Wnt-1、β-catenin在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的：Wnt-1和β-catenin分别作为Wnt／β-catenin信号通路中的信号分子及关键分子在多种肿瘤中异常表达,且与预后不良有关。本研究通过检测Wnt-1、β-catenin在鼻咽癌组织中的表达,探讨其与鼻咽癌临床预后的关系。方法：用免疫组化SP法检测111例鼻咽癌组织中Wnt-1、β-catenin蛋白的表达情况,分析其与鼻咽癌无复发生存率、无转移生存率和无进展生存率的关系。结果：111例标本中,β-catenin高表达64例（57．7％）,晚期鼻咽癌β-catenin的高表达率高于早期（63．1％VS40．7％,P=0．041）;β-catenin高表达组的无复发生存率、无转移生存率、无进展生存率均显著低于低表达组（P〈0．05）。多因素Cox回归模型显示β-catenin高表达与肿瘤进展有关。Wnt-1高表达68例（61．3％）,高表达组与低表达组的无复发生存率、无转移生存率、无进展生存率相比,两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：部分鼻咽癌中可能存在Wnt／β-catenin通路的异常活化,β-catenin可作为鼻咽癌的一个预后指标。     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP 1的表达

目的：探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况。方法：用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况。结果：免疫组化及Western bolt法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达。结论：人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关。     

胃癌组织β-catenin基因的表达

目的探讨βcatenin基因的表达与胃癌浸润转移的关系。方法应用免疫组化方法检测48例胃癌及癌旁组织βcatenin的表达。结果胃癌组织βcatenin的表达明显高于癌旁组织(P<0.01);低分化癌组织βcatenin表达较高、中分化组织高(P<0.01);浸润越深βcatenin表达越高(P<0.01);有淋巴结转移组织比无淋巴结转移的高(P<0.01)。结论βcatenin和胃癌的浸润、转移关系密切,对胃癌的预后可能具有重要意义。     

β-catenin,β-TRCP在肝癌和癌旁组织中的表达

目的：研究β-catenin、β-TRCP在肝细胞癌和癌旁组织中的表达特点及相互关系。方法：β-catenin和β-TrCP的表达是用免疫组化方法在石蜡包埋的肝癌和癌旁组织切片进行染色。结果：77％的肝癌中β-catenin呈明显阳性表达，其中51％呈过度表达。癌旁组织中表达较癌组织低，但表达水平与癌组织的表达水平成正相关。β-TRCP在肝细胞癌和癌旁组织中的表达基本一致，有20％表达减弱或缺失，其中18％为β-eatenin过度表达者。结论：β-catenin在癌旁组织中的表达水平与肝癌组织的表达水平有关。有18％的肝癌β-catenin过度表达可能是由于β-TRCP减弱或缺失造成。     

哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达

目的：构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。方法：从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析。结果：RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列;CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白。结论：成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白。     

CENPK基因过表达载体的构建及鉴定

[目的]构建着丝粒蛋白K (cetromere protein K,CENPK)基因过表达载体,并对其在肝癌FOCUS细胞中的表达进行鉴定.[方法]①从人肝癌组织中扩增出CENPK目的基因并将其克隆到pCMV-3Tag-3载体上,构建真核表达载体pCMV-CENPK;②利用脂质体法将构建好的pCMV-CENPK真核表达载体转染肝癌FOCUS细胞,并用G418筛选出CENPK基因稳定过表达的肝癌FOCUS细胞株;(③通过Real-time PCR及Western Blot的方法对筛选出来的细胞进行鉴定.[结果]①经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-CENPK.②通过Real-time PCR及Western blot的方法鉴定,CENPK基因在筛选出来的肝癌FOCUS细胞株中成功过表达.[结论]成功构建真核表达载体pCMV-CENPK并使其在肝癌FOCUS细胞中稳定过表达,为进一步研究CENPK基因在肝癌发生发展中的作用奠定了基础.     

β-catenin基因在乳腺癌中的表达和突变

 目的　探讨β-catenin基因在乳腺癌中的表达和突变情况。方法　应用免疫组织化学SP法检测119例乳腺癌、72例乳腺腺病和40例正常乳腺组织中β-catenin的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。应用PCR和基因测序的方法检测44例乳腺癌β-catenin外显子3的突变情况。结果　40例正常乳腺组织中β-catenin在细胞膜中强表达。乳腺癌β-catenin异常表达率78.15 %（93／119）明显高于乳腺腺病44.44 %（32／72）,组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）。β-catenin异常表达与淋巴结转移相关。44例乳腺癌组织中未检测到β-catenin基因外显子3的突变,β-catenin的异常表达率为77.30 %（34／44）。结论　β-catenin异常表达可作为评估乳腺癌转移预后、指导治疗的指标。乳腺癌组织中β-catenin异常表达不是由β-catenin基因突变所致,可能存在其他机制,有待于进一步研究。     

HSP90β干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在骨肉瘤细胞Saos-2中的表达

目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平。方法:设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体,酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功。重组病毒转染H1299细胞,以嘌呤霉素筛选稳定转染的Saos-2细胞,通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为干扰NC组（NEG-shRNA）、干扰组（shRNA-HSP90β）、过表达NC对照组（NEG-pEZ）及过表达组（pEZ-HSP90β）。通过qRT-PCR 与Western blotting 分别从mRNA 和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果:插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。病毒包装成功后,嘌呤霉素最小致死浓度1 μg/ml,感染复数200,感染人Saos-2的感染效率达80%,其中shRNA-HSP90β组干扰效率为86.35%,pEZ-HSP90β组的mRNA相对表达量增加2.8倍。进一步研究发现,shRNA-HSP90β组较NEG-shRNA组中HSP90β蛋白表达明显降低,pEZ-HSP90β组较NEG-pEZ组HSP90β蛋白表达增加。结论:HSP90β基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功,并能够在Saos-2中稳定表达。     

人Egr-1启动子调控的自杀基因真核表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞株中的放射诱导表达

[目的]构建由人Egr-1放射诱导性启动子调控的自杀基因靶向性真核表达载体,并转染人鼻咽癌细胞株CNE,比较射线诱导前后自杀基因在鼻咽癌细胞中的表达情况。[方法1根据Genebank数据库提供的人Egr—1启动子基因序列,设计-对引物克隆人Egr-1启动子,采用PCR、酶切、连接等分子生物学技术,构建pcDNA3．1（＋）-Egr-1-CD重组质粒表达载体,并利用脂质体转染方法转染人CNE细胞株,经G418筛选后获得阳性细胞克隆。RT—PCR分析鉴定0、5、10、15、20Gy放射剂量进行6MVX线照射对CD基因表达的影响。f结果1经PCR、酶切、测序等证实了pcDNA3．1（＋）-Egr．1．CD重组靶向性质粒表达载体构建成功,G418筛选所得到的CNE细胞阳性克隆经不同放射剂量的诱导后,RT—PCR结果显示体外放射线照射可显著提高CNE细胞中CDmRNA的表达水平,在10Gy及15Gy组CDmRNA的表达水平明显增高,尤以15Gy组CDmRNA的表达水平最高,在20Gy组CDmRNA的表达水平反而下降。[结论]pcDNA3．1（＋）-Egr-1-CD重组质粒表达载体构建成功,并成功转染人鼻咽癌细胞株．建立了基因表达与放射的剂量效应关系．为后续的临床应用研究奠定基础．     

广西人肝细胞癌β-catenin基因突变及蛋白表达

目的研究广西地区人肝细胞癌发生、发展过程中β-catenin基因突变和蛋白表达状况。方法采用PCR联合基因直接测序法,检测108例肝细胞癌癌组织中β-catenin基因的突变;同时采用免疫组化方法检测β-catenin蛋白的表达状况。结果 108例HCC癌组织中仅有12例发生β-catenin基因突变,突变率为11.1%。108例HCC癌组织中β-catenin蛋白阳性表达率为70.0%(75/108),其中14.6%(11/75)为细胞核阳性;57.3%(43/75)为细胞质阳性;28.0%(21/75)为细胞膜阳性。β-catenin蛋白在12例有突变的样本中表达阳性率为100%。结论广西地区肝癌中β-catenin基因突变率比较低;β-catenin基因突变可能为导致β-catenin蛋白过表达的因素之一,并参与了肝癌癌变过程。     

β-catenin在胃癌中的表达及意义

目的研究β-catenin的表达与胃癌的分化、浸润、淋巴结转移的相关性.方法通过免疫组化S-P法和抗β-catenin抗体,研究β-caenin在78例胃癌及正常胃粘膜上皮组织的表达.结果β-catenin在正常胃粘膜组织中表达正常,在早期胃癌及进展期胃癌组织中β-catenin正常表达率分别为70.0%、22.1%,β-catenin的表达与癌组织分化程度密切相关(P＜0.01),与浸润深度及淋巴结转移相关(P＜0.05).结论β-catenin异常表达是胃癌发生侵袭转移的分子机制之一,也是判断胃癌浸润转移的良好指标.     

乳腺癌组织β-catenin表达及与预后关系的分析

目的:分析β-catenin在乳腺癌组织中的表达特点及与预后的关系,以寻找新型的乳腺癌预后标志。方法:用组织芯片及免疫组织化学的方法检测β-catenin在213例乳腺癌组织中的表达,采用ROC曲线确定β-catenin表达高低的分界值,采用单变量及多变量分析β-catenin表达与乳腺癌预后的关系。结果:213例乳腺癌患者中,71.4%(152/213)为β-catenin高表达,28.6%(61/213)为β-catenin低表达;单变量分析显示,β-catenin高表达的患者总生存率(P=0.003)、无进展生存率(P=0.040)及无远处转移生存率(P=0.024)均低于β-catenin低表达的患者;多变量分析显示,β-catenin与乳腺癌患者总生存率(RR=5.961,95%CI:0.238～0.855,P=0.015)和无远处转移生存率(RR=3.888,95%CI:0.269～0.996,P=0.049)相关。结论:乳腺癌患者中β-catenin呈高表达,且表达越高预后越差。β-catenin可作为判断乳腺癌预后的一个新型、独立的指标。     

β-catenin在NSCLC中的表达和突变研究

目的 探讨β-连环素(β-catenin)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达和突变，及其与各临床病理因素和预后的关系。方法 采用免疫组化检测120例NSCLC标本β-catenin的表达情况，采用Western Blotting和直接测序法检测53例新鲜NSCLC标本β-catenin蛋白表达和基因突变情况。结果 高、中分化和低分化NSCLC中，β-catenin的异常表达率分别为69．2％和92．7％，差异有显著性(P=0．003)。有、无淋巴结转移NSCLC中β-catenin异常表达率分别为86．5％和69．6％，差异有显著性(P=0．044)。对53例肺癌及其自身正常肺组织Western Blotting检测结果进行灰度测定和分析，发现NSCLC中β-catenin的含量明显高于正常肺组织(t=2．935，P=0.005)。扩增53例标本β-catenin基因第3外显子进行直接测序未发现突变。结论 β-catenin的异常表达率与NSCLC的分化程度和有无淋巴结转移相关。β-catenin基因第3外显子的突变不是NSCLC中β-catenin蛋白异常表达的主要原因。     

携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞

目的 构建携带绿色荧光基因的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法 从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的ＥＢＶ潜伏膜蛋白2A（latent membrane protein 2A,LMP2A）序列,并定向克隆入pIRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞（实验组）,同时另设转染pIRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果 双酶切及测序鉴定证实真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论 成功构建了pIRES2-Zs-Green1- LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。     

siRNA抑制β-catenin表达在骨肉瘤MG63细胞系中的作用

背景与目的:β-catenin蛋白是WNT信号通路的核心蛋白,与多种肿瘤的发生相关,然而在骨肉瘤中所扮演的角色却仍未阐明.本研究通过抑制β-catenin基因在骨肉瘤细胞系MG63中的表达,探讨β-catenin对细胞的生长、凋亡及肿瘤侵袭等方面的作用.方法:设计合成β-catenin的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染入MG63细胞.采用RT-PCR和Western blot检测β-catenin在干扰后的mRNA和蛋白表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,CCK-8检测细胞增殖,transwe11法检测细胞侵袭能力.结果:RT-PCR和Western blot检测β-catenin mRNA和蛋白表达,实验组较对照组显著降低.细胞周期检测,实验组较对照组无明显差异(P＞0.05).但凋亡检测,实验组较对照组显著增加(P＜0.05).CCK-8法检测实验组较对照组略有降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).Transwell法结果显示,实验组侵袭能力显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:特异性干扰β-eatenin基因表达可抑制骨肉瘤侵袭能力,并促进肿瘤细胞凋亡.     

原发中枢神经系统淋巴瘤组织β-catenin的表达及其意义

目的 检测β-catenin在原发中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)患者组织中的表达.方法 收集2010年10月至2012年4月诊断为PCNSL的10例患者的蜡块组织(实验组),同时收集10例淋巴结炎患者的蜡块组织作为对照组.分别采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学方法检测β-catenin mRNA和蛋白的表达,分析其表达与临床病理因素的关系.结果 免疫组织化学显示β-catenin定位于细胞质和(或)细胞膜,10例PCNSL组织中阳性表达4例,相对于内参基因,目的基因相对表达量为4.70±0.57,对照组织中无阳性表达者,相对表达量为1.00±0.27,两组阳性率差异有统计学意义(P＜0.05).β-catenin的表达与患者年龄、功能状态(PS)评分、脑脊液蛋白水平和血清乳酸脱氢酶(LDH)水平无关(均P＞ 0.05).结论 无论在mRNA水平还是蛋白质水平,β-catenin在PCNSL组织中均高表达,且有细胞质内的表达,而淋巴结炎组织中无此种现象.     

直肠癌中β-catenin和survivin的表达意义及其相互关系

目的：探讨直肠癌中β-catenin和snrvivin的表达意义及相互关系.方法：应用免疫组化SP法检测60例直肠组织和20例癌旁正常粘膜组织中β-catenin和survivin的表达.结果：在20例正常组织中β-catenin均呈正常表达,survivin均呈阴性表达.直肠癌中β-catenin的异常表达率为66.7%,survivin的阳性表达率为61.7%.β-catenin的异常表达与性别、年龄、直肠癌的分化程度、5年生存率无关（P＞0.05）,与淋巴结转移显著相关（P＜0.01）.survivin的表达与性别、年龄、直肠癌的分化程度、淋巴结转移无关（P＞0.05）,与五年生存率显著相关（P＜0.05）,β-catenin的异常表达与survivin的表达在直肠癌中有显著的正相关性（P＜0.01,r=0.388）.结论：β-catenin异常表达可能是survivin激活的原因之一,并且在直肠癌的发生、发展过程中起着重要的作用.     

β-catenin的稳定表达促进调节性T细胞生存并诱导非条件性T细胞凋亡

β-catenin是Wnt信号通路的核心分子，具有介导细胞黏附及信号转导双重活性功能。Wnt信号通路在调节细胞生长和分化、胚胎发育过程中起重要作用，该通路的持续活化能加快细胞增殖和诱导凋亡抵抗。