沉默核糖核酸酶抑制因子促进膀胱癌BIU-87细胞生长和转移潜能

目的研究沉默核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达,对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长的影响。方法通过用RI mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌BIU-87细胞,通过筛选、鉴定后,用Am-blue法检测细胞增殖能力及用Western blot分析细胞中MMP-2和MMP-9的表达。将siRNA RI BIU-87(实验组)及对照组细胞皮下注射到BALB/c裸鼠中,观察肿瘤的生长和肿瘤微血管密度的变化,以及nm23-H1和E-cadherin在肿瘤中的表达。结果 RI基因表达下调显著增加了细胞的增殖,而且显著增强了MMP-2和MMP-9的表达。动物实验结果显示,实验组显著促进了肿瘤的生长(促瘤增长率31.85%),具有更大的瘤质量和更高的肿瘤微血管密度以及更低的nm23-H1和E-cadherin的表达。结论抑制RI基因的表达能显著提高膀胱癌细胞的生长和侵袭潜能,RI可能作为治疗膀胱癌的靶蛋白。     

槲皮素抑制卵巢癌细胞生长的作用研究

目的 观察槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响,为寻找治疗卵巢癌的新药物提供实验依据.方法 运用细胞培养、光镜观察及MTT法测定细胞活性等方法,对比卵巢癌细胞在槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性,探讨槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响.结果 加入50μmol/L槲皮素后,卵巢癌细胞的生长受到明显的抑制,且呈时间依赖性.结论 槲皮素能够抑制卵巢癌细胞的生长.     

槲皮素抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用研究

目的:观察槲皮素对卵巢癌细胞株生长的影响,为寻找新的卵巢癌细胞的治疗药物提供实验依据.方法:运用细胞培养、光镜观察及MTT法测定细胞活性等方法,对比卵巢癌细胞株SKOV3在加入不同浓度槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性,探讨槲皮素对卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用.结果:加入不同浓度的槲皮素后,卵巢癌细胞株SKOV3在形态学和细胞活性方面均发生改变,表现为细胞坏死、细胞生长抑制率增加,且作用浓度为50μmol/L的最为显著.结论:实验证明槲皮素有抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用,具有时间依赖性,其最佳作用浓度为50μmol/L.     

粉防己碱抑制人膀胱移行细胞癌BIU-87细胞生长的研究

为观察粉防己碱对人膀胱癌细胞株BIU 87的抑制作用并探讨其作用机制,采用四氮唑蓝法检测粉防己碱不同浓度对BIU 87细胞生长的抑制率,用流式细胞仪检测不同浓度粉防己碱作用后细胞的凋亡率,结果显示粉防己碱可有效抑制BIU 87细胞的生长,具有浓度依赖性特点,浓度为5～25mg/L的粉防已碱具有诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用,且随着药物作用时间延长凋亡率逐渐增加,说明粉防己碱可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制与凋亡有关。     

P16基因对膀胱癌细胞系BIU-87恶性生长抑制作用的研究

为了探讨P16基因在人膀胱癌中的肿瘤抑制作用及其在膀胱癌抑癌基因替代治疗中的潜在价值,构建了P16基因表达载体并将其导入有内源性P16基因缺失的人膀肤癌细胞系BIU-87中,观察转染细胞的生长速率、双层软琼脂集落试验及细胞周期的改变,发现转染了P16的细胞生长速率明显降低,软琼脂克隆形成能力显著下降,细胞周期出现向G1／G0期移行的特征性动力学改变。结果表明,P16基因对膀胱癌细胞的恶性增殖具有明显的抑制作用,是膀胱癌抑癌基因替代治疗的一个极有希望的候选靶基因,具有良好的应用前景。     

MMP-2反义寡脱氧核苷酸对人膀胱癌 BIU-87细胞株侵袭能力影响的初步研究

目的应用反义核酸技术,探讨阳离子脂质体介导的MMP-2反义寡脱氧核苷酸对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法人工设计合成一段硫代修饰型互补于MMP-2的反义寡脱氧核苷酸序列(antisenes oligodeoxynucleotide,ASODN),并设计与其碱基组成相同,但碱基顺序随机排列的无义寡脱氧核苷酸序列(nonsense oligodeoxynucleotide,NS-ODN)作为对照。以阳离子脂质体介导将不同浓度的ASODN及NS-ODN转染至膀胱癌细胞系BIU-87细胞中,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测转染前后BI-U-87细胞中MMP-2mRNA表达;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测细胞的增殖能力;采用MTT比色法与transwell小室侵袭试验相结合的方法测定肿瘤细胞的体外侵袭力。结果转染MMP-2ASODN可以显著降低BIU-87细胞中的MMP-2mRNA表达。MMP-2ASODN处理细胞24h,于1.0μmol/L的MMP-2ASODN浓度条件下即可显著抑制BIU-87细胞的体外侵袭,而且这种抑制作用随ASODN浓度的增加而增强。结论以MMP-2反义寡脱氧核苷酸阻遏MMP-2在膀胱癌BIU-87细胞株中表达可以成功地抑制BI-U-87细胞侵袭能力,提示应用反义核酸技术等方法抑制MMP-2活性可能可以应用于临床治疗膀胱癌。     

人膀胱癌耐药细胞系BIU-87/A、BIU-87/V的建立及耐药分析

为研究人膀胱癌细胞株耐药机制,应用阿霉素（ＡＤＭ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）低浓度持续递增法,在体外持续培养１０个月,逐步诱导人膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７,获得具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞。通过检测抗癌药物５０％抑制率剂量,ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞分别对ＡＤＭ、ＶＰ－１６的耐药程度较亲本细胞提高５７．４２倍、５．４４倍。两种耐药株显示了相似的耐药谱,均对ＡＤＭ、ＶＰ－１６、长春新碱和阿糖胞苷等药物产生耐药性,且随着培养时间延长,耐药性增强,但对丝裂霉素Ｃ、噻替哌和顺铂仍保持敏感性。结果表明ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞具有多重抗药性（ＭＤＲ）表型,为不同药物诱导人膀胱移行细胞癌ＭＤＲ机制和筛选抗药性逆转剂提供理想模型。     

HepaCAM联合吡柔比星抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖

目的：研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）联合吡柔比星（pirarubicin,THP）对膀胱癌细胞BIU-87的增殖影响。方法：将BIU-87细胞分为空白处理组、hepaCAM过表达腺病毒（adenovirus-GFP-hepaCAM,Ad-GFP-hepaCAM）处理组、THP处理组、Ad-GFP-hepaCAM联合THP处理组。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞周期,real-time PCR检测细胞周期相关基因cyclinD1,CDK2的mRNA表达。将空白、空载腺病毒（adenovirus-GFP,Ad-GFP）、hepaCMA过表达腺病毒（Ad-GFP-hepaCAM）处理的BIU-87细胞分别注射于裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤情况并记录瘤体体积,4周后处死裸鼠。切取各组瘤体组织,组织切片行HE染色和免疫组化检测hepaCAM蛋白的表达。结果：Ad-GFP-hepaCAM联合THP处理组,与THP处理组比较,BIU-87细胞增殖受到明显抑制（F=2.702,P=0.00）;细胞周期明显阻滞于G0/G1期（F=10.989,P=0.000）;cyclinD1、CDK2的mRNA 表达明显下调（F=5.4299,P=0.000）。Ad-GFP-hepaCAM处理组的BIU-87细胞成瘤体积明显低于空白处理组（F=12.587,P=0.000）。结论：hepaCAM基因能够增强吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞的增殖抑制作用。     

槲皮素与顺铂对人膀胱癌裸鼠移植瘤抑瘤作用的研究

目的 观察槲皮素（Quercetin）与顺铂(Cisplatin, DDP)联用对膀胱癌 BIU-87 细胞的BALB/ c 裸鼠移植瘤生长的抑制作用,检测移植瘤中 Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达水平及肿瘤细胞凋亡指数,探讨其作用机制。方法 建立膀胱癌细胞株BIU-87裸鼠移植瘤模型并随机分成4组：对照组（A组）、顺铂组（B组）、槲皮素组（C组）、槲皮素+ 顺铂组（D组）。治疗间观察移植瘤体积和裸鼠体重的变化,第15天后将移植瘤完整取出,称瘤重,计算抑瘤率,并用免疫组织化学技术检测各组移植瘤组织中Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达,原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 B 、C、 D各用药组肿瘤的生长受到明显抑制,瘤体质量明显低于A组,其抑瘤率分别为46.10 %、 39.17 %、 64.09 %, 联合用药组抗瘤作用进一步增强。Bcl-2和PCNA的表达在A组高于 B、C、D 组,Caspase-3 表达在A组明显低于 B、 C、 D 组,各用药组与对照组相比差异均有统计学意义( P < 0. 05);肿瘤细胞的凋亡指数在各用药组都比对照组明显提高,差异有统计学意义( P < 0. 05)。结论 槲皮素和顺铂均可明显抑制膀胱癌细胞在小鼠体内的生长作用,两药联合应用的抑瘤效果优于两药单用。其作用机制可能是通过调控肿瘤中 Bcl-2和 Caspase-3 的表达,也可能通过调节 PCNA 的表达,从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

RNA干扰靶向Survivin促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的研究

目的针对凋亡抑制因子Survivin应用RNA干扰技术（RNA interference,RNA）i抑制膀胱癌细胞株BIU-87细胞内源性Survivin基因的表达进而促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡.方法构建重组质粒pshRNA-survivin1、pshRNA-surv-ivin2和pshRNA-survivin 3并转染BIU-87细胞株,应用免疫组化法检测细胞中Survivin蛋白的表达,通过噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞生长增殖抑制率,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果重组质粒转染BIU-87细胞后,Survivin蛋白表达明显下调,细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑.结论膀胱癌细胞高表达Survivin,RNA干扰特异性抑制Survivin表达,可以促进膀胱癌细胞凋亡和增殖活性明显下降.     

大蒜素联合长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨大蒜素联合长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响。方法:实验分为大蒜素组、长春新碱组、大蒜素联合长春新碱组(联合用药组),以未用药物处理的BIU-87细胞为空白对照组。利用CCK-8法分别评价大蒜素和长春新碱对BIU-87细胞体外生长的抑制作用,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学法和Western blot法检测4组细胞中CDK1和CyclinB1的mRNA和蛋白表达水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:大蒜素和长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞的生长均有明显的抑制作用,呈浓度依赖性;联合用药组能明显降低BIU-87细胞中CDK1和CyclinB1的mRNA和蛋白的表达,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);同时能诱导细胞凋亡,联合用药组细胞凋亡率为(54.89±0.27)%,与空白对照组(3.81±0.63)%、大蒜素组(19.20±0.26)%、长春新碱组(25.39±0.31)%比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大蒜素可增强长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞增殖抑制作用,两者具有协同抗肿瘤作用;大蒜素诱导细胞凋亡的机制可能与下调CDK1和CyclinB1的表达有关。     

新建人膀胱癌细胞系BIU-87的染色体分析

新建的人膀胱癌细胞系命名为BIU-87,本文研究其染色体及其G带的变化及临床意义。BIU-87细胞有明显的超4倍体特点,分析100个中期细胞得出染色体众数平均为101条。染色体形态结构与正常细胞相比有很大不同,可检出12个异常的标记染色体。其中最为明显的M_1和M_2标记染色体都与1号染色体有关。这将有助于临床辅助诊断膀胱癌。双小体的存在提示了细胞癌变和癌基因变化之间的关系。     

保尔佳对膀胱癌BIU-87细胞株增殖及超微结构影响

1目的　探讨保尔佳对膀胱癌细胞生长的抑制作用。 2方法　采用 MTT法检测了不同浓度的保尔佳对膀胱癌 BIU- 87细胞株生长的抑制作用 ,同时应用电镜观察保尔佳对 BIU- 87细胞超微结构的影响。 3结果保尔佳对 BIU- 87细胞株生长增殖有明显的抑制效应 (r=0 .882 ,0 .991,P<0 .0 5 ,0 .0 1) ,且随着药物浓度增高和作用时间的延长而加强。实验组 BIU- 87细胞也出现一定的超微结构改变。 4结论　保尔佳可抑制肿瘤细胞的生长     

槲皮素对胃癌细胞增殖抑制作用的初步观察

目的 :初步观察槲皮素对人胃腺癌SGC790 1细胞增殖的影响。方法 :噻唑蓝 (MTT)比色法检测胃癌细胞的增殖。结果 :不同浓度的槲皮素对胃癌细胞增殖有抑制作用 ,且呈明显的时效关系和量效关系。结论 :体外实验显示槲皮素具有一定细胞毒作用 ,对SGC790 1细胞增殖具有一定抑制作用。     

小归芍超临界提取物抑制胃癌细胞系BGC-823增殖的实验研究

目的探讨小归芍超临界提取物抑制胃癌细胞系人类胃癌细胞823(in human gastric carcinoma 823cell,BGC-823)增殖的作用。方法将终浓度为50、100、200 mg/L小归芍超临界提取物作用于胃癌细胞BGC-823细胞48 h,观察细胞变化并用四甲基偶氮唑蓝法分析细胞生长抑制、膜联蛋白V碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法检测细胞凋亡率的改变和PI法观察细胞周期的变化。结果①在一定浓度范围内,与对照组相比小归芍提取物能够明显抑制胃癌细胞BGC-823的生长,抑制率随剂量增加而增加,并能够增加细胞的凋亡率(P<0.05或P<0.01);②细胞增殖周期G1期比例明显升高(P<0.05或P<0.001)。结论小归芍超临界提取物可明显抑制胃癌细胞BGC-823的增殖,诱导凋亡以及对细胞周期G1期具有明显的阻滞作用。     

五味子乙素B对人胃癌细胞MGC－803增殖和迁移能力的影响

目的：观察五味子乙素B（ Schisandrin B , Sch B）对人胃癌细胞MGC－803增殖、迁移能力及基质金属蛋白酶－9（matrix metalloproteinase 9, MMP－9）mRNA表达的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：采用CCK－8法检测50、100、200、400和800μmol／L Sch B对胃癌细胞增殖的抑制作用;光镜观察细胞生长状态变化,并计数细胞分裂指数;细胞划痕实验检测200μmol／L Sch B对细胞迁移能力的影响;定量PCR检测细胞MMP－9 mRNA的表达。结果：CCK－8结果显示,Sch B对胃癌细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;胃癌细胞经不同浓度Sch B处理24、48、72 h,光镜下可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核质浓缩及凋亡小体形成,细胞分裂指数随Sch B剂量增加和作用时间延长而降低;200μmol／L Sch B作用24、48、72 h,细胞迁移率分别为（39．57±9．14）％,（56．57±10．04）％和（68．21±11．43）％,明显低于对照组（P＜0．05）;PCR结果显示,胃癌细胞中MMP－9 mRNA表达显著低于对照组。结论：Sch B对胃癌细胞的增殖抑制呈剂量和浓度依赖性,并降低胃癌细胞迁移能力,可能与下调MMP－9基因的表达有关。     

重组人生长激素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期作用的实验研究

目的 :探讨重组人生长激素 (r- h GH )对人乳腺癌细胞株 MCF- 7(MCF- 7)增殖和分化的影响。方法 :以不同浓度 r- h GH分别加入处于对数生长期的 MCF- 7进行体外培养 ,4 8h后用流式细胞仪检测细胞周期的百分比构成变化 ,并与对照组进行比较。结果 :不同浓度的 r- h GH作用于 MCF- 7后 ,其细胞周期的 G0 ～ G1 期、S期、G2 ～ M期的细胞百分比变化 ,差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :r- h GH对 MCF- 7的细胞周期无明显影响 ,既无促进 MCF- 7细胞增殖作用 ,也无抑制 MCF- 7细胞的作用。     

EFFECT OF SOMATOSTATIN ON THE CELL CYCLE OF HUMAN GALLBLADDER CANCER CELL

In the last decades, incidence rate of gallblad-der cancer was increasing in China, but the survivorrate was not satisfying even if the radical operationswere performed[1]. Since gallbladder cancer wasnon-sensitive to either chemotherapy or radiothera-py[2,3], many researches had been done to find somenew effective adjuvant approaches to improve the sur-vival of patient who suffered from this malignant dis-ease , especially the patients who lost the chance ofresection.Recent evidences showed t…     

Forskolin抑制成骨肉瘤细胞增殖的作用

Forskolin系天然植物中提取到的二萜类化合物，为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现它能下调成骨肉瘤细胞的EGF受体，抑制酪氨酸蛋白激酶活性，抑制转化生长因子α（TGFα）的基因表达，抑制3H－TdR参入DNA以及抑制细胞周期的S期，这均支持Forskolin对成骨肉瘤细胞具有抑制增殖的作用。     

C-met蛋白在膀胱癌中表达的意义及其与细胞增殖和血管形成之间的关系

目的：探讨肝细胞生长因子受体C—met在膀胱癌发病中作用及与细胞增殖和血管形成之间的相关关系。方法：应用免疫组化方法检测72例膀胱癌、16例正常膀胱组织中C—met蛋白、PCNA和Ⅷ因子相关抗原的表达。结果：膀胱癌组织中C—met蛋白表达显著高于正常膀胱组织(P＜0.01)；膀胱癌C—met蛋白表达阳性者PCNA指数显著高于阴性表达者(P＜0．05)；但其表达与肿瘤分期、分级、复发和微血管密度之间并无显著相关性(P＞0.05)。结论：C—met通过促进细胞异常增殖而参与膀胱癌发病过程。