HPV高危型别检测联合细胞学检查对宫颈病变筛查的研究

目的 研究人乳头瘤病毒HPV高危型别检测联合液基薄层细胞学检查（TCT）及阴道镜检查对宫颈癌及癌前病变筛查的诊断价值。方法 对1375例宫颈组织细胞样本进行HPV高危型别检测,对其中阳性样本进行TCT检查,有宫颈上皮内瘤变者（CIN）行阴道镜下活检病理组织学确诊。HPV高危型别检测采用双色荧光定量PCR方法进行8种高危型HPV DNA（主要高危型：HPV16,18,45,31）和次要高危型（HPV33,52,58,67）分型及病毒载量检测。结果 1375例样本高危型HPV DNA检测结果为阳性256例,阳性率为18.62％;TCT结果为WNL的样本高危型HPV的感染率为16.41％ （42/256）;TCT结果为ASCUS以上的样本高危型HPV的感染率为83.59％（ 214/256）。HPV各型别的病毒载量在TCT结果为WNL、ASCUS及LSIL/HSIL/SCC之间差异无统计学意义（P＞0.5）。TCT与阴道镜的阳性符合率分别为WNL-正常或炎症92.86％（ 39/42）,LISL-CIN I 81.36％（48/59）,HSIL-CIN Ⅱ＆Ⅲ 85.19％ （23/27）,SCC-宫颈癌9/10。结论 HPV高危型别检测联合TCT技术及阴道镜检查能显著提高宫颈病变的阳性检出率,可作为宫颈癌及宫颈上皮内瘤变（ CIN）筛查的可靠早期诊断方法,具有重要临床应用价值。     

一种简易的HIV-1病毒载量定量筛查方法的建立

目的 建立一种基于RT-PCR法的简易的HIV-1感染者或艾滋病患者血浆病毒载量筛查方法.方法 在广西南宁市采集18例HIV-1感染者和18例阴性对照者血液标本,提取RNA,以引物LTR-1/LTR-2对待测样本进行PCR扩增,获得Ct值.同时,应用Nuclisens EasyQ HIV-1 v1.2法作为对照对这些样本进行病毒载量检测.对Ct值与病毒载量之间进行相关性分析,获得相应的回归方程.结果 待测样本中HIV-1感染者Ct值在29.103～31.610个循环之间,阴性对照者未能扩增出产物.RT-PCR法Ct值与Nuclisens EasyQ HIV-1 v1.2法检测出的病毒载量对数值之间具有良好的线性关系（r=-0.51,P=0.03）,回归方程为logY（viral road）=57.55-1.56＆#215;（Ct value）.结论 所建立的HIV-1病毒载量RT-PCR检测方法操作简单,价格便宜,与商业化试剂盒具有较好的一致性,可用于HIV-1感染定量筛查.     

芯片电泳快速检测高危型人类乳头状瘤病毒

目的建立人类乳头状瘤病毒（humanpa pillomavims,HPV）52和58基因型高危型的芯片电泳检测方法。方法选取114例宫颈细胞检测患者,提取宫颈脱落细胞DNA。PCR扩增HPV高危型52和58基因型特异性DNA序列,应用优化的芯片电泳分析方法对扩增产物进行分离检测。根据细胞学诊断结果将研究对象分为4组：正常组、不典型鳞状细胞组、低度鳞状上皮内病变组和高度鳞状上皮内病变组,比较各组的HPV52、58基因型感染情况。结果114份标本中,HPV52基因型检出率为8.8%（10/114）,HPV58基因型检出率为33.3%（38/114）。与正常对照组相比较,各病变组HPV52基因型检出率差异有统计学意义（P〈0.05）;而HPV58基因型检出率在病变组和正常对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论芯片电泳法检测快速、成本低,可用于HPV52、58基因型感染的筛查。     

实时荧光定量RT-PCR监测恒河猴体内人/猴免疫缺陷病毒载量在传代过程中的变化

目的为分析中国SHIV/猕猴AIDS模型的病毒载量变化趋势,建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒的定量检测方法。方法体外转录制备RNA标准品,利用TaqManEZRT-PCR试剂盒的反应体系和针对SHIVgag保守区91个碱基的TaqMan探针和引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR。提取126份来自SHIV-CN97001感染恒河猴血浆病毒RNA并定量检测。结果利用梯度稀释的RNA标准品对反应体系进行优化,标准曲线下限达到2×102拷贝/ml,相关性(r>0.99)及重复性(CV=4.14%)均能达到测定要求。病毒载量的检测结果表明SHIV-CN97001在猴体内传代过程中病毒载量有先升后降的趋势,病毒载量通常在接种病毒或感染猴的全血后第14天达到高峰。血浆载量可达到105~106拷贝/ml。结论成功地建立了一步法定量SHIVRNA的实时荧光定量RT-PCR,为SHIV/恒河猴AIDS模型的建立与应用提供了灵敏的病毒载量检测方法。SHIV-CN97001的体内繁殖能力在猴体内传代过程中有所增强。     

宫颈透明细胞癌中人乳头瘤病毒的检测

目的 探讨宫颈透明细胞癌中高危型HPV感染情况.方法 提取1例37岁宫颈透明细胞癌患者手术切除组织蜡块中的DNA,通过巢式PCR方法检测其中HPV感染情况.结果 该患者肿瘤切除组织高危型HPV18型阳性.结论 利用巢式PCR方法分型检测宫颈透明细胞癌中的高危型HPV型别,其准确性及敏感性均较高.     

双色荧光定量PCR快速分型、定量高危型人乳头状瘤病毒

目的针对高危型人乳头状瘤病毒（humanpapillomavims，HPV）亚型的多样性以及感染病毒载量的高低，旨在建立高危型HPV的定量与分型的快速检测方法，为HPV筛查与治疗提供依据。方法利用2种荧光染料分别标记HPV-16、HPV-33／52／58／67和HPV-18／45、HPV-31探针，同时以B球蛋白基因作为内对照，对120份疑为HPV感染的宫颈脱落细胞样本进行I{I＇V分型与定量，定量范围为5×10^1-5×10^7拷贝/ml，以HC-2杂交捕获法作为“金标准”，评价该方法的特异性与灵敏度。结果荧光定量PCR阳性检出率为52．5％（631120），其中HPV-16、HPV-18／45、HPV-31和m．V-33，52，58，67阳性率分别为36．51％（23／63）、11．11％（7／63）、12．70％（8／63）、58．73％（37／63）；HPV感染的平均病毒载量为1．08×10^7拷贝/ml。荧光定量PCR的特异性为100％，灵敏度为81．82％。结论双色荧光定量PCR能快速分型、定量高危型HPV，可用于HPV感染的筛查与宫颈病变程度预测以及疗效观察。     

人乳头状瘤病毒不同型别与宫颈病变的相关性研究

目的探讨人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）不同型别与宫颈病变性质的关系。方法应用ＰＣＲ技术和原位杂交方法对６１例宫颈上皮内瘤（ＣｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＮｅｏｐｌａｓｉａＣＩＮ）和１２例宫颈鳞癌（ＳＣＣ）进行ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ检测。结果ＰＣＲ检测结果显示ＨＰＶ６、１１主要分布于低度鳞状上皮内病变（６１９％）和一部分ＣＩＮⅡ中（２０％），而在ＣＩＮⅢ和ＳＣＣ中检测不到；ＨＰＶ１６、１８的检出率随ＣＩＮ级别增高而增加，在ＳＣＣ中高达８３３％。原位杂交结果显示在低度鳞状上皮内病变中，地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ杂交物质在核中均呈细颗粒状，为“游离型”。上述杂交阳性信号形态亦出现于ＣＩＮⅡ的所有ＨＰＶ６Ｂ／１１及部分ＨＰＶ１６、１８型感染中，而ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌及部分ＣＩＮⅡ中，其杂交阳性信号均为非颗粒状的“整合型”。结论低度鳞状上皮内病变是以ＨＰＶ６、１１低危型为主的多型别病毒的繁殖性感染，ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌为ＨＰＶ１６、１８高危型病毒的整合型感染，而在ＣＩＮⅡ中存在着ＨＰＶ６，１１和ＨＰＶ１６，１８的繁殖性感染及ＨＰＶ１６，１８的整合型感染     

宫颈细胞学筛查及高危型HPV检测与宫颈组织学改变的相关性研究

目的 探讨宫颈细胞学及高危型HPV检测结果与宫颈组织病变的相关性,提高宫颈病变早期诊断的敏感度和特异度.方法 将254例不孕患者宫颈细胞学及高危型HPV检测结果分为四组,A组:宫颈细胞学阳性、高危型HPV阳性:B组:宫颈细胞学阳性、高危型HPV阴性;C组:宫颈细胞学阴性、高危型HPV阳性;D组:宫颈细胞学阴性、高危型HPV阴性,回顾分析此四组检测数据与宫颈组织病理之间的关系;并分别回顾分析宫颈细胞学阳性及高危型HPV阳性与宫颈组织病理之间的关系,比较其敏感度和特异度.结果 A组宫颈CINⅡ级及以上的发现率显著高于B组(P＜0.01),A组、B组和C组的CIN Ⅰ级发现率无差异(P＞0.05);单一宫颈细胞学检测CINⅡ级及以上阳性的敏感度100.0％、特异度46.74％,串行高危型HPV检测后其敏感度97.22％、特异度87.16％.结论 不孕症患者乃至日常体检宫颈筛查仍首选宫颈细胞学检查,宫颈细胞学串行高危型HPV检查明显降低了宫颈病变的误诊率.     

浙江沿海地区宫颈病变患者中高危型HPV检测及其临床价值

目的 分析宫颈病变患者中高危型HPV的感染情况及特点,探讨HR-HPV DNA检测用于高级别宫颈上皮内瘤变中的价值.方法 回顾性分析采用液基薄层细胞学(TCT)检查、HR-HPV检测和阴道镜检查并行活检的官颈病变患者1130例临床资料.经病理组织学检查证实宫颈炎症448例,官颈上皮内瘤变Ⅰ级和(或)湿疣(CIN Ⅰ/HPV Ⅰ)212例,高级别官颈上皮内瘤变或官颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ级(C1NⅡ/Ⅲ)442例,宫颈浸润癌(均为鳞癌)28例.结果 1130例官颈病变患者中HR-HPV阳性率为65.84％(744/1130).细胞学异常者为862例,其中ASCUS356例、ASCH 84例、LSIL 216例、HSIL 184例、癌22例.病理学≥CINI/HPVI者682例,HR-HPV阳性率为78.59％(536/682).筛查≥CINⅡ病变TCT的灵敏度为88.94％,特异度为32.73％,阳性预测值为48.49％,阴性预测值为80.60％;HC-Ⅱ的灵敏度为90.21％,特异度为51.82％,阳性预测值为57.14％,阴性预测值为88.14％;两者联合的灵敏度为97.45％,特异度为22.42％,阳性预测值为47.22％,阴性预测值为92.50％.结论 HR-HPV在各年龄组宫颈病变患者中均有较高的感染率,随着宫颈病变程度的加深,HR-HPV的感染率逐步升高.HC-Ⅱ检测HR-HPV DNA是筛查宫颈上皮内瘤变可选用的方法.HR-HPV DNA检测是一种有效的ASCUS和LSIL的管理手段,有较高的灵敏度和阴性预测值.     

GeXP多重PCR技术用于人乳头瘤病毒HPV检测和分型的研究

目的建立一种基于GenomeLab^TM GeXP（GenomeLab eXpress Profiling）遗传分析系统的人乳头瘤病毒（HPV）分型新技术。方法针对5种中国人常见的HPV亚型（HPV6,11,31,33和52）的基因序列进行比对分析,设计型特异性引物,建立并优化GeXP多重PCR反应体系,评价其特异性和灵敏性,并应用于30份临床标本检测。结果本研究建立的GeXP多重PCR技术能够成功检测和鉴别5种不同亚型的HPV病毒,灵敏度高,特异性好。结论成功建立了一种新的快速同时检测和鉴别5种HPV亚型病毒的多重PCR方法,适用于临床HPV感染的实验室诊断与流行病学研究。     

不同型别人乳头瘤病毒感染不孕患者治疗方法的研究

目的 探讨不孕症患者感染不同型别高危型人乳头瘤病毒（HPV）的最佳治疗方法.方法 按宫颈病理学、宫颈状况和不孕患者生育欲望,将144例感染高危型人乳头瘤病毒的门诊不孕患者分为治疗组和不治疗组,以6个月为一复查周期,采用双色实时荧光定量PCR法,检测患者宫颈脱落细胞内的HPV-DNA,观察其阴转情况及受孕情况,并进行比较分析.结果 ①感染不同型别高危型HPV,治疗组的HPV阴转率（56.67%）较高;②次要高危型不治疗组的妊娠率（50.00%）较高,主要高危型治疗组的妊娠率（31.67%）较高,显著高于不治疗组（4.00%）;③主要高危型手术治疗后HPV阴转率和妊娠率（40.00%）均高于药物治疗（6.67%）,手术治疗二种方法中以Leep＋药物最佳.妊娠率为41.18%,高于药物治疗组的6.67%.结论 不孕患者应常规进行宫颈HPV筛查,主要高危型HPV感染是不孕的宫颈性病因,主要高危型HPV感染伴宫颈病变者以LEEP＋药物治疗为最佳.     

NucliSens HIV-1 QT和Amplicor HIV-1 monitor1.5方法测定HIV-1病毒载量的比较研究

目的进行NuchSens HIV-1 QT和Amplicor HIV-1 monitor 1．5检测相同临床样品HIV-1病毒载量值之间的比较研究。方法收集临床样本82份，使用两种方法测定病毒载量，对病毒载量值进行统计分析。结果未测到核酸的和两种方法病毒载量对数值之差小于0．5的占88．9％；用△log10 VL〈0．5的56份样本统计两种方法的相关性，相关系数为0．956。结论NucliSens HIV-1 QT和Amphcor HIV-1 monitor 1．5两种方法测定的HIV病毒载量值有很好的相关性。     

2007年秋冬季北京地区成人发热就诊患者中人冠状病毒229E感染状况分析

目的 了解北京地区成人发热就诊患者中人冠状病毒HCoV-229E感染病原学、临床表现和流行病学特点.方法 2007年10月至12月从北京地区发热且有呼吸道症状的就诊成人中采集158份鼻咽拭子标本,利用荧光定量RT-PCR法进行HCoV-229E筛查;利用常规PCR方法扩增HCoV-229E基因片段测序;对感染阳性患者进行HCoV-NL63、HCoV-HKU1及HMPV的共感染筛查、临床表现描述和流行病学特点分析.结果 158份鼻咽拭子标本中荧光定量RT-PCR检测出103(65.2%)例HCoV-229E阳性;其中26例存在与HCoV-NL63(3例)、HCoV-HKU1(3例)及HMPV(20例)的混合感染;HCoV-229E阳性标本的临床表现以头痛(70.9%)、咽红(70.9%)、咽痛(69%)、寒颤(68%)、咳嗽(33%)、有痰(21.3%)、流涕(21.4%)和鼻塞(16.5%)为主,少量可见呕吐(6.8%)、呼吸困难(3.9%)和腹泻(1.9%);统计学分析表明其感染与性别、年龄无关.结论 人冠状病毒HCoV-229E感染在秋冬季成人发热就诊患者中为常见病原,可合并感染其他病毒.其临床表现呈上呼吸道感染特征.2007年秋冬季在北京地区成人中可能存在HCoV-229E局部流行.     

持续性人乳头瘤病毒感染与宫颈癌的研究进展

宫颈癌是一种常见的妇科肿瘤, 严重威胁广大女性的生命和健康.虽然引起宫颈癌的原因很多,但目前认为,人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌的根本致病因素.HPV通常在感染后能自行消失,只有持续的高危型人乳头瘤病毒感染才是导致宫颈癌的根本原因.本文就HPV持续性感染与子宫颈癌研究进展进行了概述,并对其研究前景作一展望.     

病毒感染与男性不育相关性研究进展

目前研究将病毒感染视为可能影响男性生育力的破坏性因素。男性生殖系统的炎症与不育相关。本文概述了影响男性生殖系统的主要病毒及其对生育力的有害影响。仍需进行大量研究以阐明不同类型的病毒在男性生殖系统中作用的机制,从而开发出更适宜的治疗方案。     

北京地区儿童急性呼吸道感染与肠道病毒关系探讨

目的探讨肠道病毒（enterovirus，EV）在北京地区儿童急性呼吸道感染（acute respiratory infection，ARI）中的关系及月份、年龄和性别分布特点。方法选择402例ARI患儿，取其鼻咽深部分泌物，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测EV。对检测出EV阳性的患儿进行月份分布、年龄分布和性别分布的统计分析。结果402例标本中检出EV阳性共70例，阳性率为17．4％。下呼吸道感染EV阳性率为17，7％，上呼吸道感染EV阳性率为15．9％。EV在不同月份阳性率为0～36．1％，以2004年5月份阳性率最高（36．1％），2005年12月份阳性率较低（4，3％）。除12岁以上组患儿未检测到EV阳性外，在各年龄组患儿中的EV阳性率为14．8％～21．9％，4～6岁组阳性率最低，7个月至1岁组阳性率最高。EV感染的男性患儿占男性病例的16．2％，女性患儿占女性病例的19，7％。结论住院ARI患儿中，EV在下呼吸道感染中占有重要位置；春末至秋季EV阳性率较高，冬季较低；12岁以下的ARI患儿中各年龄段EV感染普遍存在；性别上无统计学意义。     

Evaluation of the Abbott m2000rt RealTime™ HIV-1 assay with manual sample preparation compared with the ROCHE COBAS AmpliPrep™/AMPLICOR™ HIV-1 MONITOR v1.5 using specimens from East Africa

The performance of the Abbott m2000rt RealTime™ HIV-1 assay (RealTime HIV-1) with manual sample preparation was compared against the ROCHE COBAS^® AmpliPrep™/AMPLICOR™ HIV-1 MONITOR^® Test v1.5 (CAP/CA HIV-1) using samples collected from 100 donors infected with HIV and 20 donors not infected with HIV in northern Tanzania where HIV-1 subtypes A, C, D, and their recombinant forms predominate. The RealTime HIV-1 appeared to have more within-run variability at high HIV-1 RNA concentrations, but total assay variability over the dynamic range tested was within the manufacturer's claim of <0.3 SD copies/mL. Accuracy studies showed 100% concordance for positive and negative values. When continuous values were examined, CAP/CA HIV-1 yielded higher values than the RealTime HIV-1 at higher nominal HIV-1 RNA concentrations. The RealTime HIV-1 assay showed excellent linearity between 2.5 and 7.0 log copies/mL. Of negative samples, 100% showed negative results, and >95% of samples with nominal concentrations of 40 copies/mL were detected at ≥40 copies/mL by RealTime HIV-1. Manual sample preparation may contribute to higher total assay variability. This study suggests that the Abbott m2000rt RealTime HIV-1 assay with manual sample preparation is an acceptable and feasible alternative to the conventional ROCHE COBAS AmpliPrep/AMLICOR HIV-1 Monitor v1.5 assay and that the RealTime HIV-1 assay performs well on samples from East Africa.