Bcr-abl融合基因片段的克隆及在原核细胞中的融合表达

目的：克隆和表达Bcr-abl融合基因融合位点周围的基因片段。方法：以慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株总RNA作为模板，采用RT-PCR方法扩增包含：Bcr-abl(b3a2)融合位点周围的基因片段。将RT-PCR产物按正确的阅读框架，定向克隆进pGEX-6P-1载体谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的下游，将重组质粒转化大肠杆菌BL21菌株，以1．0mmol／L IPTG诱导Bcr-abl融合基因片段的表达。结果：原核细胞融合表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，证实该融合蛋白为42000大小。用该表达产物免疫ICR小鼠，所制备的抗血清可与K562细胞特异性结合。结论：原核细胞表达的p42^Bcr-abl融合蛋白具有p210^Bcr-abl融合蛋白的特异抗原性，为进一步实验研究奠定了基础。     

Ph染色体在各种恶性血液病中的意义和新进展

Ｐｈ染色体与多种恶性血液病相关，本文从细胞遗传学及分子生物学的角度阐述有关它的各种融合基因，转录本和融合蛋白的结构，分布及其疾病的发病机制和临床表现的关系，并探讨其与临床治疗的关系。     

老年白血病bcr/abl融合基因的表达及其临床意义

目的　观察bcr/abl融合基因在老年白血病的表达及其临床意义。　 方法 　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)一步法检测 62例老年白血病患者bcr/abl融合基因的表达。　 结果 　 62例患者中bcr/abl融合基因阳性 5 3例 ,阳性率 85 5 % ,其中急性淋巴细胞白血病 (ALL) 17例 ,阳性 9例 (5 2 9% ) ;慢性粒细胞白血病 (CML)45例 ,阳性 44例 (97 88% )。DOCP方案治疗 7例bcr/abl ALL患者完全缓解 (CR)率 2 8 6% ,6例bcr/abl-ALL患者CR率 66 7% (P <0 0 1)。　 结论　bcr/abl融合基因检测有助于CML和ALL的临床诊断、治疗选择、微小残留病变 (MRD)监测以及预后判断 ;老年ALLbcr/abl融合基因阳性率较高 ,可能是其治疗效果较差的原因之一 ;bcr/abl ALL患者CR率明显低于bcr/abl-ALL患者 ;RT PCR一步法特异性好、敏感性高、简便快速 ,尤其适用于MRD的临床监测。     

白血病MLL基因重排及其融合基因检测的临床意义

目的:研究白血病MLL(mixed lineage leukemia)基因重排及其融合基因的检测及其临床意义。方法:采用荧光原位杂交(FISH)检测70例白血病患者MLL基因重排,对于MLL基因重排的患者,用巢式RT-PCR方法检测常见6种MLL融合基因类型。结果:9例白血病有MLL基因重排,发生率为12.86,5例B细胞系急性淋巴细胞白血病(B-ALL),其中融合基因2例为MLL/ENL,1例MLL/AF4,2例未扩出融合基因产物;3例为急性髓细胞白血病M5(AML-M5),其中2例融合基因均为MLL/AF9,1例未扩出融合基因产物;1例为幼年型粒单核细胞白血病(JMML),其融合基因为MLL/ENL。结论:巢式RT-PCR是检测MLL基因重排及其融合基因类型简便有效的方法,MLL基因重排见于B-ALL、AML-M5、JMML,预后差。     

bcr-abl融合基因在骨髓增殖性疾病中的表达及其临床意义

目的:探讨bcr-abl融合基因在骨髓增殖性疾病(MPD)中的表达及临床意义。方法:采用筑巢式RT-PCR方法检测52例MPD患者bcr-abl融合基因的总RNA表达,其中慢性粒细胞白血病(CML)25例、原发性血小板增多症(ET)17例、真性红细胞增多症(PV)10例。结果:在CML、ET和PV中的bcr-abl融合基因阳性率分别为100%、17.6%和10%。半定量法分析显示bcr-abl融合基因在CML的表达水平明显高于ET和PV约6倍和5倍。结论:bcr-abl融合基因在部分ET患者及PV患者存在表达,但表达水平明显低于CML,对于该类患者的转归,需进一步研究及临床观察。     

WT1基因在白血病中的表达及临床意义

目的　探讨WT1基因在白血病中的作用。方法　用定量RT -PCR方法检测病人外周血或骨髓单个核细胞WT1mRNA表达。结果　 5 0例白血病患者中 ,41例WT1mRNA表达增高 ,阳性率为 82 0 %。急性髓细胞白血病 (AML)和急性淋巴细胞白血病 (ALL)阳性率分别为 84 0 %和 93 8% ,两组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,慢性粒细胞白血病 (CML)的WT1mRNA阳性率为 6 6 7% ,其中慢性期均阴性 ,加速期和急变期均阳性。 17例完全缓解患者中 ,15例 (85 2 % )WT1mRNA转阴 ,复发患者WT1mRNA再次升高。结论　WT1mRNA表达的测定对白血病微小残留病检测具有重要意义     

bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病的发生及治疗中的作用

介绍 abl,bcr基因及bcl-abl融合基因结构，概述具有酪氨酸激酶活性的p210在慢性粒细胞白血病（CML）发病中的作用。CG157148是一种酪氨酸激酶特异性抑制剂，抑制p210活性。近年来体外实验及小规模临床试验证实CG157148是一种非常有前途的治疗CML的药物。     

PML/RARa融合基因检测在早幼粒细胞白血病鉴别诊断中的意义

急性早幼粒细胞白血病 (APL) ,具有特异性的染色体易位 t(1 5∶ 1 7)及 PML/RARa融合基因。在细胞遗传学 (MIC)分型的基础上 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术 ,检测 APL的 PML/RARa融合基因的 m RNA,可以用来诊断或鉴别诊断 ,同时也可以进行微量残留白血病细胞 (MRLC)的检测。1　材料与方法1 .1 　 病例例 1、2为经外院诊断和治疗后转入我院的患者 ,例 3～ 9为门诊或住院的患者 ,经 FAB分型不能完全确诊 ,例 1 0、1 1是同一例初诊与完全缓解 2 6个月的 M3患者 ,例 1 2、1 3是同一例完全缓解 8个月与 32个月患者。1 3…     

实时定量RT-PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的临床意义

目的：建立实时定量RT-PCR方法检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr／abl mRNA的方法；探讨CML bcr／abl融合基因的表达水平与疗效的关系。方法：可同时检测b2a2和b3a2两种亚型．GAPDH的mRNA作为内参照。检测14例CML患者的22个外周血和骨髓样本中bcr／abl融合基因表达水平．并对2例异基因造血干细胞移植后复发的患者进行动态监测。结果：bcr／abl及GAPDH标准曲线的相关系数均为0．999；灵敏度为10^-6；14例初诊患者的mRNA表达水平范围为2．81～145；2例异基因造血干细胞移植后复发患者的bcr／abl mRNA表达水平随临床治疗而变化。结论：实时定量PCR检测CML患者的bcr／abl融合基因，敏感可靠，重复性好；其融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系相一致，有助于反映白血病细胞负荷、评价疗效及判断疾病预后。     

恶性血液病四种血浆凝血因子测定及临床意义

目的：探讨恶性血液病血浆凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ的活性变化。方法：采用ＣＯＡＧ－Ａ－ＭＡＴＥＸＭ 型血凝自动分析仪，测定了４０ 例恶性血液病（ＡＬ ２４ 例，其它１６ 例）血浆凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ活性水平。结果：①ＡＬ患者４ 种凝血因子活性均低于对照组（ Ｐ＜ ０．０５～０．００１），缓解后恢复正常。②其它恶性血液病因子Ⅴ、Ⅹ活性低于对照组（ Ｐ＜ ０．０５），缓解后恢复正常，因子Ⅶ、Ⅷ活性与对照组比较差异无显著性。③有出血倾向者因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ活性比无出血倾向者显著降低（ Ｐ＜０．０５～０．００１）。结论：检测凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ活性水平对恶性血液病，特别是ＡＬ的病情判断有一定意义     

恶性血液病患者降钙素基因高度甲基化检测的临床意义

我们利用限制性内切酶和聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术对恶性血液病进行降钙素基因异常甲基化研究 ,旨在探讨降钙素基因高度甲基化与恶性血液病发生、发展的关系 ,从而为恶性血液病的诊断、鉴别诊断以及预后判断提供一个可靠的基因标志。一、资料与方法1.标本来源 :根据ＦＡＢ标准确诊的急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 30例。急性非淋巴细胞白血病 (ＡＮＬＬ) 34例。慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ) 5 1例 ,其中慢性期 32例 ,加速期 8例 ,急变期 11例。骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ) 2 0例 ,其中难治性贫血 (ＲＡ) 6例 ,环形铁粒幼红细胞性难治性贫血 (…     

COL6A3基因在胃癌中的表达及临床意义

背景从分子水平探析胃癌(gastric cancer, GC)病理机制对改善患者预后至关重要.目前, COL6A3在GC中的表达情况及临床意义鲜有报道.目的研究COL6A3基因在GC中的表达情况和临床意义,并探究可能的作用机制.方法收集GC相关生物大数据,对肿瘤样本的基因表达谱数据及其对应的临床信息进行回顾性分析和生存分析;采用基因集富集分析方法探讨COL6A3在GC中可能的作用机制.结果 COL6A3在GC中表达明显升高(P 0.0001),且具有较大诊断价值(AUC=0.9516). COL6A3高表达与T分期显著相关(P=0.001), COL6A3高表达的GC浸润深度更大. COL6A3高表达患者的预后明显差于低表达患者(P=0.0018). COL6A3高表达样本中,富集了多个肿瘤相关通路的基因集(n=68).结论 COL6A3高表达与GC的发生发展相关,具有较大的临床意义.     

急性白血病BCL-2基因的表达及临床意义

目的：探讨急性白血病患者BCL-2基因的表达及临床意义。方法：应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测40例急性白血病患者细胞中BCL-2基因的表达。结果：BCL-2基因的表达水平与患者的年龄，性别，淋巴结肿大，肝脾肿大，出血，生化乳酸脱氢酶LDH，白血病分型及初治或复发难治等因素无关，但与患者骨髓中原幼细胞数呈正相关，除7例急性早幼粒细胞白血病患者外，BCL-2基因高表达患者完全缓解率（CR）低于低表达者。结论：BCL-2基因的表达对于预测白血病细胞耐药，判断预后，评估化疗反应及选择化疗方案均有十分重要的意义。     

P-糖蛋白在恶性淋巴瘤中的表达及临床意义

化疗是恶性淋巴瘤主要的治疗手段 ,而多药耐药性 ( MDR)是恶性淋巴瘤化疗失败的重要原因。在人类 ,MDR表型与其基因 ( mdrl)过度表达 P-糖蛋白( P- glycoprotein,P- gp)有关。而 P- gp是一种跨膜大分子 ,具有外排泵的作用 ,可将进入细胞内的药物泵出而导致耐药。为此 ,我们采用免疫组化法研究了恶性淋巴瘤的 P- gp表达及其与临床化疗的关系。1　资料与方法1 .1标本来源　 1 34例淋巴瘤标本取自山东医科大学附属医院病理科 1 992～ 1 997年存档 ,均为石蜡包埋组织。其中初诊无化疗者 1 0 6例 ,化疗后复发者 2 8例。所有标本均经病理确诊…     

CD44V3基因蛋白在胃癌中的表达及临床意义

CD44是细胞表面粘附分子之一 ,有两种类型 :CD44S和 CD44V,CD44V按其外显子的不同分很多亚型 ,目前己发现 1 0多种 ,如 CD44V3 、CD44V5、CD44V6等 ,它们参与细胞 -细胞、细胞 -基质之间的粘连。其分布极广 ,大多数血细胞、上皮细胞和多种瘤细胞中均可表达。我们采用免疫组化方     

去甲基化在治疗恶性血液病中的研究

抑癌基因失活是恶性肿瘤发生发展的重要机制,近年来研究发现DNA甲基化是抑癌基因失活的第三种机制,它与另外两种机制,即基因突变和缺失不同的是,它不必改变DNA链的碱基顺序,而是通过表观遗传学修饰抑制基因转录导致基因失活,并且多种研究发现这种甲基化修饰可以用药物逆转。由于DNA高甲基化在恶性血液病中广泛存在,使得恶性血液病的去甲基化治疗成为可能。     

恶性血液病患者血清和骨髓透明质酸测定及其临床意义

应用放免法测定43例恶性血液病、37例良性血液病和23例健康人血清、骨髓液HA。结果表明：恶性血液病患者血清和骨髓液HA显著高于良性血液病（P＜0.01）及健康人（P＜0．01）。骨髓液HA分别是血清的2～2．5倍。若以血清HA＞185μg／L为标准，则血清HA对恶性血液病诊断的敏感性为81．6％。血清和骨髓液HA在急性白血病完全缓解时下降，复发时又升高。观察血清和骨髓液HA变化，对鉴别良、恶性血液病、判断急性白血病病情及估计预后有一定意义。     

WT1基因在白血病患者中的表达

目的 研究急性白血病（ＡＬ）患者中ＷＴ１基因的表达情况及其与预后的关系。方法 用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法,研究ＷＴ１基因在１０２例ＡＬ中的表达。结果 ＲＴ－ＰＣＲ检测ＷＴ１基因的敏感性为１０＾－４。ＷＴ１基因在ＡＬ所有亚型中都有表达,初治和复发的ＡＬ中阳性率为６６．７％,而在５年长期生存者中阳性率只有７．７％（４／５２）。随着完全缓解（ＣＲ）时间的延长,ＷＴ１基因阳性率有所下降,     

Atoh1基因在肺癌中的表达及临床意义

目的研究Atoh1（Atonalhomolog1）基因在肺癌中的表达。方法用实时荧光定量RT-PCR技术检测肺癌组织与癌旁组织中Atoh1的表达,采用表达的相对量进行结果分析。结果与癌旁组织相比,Atoh1 mRNA在肺癌组织中表达显著下调（P〈0.05）,两者比值约为0.46/1。结论 Atoh1基因在肺癌组织中的表达下调,可能与肺癌的发生、发展有关,可能成为诊断和治疗的新靶点。     

RNA干扰靶向白血病融合基因的研究

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是新近发展起来的一种静止基因表达的有效方法,是由双链RNA分子介导的特异性靶基因转录后基因沉默过程.1998年由Fire等[1]在对线虫的研究中首先提出,2001年Elbashir等[2]报道RNAi同样存在于哺乳动物细胞,这一突破性的进展使RNAi技术在哺乳动物细胞中的探索与应用逐渐成为研究热点.