补肾益智方拆方含药血清对阿尔茨海默病细胞模型的作用

背景中药补肾益智方对阿尔茨海默病大鼠模型学习记忆能力有一定的保护作用,该方含药血清也能减轻神经瘤细胞NG 108-15细胞对β淀粉样蛋白的神经毒性反应,为了进一步了解该方的作用机制及其配伍规律,需对该方进行拆方研究.目的研究补肾益智方拆方亚组的含药血清对阿尔茨海默病细胞模型生长、分化等方面的影响,从血清药理学的角度探讨该方的配伍规律.设计随机对照实验.单位广州中医药大学临床药理研究所DME中心.对象实验于2003-01/08在广州中医药大学临床药理研究所DME中心实验室进行.实验对象为3月龄SD雄性健康大鼠40只和冻存的NG 108-15细胞株.方法①制备药物血清将40只SD大鼠随机分为对照组、原方组(蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮、冰片)、补肾组(蛇床子、枸杞等)、益气养血组(人参、制首乌等)、去冰片组(蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮),每组8只.将各组中药浓缩液按按10 μL/g(相当于生药6 g/kg)分别进行灌胃,连续1个月,对照组灌等量生量盐水.各组大鼠最后1次灌胃2h,麻醉后心脏采血,分离血清备用.②细胞增殖、培养及分化将体外培养的NG 108-15细胞分为6组,对照组、模型组孔中的增殖培养液含正常大鼠血清,其余4组分别为原方组及3个亚组的大鼠含药血清;同时每个孔加淀粉样β蛋白25～35至终浓度5 umol/L(对照组除外),继续培养48 h.主要观察指标用MTT法测定细胞增殖数和存活率;同时检测分化突起细胞占总细胞数的比率及突起平均长度.结果①细胞增殖情况模型组A值显著低于对照组(0.520±0.022,0.665±0.037,P＜0.01),各含药血清组A值均高于模型组,但以去冰片组效果最显著(0.636±0.035,P＜0.01).②分化细胞存活率模型组显著低于对照组(58.4%,100%),各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著(75.8%,P＜0.01).③分化突起细胞占总细胞数的比率模型组显著低于对照组[(42.95±11.42)%,(58.75±12.84)%,P＜0.01],各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著[(58.20±8.40)%,P＜0.01].④突起平均长度模型组显著低于对照组[(356.0±109.0),(493.8±133.0)μm,P＜0.01],各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著[(486.8±79.2)μm,P＜0.01].结论补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制淀粉样β蛋白25-35对NG108-15细胞的损伤作用,但各组情况有所不同.各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组＞原方组＞补肾组＞益气养血组.故方中冰片的功效有待进一步研究.     

补肾益智方拆方含药血清对阿尔茨海默病细胞模型的作用术

背景；中药补肾益智方对阿尔茨海默病大鼠模型学习记忆能力有一定的保护作用，该方含药血清也能减轻神经瘤细胞NG 108—15细胞对β淀粉样蛋白的神经毒性反应，为了进一步了解该方的作用机制及其配伍规律，需对该方进行拆方研究。目的：研究补肾益智方拆方亚组的含药血清对阿尔茨海默病细胞模型生长、分化等方面的影响，从血清药理学的角度探讨该方的配伍规律。设计：随机对照实验．单位：广州中医药大学临床药理研究所DMF中心。对象：实验于2003—01／08在广州中医药大学临床药理研究所DME中心实验室进行。实验对象为3月龄SD雄性健康大鼠40只和冻存的NG 108—15细胞株。方法：①制备药物血清：将40只SD大鼠随机分为对照组、原方组（蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮、冰片）、补肾组（蛇床子、枸杞等）、益气养血组（人参、制首鸟等）、去冰片组（蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮），每组8只：将各组中药浓缩液按按10μL／g（相当于生药6g／k曲分别进行灌胃，连续1个月，对照组灌等量生量盐水。各组大鼠最后1次灌胃2h，麻醉后心脏采血，分离血清备用。②细胞增殖、培养及分化：将体外培养的NG 108—15细胞分为6组，对照组、模型组孔中的增殖培养液含正常大鼠血清，其余4组分别为原方组及3个亚组的大鼠含药血清；同时每个孔加淀粉样β蛋白25～35至终浓度5umol／L（对照组除外），继续培养48h。主要观察指标：用MTT法测定细胞增殖数和存活率；同时检测分化突起细胞占总细胞数的比率及突起平均长度结果：①细胞增殖情况：模型组A值显著低于对照组（0．520&;#177;0．022，0．665&;#177;0．037．P〈0．01），各含药血清组A值均高于模型组，但以去冰片组效果最显著（0．636&;#177;0．035.P〈0.01）。②分化细胞存活率：模型组显著低于对照组（58．4％，100％），各含药血清组均高于模型组，但以去冰片组效果最显著（75．8％，P〈0．01）。③分化突起细胞占总细胞数的比率：模型组显著低丁对照组[（42．95&;#177;11.42）％，（58．75&;#177;12.84）％，P〈0．01]，各含药血清组均高于模型组，但以去冰片组效果最显著[（58.20&;#177;8．40）％，P〈0．01]。④突起甲均长度：模型组显著低于对照组[（356．0&;#177;109．0），（493．8&;#177;133．0）μm，P〈0．01]，各含药血清组均高于模型组，但以去冰片组效果最显著[（486．8&;#177;79.2）μm，P〈0．01]．结论：补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制淀粉样β蛋白25—35对NG108—15细胞的损伤作用，但各组情况有所不同。各组含药血清对细胞的保护作用南强至弱依次是去冰片组〉原方组〉补肾组〉益气养血组：故方中冰片的功效有待进一步研究.     

补肾益智方对老年性痴呆细胞模型的影响

背景 在体外培养的神经细胞培养液中加入具有神经毒性的淀粉样蛋白( amyliod protein,Aβ)片段可诱导产生阿尔茨海默病 (Alzheimer's disease,AD)相似的病理损害,补肾药是否改善其病理损害是本研究探讨的问题. 目的观察补肾益智方对由 Aβ片段毒性诱导的 NG10815细胞老年性痴呆模型作用的影响. 设计完全随机对照实验研究. 地点和材料 研究地点为广西中医学院第二附属医院神经科学研究所,材料为健康三月龄 Wista大鼠 60只,体质量 200～ 250 g,购自第一军医大学动物实验室. 干预与主要观察指标 将 Wista大鼠随机分为对照组、治疗组,每组 30只,雄雌各半.利用细胞计数、 MTT及流式细胞仪测定等方法观察补肾益智方含药血清处理由 Aβ片段毒性诱导的 NG108-15细胞的存活率、形学改变及细胞周期的改变. 结果 补肾益智方含药血清能增加 Aβ片段毒性诱导的 NG108-15细胞存活率和细胞突起;细胞增殖周期分析显示,含药血清能增加 S期细胞数. 结论 补肾益智方具有减轻细胞对 Aβ的神经毒性反应,表明该方在通过拮抗 AD的病理发展而发挥对 AD的治疗作用.     

补肾益智方对老年性痴呆模型大鼠神经递质释放的影响

背景：胆碱乙酰基转移酶活性水平的降低和神经递质囊泡膜蛋白的减少是老年性痴呆的主要生化指标,中药补肾益智方具有补肾、益气、生髓、养脑作用,其含药血清能有效地保护由淀粉样蛋白引起的这些改变.目的：观察补肾益智方含药血清能否改善由淀粉样蛋白产物诱导神经细胞显示的老年性痴呆样病理损害,以此评价补肾益智方治疗老年性痴呆的作用.设计：随机对照实验.单位：广西中医学院第二附属医院神经科学研究所,广州中医药大学老年脑病研究所.材料：实验于2003-09/2004-03在广西中医学院新药研究开发中心完成.选取健康清洁级3月龄Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组与中药灌胃组,各30只.补肾益智方主要由枸杞、蛇床子、人参、首乌、丹皮、冰片等组成,临用前配置为成药0.176 g/mL（生药1.13 g/mL）液体.方法：①中药灌胃组每只大鼠每天灌胃成药液1.0～1.5 mL,连续灌胃1个月,于末次给药后4 h内,5 000 r/min离心5 min分离血清,无菌过滤,56℃灭活补体,即为含药血清.空白对照组给予等量生理盐水灌胃,同样方法提取分离血清.②对于NG108-15细胞,当淀粉样蛋白25～35片段在培养液浓度为5 μmol/L或淀粉样蛋白1-42的浓度为200 nmol/L时较为合适.③NG108-15细胞以Dulbecco改良的Eagle培养基在37℃,体积分数为0.1的CO2培养箱中培养1 d,然后加入浓度为5 μmol/L淀粉样蛋白25-35或200nmol/L淀粉样蛋白1-42片段,继续培养1 d后,即为老年性痴呆细胞模型.以含50g/L中药灌胃组血清或空白对照组血清的Dulbecco改良的Eagle培养基更换原培养液,仍加入上述浓度的淀粉样蛋白片段以维持老年性痴呆细胞模型,分化培养5 d后进行各项指标观察,并设立无淀粉样蛋白片段对照.④利用免疫蛋白印迹检查、免疫放射括性测定及电生理学测定方法观察补肾益智方含药血清处理NG108-15细胞老年性痴呆模型后的胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率.主要观察指标：补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平、NG108-15细胞功能性突触形成、NG108-15细胞微小终板电位频率的影响.结果：实验纳入大鼠60只,全部进入结果分析.①补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性的影响：在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42最终浓度200 nmol/L时,中药灌胃组胆碱乙酰基转移酶活性均明显高于空白对照组[（1651.2&;#177;134.5）,（1336.1&;#177;268.2）;（1586.1&;#177;223.4）,（1290.7&;#177;381.5）μmol/（g&;#183;h）;P＜0.05].②补肾益智方含药血清对突触素蛋白水平的影响：中药灌胃组突触素Ⅰ a和Ⅰ b积分吸光度总值在无淀粉样蛋白、淀粉样蛋白25-35、淀粉样蛋白1-42时分别为5.02,1.36和2.46,空白对照组分别为3.18,0.57和0.71,中药灌胃组分别是空白对照组的1.6,2.4,3.5倍.③补肾益智方含药血清对NG108-15细胞功能性突触形成的影响：当无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组功能性突触形成水平均高于空白对照组[（90.6&;#177;6.0）%,（63.2&;#177;17.0）%;（58.0&;#177;13.1）%,（34.2&;#177;13.0）%;P＜0.05].④补肾益智方血清对NG108-15细胞微小终板电位频率的影响：无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组微小终板电位频率均高于空白对照组[（9.28&;#177;4.1）,（5.48&;#177;5.14）;（5.55&;#177;5.85）,（3.05&;#177;4.46）个/min;P＜0.01,P＜0.05].结论：补肾益智方剂含药血清在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白存在的情况下均能提高胆碱乙酰基转移酶的活性,不仅能保护由淀粉样蛋白引起的细胞突触素水平降低,在无淀粉样蛋白的情况下还可以提高突触素蛋白的表达,提高功能性突触的形成率和递质含量的释放.表明该方能拮抗老年性痴呆的病理发展,并通过提高神经递质的释放能力发挥对老年性痴呆的治疗作用.     

补肾益智方对老年性痴呆模型大鼠神经递质释放的影响

背景胆碱乙酰基转移酶活性水平的降低和神经递质囊泡膜蛋白的减少是老年性痴呆的主要生化指标,中药补肾益智方具有补肾、益气、生髓、养脑作用,其含药血清能有效地保护由淀粉样蛋白引起的这些改变.目的观察补肾益智方含药血清能否改善由淀粉样蛋白产物诱导神经细胞显示的老年性痴呆样病理损害,以此评价补肾益智方治疗老年性痴呆的作用.设计随机对照实验.单位广西中医学院第二附属医院神经科学研究所,广州中医药大学老年脑病研究所.材料实验于2003-09/2004-03在广西中医学院新药研究开发中心完成.选取健康清洁级3月龄Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组与中药灌胃组,各30只.补肾益智方主要由枸杞、蛇床子、人参、首乌、丹皮、冰片等组成,临用前配置为成药0.176 g/mL(生药1.13 g/mL)液体.方法①中药灌胃组每只大鼠每天灌胃成药液1.0～1.5 mL,连续灌胃1个月,于末次给药后4 h内,5 000 r/min离心5 min分离血清,无菌过滤,56℃灭活补体,即为含药血清.空白对照组给予等量生理盐水灌胃,同样方法提取分离血清.②对于NG108-15细胞,当淀粉样蛋白25～35片段在培养液浓度为5 μmol/L或淀粉样蛋白1-42的浓度为200 nmol/L时较为合适.③NG108-15细胞以Dulbecco改良的Eagle培养基在37℃,体积分数为0.1的CO2培养箱中培养1 d,然后加入浓度为5 μmol/L淀粉样蛋白25-35或200nmol/L淀粉样蛋白1-42片段,继续培养1 d后,即为老年性痴呆细胞模型.以含50g/L中药灌胃组血清或空白对照组血清的Dulbecco改良的Eagle培养基更换原培养液,仍加入上述浓度的淀粉样蛋白片段以维持老年性痴呆细胞模型,分化培养5 d后进行各项指标观察,并设立无淀粉样蛋白片段对照.④利用免疫蛋白印迹检查、免疫放射括性测定及电生理学测定方法观察补肾益智方含药血清处理NG108-15细胞老年性痴呆模型后的胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率.主要观察指标补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平、NG108-15细胞功能性突触形成、NG108-15细胞微小终板电位频率的影响.结果实验纳入大鼠60只,全部进入结果分析.①补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性的影响在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42最终浓度200 nmol/L时,中药灌胃组胆碱乙酰基转移酶活性均明显高于空白对照组[(1651.2±134.5),(1336.1±268.2);(1586.1±223.4),(1290.7±381.5)μmol/(g·h);P＜0.05].②补肾益智方含药血清对突触素蛋白水平的影响中药灌胃组突触素Ⅰ a和Ⅰ b积分吸光度总值在无淀粉样蛋白、淀粉样蛋白25-35、淀粉样蛋白1-42时分别为5.02,1.36和2.46,空白对照组分别为3.18,0.57和0.71,中药灌胃组分别是空白对照组的1.6,2.4,3.5倍.③补肾益智方含药血清对NG108-15细胞功能性突触形成的影响当无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组功能性突触形成水平均高于空白对照组[(90.6±6.0)%,(63.2±17.0)%;(58.0±13.1)%,(34.2±13.0)%;P＜0.05].④补肾益智方血清对NG108-15细胞微小终板电位频率的影响无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组微小终板电位频率均高于空白对照组[(9.28±4.1),(5.48±5.14);(5.55±5.85),(3.05±4.46)个/min;P＜0.01,P＜0.05].结论补肾益智方剂含药血清在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白存在的情况下均能提高胆碱乙酰基转移酶的活性,不仅能保护由淀粉样蛋白引起的细胞突触素水平降低,在无淀粉样蛋白的情况下还可以提高突触素蛋白的表达,提高功能性突触的形成率和递质含量的释放.表明该方能拮抗老年性痴呆的病理发展,并通过提高神经递质的释放能力发挥对老年性痴呆的治疗作用.     

地黄饮子对阿尔茨海默病模型鼠脑神经元细胞凋亡及超微结构的影响

目的：探讨地黄饮子对阿尔茨海默病动物模型凋亡基因及超微结构的影响。方法：实验于2003-08／2004-08在黑龙江中医药大学基础理论实验室完成。选择120只Wistar大鼠，随机分成6组：假损伤组，模型组，抗脑衰对照组，石杉碱甲对照组，地黄饮子5Ag／（kg&;#183;d）和地黄饮子2．7g／（kg&;#183;d）组，每组20只。模型组以D-半乳糖腹腔注射合并淀粉样β蛋白注射海马制备阿尔茨海默病动物模型，假损伤组腹腔注射生理盐水，其余各组分别在造模的同时，地黄饮子治疗组分别给予地黄饮子灌胃[相当含生药5．4g／（kg&;#183;d）和2．7g／（kg&;#183;d）]，抗脑衰对照组、石杉碱甲对照组分别给予抗脑衰胶囊、石杉碱甲溶液灌胃[含生药分别为2．403g／（kg&;#183;d），0．018mg／（kg&;#183;d）1，1次／d，共5周。运用反转录-聚合酶链反应测定各组海马凋亡基因的表达，及采用透射电镜观察各组海马神经元超微结构的变化。结果：120只动物中，因造模死亡共20只，模型组5只、石杉碱甲对照组6只，抗脑衰对照组3只，地黄饮子5．4g／（kg&;#183;d）组3只，地黄饮子2．7g/（kg&;#183;d）组3只，进入结果分析100只。①大鼠海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、核转录因子KB、hsp70基因mRNA的表达：反转录-聚合酶链反应结果示，淀粉样β蛋白可诱发大鼠海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA表达增加，与模型组比较，抗脑衰对照组，石杉碱甲对照组，地黄饮子5．4g／（kg&;#183;d），2．7g/（kg&;#183;d）组均可不同程度降低大鼠海马区域的表达（P〈0．05）。地黄饮子5．4g／（kg&;#183;d）组下调幅度最大。与假损伤组比较，模型组鼠脑海马核转录因子KBmRNA、hsp 70 mRNA水平显著降低；与模型组比较，抗脑衰对照组，石杉碱甲对照组，地黄饮子5.4g／（kg&;#183;d），2．7g/（kg&;#183;d）组均有明显的上调作用（P〈0．05）。地黄饮子5.4g/（kg&;#183;d）组对hsp 70 mRNA水平的上调作用优于抗脑衰对照组，石杉碱甲对照组。hsp 70 mRNA电泳强度比较显示：假损伤组〉地黄饮子5．4g／（kg&;#183;d）组〉地黄饮子2．7g／（kg&;#183;d）组〉抗脑衰对照组〉石杉碱甲对照组〉模型组。②海马神经元超微结构的观察：模型组海马神经元显现凋亡早期的形态特点，各治疗组和对照组对凋亡皆有抑制作用。结论：地黄饮子对痴呆鼠海马神经元细胞凋亡有抑制作用，且呈剂量依赖性，其作用机制可能与地黄饮子上调核转录因子κB、hsp70的表达，抑制线粒体释放细胞色素C，控制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活有关。     

复方金思维对阿尔茨海默病大鼠脑组织突触后致密区蛋白95表达的影响与安慰剂及盐酸多奈哌齐干预效果的比较

目的:脑突触后致密区蛋白95具有调节人脑认知活动中突触功能和结构的作用,观察复方金思维干预实验动物致密区蛋白95表达以及学习记忆能力的变化,并与安慰剂及盐酸多奈哌齐干预相对照。方法:实验于2004-11-15/2005-02在北京中医药大学东直门医院药理实验室及首都医科大学宣武医院神经生化室进行。取雄性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只:生理盐水组、模型组、盐酸多奈哌齐组和金思维组。生理盐水组大鼠海马注入2μL生理盐水,其他3组大鼠缓慢注入2μL淀粉样β蛋白1～42(5g/L),复制阿尔茨海默病模型。造模后3d开始给药,盐酸多奈哌齐组按0.92mg/kg的剂量灌胃;复方金思维(由中药人参、肉苁蓉、石菖蒲及郁金等组成)配置成0.36g/mL的浓度,按0.7μL/g的剂量给药;模型组及生理盐水组给3mL的双蒸水,均1次/d,共4周。4周后,以Morris水迷宫测试大鼠学习期间的逃避潜伏期和游泳距离以及记忆测定中的记忆能力,评价行为学变化;以免疫组化检测大鼠海马CA1区、皮质突触后致密区蛋白95表达的变化。结果:经补充后32只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫的学习、记忆测试结果:模型组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力显著低于生理盐水组(P<0.01),盐酸多奈哌齐组、金思维组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力较模型组高(P<0.0     

阿尔茨海默病的致病因素和临床用药研究

阿尔茨海默病(AD)亦称老年性痴呆症,是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,在65岁以上老年人中患病率可高达5%～10%.据估计,全世界目前有2 430万人患有老年痴呆[1].随着当今世界人口老龄化,AD 发病率日趋增高,其患者多有记忆力、定向力及社会活动障碍,必将带来更大的社会问题和经济问题.因此,把现阶段对AD致病机制及临床用药的研究成果进行综合分析和概述,将对今后AD的防治有意义.     

补肾益智方对老年性痴呆细胞模型的影响

背景：在体外培养的神经细胞培养液中加入具有神经毒性的淀粉样蛋白(amyliod protein，Aβ)片段可诱导产生阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)相似的病理损害，补肾药是否改善其病理损害是本研究探讨的问题。目的：观察补肾益智方对由Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型作用的影响。设计：完全随机对照实验研究。地点和材料：研究地点为广西中医学院第二附属医院神经科学研究所，材料为健康三月龄Wista大鼠60只，体质量200～250g，购自第一军医大学动物实验室。干预与主要观察指标：将Wista大鼠随机分为对照组、治疗组，每组30只，雄雌各半。利用细胞计数、MTT及流式细胞仪测定等方法观察补肾益智方含药血清处理由Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞的存活率、形学改变及细胞周期的改变。结果：补肾益智方含药血清能增加Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞存活率和细胞突起；细胞增殖周期分析显示，含药血清能增加S期细胞数。结论：补肾益智方具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应，表明该方在通过拮抗AD的病理发展而发挥对AD的治疗作用。     

复方金思维对阿尔茨海默病大鼠脑组织突触后致密区蛋白95表达的影响：与安慰剂及盐酸多奈哌齐干预效果的比较

目的：脑突触后致密区蛋白95具有调节人脑认知活动中突触功能和结构的作用，观察复方金思维干预实验动物致密区蛋白95表达以及学习记忆能力的变化，并与安慰剂及盐酸多奈哌齐干预相对照。方法：实验于2004-11-15／2005-02在北京中医药大学东直门医院药理实验室及首都医科大学宣武医院神经生化室进行。取雄性SD大鼠32只，随机分为4组，每组8只：生理盐水组、模型组、盐酸多奈哌齐组和金思维组。生理盐水组大鼠海马注入2μL生理盐水，其他3组大鼠缓慢注入2μL淀粉样B蛋白1～42(5g／L)，复制阿尔茨海默病模型。造模后3d开始给药，盐酸多奈哌齐组按0．92mg／kg的剂量灌胃；复方金思维(由中药人参、肉苁蓉、石菖蒲及郁金等组成)配置成0．36g／mL的浓度，按0．7μL／g的剂量给药；模型组及生理盐水组给3mL的双蒸水，均1次／d，共4周。4周后，以Morris水迷宫测试大鼠学习期间的逃避潜伏期和游泳距离以及记忆测定中的记忆能力，评价行为学变化；以免疫组化检测大鼠海马CA1区、皮质突触后致密区蛋白95表达的变化。结果：经补充后32只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫的学习、记忆测试结果：模型组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力显著低于生理盐水组(P&;lt;0．01)，盐酸多奈哌齐组、金思维组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力较模型组高(P&;lt;0．05)，盐酸多奈哌齐组和金思维组无差异(P&;gt;0．05)。②脑突触后致密区蛋白95表达：模型组大鼠海马和皮质的表达少于生理盐水组(P&;lt;0.01)；盐酸多奈哌齐组、金思维组大鼠海马、皮质的阳性表达高于模型组(P&;lt;0．05)，但盐酸多奈哌齐组与金思维组之间无明显差异(P&;gt;0．05)。结论：模型组大鼠脑突触后致密区蛋白95表达减少，说明脑突触功能弱化和受损，而金思维和盐酸多奈哌齐治疗组大鼠脑突触后致密区蛋白95表达较模型组增加，说明突触的功能及可塑性有所恢复。提示复方金思维对实验动物脑突触功能和结构具有改善作用。     

学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠空间认知能力及脑组织的保护作用

目的：探讨学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠行为学变化和海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达的影响。方法：实验于2004-04／07在武汉大学医学院神经生物学实验室完成。选取86只大鼠运用淀粉样B蛋白双侧海马注射建立大鼠阿尔茨海默病模型，随机抽取造模成功大鼠56只分为阿尔茨海默病训练组40只、阿尔茨海默病对照组16只。未建立阿尔茨海默病模型16只大鼠为正常对照组。用Y型迷宫对阿尔茨海默病大鼠进行学习记忆训练4周，分别在训练第7，14，21，28天观察各组大鼠行为学变化和脑内异常磷酸化tau蛋白和海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达情况。结果：参加实验动物100只，模型制备成功72只进入结果分析。①训I练第28天时，阿尔茨海默病训练组Y型迷宫检测达标训I练次数，错误反应次数，潜伏期，全天总反应时间[15．82&;#177;2．64．4．18&;#177;1．75，(6．18&;#177;4．86)s，(1236．78&;#177;97．26)s]均接近正常对照组[16.10&;#177;3．94，3．90&;#177;1．72，(5．87&;#177;4．08)s，(1175．40&;#177;81．76)s，(P&;gt;0．05)】，而与阿尔茨海默病对照组大鼠比较差异显著[48．33&;#177;5．10．8．83&;#177;2，98，(11．32&;#177;12．23)s，(2264．32&;#177;244．60)s，(P&;lt;0．05)]。②训练第28天时阿尔茨海默病训练组大鼠脑海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性信号的积分吸光度(19．33&;#177;3．14，213．59&;#177;24．38)接近于正常对照组[(16．27&;#177;2．55)，(233．46&;#177;25．83)，P&;gt;0．05]。结论：学习记忆训练能明显改善海马注射淀粉样B蛋白l～40致阿尔茨海默病模型大鼠的空间学习记忆能力，减轻淀粉样B蛋白1～40诱导异常磷酸化tau蛋白的形成，提高海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的表达。说明学习记忆训练能通过改善阿尔茨海默病认知障碍的主要病理特征的物质基础，从而提高模型大鼠学习记忆力。     

地黄饮子对阿尔茨海默病模型鼠脑神经元细胞凋亡及超微结构的影响

目的:探讨地黄饮子对阿尔茨海默病动物模型凋亡基因及超微结构的影响。方法:实验于2003-08/2004-08在黑龙江中医药大学基础理论实验室完成。选择120只Wistar大鼠,随机分成6组:假损伤组,模型组,抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组,地黄饮子5.4g/(kg·d)和地黄饮子2.7g/(kg·d)组,每组20只。模型组以D-半乳糖腹腔注射合并淀粉样β蛋白注射海马制备阿尔茨海默病动物模型,假损伤组腹腔注射生理盐水,其余各组分别在造模的同时,地黄饮子治疗组分别给予地黄饮子灌胃[相当含生药5.4g/(kg·d)和2.7g/(kg·d)],抗脑衰对照组、石杉碱甲对照组分别给予抗脑衰胶囊、石杉碱甲溶液灌胃[含生药分别为2.403g/(kg·d),0.018mg/(kg·d)],1次/d,共5周。运用反转录-聚合酶链反应测定各组海马凋亡基因的表达,及采用透射电镜观察各组海马神经元超微结构的变化。结果:120只动物中,因造模死亡共20只,模型组5只、石杉碱甲对照组6只,抗脑衰对照组3只,地黄饮子5.4g/(kg·d)组3只,地黄饮子2.7g/(kg·d)组3只,进入结果分析100只。①大鼠海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、核转录因子κB、hsp70基因mRNA的表达:反转录-聚合酶链反应结果示,淀粉样β蛋白可诱发大鼠海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA表达增加,与模型组比较,抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组,地黄饮子5.4g/(kg·d),2.7g/(kg·d)组均可不同程度降低大鼠海马区域的表达(P<0.05)。地黄饮子5.4g/(kg·d)组下调幅度最大。与假损伤组比较,模型组鼠脑海马核转录因子κBmRNA、hsp70mRNA水平显著降低;与模型组比较,抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组,地黄饮子5.4g/(kg·d),2.7g/(kg·d)组均有明显的上调作用(P<0.05)。地黄饮子5.4g/(kg·d)组对hsp70mRNA水平的上调作用优于抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组。hsp70mRNA电泳强度比较显示:假损伤组>地黄饮子5.4g/(kg·d)组>地黄饮子2.7g/(kg·d)组>抗脑衰对照组>石杉碱甲对照组>模型组。②海马神经元超微结构的观察:模型组海马神经元显现凋亡早期的形态特点,各治疗组和对照组对凋亡皆有抑制作用。结论:地黄饮子对痴呆鼠海马神经元细胞凋亡有抑制作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能与地黄饮子上调核转录因子κB、hsp70的表达,抑制线粒体释放细胞色素C,控制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活有关。     

补肾方治疗原发性骨质疏松症疗效观察

目的 研究补肾方治疗原发性骨质疏松症的临床疗效.方法 110例原发性骨质疏松症患者随机分为实验组55例内服补肾方,对照组55例口服钙尔奇D.2个月后观察症状、骨密度变化.结果 补肾方和钙尔奇D治疗后症状积分、骨密度两组间差异有统计学意义.结论 中药补肾方能有效预防与治疗原发性骨质疏松.     

银杏提取物对淀粉样β蛋白致PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨银杏提取物对淀粉样β蛋白(Aβ)致PC12细胞凋亡的保护作用。方法:应用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)分析法研究细胞活性的改变,应用激光共聚焦显微镜进行线粒体膜电位测定。TUNEL法测定细胞凋亡率。结果:随着Aβ浓度的加大,PC12细胞的存活率逐渐降低。同时给予Aβ及不同剂量的银杏提取物,可明显提高PC12细胞的存活率。银杏提取物可减少Aβ所致的细胞凋亡,Aβ组细胞凋亡率为63%,高于银杏组21%(χ2=36.2069,P=0.0000)。结论:银杏提取物可抑制Aβ诱导的PC12细胞凋亡。     

阿尔茨海默病发病中淀粉样β蛋白的神经毒性作用

目的:学习和掌握淀粉样β蛋白的生物学特征,认识其在阿尔茨海默病的发病中的几种可能作用以及以淀粉样β蛋白为靶点的阿尔茨海默病治疗策略的最新进展研究。资料来源:应用计算机检索“Medline1994-01/2004-01”与淀粉样β蛋白相关文献,检索词为“β-amyloid”,限定文章语言种类为English;同时计算机检索“中国期刊网”1994-01/2004-01与淀粉样蛋白相关文献,检索词为“淀粉样蛋白”,二次检索词为“阿尔茨海默病”,限定文章语言种类为汉语。资料选择:就检索到的400余篇文献进行筛选,选择以阿尔茨海默病为研究对象、以淀粉样β蛋白为主要研究内容的文献60多篇,其中研究内容相似的,以近5年且发表在较权威杂志者优先,排除综述类文献。资料提炼:将筛选到的30篇文献按结构、功能和疾病关系分类:其中2篇与淀粉样β蛋白的结构相关,13篇与淀粉样β蛋白神经毒性相关,15篇与淀粉样β蛋白在阿尔茨海默病发病中的作用以其为治疗靶点的研究有关。资料综合:32篇文献包括体内实验和体外实验研究,说明了淀粉样β蛋白的神经毒性作用,它可诱导性活氧产生自由基损伤,诱导细胞凋亡,并刺激中枢神经系统发生炎症反应,故大多数学者认为淀粉样β蛋白在脑组织中的沉积可能是阿尔茨海默病发生、发展的中心环节,因此以阻止或减少脑内淀粉样β蛋白的数量为目标的治疗策略,可能直接作用于阿尔茨海默病的病理过程。结论:淀粉样β蛋白在阿尔茨海默病发病中起关键作用,以淀粉样β蛋白为靶点的阿尔茨海默病防治策略正在被广泛研究和应用。     

补肾填精方对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆行为的影响

背景探讨中药方剂治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是该病防治研究中的热点之一,采用中药治疗AD动物模型学习记忆行为的影响及其机制的相关报道较少. 目的研究自拟补肾填精方对铝造成AD模型大鼠学习记忆行为的影响.设计随机对照的实验研究.地点和材料实验地点河北医科大学生物化学与分子生物学教研室.将6月龄健康、雌性SD大鼠60只,随机等分为正常组、模型组、小剂量中药防治组和中等剂量中药防治组.干预用9 g/L的AlCl3溶液对模型组、小剂量中药防治组和中等剂量中药防治组大鼠腹腔注射来制造AD模型大鼠,1 mL/(次·d),连续注射3 d,间隔1 d再注射,共计72 d;按上述周期和时间对正常组大鼠腹腔注射等量生理盐水.对小剂量中药防治组和中等剂量中药防治组大鼠灌胃中药,前者每次灌胃药液的生药含量是2.6 g,后者每次灌胃药液的生药含量是5.21 g,1次/d,每连续灌胃7 d,间隔1 d,共计72 d;同时,按上述周期和时间对正常组和模型组大鼠灌胃等量的自来水.将干预完成后的大鼠同时进行学习记忆能力和行为测定.主要观察指标大鼠在Y型-电迷宫中的逃避正确率、逃避潜伏期和逃避行为方式.结果模型组大鼠的逃避正确率[(85±10)%]低于正常组[(94±13)%](P＜0.05),逃避潜伏期长于正常组(P＜0.05),逃避的启动方式、奔跑方式和逃避终点异常.小剂量中药防治组和中剂量中药防治组的逃避正确率[(93±10)%]和[(99±8)%]高于模型组(P＜0.05,P＜0.001),逃避潜伏期短于模型组(P＜0 05,P＜0.01),逃避的启动方式、奔跑方式和逃避终点也都明显好转.结论补肾填精方干预改善铝致AD模型大鼠学习记忆障碍和行为异常.     

银杏叶提取物对海马注射淀粉样β蛋白致阿尔茨海默病大鼠模型神经元凋亡的保护作用

目的:观察具有神经保护作用的银杏叶提取物对海马注射淀粉样β蛋白的阿尔茨海默病模型大鼠神经元凋亡的影响。方法:实验于2002-03/2003-10在河北医科大学第二医院、解放军总医院老年医学研究所、北京大学蛋白质工程国家重点实验室完成。取清洁级成年雌性SD大鼠共30只,随机分为3组,各10只。其中两组大鼠以淀粉样β蛋白25～353μL(4g/L)注射于海马齿状回,10只于当日起给予银杏叶提取物(购自德国威玛舒培博士药厂)2mL腹腔注射,连续7d,为银杏叶提取物组;10只以等量生理盐水腹腔注射7d,为淀粉样β蛋白组;另外10只动物以生理盐水3μL注射于海马齿状回,为对照组;行脱氧核苷酰转移酶法亦即脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记和免疫组化染色(Bcl-2和Bax)及双向凝胶电泳观察。结果:30只动物全部进入结果分析,无脱失。①淀粉样β蛋白组及银杏叶提取物组神经元均有凋亡发生。其细胞核被染成棕黄色。典型的凋亡细胞表现为染色质凝集,呈新月形聚集于核膜下。由于切面的不同,凝集的染色质可以不同形态散在于核切面的任意位置,有的以圆形位于核膜下,有的位于核中央,但不象坏死那样边界不清,呈絮状。细胞内有棕黄色粗颗粒分布或棕黄色细腻颗粒弥漫分布者为Bcl-2或bax阳性反应细胞。②淀粉样β蛋白组神经元凋亡率高于银杏叶提取物组(55%,21%);淀粉样β蛋白组Bcl-2反应阳性细胞率低于银杏叶提取物组(15%,47%);淀粉样β蛋白组Bax反应阳性细胞率高于银杏叶提取物组(49%,17%)。③通过分析比较得到的双向凝胶电泳图谱,淀粉样β蛋白组与对照组比较,有26个蛋白质点的体积百分含量发生显著性变化(P<0.05)。而在银杏叶提取物组上述26个发生变化的蛋白点有11个出现回调。结论:银杏叶提取物可使海马注射淀粉样β蛋白组对发生变化的蛋白点回调,对大鼠神经元凋亡有保护作用。     

复方金思维对阿尔茨海默病大鼠脑组织ProSAP/Shank蛋白表达的影响

目的:观察突触后蛋白ProSAP/Shank在模型大鼠脑内表达的变化,探讨复方金思维对阿尔茨海默病大鼠的神经保护作用。方法:实验于2004-11-15/2005-02在北京中医药大学东直门医院药理实验室及首都医科大学宣武医院神经生化室进行。取雄性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只:①生理盐水组:脑海马注入2μL生理盐水,3d后灌胃3mL的双蒸水。②模型组:脑海马缓慢注入2μL淀粉样β蛋白1～42(5g/L),复制拟阿尔茨海默病模型,造模后3d灌胃3mL的双蒸水。③盐酸多奈哌齐组:造模同模型组,造模后3d灌胃盐酸多奈哌齐(0.92mg/kg)。④金思维组:同前造模,造模后3d灌胃复方金思维(由人参、肉苁蓉、石菖蒲、郁金等组成,浓度0.36g/mL,剂量0.7μL/g)。所有给药均1次/d,连续4周。4周后以Morris水迷宫测试大鼠学习期间的逃避潜伏期和游泳距离,记忆测定中的记忆能力,以进行行为学评价。检测大鼠脑海马CA1区、皮质突触后蛋白ProSAP/Shank的变化应用免疫组化方法。结果:经补充后32只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫的学习、记忆测试结果:模型组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力显著低于生理盐水组(P<0.01),盐酸多奈哌齐组、金思维组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力较模型组高(P<0.05),盐酸多奈哌齐组和金思维组无差异(P>0.05)。②脑海马CA1区ProSAP/Shank蛋白免疫组化测定结果:模型组平均面密度低于生理盐水组和金思维组(14.35±3.66,21.21±5.66,19.67±3.83,P<0.05),模型组的平均吸光度也低于生理盐水组、盐酸多奈哌齐组和金思维组(68.74±5.98,121.93±8.69,84.36±13.56,84.58±8.24,P<0.01)。③脑皮质区ProSAP/Shank蛋白免疫组化测定结果:模型组的平均吸光度低于生理盐水组和金思维组(84.12±19.40,138.93±28.62,106.53±5.08,P<0.01)。结论:淀粉样β蛋白海马注射可致海马CA1区及皮质Shank蛋白表达下降,说明淀粉样β蛋白聚集损害了海马突触的功能和可塑性。而复方金思维不但显著提高了大鼠的学习、记忆能力,而且使Shank蛋白的表达明显增加,说明它对突触的功能和可塑性具有改善作用。     

调心方对淀粉样β蛋白25～35杏仁核注射诱导的痴呆模型大鼠淀粉样肽前体mRNA表达的影响

目的:观察调心方对淀粉样β蛋白杏仁核注射诱导的痴呆模型大鼠脑内淀粉样肽前体mRNA表达,淀粉样β蛋白沉积及星形胶质细胞增殖作用,并与多萘哌齐比较。方法:实验于2001-01/2004-01在上海中医药大学老年医学研究所实验室完成。取SD大鼠40只,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、调心方组、多萘哌齐组5组,每组8只。①给药:各组动物于造模前1周开始给药,调心方组给予调心方(党参、茯苓、远志、桂枝、菖蒲等组成,7.45g/mL)24.8g/kg,多萘哌齐组应用多萘哌齐组5mg/kg;其余各组用1mL双蒸水,每天灌胃1次,连续3周。②造模:正常对照组不造模;模型组、调心方组、多萘哌齐组大鼠通过单侧杏仁核注射淀粉样β蛋白25～35(5.0nmol)造成痴呆大鼠模型;假手术组切开皮肤后立即缝合。③观察指标:各组大鼠给药完毕后麻醉状态下处死取脑,采用免疫组化法观察老年斑的主要成分淀粉样β蛋白1～40沉积和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应法观察淀粉样肽前体KPI和MPImRNA的表达。结果:40只大鼠全部进入结果分析。①淀粉样β蛋白1～40的阳性表达:模型组可见皮质、海马大量阳性细胞表达,其吸光度显著高于正常对照组和假手术组,调心方组显著低于模型组(P<0.01)。多萘哌齐组虽有降低但不明显(P>0.05)。②胶质纤维酸性蛋白的表达:与正常组和假手术组相比,模型组海马、皮质内胶质阳性细胞广泛增多,吸光度值亦高(P<0.01);调心方组显著低于模型组(P<0.01)。而多萘哌齐组作用不明显。③反转录-聚合酶链反应结果:调心方组KPI(1269bp),MPI(297bp)条带表达均明显减弱,抑制大脑皮质和海马淀粉样肽前体751/770mRNA的表达。结论:淀粉样β蛋白沉积能激活胶质细胞分泌多种炎性细胞因子,诱发炎症反应,进一步促使淀粉样肽前体mRNA的表达和淀粉样β蛋白的沉积,启动炎症和免疫级联反应诱导老年斑的形成。而调心方可显著减少模型大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白和淀粉样肽前体mRNA的表达,抑制炎症反应,从而进一步减轻淀粉样β蛋白的大量沉积,其效果优于多萘哌齐。     

中药调心方、补肾方改善阿尔茨海默病认知功能的临床研究

目的比较调心方、补肾方和多奈哌齐改善阿尔茨海默病(AD)认知功能的临床疗效。方法以美国DSM－IV为诊断标准,简易智能状态量表(MMSE)、Fuld物体记忆测验(FOM)、快速词汇测验(RVR)、WAIS数字广度测验(DS)、WISC积木测验(BD)测试为评价工具,观察治疗前后分值变化。结果3组均能明显提高患者的MMSE分值,调心方和多奈哌齐能同时改善FOM和DS,补肾方能改善RVR。结论调心方、补肾方与多奈哌齐都能改善AD患者的认知功能,作用相似而又有区别。