内源性葡萄膜炎患者血清抗眼组织抗体测定

本文报告用人眼组织冰冻切片作底物,免疫荧光方法检测了28例内源性葡萄膜炎患者和30例正常人血清抗眼组织抗体,结果表明内源性葡萄膜炎自身抗体的阳性率及抗体效价明显高于正常人(P<0.01),6例急性活动期病人经治疗后自身抗体滴度明显下降。提示自身抗眼组织抗体与内源性葡萄膜炎患者病情活动关系密切,在免疫病理损害上起一定作用。自身抗体检测可作为临床疗效观察的一项指标。     

不同人群血清中抗透明带抗体的检测

为了探讨抗透明带抗体的临床意义 ,本研究用纯化的猪卵透明带ZP3抗原制备抗卵透明带抗体酶联免疫检测试剂盒 ,采用ELISA方法检测不同人群血中抗透明带抗体 ,并用阳性血清与人卵巢组织切片进行免疫组化分析。结果显示不同年龄组妇女抗透明带抗体阳性率差异不显著 (P >0 0 5 ) ,不孕组阳性率 15 % ,与其他组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。ELISA检测到的透明带抗体阳性血清不与人卵巢组织切片中的透明带产生肉眼可见的沉淀反应。除了早孕组和老龄妇女 ,任何年龄阶段的女性均可出现抗透明带自身抗体 ,鉴于这些抗体不引起周期紊乱现象 ,却可能阻止受精 ,这为透明带作为避孕疫苗候选抗原的安全提供理论依据     

抗β1-肾上腺素受体自身抗体对在体大鼠心肌细胞的致凋亡作用

目的：观察抗β1-肾上腺素受体（β1-AR）自身抗体对在体大鼠心肌细胞的致凋亡作用,并探讨其可能的信号转导通路,以阐明该抗体参与心衰发生发展的病理机制。方法：用β1-AR细胞外第二环合成肽段免疫抗β1-AR自身抗体阴性大鼠（9周）,定期检测大鼠的血清抗β1-AR自身抗体滴度、心功能、心肌组织凋亡现象和caspase-3,8,9活性。结果：（1）免疫组大鼠的血清抗β1-AR自身抗体滴度逐渐升高并维持于高水平[1∶（1280±0.07）];对照组始终在1∶10左右;（2）TUNEL和琼脂糖凝胶电泳显示免疫组大鼠在免疫3、4、5周心肌组织发生明显凋亡,caspase-3,8活性增高,免疫7、9周心功能明显下降,对照组未见异常。结论：抗β1-AR自身抗体可能通过激活死亡受体途径促进在体大鼠的心肌细胞发生凋亡,最终引起心功能下降。     

兔抗Nogo-66受体(NgR)LRR片段抗体的制备和鉴定

目的:制备兔抗Nogo66受体(NgR)片段LRR的抗体,并进行特性鉴定。方法:采用原核系统表达大鼠NgR的LRR片段,经纯化后免疫新西兰兔制备抗LRR的抗体,分别用Westernblot、免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性。结果:获得高效价的兔抗大鼠LRR的抗体,该抗体能够识别大鼠脑和脊髓组织中的NgR分子。脊髓切片的免疫组化染色结果显示,NgR分子在神经元中广泛表达。结论:制备出能特异性识别天然NgR分子的抗体,为检测NgR分子并进一步研究其功能奠定了基础。     

抗Wistar大鼠抗二硝基苯抗体的独特型抗体的研究——Ⅱ.应用酶联免疫吸附试验测定抗二硝基苯抗体的独特型

本文以“逆向”ELISA 测定 Wistar 大鼠抗 DNP抗血清中抗体的独特型,即以抗独特型抗体为涂布物来测定抗血清的效价。实验结果表明“逆向”ELISA可以专一地半定量测定大鼠抗 DNP抗血清的独特型,为进一步研究抗独特型抗体对抗体独特型表达的调节作用打下基础。同时,DNP-BSA封闭大鼠抗 DNP抗体的实验初步表明,这抗体的独特型决定簇位于抗体分子的抗原结合部位,至少十分接近抗原结合部位。     

心力衰竭大鼠血清抗β1肾上腺素受体自身抗体的产生与生物学效应的研究

目的:建立心力衰竭大鼠模型，探讨心力衰竭发生发展过程与抗β₁肾上腺素受体（β₁AR）自身抗体产生的关系，并观察该抗体的生物学效应及其信号转导通路。 方法:采用缩窄腹主动脉法制备心力衰竭大鼠模型；应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术，检测心力衰竭大鼠血清中的抗β₁AR自身抗体；利用亲和层析法纯化心力衰竭大鼠抗体阳性血清中的IgG，观察该抗体IgG对乳鼠心肌细胞搏动频率和成年大鼠心肌细胞腺苷酸环化酶活性的影响。 结果:(1) 心力衰竭大鼠血清中抗β₁AR自身抗体的阳性率(82.8%)和抗体滴度［1∶(67.3±2.4)］明显高于假手术组5%, ［1∶(17.3±2.0)］(P＜0.01);(2) 纯化的抗体IgG既可增加乳鼠心肌细胞的搏动频率，还可增强成鼠心肌细胞腺苷酸环化酶的活性，使cAMP产生量增加。 结论:心力衰竭可以诱导大鼠血清中抗β1AR自身抗体的产生，该抗体具有激动剂样正性变时效应，可增强腺苷酸环化酶活性。提示该自身抗体可能通过β1AR-Gs-AC-cAMP-PKA信号通路对心脏产生病理损害。     

用免疫组化ABC法的漂片法做好脑片实验的体会

ABC法是将亲和素作为桥，把生物素化的抗体与生物素结合的酶连接起来。首先，以Ⅰ抗与组织切片共孵育，使特异性Ⅰ抗与组织中的相应抗原结合，之后加上生物素标记的Ⅱ抗，Ⅱ抗与Ⅰ抗通过抗原一抗体反应结合，最后加人ABC复合物，Ⅱ抗上的生物素则与ABC复合物中的亲和素上空下的位点结合。用ABC法中的漂片法做脊髓冰冻切片的染色比较容易做出结果，但如果是用此法做大鼠脑的冰冻切片染色则较难做出结果，特别是做出漂亮的脑片更难。作在用ABC漂片法做脑组织冰冻切片的免疫组织化学实验的过程中，通过改变常规的操作步骤环节，使做出的脑片质量大为提高。以下实验技术介绍的是将免疫组化ABC法的漂片法用于脑组织冰冻切片中的几点体会。     

青光眼致病基因OPTN在大鼠光感受器细胞内的表达

目的观察OPTN在大鼠视网膜光感受器细胞内的表达及定位,探讨OPTN和NRL(neural retina leucine zipper)两蛋白相互的作用。方法制备正常Wistar大鼠的视网膜冷冻切片,用抗OPTN抗体、抗NRL抗体和抗CRX抗体分别进行多重免疫荧光染色。结果在外丛状层(OPL)、外核层(ONL)、光感受器细胞内节(IS)、神经节细胞层、内丛状层(IPL)和内核层(INL)中均观察到抗OPTN抗体不同强度的荧光信号。光感受器细胞内的荧光信号主要在细胞质内,而细胞核内未见染色,且具有视锥细胞特征的细胞未被抗OPTN抗体染色。结论 Optn(OPTN的大鼠同源基因)在除视锥细胞以外的光感受器细胞高表达。     

原发性胆汁性肝硬化患者抗着丝点抗体的检测

本文以大鼠肝组织切片和人喉头癌细胞HE_p-2作为核标本,用间接荧光抗体法(IF)检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中抗核抗体(ANA),发现同其他疾病比较,PBC血清中抗着丝点抗体(ACA)阳性率高。实验以21例PBC患者为对象,对照组为类狼疮肝炎(LH)9例、肝硬化(LC)9例、全身性红斑狼疮(SLE)7例、混合性结缔组织病(MCTD)10例、健康人10例。PBC等肝病患者抗线粒体抗体(AMA)均为阳性。ANA用IF法检测,抗     

防止内源性过氧化物酶给培养神经元的免疫染色带来假阳性

<正> 神经元组织切片的免疫染色过程中,为减少非特异性反应,最常用的方法是用与第二抗体来源的血清去吸附组织切片上的非特异性反应部位,而是否一定要用H_2O_2—甲醇去阻断组织内的过氧化物酶则未引起高度的重视.我们用3种不同的抗体检测培养神经元的内源性过氧化物酶对免疫染色造成的非特异性反应.这3种抗体分别是:来自兔的Nestin(标记神经前体细胞)多克隆抗体,稀释度为1:4000;来源于小鼠的NF(标记神经元)和GFAP(标记星形胶质细胞)的单克隆抗体,NF稀释度为1:3200,GFAP为1:6000.实验在两块96孔板培养的新生大鼠皮质神经组织中进行,一块板放进37℃1h,一块板放进4℃16h.每块板在加抗体前分别设有:①只加血清组;②只加H_2O_2—甲醇组;③H_2O_2—甲醇组+血清组.每组都按常规的免疫反应步骤,在经过上述各组的反应后,再分别加入一抗、二抗、三抗,最后进行DAB显色反应.结果显示:单加血清组,不论是经过哪种抗体的反应过程都呈现明显的非特异性反应,着色的细胞大多是园形或椭圆形(图1),     

人Clq纯化、抗血清制备及其临床测定

<正> Clq 是补体经典途经中第一个组分,用特异性抗 Clq 血清直接测定血清中 Clq 含量,以及用荧光或酶标记后作组织切片上定位研究,有助于 SLE、胃炎等自身免疫性疾病的诊断和病因研究,Clq 本身也可作为免疫制剂,通过放射免疫或酶免疫检测循环中免疫复合物,因此 Clq 的纯化和抗 Clq 血     

铬矾明胶加速DAB反应物褪色的观察

为防止组织切片从载玻片上脱落,目前一般使用铬矾明胶帖片.最近,我们发现免疫组织化学反应后的组织切片,用铬矾明胶帖片,经常规脱水、透明、封片后,其阳性反应产物随着时间的推移而发生褪色,影响到切片的保留和结果的观察.为此,本文用大鼠下丘脑的组织切片,在进行抗摧产素的免疫组织化学反应和硫酸镍铵加强的二氨基联苯胺(DAB)呈色,分别用单纯明胶或含不同浓度的铬矾明胶贴片,观察阳性产物消褪情况.     

自身免疫性脑炎患者外周血Tfh 细胞的检测及其临床意义

目的:研究滤泡辅助性T 细胞(Tfh)在自身免疫性脑炎(AE)患者外周血中的百分比及临床意义。方法: 采用自身免疫性脑炎相关抗体检测阳性的患者脑脊液与大鼠脑组织冰冻切片共孵育并进行免疫荧光染色,观察结果;于收集血清和/ 或脑脊液(CSF)检查自身免疫性脑炎相关抗体阳性的患者17 例(其中,3 例为抗LGI1 抗体阳性患者,3 例为抗GABAR抗体阳性患者,10 例为抗NMDAR 抗体阳性患者,1 例为抗NMDAR 抗体、抗GABAR 抗体及抗AMPA2 抗体合并阳性患者),收集外周血样本共计21 例次:未治疗组6 例次,治疗组15 例次(其中,治疗后缓解组8 例次,治疗后未缓解组7 例次),健康对照者(对照组)外周血15 例。采用流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD3+ CD4+ CXCR5+ PD1+(即Tfh 细胞)的比例,并分析Tfh 细胞比例与患者疾病恢复程度的相关性。结果:淤自身免疫性脑炎相关抗体检测阳性患者脑脊液与大鼠脑组织冰冻切片共孵育免疫荧光染色结果呈现明显阳性反应; 流式细胞术检测结果显示未治疗组患者外周血Tfh 比例明显高于对照组(P<0.001),且治疗未缓解组患者Tfh 比例高于治疗缓解组(P<0.05),而治疗缓解组患者Tfh 比例与对照组比较,差异无统计学意义(P =0.107)。结论:自身免疫性脑炎患者外周血Tfh 比例升高可能与疾病的发生发展相关。     

缺血缺氧时新生大鼠脑微血管基膜细胞外基质与脑细胞线粒体钙 …

本文用６０只新生大鼠随机分为空白对照组，假手术对照组，缺血缺氧组，复氧２４ｈ 复氧４８ｈ组。对每事的４例大脑用抗Ⅳ型胶原抗体和抗层粘连蛋白抗体进行免疫组织化学反应；每组中的８例测定脑细胞线粒体钙浓度。用方差分析Ｓｔｒｄｅｎ－Ｎｅｗｍｅｎ－Ｋｅｕｌｓ法检测所得数值的差异显著性，Ｐ〈０．０５。     

鸡胶原II型诱导大鼠类风关模型的建立

用鸡胶原II型 (chickencollagenII,CCII)和完全弗氏佐剂免疫Wistar大鼠诱导胶原性关节炎 ,建立自身免疫性类风湿性关节炎 (RA)实验动物模型。以ELISA法检测实验组和对照组动物血清中的CCII抗体的水平 ,同时采用组织病理学和X射线摄片的方法显示关节炎大鼠的发病程度和病理学特征 ,并对其血液和滑膜液进行微生物学鉴定。结果显示 ,用CCII和完全弗氏佐剂免疫的实验组大鼠关节炎的发病率为 80 %,同时在免疫后 2 5d ,关节炎指数为最高 (AI=7 8)。ELISA法检测抗CCII抗体结果显示 ,实验组大鼠血清中抗CCII抗体的水平均较各对照组大鼠明显增高 (P <0 0 0 1)。组织病理学和X 射线摄片结果显示 ,关节软骨组织、骨组织和滑膜组织呈典型的关节炎病变。微生物鉴定结果均为阴性。本实验成功建立了胶原诱导的大鼠关节炎模型 ,且其病理特征和人类RA极为相似 ,为进一步深入研究人类RA的发病机制及其临床治疗提供了有价值的实验材料。     

用白百破和牛痘疫苗免疫动物后,脑组织的体液和细胞免疫反应

本文旨在研究接种白百破和牛痘疫苗的豚鼠产生抗脑自身抗体的动态以及淋巴组织对脑提取物和末梢血对自身红细胞的细胞免疫反应。实验时,取体重200—250克豚鼠60只,分成三组:第一组动物用白百破疫苗免疫,隔日一次,共三次,每次皮下注射0.5毫升;第二组豚鼠心脏内注射牛痘苗,接种5个注射剂量;第三组为对照组。在不同试验时期杀死豚鼠(每期杀死4—6只)取其血清,用间接免疫荧光法检查抗脑的自身抗体。     

特异性和交叉反应性的抗肾小球基底膜独特型抗体在氯化汞诱导的大鼠自身免疫性肾小球肾炎的作用

在自身免疫性疾病的研究中,自身抗体的独特型和它们之间的关系日益受到重视。目前抗肾小球基底膜(GBM)抗体的独特型及其所介导的肾脏损伤罕见报道。本文探讨了氯化浆诱导的大鼠自身免疫性肾炎中存在抗-GBM 抗体及它的独特型之间的关系。作者给Brown-Norway(BN)大鼠注射氯化汞,诱发出自身免疫性肾小球肾炎后取出其肾脏、血液。并用其脾脏与IR983F细胞株融合,制备单克隆抗体(McAb),将得到的4株抗-GBM McAb 用胃蛋白酶处     

抗Wistar大鼠抗二硝基苯抗体的独特型抗体的研究——Ⅰ.抗独特型抗血清的制备和鉴定

以DNP-F_γG免疫的Wistar大鼠的脾细胞继承传递给照射过的同系大鼠,得到较多量的个体源性的抗血清。以亲和层折,从中分离得到单相的抗DNP抗体(R A DNP Ab)。用这种抗体免疫豚鼠得到抗血清(GP A Id S),经正常Wistar大鼠的免疫球蛋白(R Ig)吸收后,用ELISA测定其对R A DNP Ab和R Ig的效价,前者明显高于后者,证明了其中含有抗R A DNP Ab独特型的抗体。同时从个体间的交叉反应表明来源于不同免疫次数的个体间的R A DNP Ab具有交叉反应的独特型决定簇。     

抗吗啡疫苗抗体的制备及其特性鉴定

目的制备高效价的抗吗啡疫苗的抗体,并对其特性进行鉴定。方法将人工合成的6-琥珀酰吗啡(M-6-S)与BSA在pH9.0碳酸盐缓冲液中交联成M-6-S-BSA。经凝胶柱过滤和硫酸铵法纯化后,用两种不同方案免疫BALB/c小鼠和SD大鼠,用ELISA法和中和抑制试验分别测定抗体的滴度和进行特异性鉴定;用辐射热甩尾(TF)反射试验检测M-6-S-BSA疫苗的免疫效果。结果用合成的M-6-S-BSA疫苗连续免疫小鼠8次,所获抗血清的效价可达1∶200000,大鼠免疫4次后抗血清的效价超过1∶20000。中和抑制试验表明,抗M-6-S抗体对吗啡和与吗啡有共同母环结构的6-单乙酰吗啡、海洛因及可待因具有较高的特异性。免疫大鼠腹腔注射2mg/kg的吗啡后,其甩尾(TF)反射受到明显抑制,最大效应百分率(%MPE)减少了74.7%,TF潜伏期回到基线水平的时间明显快于对照组。结论成功地制备M-6-S-BSA疫苗,用其免疫小鼠和大鼠均可产生高滴度和特异性抗吗啡抗体。该抗体可明显减低大鼠对吗啡的抗伤害感受,为进一步研究吗啡疫苗抗体对抗吗啡的成瘾作用奠定了基础。     

人抗Aβ42自身抗体的纯化及鉴定

目的纯化并鉴定正常人血清中抗Aβ42自身抗体。方法采集正常人血清标本,测定抗体含量,用饱和硫酸铵沉淀血清得到IgG粗品,用CNBr Sephrose 4B层析柱对粗品IgG进一步纯化,采用PAGE电泳和Westernblot方法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果用CNBr活化Sephrose4B柱可纯化出较高纯度的抗AB42自身抗体,纯度可达到90％。结论CNBr活化Sephrose4B层析柱可有效地从人血清中纯化出较高纯度的抗A％自身抗体,便于对自身抗体进一步研究,为AD的免疫治疗提供更多的信息。