档案标本中的RNA提取及扩增技术

石蜡包埋组织和其他固定组织代表档案标本,这些组织是前瞻和回顾性分子遗传学或感染疾病研究的巨大资源。用RT-PCR方法扩增福乐马林固定、石蜡包埋组织中的RNA,为固定材料中基因表达和RNA病毒回顾性分析等流行病学问题的研究提供了最有价值、简单方便的方法。1 材 料 用10%的中性福尔马林缓冲液（BNF）固定的肺腺癌组织标本,二甲苯、乙醇、缓冲液、dNTP及逆转录酶,Taq酶。2 方 法2.1 固定材料中的RNA提取 档案材料为福尔马林固定、石蜡包埋组织。首先对材料脱蜡,所用的试剂是二甲苯。脱蜡两次后,用乙醇洗去二甲苯。取脱蜡组…     

石蜡包埋组织的p16基因甲基化特异性PCR技术

目的以石蜡包埋组织为材料进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测,研究其可行性.方法40例食管组织以中性福尔马林固定、包埋、脱蜡、DNA样品制备和亚硫酸盐修饰后进行PCR测定.2例MSP阳性的冰冻甲状腺组织以70%酒精、丙酮和中性福尔马林分别固定及石蜡包埋后,非甲基化引物PCR扩增,比较不同固定剂的MSP效果.结果石蜡包埋食管组织MSP检出率与文献报道的冰冻组织MSP检出率相同,三种常用方法固定的甲状腺组织均能获得理想的MSP效果.结论MSP通过选择合适的实验条件,可应用于石蜡包埋组织.     

石蜡包埋组织中DNA甲基化特异性PCR技术

目的 以石蜡包埋组织提取的DNA为模板进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测,研究其可行性.方法 35例石蜡包埋肺癌组织DNA样品制备和亚硫酸氢盐修饰后进行MSP扩增检测.结果 石蜡包埋组织MSP检出率与文献采用新鲜组织标本报道一致.结论 MSP通过选择合适的实验条件,可适用于石蜡包埋组织DNA甲基化分析.     

用RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的肠道病毒RNA

目的:应用逆转录PCR技术(RT-PCR)在石蜡包埋的心肌组织切片中检测肠道病毒(柯萨奇病毒B3,CVB3)RNA.方法:用Trizol法从石蜡包埋的心肌组织切片中提取CVB3RNA,用适当的引物合成cDNA第一链,从中取出适量进行聚合酶链反应(PCR).PCR结果用琼脂糖凝胶电泳检测并将PCR产物做核苷酸序列分析.阳性对照采用CVB3感染的人羊膜细胞.结果:用RT-PCR技术可扩增出一条约500 bp(540 bp)的核苷酸片段,测序结果表明是CVB3的一个片段.结论:RT-PCR技术应用于长期保存的石蜡包埋的组织切片进行肠道病毒的检测可获得较满意结果,可将RT-PCR技术用于回顾性研究.     

快速石蜡切片技术在病理检验中的临床应用

目的 探讨快速石蜡切片技术在病理检验中的临床应用.方法 需要多种步骤和工序,包括固定取材、透明脱水、浸蜡、包埋、切片、封固、染色等.结果 把组织标本所作的石蜡的常规切片与快速的切片一起作比较,对比制作的时间、标本诊断的准确率等.6个组标本的固定时间、透明脱水时间、浸蜡第1次时间、浸蜡第2次时间都是依增加的,从10 s增加到2.5 min.微波方法比石蜡快速方法的时间上相比,任何一个步骤在时间上缩短了5～20 min,这在很大水平上节省了时间.结论 镜下显示结构组织清楚、细胞的形态完整、细胞核、胞质清楚、与普通的切片并无明显的差异.     

从磷酸蔗糖固定OCT包埋冰冻5年的组织中提取RNA

目的磷酸蔗糖固定后OCT包埋冰冻保存5年的组织中提取RNA。方法小鼠的脑、肝、肾等组织,经25%蔗糖磷酸缓冲液固定12~24h后,制备成OCT包埋块,在-20℃冰箱中保存5年后,取出冰冻的OCT包埋组织进行RNA提取,用凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR等方法检测所提取的RNA。结果从经25%蔗糖磷酸缓冲液固定冰冻保存5年OCT包埋组织中能提取RNA,所提RNA仍保持较好的完整性,可用于进行RT-PCR,并能扩增出较长的片段。结论从25%蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋的冰冻时间较长的组织标本中可提取组织RNA,并用于进行RT-PCR扩增。     

肝癌石蜡包埋组织miRNA提取方法的优化

目的改进并优化从肝癌(HCC)甲醛固定石蜡包埋组织(FFPE)提取并检测微小RNA(miRNA)的方法。方法使用miRNeasy FFPE试剂盒探讨提取HCC石蜡组织miRNA最佳切片厚度及蛋白酶K作用时间。实时定量RT-PCR检测miR-221、miR-146a、let7-a、miR-191、miR-103及RNU6B的表达量。将HCC细胞制成石蜡组织,对比同一细胞系新鲜细胞及石蜡包埋细胞的各个miRNA表达量差异。结果切片厚度30μm,蛋白酶K作用时间48h时提取miRNA效果最佳。各HCC细胞系及临床HCC石蜡组织均有不同水平的miRNA-221、miR-146a、let7-a、miR-191、miR-103及RNU6B表达。同一细胞系新鲜细胞与石蜡包埋后的各miRNA表达无明显差别。结论改良后的miRNeasy FFPE提取方法能提取石蜡组织中的miRNA,可重复性强,可推广用于临床各种石蜡包埋组织的miRNA提取。     

石蜡包埋组织的p16基因甲基化特异性PCR技术

目的：以石蜡包埋组织为材料进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测，研究其可行性。方法：40例食管组织以中性福尔马林固定、包埋、脱蜡、DNA样品制备和亚硫酸盐修饰后进行PCR测定。2例MSP阳性的冰冻甲状腺组织以70％酒精、丙酮和中性福尔马林分别固定及石蜡包埋后，非甲基化引物PCR扩增，比较不同固定剂的MSP效果。结果l石蜡包埋食管组织MSP检出率与文献报道的冰冻组织MSP检出率相同，三种常用方法固定的甲状腺组织均能获得理想的MSP效果。结论：MSP通过选择合适的实验条件，可应用于石蜡包埋组织。     

从福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA的研究

从福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA可望解决分子生物学研究中难以得到大量标本的难题。本文对几种不成熟的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法进行了比较,建立了一种简单、有效的方法;并对石蜡包埋组织中的DNA进行了ras基因点突变的分析。     

腺泡状软组织肉瘤的免疫组化研究

腺泡状软组织肉瘤的免疫组化研究腺泡状软组织肉瘤（ＡＳＰＳ）较少见，组织来源至今尚不完全清楚。我们应用１０种单克隆或多克隆抗体对９例ＡＳＰＳ进行了免疫组化试验，以探讨其组织来源。９例ＡＳＰＳ标本为本院病理科保存标本。经常规福尔马林固定，石蜡包埋，４μｍ...     

石蜡包埋组织的电镜快速样品制备

在临床病理检验工作中,超微结构水平上的观察与研究已逐步开展,这对常规病理检验起了很大的推动作用。但由于既往外科手术标本的戊二醛固定并未能成为常规,因此电镜观察所采用的常是福尔马林固定的标本,或者在对重要病例的回顾性研究中有时只能采用石蜡包埋的组织块。一些作者已陆续报道了石蜡包埋组织的电镜制样方法,通过脱蜡标本置于稀释的乙醇和缓冲液中重新水化,锇酸后固定,     

应用聚合酶链反应探讨丙肝病毒在胆石症患者胆囊组织中的表达

目的 探讨感染丙肝病毒在胆石症患者胆囊组织中的表达.方法 应用聚合酶链式反应技术(PCR),对32例慢性丙肝伴胆石症患者的石蜡包埋胆囊标本进行HCV-RNA检测.结果 32例慢性丙肝伴胆石症患者的胆囊标本HCV-RNA阳性检出率为40 63%,20例非胆石症患者的胆囊标本HCV-DNA阳性检出率为15%.结论 提示丙肝病毒可在胆石症患者胆囊组织中表达,用PCR技术检测石蜡包埋的HCV-RNA是一种简便、可靠的方法.     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ ２０,ＮＰ ４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二乙酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

骨髓活检的研究进展

近年来骨髓活检(BMB)制片技术不断改进,骨髓检查不再满足于组织类型的鉴定,而是从细胞水平上升到分子水平、基因水平,进而探讨血液病的细胞、克隆的成熟和发病机制.现将BMB技术改进、免疫组化和分子生物学方面的进展综述如下.一、制片技术的改进BMB标本可作石蜡或塑料包埋切片和冰冻切片,前者不仅可进行回顾性研究,而且可较好地用于疾病的免疫活性分析,但可用于石蜡包埋切片的单克隆抗体(MoAb)是很有限的,所以骨髓病理诊断应结合冰冻切片的免疫组化检查和DNA及RNA分析.BMB标本的免疫活性检查受很多因素的影响,包括MoAb的种类和特异性、染色步骤的敏感性、标本的处理等.其中固定液尤为重要,用某些凝结固定液如B_5,锌—甲醛溶液、Zenker氏液可较好     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ－２０,ＮＰ－４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

MITF基因在软组织透明细胞肉瘤中的表达及意义

目的:通过RT-PCR及免疫组织化学染色检测小眼畸形相关转录因子(MITE)mRNA及MITF蛋白的表达来探讨透明细胞肉瘤(CCS)的组织发生与起源.方法:收集5例CCS冰冻新鲜组织标本,24例福尔马林固定石蜡包埋组织标本.RT-PCR方法检测5例冰冻组织标本MITF基因mRNA的表达;24例CCS石蜡组织标本采用过氧化物酶染色(SP)方法进行免疫组化染色,检测S-100、HMB-45、MITF蛋白的表达.管家基因GAPDH为内参照.结果:4例CCS冰冻组织标本中检测到GAPDH mRNA表达,100%(4/4)检测到MITF mRNA表达.24例CCS石蜡组织标本中S-100、HMB-45及MITF总阳性率分别为79.2%(19/24)、70.8%(17/24)、83.3%(20/24).结论:CCS中MITF在基因和蛋白水平高表达为神经嵴组织起源学说提供了依据.     

树脂(HEMA)包埋制片技术对软组织的应用探讨

树脂（HEMA）包埋制片技术早期只用于电镜观察，目前在国内仅用于骨髓活检、肾穿组织。我们试应用改进的树脂包理方法对临床活检、尸检等处理后的组织标本进行包埋、制片、染色试验，取得良好效果。此项技术在形态学研究及临床诊断中可替代传统的石蜡包埋技术，具有广泛的临床诊断及基础医学研究应用前景。本文就改进的树脂包埋制片技术方法的应用进行探讨。     

改良一步法从甲醛固定-石蜡包埋组织中提取RNA

作者利用自行改良的一步法(异硫氰酸胍方法),从甲醛固定石蜡包埋组织提取ＲＮＡ并获得成功,现报道如下。一、材料与方法1组织材料及细胞:35例胆囊组织石蜡包埋标本在手术中切下后常规10%甲醛固定2～10ｈ,石蜡包埋。标本在常温下已保存1～7年。ＫＢＶ1细胞株是人类Ｈｅｌａ细胞的子代细胞。从ＫＢＶ1细胞抽提的ＲＮＡ用作逆转录聚合酶链式反应(ＲＴＰＣＲ)实验的对照组。2.从石蜡包埋组织中分离ＲＮＡ:实验过程从一步法[1]中改良得来。根据蜡块中组织块的大小取40～100μｍ组织切片。经脱蜡、离心和梯度乙醇清洗后获取组织。组织干燥后加入0.…     

15例间叶组织恶性肿瘤超微结构分析

来源于间叶组织的恶性肿瘤称为肉瘤。在临床病理诊断中 ,有些肉瘤在光学显微镜下很难作出客观的诊断。其原因之一是瘤细胞分化差 ,要想达到完全确诊 ,必须借助于电镜技术 ,对瘤组织本身及其与周围组织的关系进行超微结构的分析 ,以判断瘤细胞的组织学来源。我们对 5年来 15例疑难间叶组织恶性肿瘤进行光、电镜观察并结合临床资料进行了探讨 ,报道如下。1　材料和方法1.1　材料来源　收集附属医院及邻区医院光镜下不能确诊的肉瘤标本 15例。1.2　方法　每例标本均做光镜、电镜常规处理。光镜标本经 10 %福尔马林液固定 ,脱水 ,石蜡包埋 ,切片…     

一种彩色包埋纸在常规病理技术中的应用改进

<正>病理活检小组织是病理科日常工作中的重要标本来源,由于标本体积小且不同标本之间存在数量差异,传统方法是应用白色包埋纸将组织包裹后进行常规脱水处理,由于包埋纸的折叠层次不易辨识及缺少对组织数量的相关标记,石蜡包埋效率和包埋质量都会受到影响,进而影响病理诊断的准确性。笔者设计了一套彩色包埋纸,采用特殊处理方式应用于胃肠镜活检组织的常规病理技术,经反复实验,证明了病理活检小组织标本应用该方法能够提高石蜡包埋效率和包埋质量。