新型Ⅰ型人类免疫缺陷病毒疫苗

目前，新型的HIV-1疫苗主要包括HIV-1 DNA疫苗、HIV-1活病毒载体，以及基于这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略。本文就HIV-1 DNA疫苗引发免疫反应的原理，疫苗设计中所采用的抗病毒靶点以及提升其免疫效果的策略作了介绍。同时介绍了目前应用广泛的几种HIV-1活病毒载体，以及基于HIV-1 DNA疫苗和HIV-1活病毒载体这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略。     

干血斑样本用于人类免疫缺陷病毒1型前病毒基因诊断的研究

目的研究干血斑（DBS）样本用于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染前病毒DNA基因诊断的可行性。方法采集59例静脉吸毒HIV-1感染者和22名HIV-1阴性健康人EDTA抗凝静脉全血5ml，保存全血1ml，另用50μl制备干血斑样本后，分离血浆。QIAamp Blood Mini试剂盒和10％Chelex 100树脂分别提取全血和干血斑中细胞DNA。Roche Cobas Amplicor逆转录聚合酶链反应检测HIV-1感染者血浆病毒载量。HIV-1Env基因Gp41区，gag基因，pol基因分别用2对外侧和内侧引物，按照套式PCR方法，进行扩增。以HIV-1任何两个基因区扩增结果组合判断HIV-1感染。结果在重复2～3次的前提下，59份DBS样本HIV-1感染基因诊断敏感度93％（95％可信区间89％～97％），34份全血样本94％（95％可信区间89％～98％）。疋。检验显示，两种样本用于HIV-1基因诊断时差异无统计学意义。22份两种阴性样本特异性均为100％（95％可信区间95．93％～100％）。8份血浆病毒载量（VL）〉4．0 Log的DBS样本用于基因诊断的可重复性和HIV-1感染样本检出率优于5份VL〈4．0 Log样本。18对全血和DBS样本HIV-1基因诊断一致性分析，符合率94％，一份DBS样本HIV-1特异三个基因片段均未扩增。结论干血斑样本易采集，便于运输，保存条件低，费用低廉，用于HIV-1基因诊断时与全血样本检测结果无显著性差异，病毒载量〈4．0 Log的样本，为增加检出概率需要对样本重复检测。DBS样本HIV-1基因诊断方法适合于无条件立即处理血样本的偏远地区或采样困难的感染者的诊断，及HIV-1母婴垂直传播研究中婴幼儿感染的早期诊断。     

人免疫缺陷病毒-1型疫苗研制的策略

新一代的人免疫缺陷病毒-1型HIV-1候选疫苗的开发除了安全性的考虑,还必须从策略上兼顾:①区域流行的优势株;②拥有较多的抗原决定簇,并考虑人群主要组织性相容抗原(MHC)的多态性;③能诱发体液免疫和细胞免疫,而细胞免疫更为重要;④联合免疫或加强免疫;⑤剔除有负面作用的位点。本文重点简述HIV-1候选疫苗的发展策略和方向。     

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型载体研究进展

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ Ⅰ,ＨＩＶ－Ⅰ）为慢病毒家族成员之一,除ｇａｇ,ｐｏｌ与ｅｎｖ等结构基因外,其结构中还含有编码２个调节蛋白及４个附属蛋白的基因。目前已构建了多种类型的复制缺陷性ＨＩＶ－Ⅰ载体,产生的病毒滴度最高可达１０＾７ＴＵ／ｍｌ;对包装细胞系的研究发现,将４个附属基因全部去除对载体的转导能力并无显影响。基因组分离式包装     

不同人类免疫缺陷病毒2型检测方法的比较研究

目的通过随访调查16例人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）可疑感染者，初步评价HIV一2的几种检测方法。方法从贵州省采集既往经HIV-1／2免疫印迹（WB）试验检测出现HIV-2指示带的16份受检者的全血样品，进行HIV-2抗体和核酸检测。血浆中的抗体用HIV-1／2ELISA初筛一复检，其中阳性样品再分别用HIV-1／2线性免疫试验（LIA）和HIV-2WB检测。外周血单核细胞（PBMC）中的前病毒DNA用HIV-2巢式PCR检测。结果16份血浆样品经HIV-1／2ELISA筛查均为HIV抗体阳性；用HIV-1／2 LIA检测，全部为HIV-1抗体阳性，15份为HIV-2抗体阴性、1份不确定；用HIV-2WB检测，有3份为HIV-2抗体阳性、13份不确定。由于这批样品的采样时间距首次检测至少1年以上，可以排除窗口期感染，上述检测结果不确定的受检者均可判为HIV-2抗体阴性。此外，用巢式PCR检测所有PBMC样品均为HIV一2核酸阴性。结论16例受检者全部为HIV-1而非HIV-2感染，HIV-1／2uA的抗体检测结果与HIV-2核酸检测结果基本相符，而HIV-2WB则产生了大量的不确定甚至假阳性结果。     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型基因序列分析中的质量控制研究

目的研究DNA序列分析中各种影响因素的作用，建立排除污染、进行序列质量控制的方法。方法通过对950份HIV-1样品DNA基因序列结果的分析，查找序列读取及序列分析中存在的各种影响因素，对各种可能导致污染的原因进行分析和解释。结果在使用各种软件进行序列分析时，两样本之间的基因距离为0；两样本所测区段的核苷酸或氨基酸序列完全一致或相差甚微；样本与实验室内所构建的克隆株之间的基因距离过近，同源性达到99％以上；两个独立传播的群体之间个别样本的互混等指标均提示存在污染的可能。结论构建基因进化树和将样本的核苷酸序列翻译成蛋白质的氨基酸序列后构建共享序列，是一种很好的发现序列质量问题、进行序列质量控制的方法。     

流感流行及其基因疫苗的研究进展

流感的季节性流行和大流行给人类造成了很大的损失。注射流感疫苗是预防流感的主要措施之一。目前上市的人用流感疫苗主要是由鸡胚生产的传统灭活疫苗,在疫苗用毒株的获取和生产速度等方面有很大的局限性。基因疫苗研究在近年来取得了重大进展,显示出了传统疫苗所不能比拟的巨大优势,流感基因疫苗主要有DNA疫苗、腺病毒载体疫苗和痘病毒载体疫苗,本文就这三方面作一简要综述。     

青春期人类免疫缺陷病毒患者窗口期经输血传播给两例受血者

美国在对献血者进行病毒核酸检测（NAT）前，估计重复献血者通过输血传播艾滋病毒（HIV）的几率为1／4．5万～1／6．6万。采用NAT后，风险估计为1／213．5万；初次献血者传播HIV的风险为1／120万到1／180万。从1999年3月起，献血者除按标准检测HIV-1／2EIA和P24抗原外，还做NAT检查。NAT进一步缩短了HIV感染后的窗口期。虽然在献血人群中的HIV检测已经有了很大的进步，输血传播HIV的危险已经很小了，但风险终究不是零。对于HIV的传播，公共卫生机构必须进行有效和系统性调查以确定预防失误和紧急的流行趋势，并立即干预。本文报道2例经输血感染HIV，     

应用捕获酶联免疫测定法估算2010-2012年浙江省重点人群人类免疫缺陷病毒1型新发感染率

目的 估计浙江省2010-2012年重点人群人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)新发感染情况及其发展趋势。 方法 收集浙江省2010-2012年665例HIV哨点监测阳性样本和4030例新报告确证阳性病例样本,应用BED HIV-1捕获酶联免疫测定法(BED HIV-1 capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)检测新发感染,利用公式I=[F×(365/W)×R]/[N+F×(365/W)×R/2]×100% 估算人群的HIV-1新发感染率,并对同期新报告确证阳性病例计算新发感染比例。 结果 浙江省2010-2012年HIV监测哨点重点人群的男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)HIV-1新发感染率最高,分别为3.52%(2.22%~4.83%)、6.63%(4.65%~7.94%)和6.33%(4.83%~7.84%),其他人群均较低。浙江省2010-2012年报告阳性病例新发感染比例分别为27.08%、26.09%和30.35%,2011年和2012年MSM报告阳性病例新发感染比例分别为40.17%和42.05%。 结论 浙江省MSM人群HIV-1新发感染率2010 2011年增长较快,2011-2012年稍有下降但仍维持较高水平,其他人群相对较低。报告阳性病例中MSM人群新发感染比例也较高。浙江省MSM人群HIV流行形势仍然非常严峻,应加大对该人群的干预力度。     

转录介导扩增试验筛查供血者人类免疫缺陷病毒-1RNA、丙型肝炎病毒RNA和乙型肝炎病毒DNA的多中心效能评估

背景 最近启动的Proeleix Ultrio（Chiron／Gen-Probe）筛检血液HIV-1、HCV和HBV的欧洲多中心研究。研究设计与方法 连续稀释参比物以测定检测限。交替检测高载量HCV RNA阳性和阴性标本，并作8份混合的2912组样品测定以评估其敏感度和特异性。     

人类免疫缺陷病毒实验室诊断进展

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)简称艾滋病,是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的.HIV呈球形或卵形双层结构,核心由2个相同拷贝的RNA及蛋白质、反转录酶、核糖核酸及整合酶组成.     

人类免疫缺陷病毒1型感染基因诊断方法的建立

目的 建立人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)基因诊断方法。方法 随机选取80份全国送检的已确认的HIV阳性样品，从健康献血员中选取40份HIV阴性样品。分别提取人DNA和病毒RNA，再分别扩增HIV-1的gp41、pol和gag各基因区的3套反应系统，进行巢氏聚合酶链反应(nPCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。将结果与血清学方法比较，观察结果是否一致。同时检测3套反应系统的敏感性、重复性和对HIV-1各亚型参考病毒株的扩增情况。结果 用3套反应系统对80份阳性样本进行nPCR检测的阳性率为：gp41反应系统88．8％；pol反应系统83．8%；gag反应系统81．3％；3套系统联合应用检出率90.0％。用RT-PCR检测阳性率为：gp41反应系统96．3％；pol反应系统91．3％；gag反应系统95．0％；3套反应系统联合应用检出率可达98．8％。阴性样品扩增均阴性，特异性为100％。3套反应系统不但可扩增HIV-1型M组的A、B、C、D、CRF01-AE、F、G、H亚型，还可扩增其N和O组毒株，且与HIV-2无交叉反应。nPCR最低检测限为1拷贝／PCR。gag和pol反应系统RT-PCR最低检测限为750拷贝／ml；gp41反应系统最低检测限为150拷贝／ml。nPCR和RT一：PCR扩增gp41、pol和gag基因区的重复性分别为：93．3％、90．0％、86．70h，和100%、96．7％、100％。结论 建立的HIV-1基因诊断方法敏感性、特异性和重复性较好，且成本低廉，适合我国HIV检测实验室应用。     

人类免疫缺陷病毒1型耐药性检测方法及其应用进展

近年来，艾滋病临床治疗失败中的耐药性问题，已经引起了越来越多的关注。在此背景下，耐药性检测逐步成为优化艾滋病联合化疗方案的有力工具。临床医生们能够依据耐药性检测的结果，为艾滋病感染者选择具有最大疗效和最小副作用的抗病毒药物。由于人类免疫缺陷病毒不仅在免疫学和基因水平上可以将其分为两型，而且在流行病水平上，两者也存在着明显的不同。     

P物质、神经激肽-1受体对人类免疫缺陷病毒的调节作用

<正>生活紧张状态和抑郁是HIV感染各阶段直至发展为AIDS的重要辅助因素[1]。Kopnisky等[2]报道心理改变在HIV-1疾病进程中所起的作用,发现在免疫-神经传导中脑部趋化因子特别是SP的重要性。抑郁、焦虑和紧张状态与HIV发展相关[3],行为状态和脑力活动的改变所引起的免疫应答间接或至少有一部分是     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型gag、env、rev mRNA检测

目的动态检测人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)基因gag、env、rev mRNA水平.方法将插入有HIV-1竞争模板的pSPI质粒DNA转化入感受态菌STBL-2,进行扩增.以T7 RNA聚合酶体外转录出HIV-1 mRNA竞争模板.用3对引物对HIV-1 RNA标本进行定量竞争聚合酶链反应(QC-RT-PCR), 检测HIV-1 gag、env、rev mRNA 水平.结果 HIV-1 ⅢB感染的标本中,HIV-1 gag、env和rev mRNA的水平分别为36 000拷贝/μl,9 800拷贝/μl和9 100拷贝/μl.此方法可动态定量检测HIV-1 gag、env、rev mRNA水平.结论该方法简便易行,费用低廉,适用于实验室HIV致病机理、药物筛选和病毒复制状况的研究.     

应用NucliSens Easy Q定量检测人类免疫缺陷病毒1型RNA

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）而导致的一种致死性疾病。     

人类免疫缺陷病毒感染抗体检测窗口期血清的检出

目的　搜索高危人群中HIV抗体“窗口期”样品。方法　使用HIV抗体检测、HIV 1 p2 4抗原检测和病毒载量检测等多种方法对 1 580份高危人群血清和血浆进行筛查。结果　发现 1份样品抗体检测为阴性 ,p2 4抗原检测为阳性 ,病毒载量HIV 1RNA含量极高 ,拷贝数为每毫升 41万 (RT PCR法 )和 76万 (NASB法 )。结论　该份样品HIV抗体水平极低 ,用国内目前使用的进口和国产HIV抗体检测试剂均不能检出 ,确定其为 1份处于HIV感染抗体窗口期的样品     

某国产人类免疫缺陷病毒1型核酸定量检测试剂的临床试验研究

目的 评价某国产人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核酸定量检测试剂(考核试剂)和对比试剂的相关性及一致性.方法 采用国产HIV-1考核试剂和对比试剂,对197例标本进行平行检测.采用相关性分析、Bland-Altman模型等统计方法分析2种检测试剂之间的相关性和一致性.结果 197例标本中该国产HIV-1考核试剂与对比...     

重组分泌型人类免疫缺陷病毒Tat蛋白在真核细胞中的表达及活性检测

目的 构建人类免疫缺陷病毒病毒 tat基因的重组分泌型真核表达载体并在真核细胞中表达,检测表达的重组蛋白活性。方法 聚合酶链反应（PCR）从重组质粒pcDNA3．1（＋）/Tat中扩增tat基因,利用 HindⅢ和Bam HⅠ酶切位点分别将tat基因正向、反向插入分泌型载体pSecT ag ,获得正向插入克隆（pSecT at ）和反向插入克隆（pSecTat-AS）,经双酶切鉴定连接成功后,利用测序鉴定其序列和插入方向。将构建的重组质粒转染293细胞,利用Western blot法检测Tat蛋白的表达。进而将重组质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞,CAT-酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其细胞内CAT表达,从而检测Tat蛋白的活性。最后将转染重组质粒的293细胞与转染LTR-CAT报告质粒的BCBL-1细胞用Transwell培养系统共培养,CAT-ELISA检测分泌型Tat蛋白的旁分泌调控活性。结果 PCR扩增产物在10 g/L琼脂糖凝胶上约300 bp位置出现条带,与预期的324 bp大小相符;经HindⅢ和BamHⅠ分别酶切鉴定,获得2个正向克隆;正向克隆经测序,克隆的 tat基因序列与Gen-Bank中登记的HIV-1 tat基因100％同源。正向克隆质粒转染293细胞后,Western blot法检测观察到约19×10^3蛋白条带。正向克隆质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞CAT 表达量高于反向克隆质粒转染细胞（P＜0．05）。与反向克隆对照相比,与正向克隆转染的293细胞共培养的BCBL-1细胞CAT表达量更高（P＜0．05）。结论 成功构建 HIV-1 tat基因基因分泌型真核表达载体,该载体不但可在真核细胞内表达具有调控活性的T at蛋白,表达的Tat蛋白还可分泌至细胞外并具有调控活性。     

HIV-1中国流行株gag-hIL-2重组痘苗病毒与pIRES-gag-hIL-2核酸疫苗联合免疫的实验研究

目的　将HIV 1中国流行株B亚型gag和hIL 2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达 ,与核酸疫苗联合免疫 ,评价免疫效果 ,为新型艾滋病疫苗开发研制奠定基础。方法　将HIV 1中国流行株gag hIL 2基因片段插入到痘苗病毒载体pJ38启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果　获得了重组痘苗病毒vJ38gag IL 2 ,具有更好的免疫原性 ,3rVV效果好于 2rVV ,以 2rVV DNA混合免疫效果最好。结论　重组痘苗病毒vJ38gag IL 2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫