聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢属于无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１     

抗污染PCR与斑点杂交检测血清HBVDNA的比较

目的探讨含dUTP/尿嘧啶DNA糖基化酶的PCR扩增(dUTP/UDG-PCR,抗污染PCR)和斑点杂交检测血清HBVDNA的敏感性和特异性.方法慢性病毒性肝炎患者178例,应用尿嘧啶DNA糖基化酶的PCR扩增及斑点杂交方法分别检测其血清HBVDNA.结果经抗污染PCR检测出HBVDNA阳性标本69份,阳性率为37.86%;经斑点杂交检测出HBVDNA阳性标本54份,阳性率为30.34%.两者比较差异没有显著性(x2=2.79,P>0.05),但可以看出抗污染PCR检测HBVDNA的阳性率高于斑点杂交.两种方法同时检出阳性标本52份,同时检出阴性标本107份,抗污染PCR与斑点杂交检测血清HBVDNA的符合率为89.32%(159/178)结论抗污染PCR的特异性高,其敏感性高于斑点杂交.     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者心肌组织中HBV DNA

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１８例乙型肝炎（乙肝）患者石蜡包埋心、肝组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ，并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明：在肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ复制。心肌组织中ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率为５５．６％，不存在ＨＢＶ的复制。心脏病理检查可见一些非特异性改变，如脂变、水肿和纤维素样坏死等。病理变化与心电图、临床症状、体征及ＰＣＲ检测结果无相关性     

聚合酶链反应检测HBVDNA的意义

聚合酶链反应(polymerase chainreaction,PCR)是新近建立的一种分子生物学技术,可在体外将特异DNA序列呈百万倍扩增,具有敏感、特异、简便和快速等优点。近两年来,许多学者应用PCR技术检测HBVDNA,丰富和更新了对HBV感染的认识,在HBV感染的诊断和其他研究中显示了良好的应用前景。     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA的结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１６例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ中，９例肝内仅见局灶性ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，其中４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性，说明部分ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ也存在极低水平病毒复制。     

多重和套式聚合酶链反应检测血液,腹膜透析患者血清中HBV D…

利用免疫学和聚合反应（ＰＣＲ）方法，对３５例血液透析（血透），１４例腹膜透析（腹透）患者的８４份血清进行了检测。血透组抗－ＨＣＶ阳性率８２．９％，ＨＣＶ ＲＮＡ ＰＣＲ阳性率５１．４％；腹透组抗－ＨＣＶ阳性率仅７．１％，ＨＣＶ ＲＮＡ ＰＣＲ均阴性。ＨＢｓＡｇ和（或）ＨＢｅＡｇ在二组的阳性率分别为２５．７％和２１．４％；ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ阳性率分别为４５．７％和６４．２％。透析患者ＨＣＶ和ＨＢＶ感     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清…

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶ ＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ者的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶ ＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶ     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者肝外组织中的乙型肝炎病毒DNA

应用巢式聚合酶链（ＰＣＲ）技术对１８例石蜡包埋的胆囊、肾、脾、肾上腺、心、睾丸、胰腺及肝脏组织的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行了检测，并与其免疫组化及原位杂交方法作比较。二组引物检测的结果表明：肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ的复制。肝外组织中ＨＢＶ检出率分别为胆囊８５．７％、７５．０％、肾７２．７％、肾上腺６６．７％、心脏５５．６％、睾丸５５．６％和胰腺５４．５％，但均未检测出ＨＢＶ的复制，ＰＣＲ检测发现与免疫组化及原位杂交结果基本一致。ＨＢＶ可以感染肝外组织但并不在这些组织中复制的发现可以解释受感染的肝外组织可以作为肝外感染源，但并不引起这些脏器出现明显的病理变化。     

PCR检测血清中HBV—DNA及其临床意义

应用聚合酶链反应(PCR)结合Southern blot核酸杂交和DNA直接杂交技术,检测50例乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同血清学标志的血清标本及5例无任何HBV血清学标志的血清标本中的HBV DNA,并与血清学检查结果比较。结果发现PCR结合Southern blot核酸杂交的灵敏度明显高于DNA直接杂交技术,而且还能直接反映患者血液是否有感染性。此外,前者还能直接反映病毒在体内的复制情况,澄清模棱两可的血清学结果。     

聚合酶链反应检测TT病毒核酸的优化条件

目的探讨聚合酶链反应(PCR)扩增TTV核酸的优化条件,初步测定慢性丙型肝炎及慢性非甲-戊,非庚肝炎患者中TT病毒的检出率.方法将标本分别予以4℃保存1wk、室温保存1wk及1wk内将标本于-35℃与室温间反复冻融6次3种储存方法.分别以SDS-蛋白酶K方法(方法1),NP-40法(方法2)及聚乙二醇法提取TTV DNA,分别以套式PCR与单管套式PCR检测TTV.以PCR直接序列分析方法测定扩增产物以验证扩增产物的特异性.结果在10份已知病毒标志均为阴性的血清中,方法1与方法2提取核酸后可在4份血清中检出TTV,方法3提取核酸后的检出率为0.1次PCR、单管PCR与单管套式PCR对10份已知病毒标志均为阴性血清的TTV检出率分别为10%,40%和40%.将2份血清按原血清、10-1～10-10系列稀释后检测,发现,1次PCR、套式PCR和单管套式PCR的检出水平分别为原倍、10-5与10-4及阴性、10-4与10-4.4℃保存1wk、室温保存1wk及反复冻融标本的最低检测稀释度为10-5,10-4,10-3与10-4,10-4,10-3.对一份PCR产物进行序列分析证实为TTV特异性基因.检测31份慢性丙型肝炎及32份慢性非甲-戊,非庚肝炎标本,阳性率分别为29.03%和34.38%.结论建立了一种敏感、快速、特异的TT病毒检测方法.在1wk内,不同的标本储存方法对检测结果的影响不大,TT病毒可能是慢性非甲-戊,非庚肝炎及输血后肝炎的重要致病因子.     

多重和套式聚合酶链反应检测血液、腹膜透析患者血清中HBV DNA和HCV RNA

利用免疫学和聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，对３５例血液透析（血透）、１４例腹膜透析（腹透）患者的８４份血清进行了检测。血透组抗－ＨＣＶ阳性率８２．９％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性率５１．４％；腹透组抗－ＨＣＶ阳性率仅７．１％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ均阴性。ＨＢｓＡｇ和（或）ＨＢｅＡｇ在二组的阳性率分别为２５．７％和２１．４％；ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ阳性率分别为４５．７％和６４．２％。透析患者ＨＣＶ和ＨＢＶ感染率显著高于一般人群。血、腹透两组ＨＣＶ感染率相差非常显著，血透患者抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性高于腹透患者，表明血透过程在丙型肝炎传播方面起重要作用。作者还采用多重和套式ＰＣＲ方法，将ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ在合并的逆转录和ＰＣＲ扩增系统中，连续进行逆转录和第一轮多重ＰＣＲ扩增，再进行第二轮多重ＰＣＲ，具有特异、敏感、简便、快速和经济等特点，适于临床应用。     

改良聚合酶链反应检测HBV共价闭合环状DNA

目的:建立一种基于聚合酶链反应(PCR)的简便快速、具有较高敏感性和特异性的检测乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的方法.方法:分别提取HepG2.2.15细胞内的cccDNA及培养上清中的松驰环DNA(rcDNA)样品,试剂盒纯化;设计2对特异性引物,其扩增区域跨越rcDNA单链区;设计2对非特异性引物,扩增区域位于rcDNA双链区.经单链特异性绿豆芽核酸酶(MBN)分别消化cccDNA及rcDNA样品;以特异性引物和非特异性引物对消化前后的两种样品分别进行PCR扩增,并改变PCR扩增参数如底物数量、循环次数等,观察特异性引物能否顺利扩增消化后的cccDNA,同时又不扩增消化后的rcDNA.HBV基因组质粒样品作为对照.此外还采用实际乙型肝炎患者体内病毒样本检验此策略的实用性.结果:分别以非特异性引物和特异性引物扩增不同模板数的HBVrcDNA样品,2对非特异性引物可扩增出模板数在102以上的HBVrcDNA样品,2对cccDNA特异性引物也可以扩增出模板数在104以上的样品.特异性引物在PCR反应模板数较多时将不能区分消化前的rcDNA和cccDNA.不同数量HBVcccDNA和rcDNA模板在MBN消化前后,分别应用非特异性引物和特异性引物进行PCR扩增,发现不同数量的cccDNA模板分子经过MBN消化后,仍可用特异性引物和非特异性引物扩增出相应条带;rcDNA样品经过MBN消化后,非特异性引物可扩增出产物条带,而特异性引物无法扩增出条带.采用此种策略,我们发现慢性乙肝患者血清HBV核酸样品主要成份为rcDNA,并带有少量cccDNA,而肝细胞内HBV核酸样品富含cccDNA,与实际情况一致.结论:联合应用MBN选择性消化和cccDNA特异性引物的PCR检测法简便快速,敏感性和特异性均较满意.     

乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定室间质量评价

乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测是国内开展最早也最为普遍的临床聚合酶链反应(PCR)检验项目，其定性、定量检测分别对处于HBV感染“窗口期”的患者确诊、乙型肝炎患者抗病毒治疗的动态观察，具有重要的应用价值。卫生部临床检验中心(以下简称部中心)从1998年开始对全国的HBV DNA临床PCR测定进行室间质量评价，近年PCR测定技术的临床应用发展颇快，使用的方法主要有实时荧光PCR和PCR-ELISA两种方法，临床测定正在进入规范化的轨道。     

聚合酶链反应对母婴乙型肝炎病毒感染的反馈调查

聚合酶链反应对母婴乙型肝炎病毒感染的反馈调查杨德春尚世强洪文澜为了揭示ＨＢｓＡｇ阴性母亲所引起的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）垂直传播及影响ＨＢＶ传播的某些因素，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合血清学方法，反馈性地（即由ＨＢＶＤＮＡ阳性新生儿调查其母ＨＢＶ感染...