胃黏膜屏障的损伤机制

胃黏膜屏障损伤是诸多急慢性胃病的共同病理改变，是胃病诊治工作的核心。1．胃黏膜屏障的防护因子：胃黏膜保护屏障共分为5层：第1层包括黏液、碳酸氢盐、表面活性磷脂及免疫球蛋白，该层物质由胃黏膜分泌，又称为黏液屏障；第2层主要是指胃上皮细胞顶膜及细胞间紧密连接，它能防止氢离子反渗，是形成胃组织与胃腔间pH陡峭梯度的关键，又称胃黏膜屏障；第3层是指胃黏膜血流，血流充足才能运输氧和营养成分，并维持胃黏膜的功能和结构更新，促进黏液生成和分泌，以将壁细胞产生的碳酸氢根离子运输至上皮细胞分泌入黏液层；第4层是黏膜免疫系统包括肥大细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞等，感受异体或有害成分，形成炎症性反应；第5层涉及黏膜损伤后的修复，如胃腺生成、神经再生和微循环重建等，它包括许多细胞和调控因子，如上皮细胞、成纤维细胞、血内皮细胞、免疫细胞等。以上5个层次是互相联系、互相影响的，并接受神经一体液因素调节。     

大鼠前列腺上皮细胞体外培养及其屏障功能的初步研究

目的:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,并观察其屏障功能。方法:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,采用免疫组化观察腺上皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,光镜以及电镜观察大鼠前列腺上皮细胞的结构组成。采用跨膜电阻测量仪检测前列腺上皮细胞的跨膜电阻,采用酚红渗漏实验检测前列腺上皮细胞的通透性。结果:大鼠前列腺上皮细胞在体外培养可以形成紧密的单层细胞结构,紧密连接蛋白在相邻的腺上皮细胞之间表达,透射电镜结果显示相邻的单层腺上皮细胞之间存在紧密连接。体外培养的大鼠前列腺上皮细胞跨膜电阻在培养第8天可以达到(201.3±3.5)Ω/cm2,酚红渗漏实验显示随着细胞单层跨膜电阻的增加,基底侧的酚红浓度减低。结论:大鼠前列腺上皮细胞具有与脑毛细血管内皮细胞、肠上皮细胞等具有屏障功能的细胞相似的结构和功能,体外培养的大鼠前列腺上皮细胞具有屏障特性,可以作为血前列腺屏障研究的体外模型。     

食管胃黏膜延长分层吻合的实验研究

目的　探讨食管胃吻合抗胃食管反流、预防吻合口瘘及狭窄的术式。　方法　选杂种犬 5 8条 ,随机分为实验组和对照组。实验组 :31条犬 ,自贲门横断 ,食管黏膜延长 1.5～ 2 cm;切除部分胃小弯 ,剥除大弯侧保留部分浆肌层 ,成形为宽 3～ 3.5 cm、长 4～ 5 cm黏膜管 ,行食管胃黏膜、肌层分层吻合。对照组 :2 7条犬 ,用“深套叠”术式。于术后 3～ 180天检测对比分析。　结果　两组突入胃内结构长度、肌层吻合口直径差别无显著性意义 (P>0 .0 5 ) ,黏膜游离缘直径差别有显著性意义 (P<0 .0 1) ;实验组能耐受较高胃内压 ,胃与食管压力差两组差别有显著性意义 (P<0 .0 1) ;突向胃腔内结构厚度两组相差 1倍以上 ;实验组成形黏膜血供良好 ,吻合口愈合及缝线脱落早于对照组。　结论　适当剥除肌层不引起黏膜缺血坏死 ;成形黏膜瓣薄软 ,具有良好的抗反流效果 ;黏膜层密缝对合严密、愈合快 ,能有效预防吻合口瘘的发生 ,不同平面吻合狭窄发生率低。     

阴道粘膜上皮细胞的分离培养和鉴定

目的 初步建立阴道粘膜上皮细胞体外培养方法,为阴道粘膜上皮研究提供实验模型.方法 取雌性新西兰大白兔阴道粘膜组织小块,胶原酶Ⅳ和胰蛋白酶联合消化分离法收集上皮细胞,接种于角朊细胞无血清培养液中静置培养、传代.动态观察细胞生长增殖情况,扫描和透射电镜观察超微结构,流式细胞仪测定细胞增殖周期,并进行免疫组织化学鉴定.结果 体外培养的阴道粘膜上皮细胞为二倍体细胞,增殖状态良好,细胞间可见桥粒连接,免疫组化角蛋白染色阳性.细胞的超微结构和免疫组化染色均具有上皮细胞特征.结论 在本实验条件下,体外培养的阴道粘膜上皮细胞具有较好的增殖能力,可作为阴道粘膜上皮研究的理想实验模型.     

人肾小管上皮细胞蛋白质组的双向电泳及计算机图像分析

目的 双向电泳(two—dimensional gel electrophoresis，2DGE)技术是蛋白质组研究中最为重要的蛋白质分离方法。建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术。方法 由于不同的细胞系特殊性，样品处理亦不同，因此以人肾小管上皮细胞：HK-2为研究对象，对样品液组成、样品处理、上样方式、上样量、IPG胶条和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法等相关技术进行了研究和条件优化后，以固相pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶(T=12．5％)的水平电泳为第二向，研究人肾小管上皮细胞蛋白质组。结果成功地得到了人肾小管上皮细胞双向电泳图谱，并通过ImageMaster 2D Elite 3．01软件进行图像分析，输出初步的检测结果。结论 建立蛋白质组研究的技术平台，为从更高的水平来寻找肾脏疾病的功能蛋白和特异性蛋白，阐明肾脏疾病发生发展的网络机制等后续研究工作奠定基础。     

胃黏膜单细胞悬液的制备及其周期蛋白的表达

目的寻找一种方法能够有效去除胃黏液，把胃黏膜制备成单细胞悬液以进行胃黏膜流式细胞术等单细胞的蛋白分析研究，为即将在胃组织开展细胞组学做好准备。方法应用酶反应去除胃黏液和分离黏膜层后．再使用机械法制备成单细胞悬液，并应用细胞免疫组织化学流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术初步检测胃黏膜细胞主要周期蛋白cyclin D、E、A、B1的表达。结果0．1％的胃蛋白酶和1．2-2．4U／L的中性蛋白酶分别能够较好地去除胃黏液，获得黏膜层，从而制备成胃黏膜单细胞悬液，从流式中首次系统地显示出其细胞主要周期蛋白的时相性表达规律：cyclin D3、B1明显表达，cyclin D2较弱，cyclin D1、A、E表达不明显，并得到激光扫描共聚焦显微镜的验证。结论利用胃蛋白酶，中性蛋白酶作用后能够去除胃黏液．较容易获得胃黏膜单细胞悬液；并提示体内的细胞周期蛋白的表达规律与体外培养的细胞系的表达规律不同。     

胃黏膜活检诊断高级别上皮内瘤变与手术病理对比分析

目的探讨胃黏膜活组织检查病理诊断高级别上皮内瘤变（IN）患者胃镜所见及与术后病理的关系。方法回顾分析51例经胃镜钳取活组织病理诊断为胃黏膜高级别IN患者的胃镜下表现．并对照分析其中33例接受外科手术切除标本的病理学检查结果。结果胃镜下有29例（56．9％）的病灶分布在胃窦部,11例（21．6％）在胃体,1例（2．0％）广泛累及胃窦胃体,其余10例分别在胃角和胃底：43例（84．3％）的浅表病灶形似早期胃癌样表现,另有8例（15．7％）的病灶形似进展期胃癌样。接受手术治疗的33例患者中,13例（39．4％）术后病理证实维持高级别IN的诊断,胃镜下病灶形态均为浅表病变,大小均不足20mm;其余20例（60．6％）术后则诊断为胃癌,其中早期胃癌14例．进展期胃癌6例。结论胃镜下胃黏膜活检诊断高级别IN的患者存在胃癌的概率高,应积极随访甚至手术干预。     

肾小球系膜细胞和上皮细胞的相互作用

了解肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）和上皮细胞（ＧＥＣ）的相互作用。方法运用肾小球细胞体外培养方法和双同位素标记技术，观察阿霉素肾病大鼠ＧＭＣ条件培养液（ＧＭＣ－ＣＭ）对正常大鼠ＧＥＣ掺入３５Ｓ、３Ｈ－亮氨酸和３Ｈ－ＴｄＲ的影响，以及肾病大鼠ＧＥＣ－ＣＭ对正常大鼠ＧＭＣ掺入３Ｈ－ＴｄＲ的作用。结果肾病极期的ＧＭＣ－ＣＭ明显促进了ＧＥＣ增殖及合成含硫化合物、蛋白质的功能，反之肾病极期ＧＥＣ－ＣＭ则明显刺激了ＧＭＣ增殖。结论ＧＭＣ和ＧＥＣ可通过其可溶性产物相互作用。     

胃黏膜内癌的EMR与ESD治疗

一些早期胃癌可采用缩小手术，甚至内镜下手术如内镜黏膜切除术（endoscopic mucosalre—section．EMR）及内镜黏膜下层剥离术（endoscopic submucosal dissection．ESD）就可达到根治目的。胃癌内镜治疗的根治切除前提条件包括：1）无淋巴结转移；2）保证水平方向（黏膜内浸润范围）和垂直方向（浸润深度）有足够的安全切缘；3）术后切除标本可进行详细的病理组织学检查。其内镜治疗具体适应证为：所有无淋巴结转移的无溃疡糜烂的分化型黏膜内癌，直径3cm以下的有溃疡糜烂的分化型及2cm以下的无溃疡糜烂的未分化型黏膜内癌；直径3cm以下无溃疡糜烂的分化型黏膜下层癌，直径2cm以下无溃疡糜烂的未分化型黏膜下层癌。ESD和EMR可能成为治疗早期胃癌的标准方法；且ESD的1次切除率高，局部复发率低。     

人肛瘘管壁上皮细胞的体外分离培养和鉴定

目的:寻找建立人肛瘘管壁上皮细胞体外分离、培养及鉴定细胞起源的技术方法.方法:通过组织块法分离并原代培养人肛瘘管壁组织上皮细胞,观察上皮细胞形态并对培养细胞进行细胞化学鉴定.结果:分离后的上皮细胞在24～36 h贴壁,在7～9 d进入对数期生长期.细胞鉴定角蛋白免疫细胞化学染色为阳性,波形蛋白免疫细胞化学染色为阴性.结论:该方法获得的肛瘘管壁上皮细胞能够在体外稳定培养,可以为细胞分子水平上研究肛瘘瘘管愈合机制提供可靠的细胞模型.     

比较蛋白质组学技术鉴定和筛选胃腺癌组织分化相关蛋白质

目的 应用比较蛋白质组学技术对不同分化程度胃癌组织的差异蛋白质进行筛选鉴定.方法 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)结合液质联用(LC-MS)技术对8例不同分化胃腺癌组织的差异蛋白质进行鉴定,并应用实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)和Western blot法对鉴定出的部分因子进行验证.结果 差异表达明显的蛋白质电泳条带15条,共鉴定出355种蛋白质,筛选后经功能分析确定8种可能与肿瘤分化有关的蛋白质,为人肌动蛋白素(Cofilin)、蛋白酶体激活亚单位1(PSME1)、Ras相关蛋白7a(RAB7a)、细丝蛋白A(FLNa)、丙酮酸激酶(PK)、谷胱甘肽巯基转移酶-π-1( GST-π-1)、过氧化物酶5(PRDX5)、actin相关蛋白.对Cofliin、Ras相关蛋白7a、PSME1进行验证,证实这些因子的表达与蛋白质组学鉴定的结果相符.结论 分化程度不同的胃腺癌组织蛋白质表达存在差异.     

胃癌侧群细胞分选及生物学特性的体外鉴定

目的 检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞(SP),并通过体外实验鉴定其生物学特性.方法 选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst33342/碘化丙锭(PI)荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测sP细胞比例;通过细胞生长曲线(CCK-8法)、平板克隆形成试验对SP细胞体外增殖及不对称分裂能力等生物学特性进行鉴定.结果 3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间.细胞生长曲线显示,人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞(P＜0.05).MKN-28来源的SP细胞平板克隆形成能力(89.33±6.11)%明显强于non-SP细胞(13.33±1.16)%及未经分选的MKN-28细胞(42.67±6.43)%,P＜0.05.MKN-28分选获得的SP细胞亚群经体外培养2周后可分裂产生SP细胞和non-SP细胞,SP细胞比例由起始的100.0%下降至1.4%.结论 胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞.胃癌SP细胞体外增殖和克隆形成能力均明显强于非侧群细胞,且具有不对称分裂能力,可作为胃癌干细胞研究的切入点.     

Binding of seminal vesicle proteins to the plasma membrane of rat spermatozoa in vivo and in vitro

The association of seminal vesicle (SV) proteins with rat spermatozoa has been studied in vivo and in vitro. SV proteins bind to the sperm plasma membrane after ejaculation but are removed progressively from the sperm plasma membrane in the female genital tract. Although some of these remain bound to spermatozoa when they reach the oviducts, they do not seem to be present at the time of fertilization. This could indicate a putative role for these SV proteins in pre-fertilization events. In addition, the binding of SV antigens was studied in vitro. It was observed that the ability to bind SV proteins is gained by the spermatozoa during epididymal maturation, and is first detectable in spermatozoa collected from the cauda epididymis. On the other hand, the binding is regulated by other proteins present in the ejaculate which are secreted by the coagulating glands. Experiments also showed that mouse spermatozoa are able to bind rat SV proteins, indicating that the binding is not a highly species-specific phenomenon.     

肺泡上皮细胞在急性呼吸窘迫综合征的作用

背景 肺泡上皮是急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的发病机制和康复机制所涉及的一种重要结构.肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AEC)在ARDS中对维护肺血屏障的完整性和受损屏障的修复有着关键的作用. 目的 了解AEC在ARDS中的作用,启发临床治疗ARDS的新思路. 内容 从AEC的基本作用、在ARDS的免疫调节、损伤与修复、凋亡及其机制方面进行文献综述. 趋向 目前临床上仍然没有有效的措施治疗ARDS,今后仍需要在寻找新的治疗方向上做出进一步的探索.     

富血小板血浆对大鼠许旺细胞生物学行为的影响

目的 观察不同浓度的富血小板血浆(PRP)对体外培养的许旺细胞(SCs)增殖、分泌功能及迁移的影响,探讨其促进周围神经再生的可能作用机制. 方法 从SD大鼠心脏穿刺取血,利用二次离心法制备PRP,对全血和PRP中血小板计数和血小板源性生长因子BB (PDGF-BB)和转化生长因子(TGF-β1)浓度测定;取3～5d龄的大鼠坐骨神经培养纯化SCs,将P1细胞分为实验组与对照组分别进行处理,实验组以含40.0％、20.0％、10.0％、5.0％和2.5％ PRP的条件培养液干预,并设立空白对照组.于干预不同时间点采用CCK-8法测定SCs增殖活性情况,用实时荧光定量PCR方法检测细胞神经生长因子(NGF)和胶质细胞源神经营养因子(GDNF) mRNA表达的变化,ELISA检测SCs分泌NGF和GDNF的水平,Transwell小室检测各组SCs的迁移能力. 结果 PRP血小板回收率达65％,PDGF-BB和TGF-β1浓度明显高于血清(P＜0.01);与空白对照组相比,低于20 0％浓度的PRP呈浓度依赖性促进SCs增殖和迁移,而40.0％浓度组细胞增殖和迁移受到抑制;SCs分泌的NGF和GDNF和其mRNA表达均较对照组明显增加,同样在低于20.0％浓度的范围内呈现量效关系,40.0％浓度组则显示抑制作用.结论 PRP在适当浓度范围可以促进SCs的分裂增殖,合成分泌NGF和GDNF以及迁移的能力,具有潜在的促周围神经再生的作用.     

血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子在门静脉高压大鼠胃壁中的表达及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)在门静脉高压大鼠胃壁中的表达及意义.方法 以肝前性门静脉高压症大鼠作为研究对象,以PEDF和VEGF作为观察指标,通过免疫组织化学和Western blot等方法检测PEDF和VEGF在胃壁中的表达.结果 免疫组织化学的结果显示,实验组(A组)PEDF、VEGF在胃壁的表达明显多于对照组(B组),主要位于黏膜层腺体的基底层,少量散在表达于黏膜下层及黏膜下血管内皮细胞中.Western blot结果显示,实验组大鼠胃壁PEDF与VEGF的相对表达量较对照组均有升高,在术后7、10、14 d 3个时间点VEGF的表达呈逐渐下降趋势,而PEDF的表达呈逐渐升高的趋势.结论 PEDF和VEGF在肝前性门静脉高压症大鼠胃壁中有明显的表达,主要在黏膜层的基底部.PEDF在胃壁中的表达逐渐升高,而VEGF呈逐渐下降趋势,两者可能参与门静脉高压症胃壁血管增生的调节.     

胃癌乳斑微转移在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的意义

目的：探讨胃癌乳斑微转移模型在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的意义。方法：胃癌细胞系MFC,1×10~4细胞数量注射到小鼠腹腔内,72 h后取大网膜,收集乳斑微转移灶内的胃癌细胞团;以不同细胞数量进行NOD/SCID小鼠皮下注射,观察细胞的致瘤能力,移植瘤HE染色,免疫组化分析CEA、CK20表达;免疫细胞化学分析乳斑微转移灶内的胃癌细胞团干细胞相关标志物的表达。结果：皮下注射16周后,微转移灶内的胃癌细胞团组中,皮下注射数量为5×10~2个细胞有1个部位产生肿瘤组织：注射数量为1×10~3个细胞时,5个部位均能产生肿瘤组织。对照组皮下注射为5×10~4个细胞时,仅1个部位出现肿瘤,而注射部位全部出现肿瘤组织,需要5×10~6个以上的细胞数量。两组皮下肿瘤组织分别经HE染色和免疫组化分析CEA、CK20表达,与对照组比较无统计学差异。微转移灶内细胞团高表达CD133和CD44,而CD324的表达则明显下降。结论：胃癌乳斑微转移模型内存在丰富的胃癌于细胞及前驱细胞;大网膜乳斑微环境具有富集胃癌干细胞及前驱细胞的作用。CD133~＋、CD44~＋和CD324~-可能是胃癌干细胞的表面标志物。     

Sperm plasma membrane integrity in fertile and infertile men

Sperm plasma membrane characteristics were analysed by a combined method, the HOS-eosine test (HOS-E test), that consists of the hypoosmotic swelling test (HOS test), and the eosine-Y staining. Semen samples were categorized into four groups (Normo-, Oligo-, Astheno-, and Oligoasthenozoospermic) and subjected to the standard analysis (spermiogram), HOS test, eosine-nigrosine test (reflecting sperm viability); and HOS-E test. HOS-E test makes it possible to distinguish four groups of spermatozoa: type 1, HOS+/eosine-; type 2, HOS-/eosine-; type 3, HOS-/eosine+; and type 4, HOS+/eosine+. Normozoospermic samples showed 61.2 +/- 1.4% type 1, 9.2 +/- 0.8% type 2, 22.6 +/- 1.1% type 3, and 6.8 +/- 0.6% type 4 spermatozoa. Oligozoospermic samples showed no significant differences in these values, whereas asthenozoospermic samples showed a higher percentage of types 3 and 4 and a lower percentage of type 1. Oligoasthenozoospermic samples showed high percentages of types 2, 3, and 4 and a low percentage of type 1. Sperm plasma membrane integrity is a necessary condition for motility and fertilization. So, it is not surprising that semen samples with abnormal motility showed a HOS-E result indicative of a defective plasma membrane.