“人形”何首乌真伪鉴别初探

何首乌原系蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb的干燥块根。本品历来各地就有许多品种。《本草纲目》草部第十八卷把何首乌释名为文藤(本传)、夜合(本传)、地精(本传)陈知白(开宝)、马肝石(纲目)、桃柳藤(日华)、九真藤(纲目)、赤葛(斗门)、疮帚(纲目)、红内消,并各有记述。李时珍又写道:“何首乌有赤白两种,赤者雄,白者雌”、“雌雄并用”。据报道:赤首乌即何首乌之正品;而所谓白首乌,多指萝摩科牛皮消属植物块根而言。各地有白首乌、飞来鸽、隔小消、青洋参等。但历代本草及当今资料均无有“人形”何首乌的记载。1989年在我区辰     

何首乌与人形何首乌的鉴别

何首乌为蓼科植物何首乌 Polygonummultiflour Thumb的干燥块根 ,又名“红内消”。性微温 ,味苦、甘涩。生用润肠 ,解疮毒 ;制用补肝肾、益精血。有降血脂作用。近年市场上出现芭蕉科植物芭蕉 Musa basjoo Sieb et Zucc的新鲜根茎加工成人形 ,冒充千年何首乌。说宋朝的佘太君就是服了此药而返老还童 ,学武的人能增加一甲子功力 ,平常的人能延年益寿 ,长生不老 ,具有很大的欺骗性。现将二者加以鉴别 ,以正视听。1　材　料　何首乌来自市药材公司 ,经与市药品检验所标准品对照相同。人形何首乌来自药贩手中 ,经市药品检验所鉴定为伪品。2　…     

近红外光谱法青皮药材真伪鉴别研究

目的:用近红外(NIR)光谱鉴别中药材青皮及其伪品。方法:用NIR光谱仪对不同产地的青皮药材粉末进行扫描,用导数光谱法处理原始图谱,设定CI值为3.03,建立青皮NIR光谱一致性模型,并用该模型验证陈皮伪品,结合薄层色谱法对上述药材真伪进行复核并进行聚类分析。结果:正伪品的NIR光谱存在较大差异,但薄层色谱正品与伪品的斑点差异不大,而正伪品之间的斑点却有浓度差异。结论:NIR包含的信息全面,用近红外(NIR)光谱鉴别青皮的真伪,快捷、可靠,可以在快检车上推广并用于药材的聚类分析。而TLC不能将青皮所有组分完全分离,需要选择特征斑点作为药材鉴别和聚类分析的依据。     

何首乌与其伪品索骨丹的鉴别研究

从药材性状、显微特征及薄层色谱方面对索骨丹与何首乌进行了比较研究。结果表明，正品与其伪品有明显区别，不应混用。     

何首乌—伪品的生药学鉴别

对新近发现的保首乌一伪品的来源进行了生药性状，显微，理化等方面的鉴别。     

何首乌与其伪品索骨丹的鉴别研究

从药材性状、显微特征及薄层色谱方面对索骨丹与何首乌进行了比较研究。结果表明，正品与其伪品有明显区别，不应混用。     

商品何首乌、制何首乌的真伪质量鉴别考查

目的：考查目前药材市场、药店和使用单位的何首乌与制何首乌的真伪、质量情况，并探讨其鉴别方法。方法：采用性状、薄层色谱鉴别的方法。结果：搜集的10批生何首乌中有2批检出2，3，5，4，-四羟基二苯乙烯-2—0-B—D-葡萄糖苷，未检出大黄素，结合性状特征，判断为次品；23批制首乌中有11批未检出2，3，5，4＇-四羟基二苯乙烯-2．0—β-D-葡萄糖苷和大黄素，其性状特征不同，判断为伪品；2批虽检出2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2—0—β-D-葡萄糖苷和大黄素，但其性状特征为何首乌的茎藤，为非药用部位，仍是伪品，另一为大黄伪充品。结论：生首乌来源的正确与否及品质的好坏，直接关系到制首乌的真伪和质量，用制何首乌对照药材和2，3，5，4，-四羟基二苯乙烯-2—0-β—D-葡萄糖苷及大黄素作为对照品，结合性状特征和薄层色谱进行鉴别可达到目的。     

何首乌与白首乌的鉴别

本文对何首乌与白首乌的原植物、药材性状、显微特征及理化性质进行了比较鉴别,为何首乌的真伪鉴别提供了参考依据.     

何首乌与白首乌的鉴别

何首乌用黑豆汁炮制后有乌须发的功效,可用于预防和治疗须发早白与脱发等症,加之为补血良药,为养血生发之佳品,临床用量较大。有的地区用白首乌来代替何首乌之用,而实际上白首乌并无乌须发之效,所以认真鉴别何首乌与白首乌,可以避免用药误差,以免耽误病情。《开宝本草》上记载：“根大如拳,有赤白两种。赤者雄,白者雌”。现择其要点鉴别如下。     

近红外漫反射光谱法鉴别贝母药材的研究

目的:建立贝母药材及其伪品鉴别的近红外漫反射光谱分析法.方法:将炉贝、松贝、青贝、浙贝、伊贝母、平贝母、湖北贝母及贝母伪品东贝母、光慈菇、山慈菇等10种药材烘干、粉碎、过筛,直接测定其近红外漫反射光谱;分别采用聚类分析、褶合变换-可视化-相似系数分析等方法对10种药材进行鉴别.结果:10种药材的近红外漫反射光谱原谱极其相似,无法鉴别;聚类分析可将3种贝母伪品与7种贝母正品区分开,但不同贝母正品之间的鉴别效果不甚理想;褶合变换-可视化-相似系数分析将贝母正品之间的微小差异进一步扩大化、量化,正品之间的鉴别效果得到改善.结论:近红外漫反射光谱分析法可直接、无损测定固体样品,结合信息处理技术,可以为贝母及其他中药鉴别分析提供一种新的方法.     

何首乌快繁技术优化及同源四倍体的诱导与鉴定

目的:建立何首乌快速繁殖体系并对之进行优化;探索组织培养条件下诱导何首乌同源四倍体的有效方法.方法:采用正交设计的方法,对何首乌的繁殖培养基进行优化筛选;将顶芽于不同浓度秋水仙碱溶液中浸泡不同时间筛选何首乌同源四倍体的诱导条件.结果:何首乌最佳繁殖培养基为MS +6-BA 1.0 mg· L-1 +NAA 0.3 mg·L-1+ PP3330.4 mg·L-1;0.2％秋水仙碱浸泡芽30 h,或0.3％秋水仙碱浸泡芽18h为诱导何首乌同源四倍体的理想条件,诱导率高达16.7％.结论:采用组织培养方法可进行何首乌的快速繁殖;秋水仙碱是有效的多倍体诱导剂.通过根尖细胞染色体鉴定,共获得25个同源四倍体株系.该实验为何首乌野生资源保护、优良品种的选育奠定了基础.     

何首乌不定根的离体诱导及悬浮培养研究

通过离体不定根的高效诱导与悬浮培养,实现何首乌资源的永续利用。在培养基中添加不同浓度的蔗糖和植物生长物质,筛选从幼茎有效诱导不定根的最适培养基;采用正交试验筛选不定根悬浮培养的最适培养基;对悬浮培养的不定根进行继代培养并测定生长曲线,同时对不定根中的主要有效成分进行检测。结果表明,能够从幼茎有效诱导不定根的最适培养基为MS+蔗糖 40 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+6-卞基腺嘌呤 0.2 mg·L^-1;不定根悬浮培养的最适培养基为 MS+蔗糖30 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+生根粉 0.2 mg·L^-1;经过检测,发现不定根同样含有何首乌药材中的主要有效成分二苯乙烯苷。该实验实现了何首乌不定根的高效诱导与培养,为中药资源的永续利用研究提供了工作基础。     

Hexane extract from Polygonum multiflorum attenuates glutamate-induced apoptosis in primary cultured cortical neurons

Ethnopharmacological relevance

Polygonum multiflorum has traditionally had wide use as an anti-aging treatment in East Asian countries. We investigated the neuroprotective effects of Polygonum multiflorum against glutamate-induced neurotoxicity with a focus on the anti-apoptotic mechanism in primary cultured cortical neurons.

Material and methods

Cell viability, cytotoxicity, morphological, flow cytometry, Western blot, and caspase activity assays were performed for examination of the neuroprotective effects of active hexane extract from Polygonum multiflorum (HEPM).

Results

Pretreatment with HEPM resulted in significantly decreased glutamate-induced neurotoxicity in a concentration-dependent manner and also resulted in drastically inhibited glutamate-induced apoptosis. Treatment with HEPM resulted in decreased expression of glutamate-induced death receptor (DR)4, and enhanced expression of glutamate-attenuated anti-apoptotic proteins, including Bcl-2, XIAP, and cIAP-1, and slightly reduced glutamate-induced cleavage of Bid. In addition, treatment with HEPM resulted in suppressed glutamate-induced activation of caspase-8, caspase-9, and caspase-3, and, subsequently, decreased degradation of poly(ADP-ribose) polymerase, β-catenin, and phospholipase Cγ1 protein, which are downstream targets of activated caspase-3.

Conclusions

The results of this study demonstrated that HEPM exerts a neuroprotective effect against glutamate-induced neurotoxicity via inhibition of apoptosis. This protection may be mediated through suppression of DR4 and up-regulation of Bcl-2, XIAP, and cIAP-1, as well as inhibition of caspase activation, resulting in prevention of apoptosis of cortical neurons.     

Neuroprotective effects of Polygonum multiflorum extract against glutamate-induced oxidative toxicity in HT22 hippocampal cells

Ethnopharmacological relevance

Dried roots of Polygonum multiflorum have traditionally been used in the retarding of aging process in East Asian countries and its extracts exhibit anti-oxidative activities.

Materials and methods

Neuroprotective effects of ethyl acetate extract from Polygonum multiflorum (EEPM) were investigated against glutamate-induced oxidative cell death in HT22 hippocampal cells. Cell viability, cytotoxicity, morphological, flow cytometry, and Western blot assays were performed in order to observe alterations of neuronal cell survival or death related pathways.

Results

Pretreatment with EEPM resulted in significantly decreased glutamate-induced neurotoxicity and also resulted in drastically inhibited glutamate-induced apoptotic and necrotic neuronal death. To elucidate possible pathways of neuroprotection by EEPM, we explored the activation of mitogen activated protein kinases (MAPKs), phosphatidylinositol-3-kinase, and cAMP responsive element binding protein (CREB). Treatment with glutamate alone led to activation of extracellular regulated kinase (ERK), Jun N-terminal kinase, and p38 during the late phase after glutamate exposure, but pretreatment with EEPM resulted in significantly attenuated activation of these proteins. Pretreatment with EEPM resulted in increased activation of CREB. The specific inhibitors of ERK and p38, PD98059 and SB203580, abrogated the neuroprotective effects of EEPM. When we evaluated calpain I and striatal-enriched protein tyrosine phosphatase (STEP), active form of calpain I was significantly increased after glutamate exposure, and, along with this, active form of STEP showed a decrease. Pretreatment with EEPM resulted in significant recovery of pro-calpain I and active form of STEP caused by glutamate. Co-treatment with calpain inhibitor ALLN and EEPM had a synergistic effect on neuronal death and contributed to blockade of activation of both ERK and p38 with increased activation of CREB.

Conclusions

These results suggest that Polygonum multiflorum extract may have neuroprotective effects through both alleviation of ERK and p38 activation with increased activation of CREB under oxidative stress and has potential as a therapeutic intervention for treatment of oxidative neuronal death.     

何首乌水培繁殖及生根相关生理生化特征的动态变化

目的:为何首乌人工繁育和更深一步研究何首乌生根机制提供理论依据和技术指导.方法:以何首乌嫩枝为材料,进行2号生根粉(ABT2)不同浓度的对比试验,研究水培繁殖及生根过程中内源激素吲哚乙酸(IAA)、玉米素核苷类(ZRs)、脱落酸(ABA)含量及吲哚乙酸氧化酶(IAAO)、多酚氧化酶(PPO)活性的动态变化.结果和结论:50mg·L(-1)ABT2处理何首乌插条,平均生根率到达了94%,10,25 mg·L(-1)ABT2处理插条生根率为75%,88%,而对照只有46%生根.何首乌水培生根过程可分为根诱导期、露白期和伸长期3个阶段.内源激素含量、氧化酶活性的动态变化与插条不定根生长过程密切相关,不定根诱导期需要低含量的内源激素IAA,ZRs,ABA和较高活性的IAAO;不定根形成露白期需要高含量内源激素IAA、较高活性的PPO、低含量的ZRs,ABA和低活性的IAAO;不定根伸长期需要一定含量的IAA,ZRs,ABA和较高活性的PPO,IAAO.生根过程中,50mg·L(-1)ABT2的处理增加了插条内IAA含量和PPO活性,降低了插条内ABA,ZRs含量和IAAO活性.     

2,3-二氢环戊二烯香豆素类化合物对转基因何首乌毛状根生长及其二苯乙烯苷累积的影响

目的:考察2,3-二氢环戊二烯香豆素类化合物对何首乌毛状根生长的影响,并研究其对毛状根中有效成分二苯乙烯苷累积的刺激作用.方法:将2,3-二氢环戊二烯香豆素类化合物在不同的培养时间加入到毛状根中,共培养特定时间后测定其二苯乙烯苷的含量及生长量,并通过考察不同浓度和继代次数确定最佳实验条件.结果:加入香豆素类化合物的最佳时间为预培养第4天,最佳质量浓度为0.025 g·L-1,毛状根的生长量有较大提高,与对照组相比二苯乙烯苷的含量增加4倍左右.结论:2,3-二氢环戊二烯香豆素类化合物作为一类非生物诱导子能够促进何首乌毛状根的生长及有效成分二苯乙烯苷的累积.     

何首乌水提物大鼠连续灌胃给药28d肝毒性研究——胆汁淤积相关性分析

目的:观察何首乌水提物(AEPM)28 d连续给药对SD大鼠的肝损伤程度及胆汁淤积机制的相关性。方法:SD大鼠分别灌胃AEPM 60,30 g·kg-1,每天1次,连续28 d。28 d后观察一般状况、体重变化,检测血生化中肝功能相关指标,收集胆汁,计算胆汁流量、流速、密度及检测胆汁中主要成分变化情况。检测肝体比重变化情况及肝组织病理检查。结果:AEPM对SD大鼠一般状况和体重无明显影响。肝损伤和胆汁淤积相关生化指标检测结果显示,AEPM对大鼠血清ALT和AST水平无明显影响,高剂量可致雄性大鼠血清中ALP,GGT,TBA明显升高(P<0.05,P<0.01),而TBIL明显降低(P<0.05),低剂量雄鼠给药组GGT也明显升高(P<0.05)。AEPM对大鼠胆汁流量无影响,但高剂量可引起雄性大鼠胆汁成分(TG↑,TBIL↑,TBA↓)明显改变。AEPM高剂量组肝脏质量和肝脏系数有增加的趋势,但无统计学意义。病理结果显示AEPM给药大鼠肝脏仅见部分肝细胞小灶性坏死,未出现严重病变。结论:AEPM可明显损伤大鼠胆管上皮细胞和干扰肝细胞功能,明显改变大鼠胆汁成分,在不诱发严重肝脏损伤前提下即可引起大鼠胆汁淤积相关指标改变。     

何首乌不同分离部位对人正常肝L02细胞和 肝癌HepG2细胞的杀伤作用

目的:考察何首乌不同分离部位对入正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用,寻找能明显杀伤肝癌细胞但对正常肝细胞生长影响较小的分离部位,并初步探讨其对2种细胞不同作用的机制.方法:何首乌70％乙醇提取物经AB-8型大孔树脂吸附,依次用水、50％乙醇和95％乙醇洗脱得到何首乌乙醇提取物的水洗脱部位(RW)、50％乙醇洗脱部位(R50)和95％乙醇洗脱部位(R95);体外培养人正常肝L02细胞及肝癌HepG2细胞,用含何首乌各分离部位的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,MTT检测及倒置镜下观察约物对L02及HepG2细胞生长的影响,筛选具有区别杀伤作用的部位,考察其剂量和时间作用效应.进一步通过Giemsa染色观察药物作用后细胞核的变化,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况.结果:MTT和倒置镜下镜检结果均表明,R50对L02细胞和HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用.Giemsa染色和流式细胞术结果表明,R50诱导2种细胞凋亡的程度不同:试验的各个时相下HepG2中凋亡细胞的比例均明显高于L02细胞(HepG2细胞中凋亡细胞的比例在24,48,72 h分别为83.62％,60.52％,74.49％,L02细胞中凋亡细胞的比例则分别为31.02％,20.57％,25.32％,2种细胞阴性对照组中凋亡细胞的比例在各个时相均小于5％),但对2种细胞的细胞周期没有明显影响.结论:何首乌提取物的R50部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用,区别杀伤作用的本质是药物诱导2种细胞凋亡的程度不同.     

LSA-21型大孔吸附树脂富集何首乌中二苯乙烯的工艺研究

目的:研究LSA-21型大孔树脂对何首乌二苯乙烯苷的吸附性能及分离纯化工艺参数。方法:采用高效液相色谱法测定2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量,计算LSA-21大孔树脂对二苯乙烯苷的吸附率和解析率。结果:最佳吸附纯化工艺为:最大上样量为1.2 g.g-1(生药量/干树脂),药液浓度为0.2 g.mL-1(相当于生药量),60%乙醇洗脱,洗脱剂用量为6倍树脂量,吸附及洗脱流速均为1.0 mL.min-1(10 g树脂)。结论:LSA-21大孔树脂对何首乌二苯乙烯苷的吸附纯化效果较好,本研究结果可为实际生产提供理论依据。     

基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究

目的: 建立快速准确的头花蓼与尼泊尔蓼药材的分子标记鉴定方法。方法: 通过RAPD随机引物筛选,获得头花蓼特异的RAPD 分子标记片段,经克隆、测序,重新设计特异性引物转化形成稳定的SCAR标记。结果: 获得2条稳定扩增的头花蓼特异片段Z300,Z1100,根据该2特异片段序列设计4对特异引物,分别对头花蓼与尼泊尔蓼药材DNA进行扩增,其中引物Z1-2可从头花蓼药材中扩增获得约300 bp 的片段,而尼泊尔蓼药材则未扩增出该片段。结论: 引物Z1-2成功将Z300片段转化为SCAR分子标记,可作为头花蓼与近缘种尼泊尔蓼药材分子鉴定的依据。