTOR在SD大鼠TMJOA髁突软骨中的表达变化。  方法   采用偏侧咀嚼的方法建立SD大鼠TMJOA模型，并设立相应假手术组。建模后2、4、8周分别取右侧髁突。使用HE染色、番红O-固绿染色进行病理学检查；通过免疫组织化学染色检测SOX9、mTOR的表达量。  结果   苏木精-伊红（HE）染色和番红O-固绿染色显示对照组标本髁突软骨结构层次清晰，表面平滑完整，蛋白多糖分布均匀。随着时间推移，实验组（TMD组）髁突软骨结构出现明显的退行性病变（P < 0.05），且病损在4周时最高。免疫组织化学染色显示，在实验组大鼠髁突软骨组织中SOX9的表达水平在2周（P < 0.01）、4周（P < 0.05）、8周（P < 0.05）依次下降且均低于对照组，mTOR的表达水平在2周（P < 0.05）、4周（P < 0.001）时下降，但在8周（P < 0.05）时相对上升。  结论   随着炎症进展，mTOR在SD大鼠TMJOA髁突软骨中呈现出早期下调，晚期上调的趋势，在将保护性自噬转变为破坏性的凋亡中发挥了关键作用。     

软骨细胞特殊染色技术的比较与应用

目的 探讨多种特殊染色技术在软骨细胞中的染色规律及其应用价值。方法 选取出生7 d内的C57BL/6J小鼠12只, 处死后取双侧膝关节软骨行软骨细胞原代培养, 并行II型胶原免疫荧光鉴定, 取5代以内的原代细胞制作细胞爬片, 细胞爬片制备完成后行HE染色、番红O-固绿双染色、SA-β半染糖苷酶半乳糖苷酶衰老染色及II型胶原免疫组化染色, 观察软骨细胞组织形态变化, 并对几种染色方式进行比较。结果 HE染色中细胞核呈紫蓝色, 细胞质呈粉红色, 细胞形态结构清楚;番红O-固绿双染色中细胞核呈粉红色, 细胞质呈蓝绿色, 细胞形态结果较清晰;SA-β半染糖苷酶半乳糖苷酶衰老染色时, 衰老软骨细胞呈绿色, 未衰老细胞无着色;II型胶原免疫组化染色时, II型胶原呈棕黄色, 细胞核呈紫蓝色。结论 HE染色和番红O-固绿双染色可以清晰分辨细胞核和细胞质等细胞结构, 对单个细胞形态的显示比较清楚;SA-β半染糖苷酶半乳糖苷酶衰老染色可以显示出衰老细胞的数量及衰老的程度;II型胶原免疫组化染色可以对II型胶原进行定位与定量。     

含天然钙化层的骨软骨材料修复猪膝关节软骨缺损

目的 构建含和不含天然钙化层的修复材料,比较两者在猪膝关节软骨缺损修复中的效果,探讨钙化层在骨软骨组织工程中的重要性.方法 选取普通实验猪膝关节骨,软骨通过Ⅱ型胶原水凝胶冻干技术和天然骨软骨脱细胞技术构建含有钙化层和无钙化层的骨软骨支架,以贵州小香猪自体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)为种子细胞,构建移植修复材料.30只小香猪按随机数字表法分为空白对照组、无钙化层组、含钙化层组(n=10).双膝关节滑车骨软骨缺损造模,直径8 mm,深至软骨下骨,植入对应的修复材料.分别于12、24周取材,采用大体、体式显微镜观察,以及MRI检测缺损填充情况,HE染色、番红0-固绿染色,以及Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白免疫组化染色观察新生修复物的组织类别,O'Driscoll组织学评分评价修复效果.结果 各组术后24周修复效果较12周均有改善.大体和体式显微镜观察,24周空白对照组新生组织部分填充缺损,为纤维组织,软骨表面凹陷深大;无钙化层组移植物填充缺损,软骨表面凹陷;含钙化层组缺损填充较好,表面微凹陷,三层结构可见,与宿主组织整合佳.组织学观察提示空白对照组为纤维组织填充修复;无钙化层组为骨和纤维软骨修复,三层结构不明显;含钙化层组钙化层结构清晰,移植物与宿主整合,软骨表面微凹陷,透明软骨修复.O'Driscoll组织学评分,12、24周空白对照组分别为(3.80±0.83)、(5.50 ±0.52)分,无钙化层组分别为(10.30±0.63)、(14.20±0.68)分,含钙化层组分别为(15.10±0.58)、(18.80±0.87)分,各组评分差异均有统计学意义(P＜0.01),含钙化层组评分最高.结论 含有天然钙化层的骨软骨支架,在猪骨软骨缺损修复中取得了很好的修复效果,明显优于无钙化层支架和空白对照,是今后软骨组织工程支架设计的重要参考.     

骨关节炎软骨细胞凋亡率的实验研究

目的检测和分析髋关节骨关节炎中软骨损伤轻重部位的软骨细胞凋亡率。方法关节软骨组织切片分别进行HE染色，番红O-固绿染色，Mankin评分评价软骨损伤程度，TUNEL方法检测软骨细胞凋亡率。结果关节软骨损伤重的部位的Mankin评分值及软骨细胞凋亡率均高于软骨损伤轻的部位。结论软骨细胞凋亡率与骨关节炎软骨损伤程度相一致，说明细胞凋亡可能是骨关节炎软骨损伤的机制之一。     

三种胶原纤维染色法评价宫腔粘连的比较

目的比较Masson染色、van Gieson染色、天狼猩红(Sirius red)染色三种胶原纤维染色方法在大鼠宫腔粘连模型中的评价效果。方法取24只成年雌性SD大鼠,暴露两侧子宫,左侧子宫剪开宫腔后使用机械性刮宫的方法损伤大鼠子宫内膜层,然后关腹,制作大鼠宫腔粘连模型。右侧子宫作为对照。术后14 d取材,行HE染色、Masson染色、van Gieson染色、天狼猩红染色,对子宫组织纤维化进行评估。结果刮宫后子宫组织HE染色显示子宫内膜上皮层消失,子宫内膜腺体数量显著减少(P0.01)。三种染色法均能清楚地染出胶原纤维。三种染色方法计算出的纤维化面积比,Masson染色(甲苯胺蓝)高于Masson染色(亮绿)、van Gieson染色和天狼猩红染色(P0.01)。天狼猩红染色法能够在偏振光显微镜下明确区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维,Masson及van Gieson染色法则不能区分。结论天狼猩红染色较Masson染色和van Gieson染色能够更好地显示宫腔粘连组织的纤维化程度,并能区分胶原纤维的类型。     

聚乳酸涂层的多孔羟基磷灰石负载软骨细胞移植修复兔关节软骨缺损

目的　研究复合材料负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损。方法　把软骨细胞种植到聚乳酸 (PLA)涂层的多孔羟基磷灰石 (HA)表面 ,培养 2周后 ,移植软骨细胞 载体的复合体修复兔膝关节股骨髁的软骨缺损 (直径约 5mm ,深约 2 .5mm ,达钙化层 )。然后对缺损的修复情况在移植后进行大体、光镜评估和电镜观察。另外对兔膝关节正常的软骨和移植后 12周缺损处的修复软骨进行胶原量的测定。结果　移植的软骨细胞能在复合材料上良好地生长 ,形成透明软骨 ,软骨缺损被修复。无细胞移植的对照组仅纤维修复。另外 ,多孔HA在修复过程中充当了软骨下骨的临时替代。胶原量的测定显示移植 12周后的修复软骨胶原量约 44 .6 9% ,自身正常的软骨胶原量约为 5 4.74% ,两者差异有统计学意义。结论　PLA涂层的多孔HA负载软骨细胞移植能以透明软骨的方式成功修复兔膝股骨髁软骨缺损。软骨细胞不成熟导致胶原量的差异有统计学意义。     

关节软骨浅表层的透射电镜观察

目的　观察正常关节软骨浅表层的超微结构。方法　应用透射电子显微镜对正常成年兔膝关节软骨进行超微结构观察。结果　透射电镜下正常成年关节软骨浅表层由三层结构组成 :最上层为一黏液层 ,中层为一层细胶原纤维网 ,下层为含梭形细胞的胶原纤维层。结论　浅表层的三层结构是关节软骨的重要组成部分     

带蒂阔筋膜移植修复股骨头软骨缺损的实验研究

实验选用２０只成年家犬对带蒂阔筋膜移植修复股骨头骨缺损的能力进行研究，人为造成两后腿股骨头外侧１／２全层软骨面缺损，右侧移植带蒂阔筋膜，左侧空白对照。术后不同时期分别进行形态学，组织学及超微结构观察，实验结果表明，移植带蒂阔筋膜在关节腔内可转化成透明软骨，从而为临床阔筋膜移植治疗股骨头软骨缺损提供了客观依据。     

关节软骨受压状态下的组织形态学观察

目的 探讨正常关节软骨在受压时的内部结构变化。方法 取正常关节软骨制成圆柱形标本，并用压头进行轴向加载，置于固定液中固定；纵向切取标本，分别作常规HE染色和甲苯胺蓝染色，观察软骨细胞的形态和软骨基质的染色；用扫描电镜观察胶原纤维的结构。结果 关节软骨在受压后软骨细胞变得扁平，软骨基质染色增加，胶原纤维变得弯曲，不规则，甚至断裂。结论 关节软骨在受压后会出现内部结构的变化；如果应变较大，则会引起软骨细胞的损伤和胶原纤维断裂等结构破坏征象。     

缺血再灌注后股骨头骺关节软骨的形态学观察

目的对发育期髋关节缺血再灌注后股骨头骺关节软骨的形态学变化进行观察。方法80只4周龄sD大鼠随机分为缺血再灌注组及对照组，开腹暴露腹主动脉并关闭3h，制作髋关节缺血-再灌注模型，于术后不同时点取股骨头骺关节软骨进行透射电镜观察。结果缺血再灌注组术后光镜观察到关节软骨的退行性改变，透射电镜观察到膜性细胞器的损害及软骨基质成分的变化，表现为结构模糊、线粒体肿胀、内质网扩张、核蛋白体及糖原颗粒减少，软骨基质胶原纤维增粗、间质颗粒减少、钙盐沉积增多。结论发育期髋关节缺血再灌注后股骨头骺关节软骨的损害表现为一定程度的退行性改变，缺血再灌注后超微结构的损害是关节软骨退行性改变的基础，抑制再灌注损伤可能有利于防止发育期关节软骨的退行性改变。     

关节软骨的生物力学特性研究

采用人和兔膝关节软骨标本进行单向拉伸试验和粘弹性试验。结果;人膝关节软骨拉伸强度为4．75tana;人、兔膝关节软骨的粘弹性响应随时间的增加而降低。结论：软骨的结构完整性直接影响其力学性能,应力集中可造成软骨损伤。     

关节软骨缺损修复细胞的体视学变化

[目的 ]利用图像分析技术 ,进一步了解关节软骨缺损的修复过程 .[方法 ]在 38只家兔双侧膝关节股骨髌面制作 3 0mm× 6 0mm全层关节软骨缺损区 ,随机分成红骨髓移植组、红骨髓 骨膜复合移植组和骨膜移植组 ,观察家兔股骨髌面软骨体视学变化 ,包括计算单个修复细胞面积及修复组织数密度 .[结果 ]透明软骨细胞除单个细胞面积数值较小外 ,修复组织数密度较钙化软骨细胞的数值高 ;各组再生组织中的单个细胞面积随时间推移逐渐增大 ,而修复组织数密度随时间推移逐渐减少 .     

关节内注射透明质酸钠对兔膝关节退变软骨的影响

目的：观察关节内注射透明质酸钠对兔膝关节炎模型中退变软骨的影响。方法：以２４只成年新西兰兔为实验对象,建立Ｈｕｌｔｈ膝关节骨关节炎模型。实验组（１２只）于术后第８周开始,每周关节内注射１％透明质酸钠１ｍｌ,连续注射５次,对照组（１２只）不作任何治疗。注射后６周处死动物,在手术显微镜下观察膝关节表面,取股骨内髁软骨标本进行透射电镜观察;取内侧胫骨髁软骨作氨基己糖测定。结果：实验组动物软骨细胞退变程度     

专用四肢关节磁共振在兔膝关节软骨缺损修复中的应用

【目的】 研究新西兰成年白兔膝关节软骨缺损修复后的低场强专用四肢关节磁共振诊断价值&#65377;【方法】 40只兔左膝关节随机分为两组:A组:通过手术形成软骨缺损,不植入Ⅱ型胶原;B组:缺损内填充Ⅱ型胶原,术后2&#65380;6&#65380;12&#65380;18周分别行专用关节MR扫描,扫描后取材,行组织学检查&#65377;【结果】 A&#65380;B两组手术区均显示有规律的动态MR改变,结合组织学分析,A组是软骨缺损的自我修复过程,B组是填充物的成熟过程&#65377;12周时两组均可见关节软骨信号,B组软骨信号较光滑,与组织学结果相符&#65377;【结论】 专用四肢关节MR检查具有评价关节软骨修复的潜力,可望成为一种无创的软骨修复术疗效评价方法&#65377;