碱性成纤维细胞生长因子与脊髓损伤

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)后，受损神经元的保护与存活是近年来神经科学界研究的重点。许多研究表明，碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)在体内能促进受损伤神经元的存活和突起生长，体外也能促进损伤神经元的修复与再生。本文拟就bFGF的分子结构，在脊髓中的分布，脊髓损伤后的表达变化及其可能的作用机制及bFGF在脊髓损伤实验性治疗中的研究现状，综述如下。     

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠脊髓损伤后的变化及意义

目的：比较碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)在脊髓损伤前后的表达差异。方法：采用免疫组化染色方法，观察bFGF在脊髓中的分布，以图像分析技术对损伤前后的变化进行定量分析。结果：在正常脊髓中，bFGF定位于灰质星形胶质细胞核和一些神经元胞质中，脊髓损伤后，表达阳性细胞数增多（P＜0．01），灰度值增加（P＜0．01），结论：bFGF可能在脊髓损伤后的自身修复与再生方面起重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠牵张性脊髓损伤后c-fos基因表达的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growthfactor,bFGF)对牵张性脊髓损伤后c-fos基因表达的影响.方法用特制的脊柱撑开器放置在大鼠脊髓T12～L3椎体横突上纵向牵张,同时皮层体感诱发电位监测,建立大鼠牵张性脊髓损伤模型.用免疫组织化学染色法观察c-fos基因的表达,并用计算机图像分析系统进行定量分析.结果脊髓损伤后神经元C-FOS蛋白D值较正常组显著增加,表达高峰出现在损伤后2 h,而bFGF治疗组在各时相点均低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论碱性成纤维细胞生长因子能显著抑制脊髓损伤后c-fos基因的表达,这可能是bFGF保护神经元并减轻脊髓损伤的机制之一.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脊髓牵张损伤后Caspase 3基因表达的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠牵张性脊髓损伤后神经细胞凋亡及Caspase3基因表达的影响。方法大鼠脊髓T13-L2经牵张损伤,CSEP监测P1-N1波幅下降至术前波幅70%后,于损伤平面以下经蛛网膜下腔置细导管,治疗组分别于术后即刻、1、2、3、4、8、12及24h经细导管注入bFGF溶液20μl,对照组在相同时间注入等量生理盐水,然后于术后1、4、7、14及21d处死取材。采用流式细胞仪、原位末端转移酶标记法(TUNEL)、Caspase3活性测定及免疫组织化学检测分方法别观察各组不同时相点神经细胞凋亡及Caspase3表达的变化。同时应用联合行为评分(CBS)及电生理检查观察大鼠功能恢复情况,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果脊髓损伤后对照组流式细胞仪检测的细胞凋亡率、TUNEL阳性细胞数、Caspase3阳性表达及活性测定在各时相点均明显高于正常组(9.4%±1.7%比4.7%±0.9%、7.6个/mm2±2.8个/mm2比4.0个/mm2±1.1个/mm2、894±74比501±31),bFGF治疗组与对照组相比则显著降低,二者比较差异有统计学意义(P<0.05,0.01)。联合行为评分及皮层体感诱发电位也显示出大致相同的趋势。结论bFGF能抑制Caspase3蛋白的表达,降低Caspase3活性,减少继发性脊髓损伤细胞凋亡并促进脊髓神经功能的恢复。     

脊髓损伤后碱性成纤维细胞生长因子的表达及意义

目的　观察脊髓损伤 (SCI)后大鼠后肢功能恢复情况 ,以及损伤后不同时间碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的变化及意义。　方法　取雌性 SD大鼠 4 0只随机分为 5组 (n=8) :正常对照组、伤后 2 ,5 ,1 2和 1 8d组。 Allen法致伤脊髓。免疫组织化学和图像分析方法观察神经细胞 b FGF表达变化。大鼠综合行为评分法(CBS)对各级神经功能评分。　结果　 (1 )在行为观察中 ,发现大鼠脊髓损伤后有自行恢复倾向 ,损伤后 1 8d后肢功能恢复 6 8%。 (2 ) b FGF表达 :2 ,5 ,1 2 d b FGF表达量及 b FGF阳性细胞数目呈进行性增加 ,但在 1 8d开始下降。损伤后的前 1 2 d,各组 b FGF灰度值与 CBS评分有显著的相关性 (r=- 0 .95 98,P<0 .0 1 )。　结论　 (1 )急性脊髓损伤后脊髓有自我修复的倾向 ;(2 ) b FGF在急性脊髓损伤后早期可能对脊髓的再生和自我修复起重要作用     

腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子对人骨关节炎软骨细胞的作用

目的:探讨腺病毒介导的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人骨关节炎(OA)软骨细胞的转染及其作用。方法:人OA软骨细胞分为3组:OA对照组、绿色荧光蛋白(EGFP)对照组及bFGF转染组。采用含bFGF的腺病毒载体转染人OA软骨细胞,48 h后通过流式细胞术分析腺病毒转染软骨细胞的效率,绘制转染效率曲线。6 d后检测培养基中bFGF的浓度及软骨细胞增殖;观察软骨细胞蛋白多糖及Ⅱ型胶原的表达。结果:腺病毒介导的bFGF可高效转染人OA软骨细胞并在细胞外表达。与OA对照组相比,bFGF转染后可明显促进软骨细胞的增殖(P<0.05);同时增加了软骨细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原的生物合成(P<0.05)。结论:腺病毒介导的bFGF可促进OA软骨细增殖,增强细胞基质的合成,对软骨细胞表型的维持具有重要作用。     

酸性成纤维细胞生长因子在大鼠脊髓中的定位及脊髓损伤后的表达

目的：了解脊髓损伤（ＳＣＩ）后酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）的变化规律。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化染色方法，观察ＳＣＩ前后脊髓中ａＦＧＦ的动态变化，并以图像分析技术对这种变化进行定量分析。结果：在正常脊髓中，ａＦＧＦ定位于前角运动神经元胞浆中；ＳＣＩ后ａＦＧＦ明显增高。结论：ＳＣＩ后，脊髓自身产生大量的ａＦＧＦ，这种自身保护机理可能在ＳＣＩ后的自身修复与再生方面起重要作用。     

酸性成纤维细胞生长因子在大鼠脊髓中的定位及脊髓损伤后的 …

目的：了解脊髓损伤（ＳＣＩ）后酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）的变化规律。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化染色方法，观察ＳＣＩ前后脊髓中ａＦＧＦ的动态变化，并以分析技术以这种变化进行定量分析。结果：在正常脊髓中，ａＦＧＦ定位于前角运动神经元胞浆中ＳＣＩ后ａＦＧＦ明显增高，结论：ＳＣＩ后，脊髓自身引产生大量的ａＦＧＦ，这种自身保护机理可能在ＳＣＩ的自身修复与再生方面起重要作用。     

应用碱性成纤维细胞生长因子基因治疗促进大鼠早期断蒂皮瓣的成活

目的探讨腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子基因(Ad-bFGF)对大鼠随意皮瓣早期断蒂的影响。方法SD♂大鼠,普通级,随机分成3组:Ad-bFGF目的组、Ad-GFP对照组、PBS对照组,每组10只。于大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。术后4d断蒂,断蒂后7d观测皮瓣成活面积,检测bFGF表达情况,计算血管密度。结果目的组皮瓣的成活率、血管密度和染色深度均较两对照组有显著差异(P<0.05)。结论应用Ad-bFGF基因治疗能够促进大鼠随意皮瓣早期断蒂。     

大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后病理与后肢肌力的变化

目的 观察大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后脊髓病理与后肢运动功能的变化.方法 构建大鼠T9脊髓慢性压迫性损伤模型,30只Wistar大鼠按完全随机法分组:假手术对照组(5只)、慢性压迫组(5只)、减压组(20只),减压组分为减压后1周、2周、4周、6周,采用斜板试验,观察大鼠后肢功能;利用HE染色、NissⅠ染色和TUNEL染色方法,观察受压部位脊髓及临近上下节段的脊髓前角病理变化和细胞凋亡现象.结果 慢性压迫组大鼠斜板试验角度明显低于对照组(P＜0.01),脊髓减压后第1周,斜板角度显著提高(P＜0.01),随着时间延长后肢肌力逐渐增强;受压部位脊髓减压后早期病理变化无明显改变,减压后第2周细胞凋亡指数仍较高,为(24.31±4.73)％,与慢性压迫组差异无统计学意义(P＞0.05);临近上下节段脊髓减压后早期病理恢复可见,细胞凋亡率于减压后1周显著下降(P＜0.05),分别为(15.21±4.81)％和(16.21±3.98)％,以后继续降低.结论 大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后,其早期的后肢运动功能恢复,可能主要因受压部位临近上下节段脊髓功能代偿所致.     

Nutlin-3a-PLGA微球促大鼠脊髓损伤后的运动功能恢复

目的 探讨Nutlin-3a-PLGA微球对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响.方法 采用单乳化法制备Nutlin-3a-PLGA微球.健康成年SD大鼠采用随机数字表法分为单纯损伤组、生理盐水微球治疗组和Nutlin-3a-PLGA微球治疗组,每组12只;另取3只大鼠进行正常脊髓铬化青染色.对T1o脊髓进行右半横断损伤.单纯损伤组仅行脊髓右半横断损伤而不给予干预,生理盐水微球治疗组术后予以生理盐水微球治疗,Nutlin-3a-PLGA微球治疗组术后予以Nutlin-3 a-PLGA微球治疗.术后2、4周行铬化青染色观察脊髓脱髓鞘情况,术前1d,伤后2、3、4周行Catwalk步态分析正常步序比、站立时间、足印平均强度、两后爪脚间距离以及相对足印距离5个时间-空间参数评价大鼠运动功能变化.结果 伤后4周与单纯损伤组(1 461.44±123.46)和生理盐水微球治疗组(1 347.33±114.42)比较,Nutlin-3a-PLGA微球治疗组(1 879.46±115.41)铬花青染色显示脱髓鞘病变较轻(P＜0.05),髓鞘排列较为紧密.与术前比较,术后2周单纯损伤组和生理盐水微球治疗组Catwalk步态分析各项行为学参数差异有统计学意义(P＜0.05);Nutlin-3 a-PLGA微球治疗组正常步序比、两后爪脚间距离以及相对足印距离差异有统计学意义(P＜0.05),左后肢站立时间和前肢足印平均强度差异无统计学意义(P＞0.05).与单纯损伤组和生理盐水微球治疗组比较,Nutlin-3 a-PLGA微球治疗组伤后2周左后肢站立时间、左右前肢足印平均强度降低,正常步序比增加;伤后4周单纯损伤组、生理盐水微球治疗组和Nutlin-3a-PLGA微球治疗组两后爪脚间距离分别为3.20±0.89 cm,3.23±0.90 cm,2.29±0.36 cm,Nutlin-3a-PLGA微球治疗组与其余两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);单纯损伤组、生理盐水微球治疗组和Nutlin-3a-PLGA微球治疗组左侧相对足印距离分别为10.17±6.40 cm、9.75±6.92 cm和2.85±1.72cm,右侧分别为7.63±4.78 cm、8.21±4.82 cm和3.00±2.07 cm;Nutlin-3a-PLGA微球治疗组与其余两组比较左右两侧相对足印距离差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 Nutlin-3a-PLGA微球局部作用能促进脊髓后半损伤大鼠传导功能及运动功能的恢复,对损伤节段轴突的再生可能有促进作用.     

脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子基因转染对大鼠脊髓损伤后神经功能的影响

目的　探讨阳离子脂质体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)基因体内转染对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能恢复的影响。方法　雄性成年SD大鼠 30只 ,随机均分为绿色荧光蛋白 (GFP)对照组及GDNF治疗组。采用改良Nystr m法经后路压迫大鼠胸段脊髓模型 ,以直接注射法将脂质体DC Chol和重组质粒 pEGFP GDNFcDNA混合后注入大鼠损伤脊髓。HE染色观察伤后 4周伤段脊髓残存组织的面积 ,采用斜板试验和运动功能评分观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果　大鼠脊髓损伤后 1～ 4周 ,GDNF治疗组后肢运动功能评分明显高于GFP对照组 ,两组间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。伤后 4周 ,GDNF组伤段残存脊髓组织的面积大于对照组 (P <0 .0 1)。结论　脂质体介导GDNF基因体内转染能明显减少脊髓损伤后伤区的坏死和萎缩 ,并促进大鼠后肢运动功能的恢复     

补阳还五汤联合电针疗法对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的研究

目的 探究补阳还五汤联合电针治疗对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响。方法 采用随机数字表法,将40只SD大鼠分成假手术组（n=8）、模型组（n=8）、实验1组（n=8）、实验2组（n=8）和实验3组（n=8）。造模成功后,实验1组和实验3组予补阳还五汤灌胃,1次/d;实验2组和实验3组电针治疗,1次/d;假手术组和模型组大鼠给予与实验1组和3组等量的生理盐水灌胃治疗;干预后1d、7d、14d和28d,每组随机处死2只大鼠,作为4个亚组,采用大鼠脊髓损伤评分（Basso,Beattie & Bresnahan locomotor rating scale,BBB scale）评估每个亚组大鼠运动功能;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠脊髓损伤后的脊髓组织形态。结果 假手术组大鼠评分无明显变化,实验1组、实验2组、实验3组7d、14d、28d的BBB评分整体高于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 补阳还五汤联合电针疗法对脊髓损伤大鼠的运动功能恢复有促进作用。     

三七总皂苷对大鼠脊髓损伤后GS的表达及运动功能恢复的影响

目的 探讨三七总皂苷(total panax notoginseng saponins,TPNS)对大鼠脊髓半横断损伤后运动功能恢复的作用以及对谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase,GS)表达的影响.方法 将大鼠随机分为正常组、溶媒对照组和TPNS组,实验组大鼠建立脊髓半横断模型,TPNS组损伤处为脊髓右侧T10段.损伤后15 min,腹腔注射剂量为20 mg/kg的三七总皂苷,每天给药1次,溶媒对照组注射等量生理盐水.术后1、3、7、14、21、28d进行行为学指标检测;采用免疫生物化学方法检测脊髓损伤远侧端GS表达的变化.结果 行为学结果表明,该浓度的三七总皂苷能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复,其中损伤后7d和14 d的BBB评分表明,三七总皂苷组大鼠运动功能恢复程度明王高于溶媒对照组.免疫组化结果表明脊髓半横断损伤后,在损伤脊髓远侧端GS的表达损伤侧强于对侧,损伤侧GS的表达趋势为1、3d逐渐增强,7d达高峰,在14 d时GS的表达逐渐下降,至28d仍略高于正常组.三七总皂苷组和溶媒对照组相比,GS的表达在相同时间点优于对照组,尤其是3d和7d.结论三七总皂苷促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复,这可能与其促进GS表达,从而改善脊髓再生的微环境有关.     

慢性完全性脊髓损伤后大脑运动系统功能

大部分针对恢复脊髓损伤（SCI）后运动功能的治疗方法是基于假设大脑具有完整的运动功能，为验证该假设，12例慢性完全性SCI患者和12例对照者，在其试图运动右足或想像运动右足期间分别以两种力量水平进行功能MRI检查。SCI患者保存了许多正常运动系统功能的特征，但也出现了一些明显的异常：①激活体积通常明显减少，如占初级感觉运动皮质正常激活体积的4％～8％，且信号变化的方差达正常组的2倍；②存在异常的激活模式，如在试图运动过程中苍白球一丘脑皮质环路激活增加和在想像运动过程中初级感觉运动皮质的异常处理过程；③随任务改变或力量水平变化而对运动的调节与在对照组中看到的模式不一致，如对照组的试图运动较想像运动在左侧初级感觉运动皮质和右背侧小脑的激活更多，而想像运动较试图运动在背外侧额前皮质和右侧中央前回的激活更多，SCI患者缺少上述调节。慢性完全性SCI后，患者足部运动过程中大脑运动系统功能的许多特征持续存在，但是，患者存在脑激活的明显异常，随任务需要而进行的功能调节能力较差，并出现病理性脑活动。因为脑功能是自主运动的中心，所以旨在改善慢性SCI后运动功能的治疗可能也需要注意上述脑功能异常。     

骨髓单个核细胞对大鼠脊髓损伤后行为功能影响的研究

目的：通过建立大鼠脊髓半横断模型,观察骨髓单个核细胞（BMMNCs）对大鼠后肢功能及受损脊髓组织中神经营养因子3（NT-3）表达的影响.方法：无菌条件下取大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞,用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞备用.将104只Wistar大鼠随机分为A组（假手术组）,8只;B组（PBS对照组）,48只;C组（BMMNCs实验组）,48只.大鼠术后1d、3d、5d、7d、14d和21d行BBB评分后,用免疫组织化学技术观察各组大鼠受损脊髓组织中NT-3的表达.结果：各个时间点BBB评分测试表明A组较B、C组分值高（P＜0.05）;B组分值较C组低（P＜0.05）.免疫组织化学技术检测显示各个时间点C组大鼠受损脊髓中NT-3的表达量高于B组（P＜0.05）,A组与B、C组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论：BMMNCs能够促进损伤脊髓组织中NT-3的表达,可能是其修复损伤脊髓,促进脊髓功能恢复的机制之一.     

大鼠脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的变化

目的:探讨甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的影响。方法:54只SD大鼠,随机分组为:假手术(对照组)、脊髓损伤(SCI组)和甲基强的松龙治疗(MP组),每组又分为处理后6h、12h、24h三个时相组,每组6只,采用Allen's打击法造成脊髓损伤模型,在各时相提取伤段脊髓线粒体,测定线粒体呼吸Ⅲ态(R3)、Ⅳ态(R4)、呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)。结果:SCI组在伤后6h、12h和24h的R3、RCR和P/O显著低于对照组,R4显著高于对照组,有统计学意义(P<0.01);MP组伤后6h和12hR3、RCR和P/O高于SCI组,R4低于SCI组,有统计学意义(P<0.01);MP组R3、R4和RCR在6h和12h时相与对照组之间无明显差异,24h时相R3、RCR和P/O低于正常对照组,有显著差异(P<0.05)。结论:脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能明显受到影响,线粒体内膜通透性增加,线粒体氧化磷酸化的偶联程度明显受到抑制。早期使用甲基强的松龙可明显改善线粒体的呼吸功能,保护伤段脊髓线粒体的稳定性。     

实验性家兔脊髓损伤后后肢运动功能与肌肉运动诱发电位的关系

目的 了解实验性家兔脊髓损伤模型损伤后肢体肌力和肌肉运动诱发电位(MEP)之间的关系.方法 45只家兔随机分为打击组和对照组共9组,打击能量分别为0、50、75、100、125、150、175、200、250 gcf.打击后和第4周末记录实验兔双后肢肌力、MEP的潜伏期和波幅,并在第4周末取家兔脊髓固定,脊髓神经中丝(NF)免疫组化及病理形态观察,测量NF光密度,进行统计分析.结果 脊髓受到外伤打击后,术中MEP的表现是出现或消失,即有或无,并与伤后实验兔后肢运动功能状态、术后皮质脊髓束神经微丝NF光密度相关.伤后4周实验兔的后肢MEP潜伏期延长程度与肌力下降呈线性相关,但其波幅与伤后肌力变化无相关.结论 在脊髓损伤中可以通过肌肉MEP的有或无作为判断脊髓损伤程度的指标.     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后EphA2在脊髓前角运动神经元中的表达

目的 探讨慢性脊髓损伤后红细胞生成素诱导肝癌细胞株受体A2(EphA2)在脊髓中的变化规律,寻找脊髓损伤后治疗的靶点.方法 将40只Wistar大鼠分为假手术组、轻度压迫组(CR 20%)、中度压迫组(ca 40%)、重度压迫组(ca 60%)4组.T10水平脊髓背侧加压,压迫方法采用塑料螺钉渐进性加压,分次完成手术.对大鼠进行后肢运动功能评分及所取脊髓标本进行原位杂交分析,对脊髓前角EphA2阳性细胞率进行统计分析,比较各组之间的差异.结果 EphA2阳性细胞主要存在于压迫远端脊髓灰质中,其中以脊髓前角运动神经元为著.假手术组有很少量EphA2阳性细胞,压迫组EphA2阳性细胞明显升高(P<0.01),中度压迫组及重度压迫组较轻度压迫组升高(P<0.05).中度压迫组及重度压迫组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 慢性压迫性脊髓损伤后脊髓前角运动神经元EphA2表达升高.慢性脊髓压迫可以诱发脊髓EphA2表达升高,对脊髓损伤是一个保护性因素.