磷酸钙作为佐剂应用在乙肝核酸疫苗中的可能性研究

目的：研究使用磷酸钙作为乙ＤＮＡ疫苗的佐剂,诱导机体免疫反应的可能性,方法：磷酸钙与疫苗ＤＮＡ制备出磷酸钙－ＤＮＡ共沉物,免疫小鼠,检测外周血抗体,观察免疫应答反应,结果：磷酸钙－ＤＮＡ共沉物能激发机体免疫应答反应。结论：佐剂在核酸疫苗的应用值得进一步研究。     

乙肝核酸疫苗NV—HB／s接种小鼠的免疫反应

目的：研究乙型肝炎核酸疫苗NV－HB／s经肌肉注射、皮下注射、转化伤寒杆菌CVD908后再经口服等不同途径接种小鼠后，小鼠产生体液免疫应答的规律，以及磷酸钙在提高核酸疫苗免疫能中的作用。方法用自制的乙肝核酸疫苗、佐剂化乙肝核酸疫苗及口服疫苗，以不同接种途径免疫小鼠，分别检测小鼠外周血中的HBsAg及抗HBs；肌肉组织标本中的 苗质粒以及C－myc mRNA。结果：肌注NV－HB／s 3天后，在接种部位检出了HBsAg;1月后外周血中检出了抗HBs。肌注与皮下注射对HV－HB／s的免疫效能无显著影响。口服接种所诱生的抗HBs阳转率及滴度低于肌肉注射与皮下注射。磷酸钙处理可降低核酸疫苗的用量，增加其安全性。结论：乙肝核酸疫苗NV－HB／s能有效地诱导小鼠产生抗HBs，在免疫后6个月内，质粒的注入未见癌基因的激活。     

乙肝核酸疫苗NV-HB/s接种小鼠的免疫反应

目的　研究乙型肝炎核酸疫苗 NV- HB/s经肌肉注射、皮下注射、转化伤寒杆菌 CVD90 8后再经口服等不同途径接种小鼠后 ,小鼠产生体液免疫应答的规律 ,以及磷酸钙在提高核酸疫苗免疫效能中的作用。方法用自制的乙肝核酸疫苗、佐剂化乙肝核酸疫苗及口服疫苗 ,以不同接种途径免疫小鼠 ,分别检测小鼠外周血中的HBs Ag及抗 HBs;肌肉组织标本中的疫苗质粒以及 C- m yc m RNA。结果　肌注 NV- HB/s 3天后 ,在接种部位检出了 HBs Ag;1月后外周血中检出了抗 HBs。肌注与皮下注射对 NV- HB/s的免疫效能无显著影响 ;口服接种所诱生的抗 HBs阳转率及滴度低于肌肉注射与皮下注射。磷酸钙处理可降低核酸疫苗的用量 ,增加其安全性。结论　乙肝核酸疫苗 NV- HB/s能有效地诱导小鼠产生抗 HBs;在免疫后 6个月内 ,质粒的注入未见癌基因的激活     

空肠弯曲菌CJ-S_(131)与佐剂诱发的自身免疫动物模型的优化

目的 通过对不同浓度空肠弯曲菌CJ-S_(131)诱发自身免疫动物模型的研究,进而探求一稳定可靠的自身免疫动物模型。方法 40只健康雌性ICR小鼠被随机分为4组,每组10只,分别用CJ-S_(131)低、中、高三种浓度加弗氏完全佐剂免疫小鼠,通过抗ds-DNA抗体、T、B淋巴细胞活性、病理切片检测观察组间区别。结果 中浓度CJ-S_(131)加弗氏完全佐剂免疫小鼠所得模型抗ds-DNA抗体、T、B淋巴细胞活性明显高于正常组和低、高浓度CJ-S_(131)组,肝组织产生炎性病理损伤最明显。结论 中浓度CJ-S_(131)加弗氏完全佐剂免疫小鼠所得模型最佳。     

ISCOMs作为粘膜免疫佐剂在避孕疫苗构建中的作用研究

目的探索有效提高避孕疫苗生殖道粘膜免疫的方法.方法将合成纯化的35多肽与皂甙QuilA、脂类混合物(等体积比的磷脂和胆固醇)以1∶4∶1比例混合,经充分透析后得到35肽-ISCOMs;将35肽-ISCOMs和35肽-弗氏佐剂混悬物分别免疫纯系BALB/c雌性小鼠,并比较免疫后小鼠生殖道内特异性IgA的动态变化以及小鼠生育力的变化.结果制备成功的35肽-ISCOMs在电镜下可见明显的、较规则的蜂巢样结构;35肽-ISCOMs免疫组IgA抗体在第10周时达最高值(1∶600),约持续4周左右;而35肽-弗氏佐剂组IgA抗体在第14周时达最高值(1∶300),约持续1周左右;35肽-ISCOMs免疫后小鼠的受孕率(14.3%)显著低于35肽-弗氏佐剂免疫组(60.0%).结论 ISCOMs可以显著提高抗原在生殖道内的粘膜免疫效应,增强抗生育作用,是一种极富潜力的粘膜免疫佐剂.     

日本血吸虫HGPRT重组抗原与不同佐剂联合应用对小鼠免疫保护作用的研究

目的:观察日本血吸虫(大陆株)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl-transferase, HGPRT)重组抗原(reSjc HGPRT)与ISA206或弗氏佐剂联合免疫对小鼠诱导抗日本血吸虫感染的保护作用. 方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:reSjc HGPRT加ISA206佐剂免疫组、reSjc HGPRT加弗氏佐剂组、ISA206佐剂对照组、弗氏佐剂对照组和感染对照组.20 μg重组抗原和ISA206或弗氏佐剂乳化后小鼠项背部多点皮下注射,共免疫3次,每次间隔2周.佐剂对照组小鼠仅注射ISA206或弗氏佐剂和生理盐水,感染对照组不注射任何重组抗原或生理盐水.于末次免疫后3周,每只小鼠经腹部皮肤感染(30±1)条日本血吸虫尾蚴,6周后剖杀小鼠,门脉灌注收集成虫,计数成虫数、雌雄合抱数和小鼠肝组织虫卵数.在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前分别采血并分离血清,用ELISA检测血清中特异性IgG抗体. 结果:重组抗原加ISA206佐剂或弗氏佐剂免疫组均诱导小鼠产生特异性IgG抗体应答,与感染对照组和弗氏佐剂对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);诱导小鼠产生的减虫率、减雌雄合抱率和肝组织减卵率分别为53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%,与感染对照组和2种佐剂对照组相比均有统计学意义(P<0.05).结论:reSjc HGPRT与ISA206或弗氏佐剂联合免疫,可诱导小鼠产生抗血吸虫感染保护作用.     

L.casei Zhang PG对鸡新城疫疫苗免疫协同作用的研究

目的了解干酪乳杆菌（L.casei Zhang）肽聚糖（peptidoglycan,PG）作为新城疫疫苗佐剂对免疫鸡血清中HI抗体、IgG及T淋巴细胞转化率的影响。方法把L.casei ZhangPG作为佐剂和弗氏完全佐剂分别添加到鸡新城疫疫苗里,制成L.casei Zhang PG佐剂鸡新城疫疫苗和弗氏完全佐剂鸡新城疫疫苗后,分别使小鸡致免;二免后每周采样,连续采6周后检测其血清中的HI抗体效价、IgG含量以及鸡脾脏中T淋巴细胞的转化率。结果 L.casei ZhangPG佐剂组鸡血清中HI抗体效价、IgG含量均显著提高,鸡脾脏中T淋巴细胞转化率也明显提高。结论 L.casei ZhangPG是鸡新城疫疫苗的良好佐剂。     

L．casei Zhang肽聚糖对禽流感疫苗的佐剂作用

目的探讨干酪乳杆菌肽聚糖作为佐剂对禽流感疫苗的免疫协同作用。方法从干酪乳杆菌细胞壁提取肽聚糖,并将其与禽流感疫苗混合后致免小鸡。予加强免疫后,每周采样,连续6周。检测鸡血清中的HI抗体效价、IgG含量以及鸡脾脏中T淋巴细胞的转化率。同时与添加弗氏完全佐剂的禽流感疫苗组进行对比,观察其佐剂效应。结果注射干酪乳杆菌肽聚糖组鸡血清中HI抗体效价、IgG含量均显著提高,鸡脾脏中T淋巴细胞转化率也明显提高。结论干酪乳杆菌肽聚糖能增强机体相应的体液免疫应答和细胞免疫应答能力,具有良好的免疫佐剂效应。     

一种新纳米乳作为流感疫苗佐剂的效果

目的 筛选有佐剂效果的纳米乳新配方,并从稳定性、粒径大小、载水范围、佐剂效果与安全性等方面评价其作为疫苗佐剂的可行性。方法依据伪三元相图筛选出能被水大量稀释的配方,测定基本性质如pH,黏度,粒径,长期保存或离心条件下是否保持稳定等。将其做为佐剂与流感疫苗混合进行动物实验。25只ICR小鼠随机分为生理盐水组、单独疫苗组、铝佐剂对照组、弗氏佐剂组和纳米乳佐剂组,每组5只,经大腿腓肠肌注射流感H3N2裂解疫苗。第三周加强免疫一次,初次免疫后一周内观察各组小鼠的体重变化,每周收集血清以检测血凝抑制抗体的效价,用SPSS18.5软件分析比较各组小鼠产生的抗体水平。最大给药量实验评价其安全性。结果该纳米乳理化性质稳定,pH值为7.5,黏度与水接近,平均粒径为56.3 nm,离心及长期保存不破乳。纳米乳佐剂组小鼠能产生更高水平的血凝抑制抗体,在0.25 mg/10 g给药量下无小鼠死亡。结论该纳米乳配方作为流感疫苗佐剂具有良好的稳定性、安全性及佐剂效果。     

不同佐剂及免疫法对五步蛇毒类毒素产生免疫能力的影响

应用蚁醛含量渐增法使五步蛇毒脱毒为类毒素。将类毒素分别与等量的不同佐剂混合用以免疫豚鼠,均可使动物获得强固免疫力。不同佐剂类毒素的免疫力比较试验表明,美粘土及弗氏不完全佐剂类毒素免疫的豚鼠,其免疫力要比磷酸铝佐剂类毒素组为优越。美粘土组免疫动物的局部和全身反应均较轻微,但弗氏不完全佐剂组的注射局部易产生硬结。应用美粘土佐剂类毒素免疫豚鼠,皮下注射三次,每次间隔四周,总剂量为35mg 类毒素。免疫动物可抵御18—24mg 五步蛇毒,相当于对体重300—400克豚鼠的6—8MLD 毒量。免疫豚鼠每毫升血清所含蛇毒抗毒素,可中和700微克五步蛇毒,相当于对体重20克小鼠腹腔注射8.75LD50毒量。免疫血清的抗五步蛇毒沉淀素效价为1:20000—1:40000。     

基因乙肝疫苗接种母鸡的体液免疫应答

目的：探讨基因乙肝疫苗对母鸡免疫效果的影响。方法：用基因乙肝疫苗辅以佐剂皮下注射母鸡，随后加强免疫4次，用ELISA方法检测血清中抗－HBs。结果：在初次免疫母鸡血清中检出低滴度抗体，加强免疫后，抗体水平显著上升，滴度高达1：640，并维持较长时间，其抗体水平及抗体应答持久性与注射次数与注射途径有关。此外，用乙肝疫苗加佐剂比单用乙肝疫苗免疫效果明显要好。结论：应用基因乙肝疫苗能够诱导母鸡产生针对HBsAg的特异性体液免疫应答。     

枸杞多糖作为甲型肝炎疫苗佐剂免疫效果的实验研究

目的：探讨枸杞多糖（LBPS）作为甲型肝炎（HAV）疫苗佐剂的效果.方法：设HAV含铝佐剂疫苗阳性对照组、HAV不含任何佐剂的抗原阴性对照组、生理盐水空白对照组、LBPS（20mg、10mmg、5mg）3个剂量分别与HAV含铝佐剂疫苗联合、分别与HAV不含任何佐剂的抗原联合成6个实验组免疫小鼠,于免疫后4周、8周、12周、16周、20周尾静脉采血,ELISA法检测小鼠血清抗-HAVIg水平.结果：LBPS 10mg剂量作为HAV疫苗佐剂免疫效果最佳,与阳性、阴性对照组比较差异均有显著性意义.结论：LBPS与铝佐剂有相似的疫苗佐剂效果,且与铝佐剂合用有佐剂协同作用.     

CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应

目的：探讨CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应。方法：培养Eca-109细胞,用酸洗法收集细胞膜表面小肽,再用去盐、浓缩、超滤法纯化这些小肽后,以此刺激人外周血树突状细胞（DC）作为人食管癌疫苗,不用小肽刺激的DC作为对照疫苗,并用这些疫苗加佐剂CpG基序激活纯化的T细胞。实验分组：①CpG基序加食管癌疫苗组（CpG—Ve）;②CpG基序加食管癌对照疫苗组（CpG—Vc）;③单纯食管癌疫苗组（Ve）;④单纯食管癌对照疫苗组（Vc）;⑤单纯CpG基序刺激组;⑥直接用纯化的T细胞加Eca-109细胞作效应对照组。用^3H渗入法对各组行T细胞增殖试验,用^51Cr释放试验测定各组细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的活性。结果：CpG-Ve组的T细胞增殖活性和CTL对Eca-109细胞杀伤率均高于其余各组（P〈0．01）。结论：CpG基序可能是人食管癌疫苗研究中的有效佐剂。     

A two-dose combined vaccine against hepatitis A and hepatitis B in healthy children and adolescents compared to the corresponding monovalent vaccines

BACKGROUND: Immunization against hepatitis A and B has been available for some time, protecting against both infections. With a view to achieving further reduction in the number of interventions and increasing convenience of the vaccinee, we investigated the reactogenicity and immunogenicity of a combined hepatitis A and B vaccine in healthy 4- to 20-year-old subjects at a 0, 6-month schedule. METHODS: Two hundred forty-eight study subjects were allocated to two study groups and received either two doses of the combined hepatitis A and B vaccine (68% of subjects) or the corresponding monovalent hepatitis A and hepatitis B vaccines (32% of subjects) concomitantly in opposite arms. Reactogenicity was assessed via diary cards after each vaccination. Serum samples were analyzed at months 1, 2, 6, and 7. RESULTS: All vaccines were well tolerated and very few symptoms were scored as severe. All but one subject seroconverted for anti-hepatitis A virus (anti-HAV) antibodies (98.6%) and 100% of subjects seroconverted for anti-hepatitis B (HBs) antibodies, with respective seroprotection rates of 98.7% for the combined vaccine group and 95.9% for the concomitant vaccine group (p >0.05), respectively. Geometric mean titers were higher in the group receiving the combined vaccine: 6,635 mIU/mL vs. 2,728 mIU/mL (p = 0.0001) for anti-HAV and 3,362 mIU/mL vs. 1,724 mIU/mL (p = 0.0205) for anti-HBs, respectively. Younger subjects had a stronger immune response compared to older subjects. CONCLUSIONS: The combined hepatitis A and B vaccine was well tolerated at this two-dose schedule. The combined vaccine had higher immunogenicity, probably explained by a adjuvant effect of the antigens. Vaccination programs requiring fewer injections will most likely have a positive impact on compliance rate and comfort of the vaccinee.     

柚皮素增强乙肝疫苗免疫效果的探讨

目的探讨柚皮素作为佐剂增强HBV疫苗的体液免疫效果。方法用柚皮素作为免疫佐剂免疫Balb/c小鼠,以佐剂铝盐作为阳性对照,在免疫3次后取小鼠血清做ELISA检测HBsAb滴度,比较各组的免疫效果。结果与无佐剂组小鼠对比,柚皮素和铝盐作为佐剂均可有效地引起小鼠对HBsAg的体液免疫应答。结论柚皮素可以增强乙肝疫苗的免疫效果,和铝盐相比没有统计学意义。     

GRANULOCYTE MACROPHAGE COLONY STIMULATING FACTOR IMPROVES IMMUNOGENECITY OF HEPATITIS B VACCINE IN HEMODIALYSIS PATIENTS

Only 20–50% of hemodialysis patients, develop protective antibodies following double dose Hepatitis B vaccination. Early reports suggest augmented response with concomitant use of Granulocyte macrophage colony stimulating factor (GMCSF). This study was done to assess the response rate to hepatitis B vaccine in hemodialysis patients with use of GMCSF. Seventeen patients were included in study, all received 40 mcg of hepatitis B vaccine at 0,1 and 2 months. Ten of these received 150 mcg of GMCSF with each dose of vaccine while 7 were taken as controls. Only one patient from control group (14.3%) while 5/10 (50%) patients from GMCSF group, developed protective antibodies, i.e. anti HBS titres > 10miu/ml (p < 0.05). Present study shows the beneficial effect of GMCSF when used as adjuvant with hepatitis B vaccine, in hemodialysis patients.KEY WORDS: GMCSF, Hepatitis B vaccine, Hemodialysis patients     

树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

目的 探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响.方法 按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降.同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组.并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异.结论 通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性.     

赖型钩体flaB2与VR1012中的CpG基序分析

目的：对问号赖型钩端螺旋体（赖型钩体）DNA疫苗[包括内鞭毛蛋白基因（flaB2)和质粒DNA表达载体（VR1012）]的CpG基序（CpG motifs)进行分析，为DNA疫苗免疫机制的阐明和提高DNA疫苗的效能奠定基础。方法：以flaB2与VR1012构建重组DNA的免疫原，对flaB2及VR1012全核苷酸序列进行计算机分析（分类、计数和定位）。结果：CpG的“C”的侧翼为两个嘌呤，“G”的侧翼为两个嘧啶，在flaB2中共3个，分别为GACGCT，GACGTC和GACGCC；在VR1012中共11个，分别为GACGTC1个，GACGCT2个，GACGCC1个，GACGTT1个，GGCGTT2个，GGCGCT2个，GGCGCC1个，AACGCT1个，其中特别重要的TGACGTCA4个和TAACGCCA有1个，位于5'端456－463；509－516；592－599；778－785和486－493；4个TGACGTCA和1个TAACGCCA均位于5'端且相对集中。结论：赖型钩体flaB2与VR1012构成的DNA疫苗含有TGACGTCA等CpG，这些基序又称免疫刺激序列，构成了DNA疫苗中的佐剂。     

The safety of the hepatitis B vaccine. Inactivation of the AIDS virus during routine vaccine manufacture

In the United States, one hepatitis B vaccine (Heptavax-B) has been licensed for the prevention of hepatitis B virus infections. Even though this vaccine has been shown to be highly effective and well tolerated in controlled trials and has been recommended for use in those at risk for acquiring infection by hepatitis B virus, many individuals have been reluctant to be immunized for fear of contracting acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). In this study, we demonstrate that each of the three inactivation steps used in the manufacture of Heptavax-B independently will inactivate the infectivity of high-titered preparations of the AIDS virus; recipients of the hepatitis B vaccine do not develop antibodies to the AIDS virus; the hepatitis B vaccine does not contain detectable levels of nucleic acids related to the AIDS virus. These observations clearly demonstrate that vaccination with the currently available hepatitis B vaccine poses no demonstrable risk for acquiring AIDS.     

吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂联合铝佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效应分析

目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂联合对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其复合佐剂效应.方法 分别将三种不同剂量的INCB024360类似物(150 μg,100 μg,50 μg)与Al(OH)3(300 μg)复合后与HepA-1共同免疫ICR小鼠分别作为复合佐剂1组,2组,3组,同时设空白对照组、单纯疫苗组、铝佐剂对照组和单一INCB024360类似物(100 μg)组,共免疫一次,于免疫后4周、8周、12周、16周进行尾静脉采血,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗甲型肝炎病毒(HAV) IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,各组小鼠免疫后4周、8周、12周、16周,均产生抗HAV IgG抗体,抗体水平随免疫时间的延长逐渐升高,于12周达到峰值.复合佐剂2组[HepA-118 EU+Al(OH)3 300 μg+INCB024360类似物100 μg]产生的抗体水平最高且持续时间较长,在8周和12周时,其对HepA-1的免疫增强效应显著高于单一佐剂组以及铝佐剂对照组(P＜0.05,t值分别为3.169、2.439).4周、8周、12周、16周,单一佐剂组与单纯疫苗组差异均不具有统计学意义(P＞0.05).结论 IDO抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂复合后具有较强的复合佐剂效应,免疫增强效应优于铝佐剂对照组;但是单一的INCB024360类似物不具有显著佐剂效应.