日本医蛭的研究进展

日本医蛭是中国药典收载的唯一吸食动物血液的水蛭药材品种,具有极强的抗凝血酶活性和抗血小板聚集作用。现阶段对日本医蛭的研究十分匮乏,不利于日本医蛭资源繁育及开发利用。本研究综合国内外日本医蛭的研究现状进行了分析,并阐述了日本医蛭产业发展存在的问题,旨在为更好地保护利用中药材资源提供数据和参考。     

日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究

目的研究日本医蛭不同萃取部位的抗凝活性,为日本医蛭的新药开发提供依据。方法SD大鼠腹主脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）和活化的部分凝血活酶时间（APTT）。结果日本医蛭的总提物能使大鼠PT,TT,APTT时间显著延长;石油醚部位能使大鼠PT,APTT延长。结论中药日本医蛭的低极性小分子具有抗凝活性。     

日本医蛭适宜饲养密度的研究

通过对不同放养密度的日本医蛭饲养试验表明，日本医蛭适宜的养殖密度区间为80—120头／m^2，饲料系数3．8-4．8。     

日本医蛭微量元素分析

本文对《中国药典》收载品种,含有世界上最强的抗凝血活性物的日本医蛭进行了人工及野生药材微量元素的测定。测定结果表明,人工及野生药材体内所含微量元素一致,均含有人体必需的元素。这些元素对增强血液循环、抗凝血等具有很大的作用。     

土鳖虫与日本医蛭提取物抗凝血酶活性的比较研究

目的研究土鳖虫提取物的抗凝血作用,并与日本医蛭抗凝活性做了比较,为土鳖虫的新药开发提供实验依据。方法采用凝血酶直接滴定法。结果鲜(干)土鳖虫提取物的抗凝血活性均很强,与日本医蛭相当。但土鳖虫和日本医蛭抗凝血酶活性成分对热稳定性有差异。结论土鳖虫中含有直接作用于凝血酶的成分,但不同于日本医蛭的抗凝血酶成分。     

日本医蛭的研究近况

日本医蛭为水蛭的一种,属医蛭科高度特化的环节动物。中国药典（９５年版）收入蚂蝗Ｗｈｉｔｍａｎｉａｐｉｇｒａｗｈｉｔｍａｎ、日本医蛭Ｈｉｒｕｄｏ　ｎｉｐ－ｐｏｎｉｃａｗｈｉｔｍａｎ、柳叶蚂蝗Ｗｈａｃｒａｎｗｌａｔａ三种。水蛭始载于《神农本草经》味碱平,逐恶血、瘀血、破血,利水道。其功能：破血逐瘀,通经消。其主治：血瘀经闭,瘕痞块,跌打损伤。近二十年来国外学者对日本医蛭进行了大量的研究工作。尤其对水蛭素的研究更加深入,包括化学结构、药效学、药代动力学、临床试验及毒副作用等方面。近年来,国内学者对日本…     

野生日本医蛭与人工饲养医蛭氨基酸含量的对比研究

采用日产日立835—50型氨基酸自动分析仪，对野生日本医蛭和人工饲养医蛭的氨基酸测定结果表明，两样品中所含的氨基酸种类相同，氨基酸总量和人体必需要氨基酸含量均为人工饲养医蛭略高于野生医蛭，与别的动物药相比，医蛭体内氨基酸含量明显高于别的动物药。     

日本医蛭防逃试验研究

本文研究了人工饲养日本医蛭过程中防止医蛭逃遁,减少死亡率,提高产量的物理和化学方法。结果表明,用尼龙过滤筛网(80—100目)粘结于饲养箱上及香柏油、香茅醛涂抹于水族箱四壁皆可防止医蛭外逃,其中尼龙细筛网粘结于塑料饲养盒四周效果最佳。     

日本医蛭快速生长繁育的研究

提高环境温度以打破日本医蛭的冬眠对医水蛭的取食无影响，对增加其体重有促进作用，但是对其繁殖有明显的抑制作用，因此，应该根据情况采用打破冬眠的办法，加速医蛭的生长。     

PSB净化日本医蛭养殖水体的研究

采用PSB微生态制剂处理日本医蛭养殖水体的研究结果表明：施用PSB能明显降低日本医蛭养殖水体中的COD、NH4＋－N、底质硫化物、底质有机物,增加水体中的溶氧,净化养殖水体。     

光合细菌净化日本医蛭养殖水体的研究

采用光合细菌(PSB)制剂处理日本医蛭养殖池的研究结果表明：PSB能明显降低养殖水体中的COD、NH4^ -N、底质硫化物、底质有机物,增加水体中的溶氧,净化水体。     

抗凝血酶效价测定法综合考察水蛭的提取工艺

目的:通过考察水蛭提取物的抗凝血生物活性,确定水蛭的最佳提取工艺,保证水蛭抗凝血活性成分获得最大保留。方法:选择浸泡时间、煎煮次数、煎煮时间、水与水蛭质量比为考察因素,按L9(34)正交设计因素水平表排列,考察水蛭提取物得率和提取物的凝血酶效价。结果:水蛭的最佳提取工艺为水蛭药材先用10倍量的水浸泡4h,加水煎煮3次,每次煎煮1.5h。结论:水蛭经水提、乙醇精制后凝血酶活性依然保留完好,得率与凝血酶效价呈正相关。此工艺对水蛭提取物的生产简便可行。     

土鳖虫提取物体外抗凝血活性研究

目的：比较土鳖虫不同提取物对人血浆的抗凝血活性,探讨其抗凝血机制。方法：测定土鳖虫提取物不同萃取部位对凝血酶原时间（PT）,凝斑酶时间（TT）,活化的部分凝血活酶时间（APTT）,纤维蛋白原凝固时间（FCT）的影响。结果：土鳖虫的乙酸乙酯部位显著地延长人门,APTT,下下和FCT;石油醚部位、正丁醇部位也有抗凝活性,作用较弱。结论：土鳖虫乙酸乙酯提取部分抗凝作用最强,能直接抑制凝血酶催化的纤维蛋白原凝固。     

硫酸苦豆子多糖构象及抗凝血活性

目的:研究硫酸化苦豆子多糖(SAPS)溶液的构象特征以及在不同因素影响下的溶液行为,并考察其体外抗凝血活性。方法:采用刚果红法研究SAPS构象特征;通过圆二色谱(CD)研究SAPS在不同浓度、温度和添加钙离子等条件下构象的变化;并测定SAPS体外抗凝血活性。结果:刚果红试验中SAPS络合物的最大吸收波长会发生红移;浓度、温度变化以及添加钙离子使SAPS构象发生变化。不同取代度的SAPS表现出不同程度的抗凝血活性。结论:SAPS具有多股螺旋结构。浓度、温度和金属离子因素均对其构象均有不同程度的影响。随着硫酸根的取代度增加,SAPS的抗凝血作用增强。     

水蛭不同炮制品抗凝血活性的比较

目的:应用抗凝血活性指标筛选水蛭炮制工艺。方法:按生物检定法测定各种炮制品水提取物的抗凝血时间,比较不同炮制方法对水蛭抗凝血活性的影响。结果:净制法和低温冷冻粉碎炮制法均能较好地保持水蛭抗凝血活性,而其它炮制方法炮制的水蛭抗凝血活性不强。结论:净制法炮制水蛭,能较好地保持抗凝血活性,且制作简便,是一种较好的炮制方法。     

水蛭乙醇提取物体外抗凝血活性研究

目的:研究水蛭不同提取物对人血浆的抗凝活性及作用环节。方法:测定水蛭乙醇提取物不同萃取部位对凝血酶原时间(PT),凝血酶时间(TT),活化的部分凝血活酶时间(APTT),纤维蛋白原凝固时间(FCT)的影响。结果:水蛭的乙酸乙酯部位显著地延长人PT,APTT,TT和FCT;石油醚部位、正丁醇部位、水部位也有较弱抗凝活性。结论:水蛭乙酸乙酯提取部分抗凝作用最强,直接抑制凝血酶催化的纤维蛋白原凝固。     

芩连四物汤化学物质基础及其抗凝血活性研究

目的:研究芩连四物汤的化学物质基础及其抗凝血生物效应。方法:采用水煎醇沉,醇溶液减压回收乙醇,用适量水溶解后,上D101大孔树脂采用不同浓度的乙醇梯度洗脱,各不同洗脱部位采用硅胶柱层析的方法分离,所得单体通过UV,IR,NMR及MS等方法确定其化学结构;将所得成分配成水溶液(100μmol·L^-1),采用体外法测定对血浆凝血酶时间(TT)的影响。结果:从芩连四物汤中分离并鉴定了5个黄酮类成分、1个生物碱、3个芳香酸、1个倍半萜类成分及2个其它类化合物。黄酮苷元、芳香酸、生物碱及倍半萜类化合物均能显著延长血浆凝血酶时间(TT)。结论:首次对芩连四物汤整方进行化学物质分离和结构分析研究,其中9个化合物,包括千层纸素A、汉黄芩素、6-甲氧基汉黄芩素、小檗碱、黄芩素、阿魏酸、香草酸、咖啡酸、地黄苦苷元显示了一定的体外抗凝血活性。     

土鳖虫胰酶酶解物抗凝活性部位分离纯化及组成分析

目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶酶解物进行分离纯化,初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物,以APTT(活化部分凝血酶时间)为指标,采用溶剂萃取法,获得抗凝活性部位IV,经凝胶柱色谱法对其进行分离纯化获得胰酶酶解纯化物;采用考马斯亮蓝法对纯化物进行定量分析,通过MALDI-TOF-MS检测分离部分的分子量分布范围。结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV有较强的抗凝活性,其抗凝活性强度与酶解物质量浓度相关;部位IV经Sephadex G-25纯化后,通过考马斯亮蓝法测得其蛋白质量分数5.5%;进一步经Sephadex G-10脱盐的纯化物,采用MALDI-TOF-MS检测,确定为相对分子质量在850～910 Da的3组多肽混合物。结论:采用凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物是可行的,抗凝活性组分是<1 000 Da的小分子肽类。     

疏血通注射液的抗凝生物活性测定方法及其机制研究

目的:建立适合的疏血通注射液抗凝生物活性测定的方法,并探索疏血通注射液的抗凝作用机理。方法:通过实验建立了疏血通注射液生物活性测定的3钟方法,即《中华人民共和国药典》上收载的凝血酶滴定法(挑丝法)、临床上常用的凝血仪测定法、以及国际上通用的测定凝血酶活性的荧光共振能量转移(FRET)法,并进行了3种方法的比较。结果:确定3种方法都可以使用,但以FRET法比较稳定,受人工操作误差影响小,灵敏度最高。结论:建立了适合疏血通注射液的3种抗凝生物活性方法。通过测定疏血通注射液对活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)的影响,以及对凝血酶活性的抑制作用,推测凝血酶可能是疏血通注射液抗凝作用的主要靶点。