微囊化转NGF基因NIH3T3细胞填充静脉修复大鼠坐骨神经缺损的作用

目的：了解微囊化转NGF基因NIH3T3细胞在修复周围神经缺损中的作用。方法：SD雄性大白鼠30只,建立大鼠坐骨神经离断模型后随机分为3组,A组：异体静脉桥接神经缺损,形成神经再生室,其内填充微囊化转NGF基因NIH3T3细胞,修复大鼠坐骨神经10 mm缺失;B组：自体神经移植;C组：微囊化NIH3T3细胞。于术后4、8及12周进行足迹试验,术后12周进行电生理学测试及形态学观察。结果：术后4、8和12周不同时间点坐骨神经功能指数,术后12周神经传导速度、再生神经的组织学改变及再生神经纤维的成熟程度A组和B组比较,差异均无显著性(P>0.05), A 组和B组明显优于C组 (P<0.05)。结论：聚赖氨酸/海藻酸钠(APA) 微胶囊与外周神经组织有良好的生物相容性;辅加微囊化转NGF基因NIH3T3细胞对修复缺损的神经具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

组织工程化神经修复周围神经缺损的实验研究

目的通过人工神经修复神经缺损的实验研究，为神经组织工程的进一步研究和临床应用提供实验依据。方法分3组修复大鼠1cm长坐骨神经缺损：（A组）含许旺细胞的移植体；（B组）无许旺细胞的移植体；（C对照组）自体神经移植。术后10周内，进行肌肉湿重、电生理等测定以及组织学观察、图像分析。结果许旺细胞能与PLGA纤维构成活性细胞-材料复合物；神经修复术后10周，A、C两组电生理特性、组织学变化以及肌肉湿重等测定均明显优于B组，A组与C组之间无显著差别。结论许旺细胞能与PLGA纤维在体外构建具有活性的神经移植体并能够促进神经再生，其修复效果接近于自体神经移植。     

自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经修复坐骨神经缺损的研究

目的:研究医用人工组织神经移植物与自体骨髓间充质干细胞构建成的组织工程化神经桥接修复周围神经缺损的能力。方法:采用自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经桥接毕格犬5cm缺损的坐骨神经,桥接组n=5,缺损组n=5。术后定期观察术肢运动功能情况。术后6月,进行电生理学检测,并对再生神经和靶肌进行形态学观察。结果:桥接组术后6月,组织工程化神经移植物已完全降解,再生神经组织修复了坐骨神经5cm缺损,动物术肢承重能力恢复较好,行走、奔跑或上下楼梯时两后肢比较协调;而缺损组动物术肢难以承重,两后肢运动极不协调。神经三色染色显示,桥接段再生神经纤维密集,形成大量的再生单位。电生理学检测,桥接组术侧均记录到了复合肌动作电位(CMAPs),而缺损组未记录到CMAPs。桥接组腓肠肌无明显萎缩,肌肉三色染色显示胶原纤维增生不明显。缺损组腓肠肌明显萎缩,胶原纤维增生明显。结论:自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经桥接5cm坐骨神经缺损术后6月,再生神经修复了缺损,并在形态和生理功能上都得到了明显的恢复,靶肌实现了神经的重支配,动物术肢的运动功能取得了明显恢复。     

同种异体神经与自体神经瘤联合修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨用优化法处理后的脱细胞同种异体神经和自体神经瘤组成的联合体修复大鼠坐骨神经缺损的效果. 方法 30只SD大鼠随机分为2组(每组15只):A组(自体神经瘤模型组),行同种异体神经与自体神经瘤联合移植;B组(坐骨神经缺损模型组),做自体神经移植.将30只成年Wistar大鼠作为神经供体,取其单侧坐骨神经,制备为脱细胞同种异体神经.在术后的8周、16周进行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查. 结果 两组模型制备成功后,术后8周时大鼠均出现肢体躲避反应;术后16周时均有大量神经纤维通过移植体,两组再生神经的纤维数量、直径及髓鞘比较,差异无统计学意义;术后8周电生理检测发现A组再生神经的传导速度明显慢于B组(P<0.05),术后16周两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后16周A组和B组坐骨神经功能指数比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 同种异体神经与自体神经瘤组成的联合体能修复周围神经缺损,恢复神经的传导功能,有效地促进神经的再生,此联合体是一种良好的自体神经移植替代材料.     

人工组织神经移植物桥接狗缺损坐骨神经后腓肠肌内琥珀酸脱氢酶表达含量的变化

目的：了解人工骨组织神经移植植物辅加神经再生索桥接狗坐骨神经缺损后相应腓肠肌形态与酶的变化。方法:人工组织神经桥接修复狗的坐骨神经30mm缺损为实验组，自体神经桥接或神经缺损的为对照组I或II.术后6个月时取腓肠肌，按Nitro-BT法显示琥珀酸脱氢酶光镜标本。图像分析仪分析琥珀酸脱氢酶（SDH）染色后灰度值及腓肠肌截面积。结果：实验组腓肠肌SDH的灰度值及截面积均与对照组II有明显差别，而与对照组I无明显差别。结论：人工组织神经修复缺损神经后，重新支配靶器官，使腓肠肌萎缩明显减弱，琥珀酸脱氢酶活性的下降也明显减轻。     

血管化纳米复合材料n-PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管修复大鼠坐骨神经缺损

目的:探讨血管化复合纳米材料n-PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管对损伤大鼠坐骨神经再生及修复的效果。方法:将60只SPF级雄性成年SD大鼠随机平均分为4组,均于右侧制备坐骨神经15mm缺损模型。A组:PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管桥接+局部注射血管内皮生长因子基因(pHVEGF16);B组:单纯PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管桥接;C组:自体神经移植;D组:硅胶管桥接。术后每隔2周检测坐骨神经功能指数(SFI),每4周检测腓肠肌湿重,3个月后取材并进行神经肌肉电生理、组织学和透射电子显微镜观察等检测。结果:A组大鼠运动功能恢复最快(P<0.05),腓肠肌湿重检测优于B、D组(P<0.05)。术后12周,A组坐骨神经传导速度、轴突计数结果较B、D组好(P<0.05)。A组再生坐骨神经纤维较B、D组排列密集且成熟,接近正常神经组织,脱髓鞘改变和雪旺细胞空泡样改变少见。结论:运用n-HAP/PRGD/PDLLA/VPA复合神经材料导管合并局部注射pHVEGF16对大鼠15mm坐骨神经缺损显示出了良好的神经修复效果,说明此种复合神经材料导管对于损伤神经再生和血管化效果明显。     

冻干去细胞异种神经和类许旺细胞共移植修复外周神经缺损的实验研究

目的 研究冻干化学去细胞异种神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 48只成年雌性DA大鼠分别用4种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损:冻干化学去细胞异种神经与类许旺细胞共移植组、冻干化学去细胞异种神经移植组、化学去细胞异种神经移植组、异种神经移植组.术后4周、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果.结果 术后24周A组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率优于B、C、D组(P＜0.05);组织学检测发现,术后24周A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主.结论 种植类许旺细胞的冻干化学去细胞异种神经能有效的修复大鼠周围神经缺损.     

人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植修复犬坐骨神经缺损

目的:探讨人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植技术的可行性。方法:12只犬分为脱细胞同种异体神经移植组和人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植(B)组,每组6只,均建立坐骨神经缺损动物模型。制备人胎盘羊膜和脱细胞同种异体神经。A和B组分别行同种异体神经移植术和人胎盘羊膜包裹的同种异体神经移植术。术后16周运用电生理学、髓鞘HE染色等观察2组犬移植段神经比目鱼肌诱发电位的波幅和时限、双侧坐骨神经传导速度的差异。结果:术后16周,A组犬足部及小腿红肿;B组犬神经功能恢复,小腿肌肉肌力恢复,犬右后肢能够站立。A和B组犬移植段神经连续性好,B组犬移植段神经周围炎症反应轻。B组与A组相比可见较多雪旺细胞增殖及大量再生的神经纤维。B组轴突密度和比目鱼肌诱发电位波幅、时限明显高于A组(t=10.195、4.825和6.323,P<0.001)。结论:人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植术可改善神经形态学变化,提高移植神经的修复质量。     

小肠黏膜下层复合雪旺细胞粗制品桥接周围神经缺损

目的观察小肠黏膜下层(SIS)复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损的效果。方法选取健康雄性SD大鼠36只,随机平均分为3组(n=12)。致大鼠坐骨神经12 mm缺损后,分别用SIS桥接修复(A组),SIS复合雪旺细胞粗制品修复(B组)和自体神经移植修复(C组)。术后16周取材,通过组织学观察、肌肉湿重测量、计算机图像分析、Trueb lue逆行示踪和透射电镜观察来评价神经再生效果。结果组织学观察、Trueb lue逆行示踪和透射电镜观察证实三组均有再生神经纤维通过缺损区;B组和C组大鼠的小腿三头肌湿重、单位面积轴突数量和神经组织面积均显著优于A组(P<0.05),B、C两组间的差异则无统计学意义(P>0.05)。结论SIS复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损可达到自体神经移植的效果,有望替代自体神经移植。     

化学去细胞同种异体神经修复家兔面神经缺损

目的探索修复面神经缺损的一种新的有效替代材料。方法24只兔子随机分成实验组(化学萃取同种异体腓神经移植组,12只)和对照组(自体新鲜面神经移植组,12只)。每只兔子右侧面神经下颊支被切断以造成面神经缺损1 cm的模型,同时两组兔子分别以去细胞同种异体神经和自体面神经桥接修复。术后3个月行肌电图、电镜、图像分析仪以及靶肌肉运动终板染色检查。结果术后3个月两组在神经传导速度、有髓神经纤维计数、靶肌肉运动终板计数上的差异没有统计学意义,电镜检查结果相似。结论化学去细胞的同种异体神经在面神经缺损修复上是自体神经的一种有效替代物。     

化学去细胞神经同种异系(体)移植的免疫学反应

目的:观察化学去细胞神经同种异系(体)移植的免疫学反应,研究化学萃取去细胞处理对同种异系(体)神经抗原性的影响。方法:在W istar大鼠的背部和腹部皮下植入取自SD大鼠的化学去细胞神经,对照组植入新鲜同种异系(体)神经。用ELISA法测定大鼠血清内的抗体滴度。免疫组化染色检测各时间点异系(体)神经及周围组织中T淋巴细胞的浸润程度。结果:实验组和对照组2周、4周、8周、12周的大鼠血清均没有呈现阳性的抗体滴度。化学去细胞同种异系(体)神经移植组植入后2和4周时CD3 、CD4 和CD8 T淋巴细胞的浸润程度明显轻于未去除细胞的新鲜同种异系(体)神经移植组。8和12周时埋入的新鲜同种异系(体)神经已经被受体吸收,而去细胞同种异系(体)神经移植组的植入组织保持原形态,周围仅见极少量淋巴细胞浸润。结论:化学萃取去细胞同种异系(体)神经的抗原性明显降低,植入体内后免疫排斥反应不明显。     

纳米微囊缓释VEGF促血管化修复大鼠周围神经缺损的研究

目的评价应用纳米微囊缓释VEGF促血管化及其修复周围神经缺损的效果。方法化学去细胞神经内显微注入纳米微囊缓释VEGF,修复大鼠15mm坐骨神经缺损为实验组（A组）,对照组为化学去细胞神经显微注入VEGF组（B组）和化学去细胞神经移植组（c组）,比较A、B、c组血管化时间。术后12周,检测肌电图、小腿三头肌湿重、神经微血管密度及再生轴突计数,评价其修复周围神经缺损的效果。结果术后,A组神经中心血管化的时间为7d,B、C组为13d。术后12周,A组神经传导速度、动作电位波幅、小腿三头肌湿重,微血管密度和神经轴突再生密度高于B、c组。结论纳米微囊缓释VEGF促进去细胞神经血管化,有利于神经轴突再生和功能恢复。     

化学去细胞同种异体神经制备的改良及桥接周围神经缺损效果

目的:改良去细胞异体神经的制备方法,研制出一种理想的自体神经移植替代物. 方法:将用Sondell法(Triton X-100、脱氧胆酸钠)和改良法[Triton X-200,sulfobetaine-10(SB-10),sulfobetaine-16(SB-16)]两种方法制备的去细胞异体神经用HE染色、髓鞘染色、免疫组化染色、扫描电镜检查等进行组织学评价. 然后将制备的神经桥接大鼠坐骨神经缺损,从坐骨神经指数、神经电生理、运动终板染色等方面评价神经移植后的再生效果. 结果:改良法制备的神经细胞及髓鞘去除彻底、结构保存完好;移植后神经再生良好,优于Sondell法制备的神经,达到了与自体神经移植相当的再生效果. 结论:综合运用萃取剂Triton X-200,SB-10和SB-16的改良化学萃取方法是一种较为理想的去细胞异体神经制备方法,其制备的异体神经移植物可望替代自体神经移植.     

去细胞神经支架联合VEGF修复周围神经缺损的实验研究

目的观察去细胞神经支架联合血管内皮生长因子（VEGF）在促进周围神经损伤修复中的作用。方法购买雄性Wistar大鼠60只,先取15只成年Wistar大鼠作为神经供体,制备去细胞神经支架,将制备好的神经支架剪取长度约为1 cm的去细胞神经基膜管。根据实验要求,将余Wistar大鼠随机分为三组,每组大鼠均15只。实验组（A组）为去细胞神经支架移植＋局部注射VEGF组;对照组Ⅰ（B组）为去细胞神经支架移植组;对照组Ⅱ（C组）为自体神经移植组。术后喂养1个月,并每日观察大鼠步态、患足溃疡恢复情况。术后1个月取移植段坐骨神经组织行HE染色、免疫组化染色观察再生神经S-100及轴突数量,髓鞘、神经纤维数等生长情况。结果术后1个月,三组大鼠的足部溃疡、步态均有不同程度的恢复,其中实验组恢复率接近于自体神经移植组,明显优于单纯去细胞神经支架移植组;A组的再生神经轴突数为（125.34±5.67）,B组再生神经轴突数为（62.32±3.71）,C组再生神经轴突数为（132.55±7.48）,A组与C组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,A组与B组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论去细胞神经支架联合VEGF在促进周围神经损伤修复过程中可能具有一定的作用。     

脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损的形态学观察

目的:研究脱细胞处理的同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后,再生神经的形态学变化.方法:光镜、电镜观察移植物内再生神经的超微结构变化,免疫组织化学技术观察再生神经中S-100蛋白表达,并对再生神经的纤维数量、髓鞘厚度等进行统计学分析.结果:实验组和自体神经移植对照组的移植段内见有由束膜和外膜包被的大量再生神经纤维,两组比较再生神经的纤维数量、髓鞘厚度、有髓纤维占有的面积均无显著性差异;两组移植段神经中的S-100阳性施万细胞数、形态和排列等方面也无明显差异.结论:脱细胞同种异体神经同自体神经一样,对缺损的坐骨神经再生具有促进作用.     

脂肪源性干细胞对大鼠坐骨神经功能恢复的影响

目的：：探讨脂肪源性干细胞（ADSCs）对大鼠坐骨神经功能恢复的影响。方法：将第4代ADSCs移植入脱细胞神经移植物（ANA）中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常对照组、培养基组和实验组,培养基组和实验组均建立坐骨神经损伤模型,然后用相应的组织工程神经桥接损伤神经的断端。术后6W和12W采用神经电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅。结果：术后6 W、12W,实验组坐骨神经传导速度和波幅明显高于培养基组（P<0.05）,但低于正常对照组（P<0.01）;并且,实验组术后12W时的神经传导速度和波幅明显高于术后6W（P<0.05）。结论：ADSCs可增加坐骨神经传导速度和波幅,促进坐骨神经功能的恢复。     

低免疫原性脱细胞神经基质的制备及其理化性能

目的：制备低免疫原性异种脱细胞神经基质并评估其理化性能。方法：以α-1，3-半乳糖苷转移酶基因敲除（GTKO）猪坐骨神经为实验原料对基因敲除猪坐骨神经进行脱细胞处理制备低免疫原性异种脱细胞神经基质，通过HE、DAPI染色及DNA残留量检测评价神经组织的脱细胞效果；I型胶原、层黏连蛋白、纤连蛋白免疫组织化学及天狼猩红染色评价脱细胞神经细胞外基质组分保留情况；α-1，3-半乳糖基（a-gal）免疫荧光检测异种抗原a-gal的残留；扫描电镜（SEM）分析脱细胞神经三维组织结构及孔隙率。结果：组织染色显示脱细胞神经基质内膜、外膜、束膜中的细胞均去除干净，DNA定量结果显示DNA含量下降了95%。天狼猩红染色及免疫组织化学结果显示脱细胞神经组织较好地保留了胶原纤维与细胞外基质主要蛋白。SEM结果显示脱细胞神经较好地保留了其三维组织结构，细胞毒性检测表明脱细胞神经基质无细胞毒性。结论：本研究自主设计的四联脱细胞方案能彻底去除神经组织中的细胞成分与异种抗原，并且较完整地保留了神经组织结构，与天然神经具有高度相似性。     

硫酸软骨素酶ABC-PLGA缓释微球处理去细胞同种异体神经移植修复大鼠坐骨神经

目的 探讨硫酸软骨素酶ABC（chondroitinase ABC,ChABC）-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球处理改良化学法去细胞同种异体神经移植修复大鼠坐骨神经的可行性。方法 用复乳法制备硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球。取成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组（n=10）：硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球处理改良化学法去细胞同种异体神经移植组（A组）、自体神经移植组（B组）、改良化学法去细胞同种异体神经浸泡ChABC神经移植对照组（C组）、改良化学法去细胞同种异体神经移植09%氯化钠注射液对照组（D组）。取A、C、D 3组动物人工切取右侧坐骨神经10 mm,用改良化学法制备移植神经段：A、C两组浸泡在PBS液中,D组浸泡在含2 U/ml ChABC的PBS液（pH7.4）中。A组动物取C组制备神经行同种异体神经移植,外膜无张力缝合,并在移植神经段距近心端缝合处2 mm、4 mm、6 mm、8 mm处分别注入0.2μl制备好的硫酸软骨素酶ABC-PLGA缓释微球。B组在右侧离断10 mm坐骨神经倒置后行外膜缝合。C组取D组制备神经行神经移植。D组取A组制备神经行神经移植后,按照A组的位置注入等量等渗0.9%氯化钠注射液。术后4、8、12周进行大体标本观察,术后12周行电生理检测、HE染色、镀银染色及电镜组织学检测、图像分析对比。结果 制备所得硫酸软骨素酶ABC微球表面光滑,球体大小各异且均匀,无粘连及成簇等现象,Weibull方程曲线显示硫酸软骨素酶ABC微球体外释药稳定。采用硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球处理改良化学法去细胞同种异体神经移植能够促进大鼠神经缺损处的轴突再生,提高神经修复的速度和质量,再生神经直径较粗,粘连较轻,电生理检测和组织学观察显示各项指标均优于两对照组,且较两对照组修复效果更接近于自体神经移植。结论 硫酸软     

Biomechanical properties of peripheral nerve after acellular treatment

Background  Peripheral nerve injury causes a high rate of disability and a huge economic burden, and is currently one of the serious health problems in the world. The use of nerve grafts plays a vital role in repairing nerve defects. Acellular nerve grafts have been widely used in many experimental models as a peripheral nerve substitute. The purpose of this study was to test the biomechanical properties of acellular nerve grafts.

Methods  Thirty-four fresh sciatic nerves were obtained from 17 adult male Wistar rats (age of 3 months) and randomly assigned to 3 groups: normal control group, nerve segments underwent no treatment and were put in phosphate buffered saline (pH 7.4) and stored at 4°C until further use; physical method group, nerve segments were frozen at –196°C and then thawed at 37°C; and chemical method group, nerve segments were chemically extracted with the detergents Triton X-200, sulfobetaine-10 (SB-10) and sulfobetaine-16 (SB-16). After the acellularization process was completed, the structural changes of in the sciatic nerves in each group were observed by hematoxylin-eosin staining and field emission scanning electron microscopy, then biomechanical properties were tested using a mechanical apparatus (Endura TEC ELF 3200, Bose, Boston, USA).

Results  Hematoxylin-eosin staining and field emission scanning electron microscopy demonstrated that the effects of acellularization, demyelination, and integrity of nerve fiber tube of the chemical method were better than that of the physical method. Biomechanical testing showed that peripheral nerve grafts treated with the chemical method resulted in some decreased biomechanical properties (ultimate load, ultimate stress, ultimate strain, and mechanical work to fracture) compared with normal control nerves, but the differences were not statistically significant (P >0.05).

Conclusion  Nerve treated with the chemical method may be more appropriate for use in implantation than nerve treated with the physical method.

     

激光焊接神经的组织学观察

目的：观察CO₂激光焊接与线缝合神经吻合口的组织学改变,探讨激光焊接神经的优越性。方法：Wistar大鼠30只,随机分为实验组和对照组,将大鼠的右下肢坐骨神经离断,实验组采用输出功率为（150±20）mW激光焊接吻合神经;对照组采用传统线缝合神经。术后7、14和21 d对两种方法吻合的神经吻合口进行组织学观察。结果：与线缝合法相比,激光焊接吻合的神经吻合口愈合快、炎症反应轻。 结论：激光焊接神经能提高神经吻合质量,有利于神经功能的尽快恢复,是一种较理想的神经修复方法。