大鼠坐骨神经去细胞基膜管异体移植的比较研究

目的:探讨化学萃取法(CEN)、冻融法(FTN)制备的异种鼠坐骨神经去细胞基膜管移植术后8、13、23天神经再生轴突距离、Schwann细胞迁入、再血管化及炎症反应异同.方法:将36只雌性Wistar鼠随机配对,分为CEN组与FTN组,每组18只,分别桥接移植两种方法制备的Sprague-Dawley鼠坐骨神经去细胞基膜管.观察术后8、13、23天移植物物理性状及组织形态学变化.结果:术后8、13、23天,神经轴突再生距离、近和远端Schwann细胞数、再血管化及炎症反应差异有显著性(P<0.05),CEN组优于FTN组.结论:化学萃取法制备的异种周围神经去细胞基膜管较冻融法能更快、更好地修复周围神经缺损,亦应有更大的临床实用价值.     

脱细胞基质面神经修复材料的制备

目的 制备具有天然神经组织结构的支架,构建组织工程化面神经用于修复面神经损伤。方法 取家兔面神经,改良化学萃取法制备脱细胞神经基质,HE染色形态学观察去细胞及脱髓鞘情况,荧光分光光度计测定支架内细胞经Quant-iT PicoGreen工作液染色后的DNA含量。MTT法检测细胞在支架上的相对生长率从而检测支架的细胞毒性。结果 支架移植体呈圆柱形,弹性与正常神经基本一致,组织观察显示细胞结构未见残余完整细胞及细胞碎片残留,未见神经髓鞘及轴突结构,细胞外基质形成纵向排列结构,结构之间可见空隙。兔脱细胞面神经基质支架内残留的DNA含量较正常兔面神经明显下降(P<0.01)。神经基质供体无细胞毒性。结论 改良化学萃取法可有效去除面神经细胞,天然结构保存完好,细胞毒性低,可作为组织工程化面神经的支架。     

化学萃取同种异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的 :通过化学萃取同种异体神经 ,去除髓鞘和雪旺细胞 ,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损 ,研究神经再生效果。方法 :正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管 ,桥接鼠坐骨神经 2 0mm缺损。实验分 3组 :无细胞基膜管移植组 (A组 )、自体神经移植组 (B组 )和异体神经移植组 (C组 )。术后进行肌电图、组织形态学及图像分析仪检查。结果 :A组再生神经有大量轴突通过移植体 ,术后 2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组 (P <0 .0 5 ) ,3个月时差异无显著性。髓鞘厚度在术后 3个月时亦低于B组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。轴突直径及数目两组无差异。结论 :这种无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移 ,是一种良好的神经移植替代材料。     

NaOH消蚀法制备周围神经细胞外基质的实验研究

目的 探讨家兔坐骨神经细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的制备,并观测其生物相容性,为临床应用ECM修复神经干缺损提供实验依据。方法 采用本室改良的NaOH消蚀技术,制备去除细胞成分的家兔坐骨神经ECM支架,进行光镜和扫描电镜观察和分析。将制备的ECM包埋于同种异体家兔背部肌肉组织中,术后不同时间取出,行大体及光镜下组织学观察,检测其有无排异反应及周围血管长人情况。结果 ①经NaOH消蚀法处理的坐骨神经组织细胞成分被完全消蚀掉,神经外膜、神经柬膜和神经内膜仍保持原有的构筑特征。②肌肉包埋后,宿主的成纤维细胞和血管内皮细胞向ECM内生长,形成较多富含红细胞的血管,并可引导再生细胞定向排列。结论 本室改良的NaOH消蚀法制备的周围神经ECM神经膜管结构保存完好,有良好的组织相容性,并可引导再生细胞定向排列。     

改良去细胞同种异体神经移植后免疫反应的观察

目的 观察冻融联合改良化学法去细胞同种异体神经植入受体后体内细胞免疫变化从而判断其免疫原性.方法 30只雄性Wistar大鼠分成冻融法联合改良化学法供体组（实验组）15只、新鲜异体神经供体组（对照组）15只.另取30只Spraue Dawley大鼠随机分成冻融法联合改良化学法受体组15只,新鲜异体神经受体15只.右侧坐骨神经造成1 cm长缺损,用供体组的两种不同方法处理的神经分别与相应受体组进行移植物桥接.植入4周后,将移植段取出,作组织学观察、免疫组化染色,记数上述CD4^＋、CD8^＋淋巴细胞变化.结果 CD4^＋、CD8^＋淋巴细胞变化新鲜异体神经组明显多于冻融法联合改良化学法（P＜0.01）.结论 经冻融联合改良化学法制备的去细胞同种异体神经具有免疫原性低,作为同种神经移植物不会被排斥吸收.     

脱细胞异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的　通过化学萃取同种异体神经 ,去除髓鞘和雪旺细胞 ,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损 ,研究神经再生效果。方法　正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管 ,桥接鼠坐骨神经 2 0mm缺损。将实验分 3组 :无细胞基膜管移植组 (A组 ) ;自体神经移植组 (B组 ) ;异体神经移植组 (C组 )。术后进行肌电图 ,组织形态学及图像分析仪检查。结果　A组再生神经有大量轴突通过移植体 ,术后 2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组 (P <0 0 5) ,3个月时差异无显著性。髓鞘厚度在术后 3个月时亦低于B组 ,差异有显著性 (P <0 0 5)。轴突直径及数目两组无差异。结论　无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移 ,是一种良好的神经移植替代材料。     

改良萃取法制备脱细胞神经支架的去髓鞘效果评价

【目的】评价改良化学方法制备脱细胞神经支架的去髓鞘与脱细胞效果。【方法】12只成年SD大鼠(230～280g),取双侧坐骨神经,随机分为3组,每组8例,分别采用不同的处理方法。正常对照组:不作任何处理;Hudson组:采用Triton X-200、磺基三甲铵乙内酯-10(SB-10)、磺基三甲铵乙内酯-16(SB-16)处理;改良组:采用Triton X-200、SB-10、SB-16联合脱氧胆酸钠(SDC)及过氧乙酸(PAA)处理。处理后行HE染色、甲苯胺蓝染色及透射电镜检查,观察脱细胞、去髓鞘程度及基底膜保存情况。【结果】形态学检查显示,与对照组相比,Hudson组中的细胞核结构完全消失,甲苯胺蓝染色为散在同心圆状的髓鞘结构,透射电镜下显示髓鞘板层成分保留,但有崩解断裂,轴突依然存在;改良组细胞核完全去除,与Hudson组不同的是,甲苯胺蓝染色显示为不规则多孔状结构,髓鞘成分消失,透射电镜下显示髓鞘及轴突成分彻底去除,基底膜管壁结构清晰并完整保留。【结论】改良萃取法制备脱细胞神经支架能够有效地去除细胞和髓鞘成分,同时基底膜管结构保留完整。     

肌基膜管植入对大鼠脊髓半横断损伤模型的血管化作用

目的：观察肌基膜管移植治疗大鼠脊髓损伤的血管生成情况,为在脊髓损伤中应用肌基膜管作为组织工程支架提供理论和实验依据。方法：利用冻融法将大鼠骨骼肌制备成肌基膜管,将其移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中,分别于术后3、5、7、14和28 d取材,利用碱性磷酸酶染色观察各个时间点支架中血管生成情况,比较不同时间点（3、5、7、1...     

大鼠去细胞神经支架制备方法的改良

目的:探讨去除大鼠周围神经中的细胞和髓鞘以取得去细胞神经支架的方法.方法:取15只SD大鼠的坐骨神经30条,随机分为3组(每组10条).分别为正常神经组(A组),TritonX-200处理的化学去细胞组(B组),TritonX-200联合sulfobetaine-16(SB-16)、sulfobetaine-10(SB-10)去细胞组(C组).在光镜和电镜下观察各组神经组织的组织学结构.采用免疫组织化学SP法检测各组神经组织中S-100蛋白和层黏连蛋白(Laminin)的表达.结果:制备出的去细胞神经呈淡乳白色圆柱状外观.略透亮,其延展性较化学处理前略增加.B、C组神经经去细胞处理后,均去除了Schwann细胞、神经髓鞘和轴突,C组更好地保存了由Schwann细胞基底膜管以及外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构.结论:TritonX-200联合SB-16、SB-10改良化学方法处理可获得达到要求的去细胞神经支架.     

人工神经桥接体修复神经缺损的研究

目的:观察冷冻处理后的兔胚胎施万细胞(Schwann cells,SCs)种植到去细胞基膜管中移植对周围神经缺损再生的影响,寻求修复周围神经缺损较为理想的方法。方法:取成年雄性兔88只,建立左侧上臂正中神经20 mm缺损模型,随机分为4组,每组22只,分A组:自体神经移植组,B组:去细胞基膜管桥接体组,C组:去细胞基膜管种植未冷冻处理胎兔SCs的桥接体组,D组:去细胞基膜管种植两步冷冻处理胎兔SCs的桥接体组,4组修复兔正中神经缺损。于16周内不同时间段行大体观察,光、电镜组织学观察及形态定量学分析(再生有髓神经纤维密度、髓鞘平均厚度、有髓纤维直径),检查各组桥接体运动神经传导速度,称指浅屈肌肌肉湿质量;术后8周行辣根过氧化物酶(horseradish peroxi-dase,HRP)逆行示踪标记,观察神经功能恢复。结果:C组和D组神经再生及功能指标(再生有髓神经纤维密度、髓鞘平均厚度、有髓纤维直径、运动神经传导速度、肌肉湿质量恢复率)与A组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。6周时C组存在单核细胞浸润情况较D组严重,胶原纤维形成稍多。8周行HRP逆行示踪标记,A、B、C、D 4组背根神经节和脊髓前角运动神经元均可见深蓝色或蓝黑色阳性细胞,B组阳性细胞数(5.00±2.16)个与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05),D组(12.5±3.87)个﹑C组(11.75±2.16)个与A组(13.50±4.20)个比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采用两步冷冻法处理后的兔胚胎SCs种植到去细胞基膜管中制备人工神经桥接体,经培养后桥接修复兔正中神经缺损能提高神经再生质量,很少发生免疫排斥反应,为神经修复提供了一种新方法。     

脱细胞异种神经移植体复合BMSCs修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的：对脱细胞异种神经的生物相容性进行评价,证明应用其复合BMSCs促进神经再生和功能恢复的效果。方法：采用化学萃取法制备兔的脱细胞神经,应用扫描电镜观察其超微结构;将BMSCs种植到神经支架构建神经移植体,体外培养后观察细胞形态;用构建的异种神经移植体桥接大鼠坐骨神经缺损,术后8周,检测胫前肌湿重比率,对再生神经进行组织形态学分析;并应用免疫荧光染色检测神经内NGF的表达。结果：脱细胞异种神经较完整地保留了天然立体的施万细胞基底膜管结构,完全地移除了神经内的施万细胞、轴突和髓鞘成分;在体外培养中支持种植的BMSCs黏附和生长。神经移植术后,与单纯异种脱细胞神经移植组相比,复合BMSCs的异种神经移植体移植能使胫前肌湿重比率增加、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径增加;增加再生神经内NGF的表达。结论：异种脱细胞神经移植体具备天然的立体结构,移除了施万细胞、髓鞘等抗原成分;神经支架无细胞毒性,具有良好的细胞相容性;复合BMSCs的异种神经移植体可显著地促进神经再生及功能恢复。     

脂质体的制备及相关性质的研究

目的:制备CL2MDP(Disodium clodronate,氯屈膦酸二钠)脂质体,并研究其包封率和稳定性。方法:采用逆相蒸发法制备CL2MDP脂质体,在透射电镜下观察脂质体颗粒的形态大小,应用离心法测定CL2MDP的包封率,并用反复冻融法考察脂质体的稳定性。结果:制备的脂质体形态较为规则,近似呈圆球形,平均直径(200±8)nm,计算测得包封率达(18.6±2.8)%,经冻融处理后脂质体包封率有一定程度的提高。结论:逆相蒸发法可用于制备包封率较高及稳定性良好的CL2MDP脂质体。     

组织工程膀胱细胞外基质生物相容性的实验研究

目的 制备兔膀胱细胞外基质材料,检测其生物相容性,探讨其作为组织工程泌尿道修复重建支架材料的可行性.方法 联合应用渗透溶液法-酶消化法-去垢剂洗涤法制备兔膀胱细胞外基质,将体外培养的兔膀胱移行上皮细胞与其复合培养,观察细胞在材料表面的黏附、生长、增殖情况;MTT法检测材料浸提液对膀胱移行上皮细胞的细胞毒性;将材料植入兔背部皮下检测其组织相容性.结果 兔膀胱细胞外基质冻干后呈白色半透明薄膜状,扫描电镜观察材料一面呈纤维网状结构,另一面呈平坦致密结构,两面均无细胞残留.膀胱移行上皮细胞能够在材料表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好.MTT法检测材料细胞毒性分级为0级或1级.皮下植入实验中动物无异常反应,材料能在体内逐渐降解并引导新生组织长入.结论 本研究制备的兔膀胱细胞外基质已完全除去组织中的细胞成份,同时保留了细胞外基质的纤维网状结构,具有良好的细胞相容性和组织相容性,可以作为组织工程泌尿道修复重建的支架材料.     

远志皂苷对蛙坐骨神经干动作电位的影响

目的：观察远志皂苷对蛙坐骨神经兴奋性的影响。方法：用蛙制作坐骨神经标本,以1／3最大反应的刺激强度作为最适刺激强度,观察不同浓度远志皂苷（0．1mg／mL、0．5mg／mL、1mg/mL和10mg／mL）对坐骨神经动作电位幅值的影响;在获得最适合药物浓度的基础上,进一步观察高钾及低温环境下远志皂苷对蛙坐骨神经动作电位幅值的影响。结果：（1）各浓度的远志皂苷均能提高坐骨神经动作电位的幅值,分别为：（115．05±42．08）％,（136．60±44．75）％,（122．91±44．75）％及（120．23±65．41）％,以浓度为0．5mg／mL时作用最显著（P〈0．05）;（2）高钾（1mol／L）溶液与低温环境（10±2）℃分别使坐骨神经动作电位幅值降低为处理前的（16．31±10．81）％及（52．19±29．19）％,撤除高钾及低温条件则能恢复至基线水平．而0．5mg／mL远志皂苷溶液却能使高钾及低温作用下的坐骨神经动作电位幅值得到提高,分别提高为基线的（118．47±42．42）％及（123．88±50．76）％,洗去远志皂苷后均能恢复至基线水平。结论：（1）远志皂苷能提高蛙坐骨神经的兴奋性,以0．5mg／mL的效果最为明显;（2）高钾及低温环境对坐骨神经兴奋性具有抑制作用;（3）0．5mg／mL远志皂苷能改善高钾及低温对蛙坐骨神经兴奋性的抑制作用。     

两种穿刺方法对家兔坐骨神经损伤的影响

目的研究神经刺激仪定位法及普通法行家兔坐骨神经阻滞后,对神经的电生理影响。方法以两种方法定位坐骨神经干后行阻滞,检测麻醉前后神经的传导速度、潜伏期、波幅以及髓鞘碱性蛋白含量的变化。结果阻滞后24h时间段,神经刺激仪组的神经传导速度（70.945±1.638）较普通组（68.239±1.818）快,P〈0.01;神经刺激仪组的潜伏期（0.845±0.019）较普通组（0.880±0.023）短,P〈0.05;神经刺激仪组的波幅（0.198±0.021）较普通组（0.177±0.028）高,P〈0.05。结论神经刺激仪引导下较普通法行神经阻滞,成功率高,恢复快,神经损伤小。     

注射性坐骨神经损伤的原因与外科治疗

目的：探讨臀部肌肉注射性坐骨神经损伤的发生机制及诊治方法,并结合15具尸体标本30条坐骨神经的解剖走行特点分析其损伤原因。方法：回顾性总结1995年10月-2012年10月本院收治的23例采用手术治疗的患者临床资料,观察治疗效果;并通过15具尸体标本和23例手术患者共53条坐骨神经归纳坐骨神经穿出梨状肌前后的分支类型,论述坐骨神经伤的医源性和解剖学原因。结果：（1）23例患者中,术后1周症状完全恢复4例,基本恢复7例;术后随访3个月：完全恢复11例,基本恢复6例,部分恢复6例;术后6个月：完全恢复16例,基本恢复5例,部分恢复2例,治愈率69．6％;（2）15具尸体30条坐骨神经对照组变异比例小于正常变异比例;23例坐骨神经损伤的病例中,有4例为I型,1例为Ⅱ型,14例为Ⅲ型,4例为Ⅳ型,变异比例82．6％,且损伤者多为小儿。结论：注射性坐骨神经损伤不仅与注射操作不规范所致的机械刺激、药物毒性、瘢痕压迫有关,主要与坐骨神经的解剖学结构和走行变异有关。解剖学结构中小儿臀大肌发育差、臀部小和坐骨神经走行变异是其注射性损伤的物质基础;外科治疗是坐骨神经损伤修复的有效方法。     

外膜袖套吻合法修复雌性SD大白鼠坐骨神经离断的实验研究

目的 通过动物实验,比较神经外膜袖套吻合法和神经外膜直接吻合法修复离断周围神经的效果.方法 雌性成年SD大白鼠48只,随机分为两组,即神经外膜直接吻合法组(对照组)、神经外膜袖套吻合法组(实验组),每组24只.两组皆解剖出左侧坐骨神经并与中段横行离断,对照组以神经外膜直接吻合法吻合离断神经;实验组以神经外膜袖套吻合法吻...     

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对大鼠损伤脊髓后IκBα表达的影响及意义

目的探讨微囊化兔坐骨神经组织细胞移植于大鼠损伤脊髓后对其IκBα的表达及活性的影响。方法家兔10只用于制备兔坐骨神经组织的胞悬液。成年SD大鼠120只随机分为4组：微囊组（微囊化兔坐骨神经组织细胞移植组，n=36）、细胞组（坐骨神经组织细胞移植组，71—36）、单损组（单纯损伤组，n=36）、假手术组（n=12）。微囊组、细胞组和单损组大鼠在脊髓半横断伤后，立即于损伤处分别植入明胶海绵吸附的10uL微囊化坐骨神经组织细胞、明胶海绵吸附的10uL坐骨神经组织细胞以及明胶海绵吸附的10uL生理盐水。分别于术后6h、12h、24h、3d、7d、14d（每个时相取6只大鼠）取出损伤部位脊髓标本，假手术组（每个时相取2只大鼠）则取相应节段脊髓。石蜡包埋后切片，行免疫组织化学染色观IκBα的表达变化。结果IκBα阳性细胞主要见于神经元细胞及胶质细胞的胞浆内。大鼠脊髓损伤后上述细胞IκBα表达降低，24h降到最低点．3d后表达开始回升，7d逐步恢复正常水平。微囊组与单损组、细胞组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论微囊化兔坐骨神经组织细胞移植于大鼠损伤脊髓后，可以通过抑制IκBα磷酸化降解环节，从而抑制炎症反应。     

纤维蛋白凝胶／血管内皮生长因子复合体在兔坐骨神经损伤恢复中的作用

目的 探讨纤维蛋白凝胶／血管内皮生长因子复合体在新西兰兔坐骨神经损伤后的功能恢复中的作用。方法 将12只新西兰兔分成两组,每组6只,实验组给予纤维蛋白凝胶／血管内皮生长因子复合体治疗,对照组给予血管内皮生长因子基因转染治疗,分别于治疗后第3、6、9周比较两组大体观察、坐骨神经功能指数、微血管计数等指标改善情况。结果连续观察9周后,实验组新西兰兔大体观察、坐骨神经功能指数、微血管计数等指标均明显优于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论纤维蛋白凝胶／血管内皮生长因子复合体能够有效促进新西兰兔坐骨神经损伤后的功能修复。     

化学去细胞同种异体神经制备的改良及桥接周围神经缺损效果

目的:改良去细胞异体神经的制备方法,研制出一种理想的自体神经移植替代物. 方法:将用Sondell法(Triton X-100、脱氧胆酸钠)和改良法[Triton X-200,sulfobetaine-10(SB-10),sulfobetaine-16(SB-16)]两种方法制备的去细胞异体神经用HE染色、髓鞘染色、免疫组化染色、扫描电镜检查等进行组织学评价. 然后将制备的神经桥接大鼠坐骨神经缺损,从坐骨神经指数、神经电生理、运动终板染色等方面评价神经移植后的再生效果. 结果:改良法制备的神经细胞及髓鞘去除彻底、结构保存完好;移植后神经再生良好,优于Sondell法制备的神经,达到了与自体神经移植相当的再生效果. 结论:综合运用萃取剂Triton X-200,SB-10和SB-16的改良化学萃取方法是一种较为理想的去细胞异体神经制备方法,其制备的异体神经移植物可望替代自体神经移植.