补中益气汤干预肺腺癌A549细胞移植瘤Wnt/β-catenin信号通路对顺铂敏感性的影响

目的 探讨补中益气汤干预肺腺癌A549细胞移植瘤Wnt/β-catenin信号通路对顺铂敏感性的影响。方法 体外培养A549细胞，接种于BALB/cnu裸鼠腋窝皮下，8 d成瘤，隔天开始分别给予低剂量(1.46 g/kg)、中剂量(2.91 g/kg)、高剂量(5.82 g/kg)补中益气汤治疗25 d。30只裸鼠随机分为5组：对照组、顺铂组、顺铂+低剂量补中益气汤组、顺铂+中剂量补中益气汤组、顺铂+高剂量补中益气汤组。测量移植瘤质量并计算药物抑瘤率；Western印迹检测细胞质中p-糖原合成激酶(GSK)-3βser9、p-GSK-3βtyr216、GSK-3β蛋白的表达；实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法检测移植瘤组织β-catenin、Survivin蛋白的表达。结果 给药25 d后，顺铂联合不同剂量补中益气汤使移植瘤质量均显著缩小(P<0.05),抑瘤率均显著增加(P<0.05),且呈剂量依赖性。与对照组相比，顺铂联合不同剂量补中益气汤组可显著下调移植瘤细胞质p-GSK-3βser9蛋白的表达(P<0.05),并显著下调β-catenin、Sur...     

VEGFR-3小干扰RNA对结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究血管内皮生长因子受体3(vascularendothelial growth factor receptor 3,VEGFR-3)小干扰RNA对结肠癌细胞移植瘤模型生长的影响.方法:构建VEGFR-3小干扰RNA表达载体.将结肠癌LoVo细胞注射入裸鼠皮下建造裸鼠移植瘤模型.将15只裸鼠结肠癌模型随机分成3组:实验组(pG-siRNA/VEGFR-3重组质粒)、阴性对照组(pG-HK重组质粒)与空白对照组.分别瘤体内注射相应的siRNA混合物或转染剂混合液,每3 d注射1次,共注射3次,观察肿瘤体积的变化;6 wk后处死裸鼠,肿瘤称取质量,并进行qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化,通过免疫组织化学进行微淋巴管计数.结果:实验组移植瘤体积和质量明显小于阴性对照组和空白对照组,有显著的统计学意义(P<0.001).实验组抑制率为52.75%,与对照组相比,差异有显著(P<0.001).qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化比较,实验组有明显降低(P<0.001).实验组淋巴管计数较对照组差异显著(P<0.05).结论:VEGFR-3 siRNA可以抑制裸鼠结肠癌细胞移植瘤的生长,并减少裸鼠移植瘤淋巴管生成,能有效抑制结肠癌细胞的生长.     

吲哚美辛联合奥沙利铂对人肺癌A549细胞株裸鼠移植瘤微淋巴管生成的影响及其化疗增敏作用

目的 研究非甾体抗炎药物吲哚美辛与化疗药物奥沙利铂对人肺癌A549细胞株裸鼠移植瘤微淋巴管生成的影响及化疗增敏作用.方法 将人肺癌A549细胞接种于裸鼠背部皮下,将裸鼠按随机数字表法分为4组:对照组、吲哚美辛组、奥沙利铂组、吲哚美辛和奥沙利铂联合用药组,并给予相应的药物.观察裸鼠生长情况,每7天测量1次肿瘤体积.42 d后处死裸鼠,切取移植瘤组织,用免疫组织化学染色法检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)、β-连环素及生存素蛋白的表达,并测定微淋巴管密度,用实时荧光定量PCR检测VEGF-C mRNA及生存素mRNA的表达.用SPSS 16.0软件进行统计学分析,实验数据以((-x)±s)表示.多组间比较用方差分析,多组样本均数两两比较采用SNK检验,两变量的相关程度采用直线相关分析.结果 (1)吲哚美辛组、奥沙利铂组和联合用药组治疗后移植瘤体积分别为( 1322±327) mm3、(962 ±221) mm3和(611±161) mm3,低于对照组的(1664 ±318) mm3(F=23.33,P＜0.01);(2)吲哚美辛组和联合用药组VEGF-C、生存素、β-连环素蛋白的表达及微淋巴管密度积分吸光度值均低于对照组(均P＜0.05).奥沙利铂组VEGF-C蛋白含量(20 825±2067)高于对照组(16 075±875,F=97.24,P＜0.05),β-连环素蛋白和微淋巴管密度( 17 396±1693,9666±978)与对照组(9824±1181,17 588±1698)比较无明显差异;(3) VEGF-C蛋白、生存素蛋白与微淋巴管密度呈直线正相关(r值分别为0.737和0.662,均P＜0.01),β-连环素蛋白与生存素蛋白呈直线正相关(r =0.582,P＜0.01),VEGF-C mRNA的表达与其蛋白表达呈直线正相关(r =0.873,P＜0.01).结论 吲哚美辛与奥沙利铂联合应用可提高抗肿瘤及抗微淋巴管生成作用,其作用机制可能是协同抑制了VEGF-C/VEGF受体3和Wnt信号途径.     

南蛇藤乙酸乙酯提取物对荧光蛋白标记的HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 建立裸鼠原位人荧光蛋白肝癌移植瘤模型,采用活体荧光成像技术研究南蛇藤乙酸乙酯提取物对人肝癌生长的抑制作用.方法 BALB/c裸鼠肝脏接种荧光蛋白标记的人肝癌细胞(RFP-HepG2),建立肝癌动物模型并随机分为空白对照组(G1组)、奥沙利铂阳性对照组(G2组,25mg/kg)、南蛇藤小剂量治疗组(G3组,20mg/kg)、南蛇藤大剂量治疗组(G4组,40mg/kg)和南蛇藤预防治疗组(G5组,20mg/kg).治疗组自RFP-HepG2细胞接种第20天开始用药,每日给药1次,连续4周.奥沙利铂尾静脉注射给药,南蛇藤灌胃给药,G1组用等渗盐水替代.G5组自RFP-HepG2细胞接种第2天开始给药至治疗结束.活体荧光影像技术追踪肿瘤生长情况,测量移植瘤体积;治疗结束后切除肿瘤并称重.组间肿瘤体积和质量比较用t检验.结果 RFP-HepG2细胞接种第31天的影像扫描结果提示各组移植瘤体积出现差异,第45天达高峰,G1、G2、G3、G4、G5组的移植瘤体积分别为(803.1±512.3)mm3、(83.8±23.5)mm3、(852.7±502.6)mm3、(410.0±231.6)mm3、(120.5±60.1)mm3;G5组肿瘤体积较G1组明显减小(t=3.723,P＜0.01),与G2组间的差异无统计学意义(t=0.163,P＞0.05);G4组与G1组间的差异无统计学意义(t=2.156,P＞0.05),且均明显大于G2组(t=4.526,P＜0.05).G1、G2、G3、G4、G5组瘤体质量分别为(0.95±0.49)g、(0.36±0.09)g、(0.67±0.29)g、(0.48±0.15)g、(0.38±0.11)g;G2、G4和G5组瘤体质量明显小于G1组(t值分别为3.371、2.774和2.901,P值均＜0.05),G4组和G5组与G2组间差异无统计学意义(t值分别为1.735、0.259,P＞0.05),而G3组瘤体质量则明显高于G2组(t=2.684,P＜0.05).结论 大剂量南蛇藤对移植瘤具有明显的抑制作用,疗效稍低于奥沙利铂;预防用药组肿瘤的生长速度明显减弱,其作用与奥沙利铂相当.     

康莱特注射液与光动力疗法联合治疗大鼠胰腺移植瘤

目的 探讨康莱特注射液与光动力疗法(PDT)联合应用对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的抑制作用.方法 将人胰腺癌细胞株SW1990移植至裸鼠皮下制备皮下移植瘤模型.60只荷瘤鼠按随机数字法分为6组:对照组,不予任何治疗;康莱特1组,激光照射前一天开始从尾静脉注射康莱特注射液1.25 g/kg体重,连续10 d;康莱特2组,同上法注射康莱特注射液2.5 g/kg体重;光动力(PDT)组,腹腔内注射Photosan 2 mg/kg体重,48 h后予激光照射;联合1组,治疗方法采用康莱特1组+PDT组;联合2组,治疗方法为康莱特2组+PDT组.每组10只.每周2次测量肿瘤大小.PDT后14 d处死动物,取瘤块称重,计箅抑瘤率.结果 对照组、康莱特1组、康莱特2组、PDT组、联合1组和联合2组治疗后14 d的瘤体积分别为(550.08±52.46)mm3、(519.71±46.44)mm3、(405.29±38.67)mm3、(199.27±37.37)mm3、(107.47±14.13)mm3和(75.58±12.53)mm3;瘤重分别为(0.82±0.08)g、(0.77±0.06)g、(0.61±0.06)g、(0.41±0.05)g、(0.28±0.04)g和(0.16±0.04)g.2个联合组的肿瘤体积和瘤重明显小于其他各组(P＜0.05);联合1组抑瘤率从PDT组的50%上升到65.9%,联合2组上升到80.5%.结论 康莱特与PDT联合应用可明显抑制移植瘤体积,有协同增效作用.     

RPL31-siRNA对人胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的:研究siRNA沉默糖体蛋白L31(ribosomal protein L31,RPL31)对人胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,探讨RPL31基因在胰腺癌中可能的作用机制.方法:设计合成靶向人RPL31基因的siRNA及阴性对照siRNA;建立人胰腺癌BxPC-3细胞的Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型,按照移植瘤体积随机化分为3组:溶剂对照组、阴性对照组及RPL31-siRNA干预组;使用RNAi-Mate转染试剂将RPL31-siRNA进行移植瘤瘤内注射,观察各组裸鼠体内瘤体生长速度,绘制肿瘤生长曲线;采用实时定量PCR及Western blot的方法检测移植瘤组织RPL31基因的表达;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测裸鼠皮下移植瘤Ki-67及CD31的表达;原位末端标记技术(TUNEL)检测移植瘤组织的细胞凋亡.结果:与溶剂对照组和阴性对照组相比,RPL31-siRNA注射组裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,移植瘤体积明显缩小,差异具有统计学意义(P<0.05);移植瘤组织中RPL31基因的mRNA水平和蛋白水平表达下调;另外,RPL31-siRNA注射组裸鼠移植瘤中Ki-67表达下调(55.78%±4.63%、51.37%±5.05%vs11.08%±1.31%),CD31的表达下调(56.53%±6.03%、44.84%±5.24%vs9.67%±1.39%);RPL31-siRNA注射组裸鼠移植瘤细胞凋亡增加(2.92%±0.54%、3.85%±0.87%vs39.58%±4.02%).结论:RPL31-siRNA可以下调胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤中RPL31基因的表达,抑制移植瘤的生长,并且还可以抑制移植瘤中Ki-67及CD31的表达,诱导移植瘤细胞的凋亡.以RPL31为靶点的基因治疗有潜在临床应用前景.     

Slug-siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌的抑制作用

目的: 研究携带Slug-siRNA的rAAV对裸鼠体内胰腺癌的作用.方法: 建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,2wk后随机将建模成功的裸鼠分为3组,每组6只. 构建携带Slug-siRNA的rAAV载体,采用瘤体内多点注射的方法,阴性对照组裸鼠按1×109 puf(50 μL)标准注射rAAV-EGFP,空白对照组裸鼠注射等量生理盐水,实验组裸鼠按1×109 puf(50 μL)标准注射rAAV2-EGFP-slugsiRNA,只注射1次. 观察裸鼠的一般情况,摄食,活动能力,每周用电子天平秤体质量,绘制裸鼠生长曲线. 治疗6 wk后二氧化碳吸入法处死裸鼠,切取肿瘤称质量;免疫组织化学SP法检测slug蛋白的表达,TUNEL检测皮下移植瘤细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构.结果: 3组裸鼠分别接受不同的处理后,在开始的2 wk皮下移植瘤的生长无明显差别,2 wk以后,实验组裸鼠皮下移植瘤的体积增长明显滞后于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义( P<0.05). 治疗6 wk后,实验组裸鼠皮下移植瘤的质量明显轻于阴性对照组和空白对照组差异有统计学意义(3.26±0.48 g vs7.56±1.25 g,7.50±1.23 g,均P<0.05). 实验组裸鼠皮下移植瘤的AI值明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(0.27±0.06vs 0.024±0.01,0.025±0.01,均P<0.05);实验组的抑瘤率明显高于阴性对照组,差异有统计学差异(71.4% vs 0.04%,P<0.01). 透射电镜下,实验组肿瘤细胞可见细胞器结构模糊,核固缩,染色质边集等现象. 免疫组织化学检测示实验组Slug表达明显减少.结论: Slug基因被有效沉默,Slug基因沉默后促进细胞凋亡,抑制胰腺癌实体瘤增殖和生长.     

褪黑素对小鼠皮下移植性胰腺癌的作用

目的 探讨褪黑素(MT)对Balb/c裸鼠胰腺癌皮下移植瘤的治疗作用.方法 建立Balb/c小鼠皮下胰腺癌移植瘤模型,分别用生理盐水(对照组)、低剂量MT(10 mg·kg-1·d-1)、高剂量MT(20 mg·kg-1·d-1)、吉西他滨(GEM,50 mg·kg-1·d-1)及GEM+高剂量MT(联合)干预,定期测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,并用MTT法检测小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)活性.结果 对照组移植瘤体积为(1.476±0.075)cm3,低剂量MT组、高剂量MT组、GEM组和联合组的移植瘤体积分别为(0.998±0.112)cm3、(0.756±0.128)cm3、(0.746±0.115)cm3和(0.305±0.111)cm3,较对照组显著缩小(P值均<0.01),并且高剂量MT组移植瘤体积较低剂量MT组小,联合组移植瘤体积最小.对照组NK细胞的杀伤活性为(18.07±1.23)%,低剂量MT组、高剂量MT组和联合组NK细胞的杀伤活性分别为(44.27±3.19)%、(45.16±3.20)%和(30.29±2.91)%,较对照组显著增强(P值均<0.01);GEM组NK细胞的杀伤活性为(14.24±2.70)%,较对照组显著减弱(P<0.05),而联合组NK细胞的杀伤活性显著高于GEM组(P<0.01).结论 MT能增强荷瘤裸鼠的免疫功能,抑制移植性胰腺癌的生长,与吉西他滨联合应用,则肿瘤抑制作用更强.     

鸟苷酸环化酶C基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响

目的:探讨鸟苷酸环化酶C(GC-C)基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响及其机制.方法:将SGC-7901细胞(SGC-7901组)、空质粒转染的细胞(PRNA组)、GC-C基因稳定沉默的细胞(GC-C-shRNA组)悬液先在裸鼠皮下接种成瘤,再取瘤组织块分别接种到裸鼠皮下,建立3种胃癌裸鼠皮下种植瘤模型.观察裸鼠一般情况、肿瘤的成瘤率、生长速度,描绘肿瘤的生长曲线,计算肿瘤的抑瘤率;采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR),Western blot和免疫组织化学法检测GC-C和趋化因子受体4(CXCR4)在各组移植瘤组织中的表达.结果:与SGC-7901组和PRNA组比较,GC-C-shRNA组裸鼠移植瘤生长速度明显减慢、体积明显变小(抑制率分别为33.7%、33.2%),肿瘤异型性、坏死程度明显降低,差异具有统计学意义(均P<0.05),且移植瘤组织中GC-C和CXCR4 mRNA和蛋白均明显下调(GC-CmRNA:7.47±1.70 vs 11.18±0.60,11.28±0.85;GC-C蛋白:0.52±0.15 vs 1.04±0.19,1.03±0.24;CXCR4蛋白:0.67±0.13 vs 1.02±0.21,1.03±0.23,均P<0.05).结论:GC-C基因稳定沉默在体内能保持稳定,且能抑制裸鼠移植瘤生长,该过程可能与CXCR4下调有关.     

肠胃清方对人结肠癌HCT116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤miR-30a/Beclin1通路的影响

目的本课题旨在分子生物学技术和中医基础理论指导下,从miRNAs与自噬相关联的角度,讨论miR-30a与自噬基因Beclin1在结肠癌化疗耐药中的相关性,并探讨肠胃清对miR-30a介导自噬的调控作用及逆转结肠癌耐药的分子机制.方法建立人结肠癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株HCT116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白组、L-OHP组、肠胃清方组、肠胃清方低剂量+L-OHP组、肠胃清方高剂量+L-OHP组.治疗结束后采用RT-PCR、免疫组织化学、Tunnel等研究肠胃清对瘤体组织中miR-30a、Beclin1、LC3的表达及细胞凋亡的影响.结果奥沙利铂组可见Beclin1、LC3的上调,miR-30a的下调,细胞凋亡的减少.而肠胃清联用奥沙利铂组可见Beclin1、LC3的下调,miR-30a的上调,细胞凋亡的增加(P0.05或P0.01).结论奥沙利铂诱导保护性自噬导致细胞凋亡减少可能是其耐药的机制.肠胃清可通过调控miR-30a/Beclin1通路而抑制自噬逆转结肠癌耐药.     

敲除NOR1基因对人肝癌裸鼠移植瘤的影响及作用机制

目的 探究敲除NOR1基因后对人肝癌裸鼠移植瘤生长、存活率及器官损伤的影响。 方法 SPF级雄性BALB/C裸鼠30 只随机分为Control组(n=10)、Scramble组(n=10)、siNOR1组(n=10),构建阴性对照质粒 (Scramble)和 siNOR1质粒转染至HepG2细胞并接种至裸鼠构建移植瘤裸鼠模型。连续30 d每5 d检测裸鼠移植瘤组织体积;检测移植瘤重量;免疫组化检测Ki-67、Caspase-3、Notch、NOR1表达情况;Western Blot检测Survivin、Notch1、NICD、Hes1、Hey1蛋白表达量情况,HE染色观察肝、肾、肺、脑病理损伤程度。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;生存分析采用Kaplan-Meier法,生存率的比较采用log-rank检验法。结果 从建模第20天开始,与Control组相比,siNOR1组第20、25、30 天移植瘤体积显著减小[(418.71±78.24)mm3 vs (149.6.16±60.05)mm3、(864.22±125.66)mm3 vs (239.83±100.51)mm3、(1468.45±199.78) mm3 vs (446.54±147.09) mm3,P值均<0.05];第30天时取出移植瘤,与Control组相比,siNOR1组移植瘤质量显著减小[(0.45±0.07)g vs (0.12±0.04)g,P<0.05];与Control组相比,siNOR1组移植瘤组织中Ki-67、Notch、NOR1阳性表达率显著降低[Ki-67:(48.98±9.75)% vs (11.51±5.09)%, Notch: (62.51±9.26)% vs (18.75±4.61)%,NOR1:(76.33±8.31)% vs (16.57±3.76)%, P值均<0.05],Caspase-3阳性表达率显著升高[(6.39±4.67)% vs (38.03±9.28)%, P<0.05];siNOR1组模型裸鼠30 d内生存率显著高于Control组[(77.66±6.75)% vs (25.32±4.63)%,χ^2=6.897,P<0.05];Western Blot检测结果显示,与Control组相比,siNOR1组Survivin、Notch1、NICD、Hes1、Hey1蛋白表达水平均显著降低(Survivin: 0.34±0.06 vs 0.02±0.01;Notch1:0.16±0.03 vs 0.03±0.01;NICD:0.26±0.05 vs 0.04±0.02;Hes1:0.35±0.04 vs 0.06±0.02;Hey: 0.29±0.06 vs 0.05±0.02,P值均<0.05),且siNOR1组裸鼠各组织器官损伤情况均得到有效缓解。结论 敲除NOR1基因抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,提高模型裸鼠生存率,并缓解模型裸鼠肝、肾、肺、脑损伤,其机制可能与抑制Notch信号通路活性有关。     

DAPT对人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨DAPT对人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法人肝癌细胞株MHCC97H接种于3~4周鼠龄的雄性裸鼠BALB/C-nu背部1周,建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录裸鼠体质量。24只成瘤裸鼠随机分为4组,高剂量DAPT组(10 mg/kg,0.03 ml/只)、低剂量DAPT组(5 mg/kg,0.03 ml/只)、DAPT溶剂二甲基亚砜(DMSO)对照组(0.05%,0.03 ml/只)、空白对照组(生理盐水,0.03 ml/只),腹腔注射给药。间隔2 d给药1次,共6次。观察裸鼠肿瘤生长情况及生存状态。于末次给药48 h后采用颈椎脱臼法处死全部裸鼠,称量裸鼠体质量,解剖瘤体,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。结果药物干预前,4组移植瘤模型的裸鼠体质量差异无统计学意义(P0.05);药物干预后,高剂量DAPT组与低剂量DAPT组较其他两组生存状态佳,高剂量DAPT组裸鼠体质量明显高于其他3组,差异有统计学意义(P0.05);相比于其他3组,高剂量DAPT组移植瘤体积最小,差异有统计学意义(P0.05);高剂量DAPT组及低剂量DAPT组的抑瘤率分别与DMSO对照组及空白对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DAPT抑制人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长,改善人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠的生存状态。     

蛋白激酶C抑制剂联合顺铂治疗非小细胞肺癌的实验研究

目的 初步探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜红碱(CH)与化疗药物顺铂联合应用在非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中的作用及其可能的机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝试验及流式细胞术分别检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对人NSCLC细胞株A549增殖和凋亡的影响.用裸鼠移植瘤实验检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对A549细胞成瘤性的影响.应用人肺腺癌细胞株A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,用随机数字表法将24只倚瘤裸鼠分为CH组、顺铂组、CH+顺铂组及生理盐水对照组,每组5只,裸鼠分别腹腔注射CH、顺铂、CH+顺铂和生理盐水(共3周,顺铂及生理盐水每周注射1次,CH每周注射2次),观察移植瘤的生长情况.结果 CH可抑制NSCLC细胞株A549增殖,浓度增加其细胞毒作用亦增强,CH与顺铂联用呈协同或相加作用;CH组、顺铂组及CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别为(5.36±0.70)%、(5.23±0.55)%及(17.28±2.17)%,均高于对照组的(2.75±0.35)%(t=7.88,P＜0.05),CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别高于CH组及顺铂组(t=5.62,P＜0.05);裸鼠移植瘤体内实验结果表明,CH及顺铂均町抑制移植瘤的生长,CH+顺铂组的抑瘤率(80.5%)高于CH组(72.4%)及顺铂(64.3%)组(t=11.34,P＜0.01).结论 CH与顺铂联用对A549细胞及裸鼠移植瘤有显著的协同抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡而实现.     

薏苡仁油联合奥沙利铂对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析薏苡仁油联合奥沙利铂对结肠癌HT-29细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 将人结肠癌HT-29细胞株作为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度注射用薏苡仁油和奥沙利铂联合作用对人结肠癌HT-29细胞株增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Suvivin表达水平。结果 薏苡仁油组、奥沙利铂组、奥沙利铂+薏苡仁油组均会对人结肠癌HT-29细胞增殖产生一定抑制作用,且薏苡仁油浓度越高,作用时间越长,细胞增殖抑制率越高,差异有统计学意义(P<0.05);与薏苡仁油组、奥沙利铂组相比,奥沙利铂+薏苡仁油组细胞增殖抑制率更高,差异有统计学意义(P<0.05);薏苡仁油组、奥沙利铂组、奥沙利铂+薏苡仁油组细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.05);薏苡仁油浓度越高,细胞凋亡率也越高,差异有统计学意义(P<0.05);奥沙利铂+薏苡仁油组细胞凋亡率明显高于单独奥沙利铂组、薏苡仁油组,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组中Survivin mRNA为阴性表达,将不同浓度薏苡仁油加入行4...     

沙利度胺联合三氧化二砷腹腔注射对肝癌细胞SMMC7721移植瘤生长的影响及机制

目的观察沙利度胺(Tha)联合三氧化二砷(AsT)对肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其可能作用机制。方法将35只雄性BALB/c裸鼠随机分为7组各5只,均于颈部皮下接种人肝癌细胞株SMMC7721细胞悬液(密度为5×107/mL)0.2 mL,其后按如下方法处理:高、低剂量Tha组分别腹腔注射Tha 25、2.5 mg/kg,AsT组腹腔注射AsT 2.5 mg/kg,高、低剂量Tha联合AsT组分别同前联合给予Tha、AsT,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺(CTX)20 mg/kg,阴性对照组腹腔注射生理盐水20 mL/kg,均连续给药4周。观察各组裸鼠皮下移植瘤体积变化及裸鼠行动、对外界刺激的反应;用药结束后处死裸鼠,取部分瘤组织采用RT-PCR法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达,免疫组化法检测Bax、Caspase-3表达。结果裸鼠移植瘤成瘤率100%,瘤体积在高剂量Tha联合AsT组<低剂量Tha联合AsT组<高剂量Tha组<低剂量Tha组低剂量Tha联合AsT组>AsT单药组>高剂量Tha组>低剂量Tha组>阳性对照组>阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 Tha联合AsT对SMMC 7721移植瘤的生长具有显著抑制作用,效果优于两单药;机制分别与通过下调VEGF mRNA表达抑制肿瘤血管生成、上调Bax及Caspase-3蛋白表达促进肿瘤细胞凋亡相关。     

PDCD5因子增强顺铂抑制结肠癌细胞生长作用的体内研究

目的通过体内实验研究稳定转染程序性细胞死亡5(PDCD5)因子的结肠癌细胞对顺铂的敏感性,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗结肠癌的可行性。方法稳定转染PDCD5因子的结肠癌细胞SW480/PDCD5、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/Neo及正常结肠癌细胞SW480分别接种到裸鼠皮下,形成皮下移植瘤后,顺铂(10 mg/kg)腹腔内注射,绘制移植瘤生长曲线;组织学观察皮下移植瘤,TUNEL法检测皮下移植瘤的凋亡情况;Western印迹法检测皮下移植瘤caspase-9和caspase-3的表达水平。结果 SW480/PDCD5对顺铂更加敏感,肿瘤体积增加幅度低于SW480和SW480/Neo(P0.05);SW480/PDCD5有更多的细胞出现变性坏死,更多的细胞染色体边集并出现凋亡小体,出现凋亡细胞的比例高于SW480和SW480/Neo(P0.05);SW480/PDCD5中caspase-9和caspase-3的活化片段较SW480和SW480/Neo更多(P0.05)。结论稳定转染PDCD5因子可以增加结肠癌细胞对顺铂的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在的价值。     

米非司酮对卵巢癌OVCAR3细胞及模型鼠HLA-G表达的影响

目的探讨米非司酮、顺铂治疗卵巢癌的作用机制。方法培养卵巢癌OVCAR3细胞株,并建立荷卵巢癌裸鼠模型,采用RT-PCR技术检测米非司酮、顺铂对卵巢癌OVCAR3细胞和裸鼠皮下移植瘤组织中HLA-G mRNA表达水平的影响。结果米非司酮能明显下调OVCAR3细胞HLA-G mRNA表达水平差异显著(P<0.01)。顺铂对细胞中HLA-G mRNA表达无明显影响,组间方差分析无显著差异(F=1.138,P>0.05)。不同分组裸鼠移植瘤组织之间HLA-G mRNA水平比较差异显著(F=16.275,P<0.01)。米非司酮组、顺铂组和联合组两两比较,联合组HLA-G mRNA表达显著低于顺铂组(P<0.01),联合组HLA-G mRNA表达有低于米非司酮组的趋势,但差别无统计学差异。结论米非司酮抗肿瘤机制与下调HLA-G抗原表达有关,而顺铂此方面作用不明显,二者联合使用可以起到互补作用,为临床顺铂耐药性卵巢癌的治疗提供了新的思路。     

125I粒子组织间植入对裸鼠食管癌移植瘤的影响

目的 研究125I放射性粒子组织间植入对于食管癌移植瘤的影响.方法 将人食管癌细胞Eca-109注入裸鼠腋侧皮下建立食管癌裸鼠移植瘤模型,随机分成对照组(牛理盐水+空心粒子)、125I粒子组(剂量22.2 MBq×1)和顺铂组(1 ms/kg).观察人食管癌移植瘤的生长情况和病理学改变.结果 术后16 d,对照组、125I粒了组、顺铂组的瘤块平均重量分别为(0.20±0.06)g,(0.12±0.03)g,(0.12±0.05)g,3组间差异有统计学意义(P<0.05).病理结果,125I粒子组、顺铂组镜下可见变性、坏死的食管癌肿瘤细胞.125I粒子组、顺铂组肿瘤组织坏死范围大于对照组(P<0.05).结论 125I粒子植入可以引起食管癌移植瘤肿瘤组织变性、坏死,抑制肿瘤组织的生长.     

二甲双胍联合奥沙利铂对肺癌裸鼠移植瘤VEGF-C、VEGFR-3、CD44v6和β-catenin表达的影响

目的探讨二甲双胍联合奥沙利铂对肺癌裸鼠移植瘤血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)、CD44变异体蛋白6(CD44v6)和β-链蛋白(β-catenin)分子表达水平的影响。方法建立肺癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为二甲双胍组、奥沙利铂组、联合用药组及对照组,每组分别给予二甲双胍、奥沙利铂、二甲双胍+奥沙利铂及灭菌蒸馏水等干预,42 d后处死动物,留取肿瘤组织,分别采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中VEGF-C、VEGFR-3、CD44v6和β-catenin蛋白及mRNA的表达。结果二甲双胍组、奥沙利铂组和联合用药组的抑瘤率分别为28.97%、34.37%和50.27%。与对照组相比,奥沙利铂组、联合用药组VEGF-C、VEGFR-3、CD44v6和β-catenin蛋白及mRNA表达水平均降低(P均<0.05);与二甲双胍组、奥沙利铂组比较,联合用药组VEGF-C、VEGFR-3、CD44v6和β-catenin蛋白及mRNA表达水平均降低(P均<0.05),VEGF-C、VEGFR-3、CD44v6和β-catenin蛋白组间比较有统计学差异(F值分别为79.281、151.275、171.294、164.149,P均<0.01);VEGF-C、VEGFR-3、CD44v6和β-catenin mRNA组间比较差异均有统计学意义(F值分别为78.897、81.029、64.100、83.892,P均<0.01)。结论奥沙利铂及二甲双胍均可抑制VEGF-C、VEGFR-3、CD44v6和β-catenin的表达,联合应用抑制效果更强。     

尼美舒利联合奥沙利铂在食管癌大鼠中的作用及对β-catenin表达水平的影响

目的 探讨尼美舒利联合奥沙利铂在食管癌大鼠中的作用及对β-连环蛋白(catenin)表达水平的影响。方法 清洁级SD大鼠50只作为对象，随机取大鼠10只设为空白对照组；剩余40只大鼠采用人工食管癌动物模型，建模成功后随机取大鼠10只，设为模型对照组；剩余大鼠分为尼美舒利组、奥沙利铂组和联合组，各10只。空白对照组与模型对照组常规注射等量生理盐水，尼美舒利组灌胃2.5 mg/kg尼美舒利；奥沙利铂组腹腔注射10 mg/(kg·次)奥沙利铂，联合组同时给予尼美舒利与奥沙利铂，给药方式同上，42 d干预对大鼠效果进行评估，比较各组抑瘤率、肿瘤标志物、T淋巴细胞及β-catenin表达水平。结果 联合组瘤体体积、瘤质量均显著低于尼美利舒组、奥沙利铂组和模型对照组(P<0.05);抑制率显著高于尼美利舒组、奥沙利铂组和模型对照组(P<0.05);联合组CEA、CYFRA21-1、SCCAg水平均低于尼美利舒组、奥沙利铂组和模型对照组(P<0.05),显著高于空白对照组(P<0.05);联合组CD3⁺、CD4⁺、CD4^+...