氟对雄性大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响的研究

目的探讨氟对大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响。方法将30只4～5周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低剂量组、高剂量组。分别按0、10和20mg/kg染毒剂量隔日灌胃氟化钠(NaF)染毒39天,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,用放射免疫法测定大鼠血清睾酮含量,用免疫组化(ICH)检测睾丸中Fas蛋白表达情况,同时镜检成熟精子质量。结果各染氟组大鼠睾丸氟含量均高于对照组(P0.05)且随染毒剂量的增加而逐渐升高;各染氟组大鼠血清睾酮含量低于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,睾酮含量逐渐降低;各染氟组大鼠生精细胞Fas蛋白阳性表达率高于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,Fas蛋白阳性表达率逐渐升高;各染毒组大鼠精子数量和精子活动率低于对照组(P0.05);精子畸形率高于对照组(P0.05)。结论染氟雄性大鼠血清睾酮水平降低,激活了生精细胞Fas/FasL系统,从而导致生精细胞损伤。     

烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮和抑制素B水平的影响

目的探讨烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮、抑制素B表达的影响。方法将40只8周龄雄性SD大鼠随机分成4组,分别为对照组及轻、中、重度吸烟组(每天分别暴露于4、8、12支香烟烟雾,早晚各1次),连续染毒8周后成功建立大鼠被动吸烟毒性模型。采用TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡数,分别以直接化学发光和ELISA法检测大鼠血清中睾酮、抑制素B的表达水平。结果对照组及轻、中、重度吸烟组大鼠生精细胞凋亡指数分别为(6.62±0.58)%,(7.08±1.02)%,(8.71±0.76)%,(10.17±1.18)%,各染毒组生精细胞凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。各染毒组大鼠血清睾酮、抑制素B水平均低于对照组,且均随染毒剂量的增加而降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论烟草烟雾可诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡,并影响血清抑制素B及睾酮分泌。     

姜黄素对砷致大鼠睾丸生精细胞凋亡的拮抗作用

目的研究姜黄素对砷致大鼠睾丸生殖细胞凋亡的拮抗作用。方法将50只健康清洁级Wistar雄性大鼠随机分为5组,分别为对照(双蒸水)组和亚砷酸钠(100 mg/L)染毒组及低、中、高剂量姜黄素(100 mg/L亚砷酸钠+25、50、100mg/kg姜黄素)干预组,每组10只。亚砷酸钠采用自由饮用方式进行染毒;姜黄素采用经口灌胃方式染毒,每周3次,连续8周。测量生精小管平均直径;测定大鼠血清睾酮浓度及睾丸生精细胞凋亡指数。结果与对照组比较,亚砷酸钠染毒组大鼠血清睾酮的水平降低,生精小管直径缩小,而睾丸生精细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01)。与亚砷酸钠染毒组比较,中、高剂量姜黄素干预组大鼠血清睾酮的水平升高,生精小管直径增大,而睾丸生精细胞凋亡指数下降,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着姜黄素染毒剂量的升高,大鼠血清睾酮水平和生精小管直径均呈上升趋势,而睾丸生精细胞凋亡指数呈下降趋势。结论姜黄素对砷致大鼠睾丸生殖细胞凋亡具有拮抗作用。     

壬基酚对体外培养大鼠睾丸支持细胞凋亡影响的研究

目的探讨壬基酚对大鼠睾丸支持细胞的影响及其作用机制.方法建立体外培养大鼠睾丸支持细胞以及混合培养支持细胞和生精细胞体系,以不同浓度的壬基酚(分别为0.2μg/L、1.0 μg/L、3.0 μg/L、5.0 μg/L)作用于支持细胞和混合培养的支持细胞和生精细胞,采用MTT法测定支持细胞的活性,流式细胞仪测定支持细胞的凋亡率,RT-PCR法测定混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasL mRNA表达量的变化.结果随着壬基酚作用剂量的增大和作用时间的延长支持细胞的活性下降,且支持细胞的凋亡率随着壬基酚浓度的增大而提高;混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasL mRNA表达量均明显提高.结论壬基酚可引起支持细胞凋亡,进而通过Fas/FasL系统启动生精细胞凋亡.     

氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸组织和血清睾酮水平变化

目的研究氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸功能和组织学变化。方法将55只雄性大鼠随机分成5组,4个剂量组分别给予4.3、8.6、17.2和34.4mg/kg的氯乙酸甲酯,对照组给予生理盐水共13周,观察睾丸和附睾组织形态学的变化,检测精子活力、精子计数以及精子畸形率,血清睾酮水平和睾丸细胞的凋亡率。结果高剂量染毒组睾丸脏器系数、血清睾酮水平、睾丸细胞凋亡率[0.85±0.05、(5.93±2.75)μg/L、(18.22±7.03)%]与对照组[0.80±0.09、(14.70±8.04)μg/L、(6.40±4.51)%]之间差异有显著性(P<0.05)。结论最高剂量氯乙酸甲酯处理大鼠睾丸和血清睾酮水平有变化。     

锌对乙醇长期摄入致大鼠睾丸损伤保护作用

目的 观察锌对乙醇长期摄入所致大鼠睾丸损伤的保护作用机制.方法 30只健康雄性成年SD大鼠随机分为对照组、乙醇组、乙醇+葡萄糖酸锌组,各组每日分别灌胃0,7.5g/kg乙醇、7.5g/kg乙醇+7.7mg/kg葡萄糖酸锌,连续13周后检测精子计数、活动率、精子畸形率,血清睾酮;光、电镜观察睾丸的形态改变,同时测定睾丸线粒体中丙二醛(MDA)的产生量,免疫组织化学法和蛋白印迹(western-blot)检测睾丸组织中诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)的表达.结果 与对照组(38.0±7.9)×106/mL比较,乙醇组精子计数为(8.2±5.1)×106/mL,减少了78%(P<0.05),精子活动率下降了71%(P<0.05),精子畸形率明显升高(P<0.05),血清睾酮水平明显降低(P<0.05);睾丸生精上皮结构破坏,支持细胞和各级生精细胞均有退化变性;睾丸生精细胞iNOS表达明显增强(P<0.05);睾丸线粒体丙二醛含量明显升高.乙醇+葡萄糖酸锌组较单纯乙醇组精子计数、精子活动率上升,生精细胞退化变性程度减轻,睾丸生精细胞iNOS表达减弱(P<0.05),睾丸线粒体MDA减少,但血清睾酮仍低于对照组.结论 长期摄入乙醇会抑制精子生成和睾酮合成,补充锌可以抑制乙醇引起的睾丸过氧化损伤,保护睾丸的生精功能.     

精索静脉曲张与生精细胞凋亡

精索静脉曲张（VAC）是导致男性不育的常见原因，生精细胞凋亡在VAC所致的生精障碍中起了重要作用。VAC所致的少精子症是由于生精细胞广泛凋亡所致，其发生与镉毒性、氧化损伤、雄激素缺乏、睾丸温度升高、Fas／FasL作用增强等机制有关。而睾丸生精细胞凋亡检测虽有助于VAC手术指征的掌握及预后的判断．但属于创伤性检查，不宜作为临床常规。     

弓形虫致雄性生殖激素异常对生精细胞凋亡的影响

[目的]研究弓形虫感染后对雄性小鼠黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平的影响,进一步探讨其对雄性睾丸生殖细胞的损伤特点. [方法]选用10周龄雄性BALB/C小鼠72只,随机分为:正常对照组、弓形虫感染组(1×103、2×103、4×103、8×103)及阳性对照组(环磷酰胺).采用腹腔注射法,建立弓形虫感染模型,放射性免疫检测小鼠血清LH、T以及睾丸局部T水平;流式细胞仪检测睾丸生精细胞的凋亡情况并免疫组化SP法测定睾丸Bax、Bc1-2表达的变化. [结果]血清LH变化不明显,血清及睾丸局部的T水平降低(P＜0.05);睾丸细胞Bcl-2表达无明显改变,而生精细胞尤其是精母细胞的Bax表达明显增加;流式细胞仪检测正常对照组未出现明显的凋亡峰,实验组的二倍体出现明显凋亡,四倍体细胞减少. [结论]弓形虫感染导致生精细胞,尤其是精母细胞的大量凋亡可能与局部T水平的降低密切相关.     

染锰大鼠生殖激素水平与生精细胞凋亡基因表达

目的 探讨染锰大鼠血清生殖激素水平与生精细胞凋亡基因Caspase-3表达关系.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和15,30 mg/kg氯化锰组,分别染锰4,6周,乙醚麻醉,眼眶取血,分离双侧睾丸,称重,采用免疫组织化学方法检测生精细胞caspase-3表达,放射免疫法检测血清睾酮(testosterone,T)、卵泡刺激素(follicle stimulating,FSH)、黄体生成素(luteinizine hormone,LH)水平.结果 30 mg/kg氯化锰组染锰4,6周,血清中T、FSH、LH含量分别为(2.78±0.74)和(2.76±0.81)nmoL/L,(0.44±0.03)和(0.57±0.03),(0.19±0.02)和(0.19±0.03)U/L;Caspase-3表达水平分别为(65.49±11.34)和(82.65±5.26);染锰组大鼠生精细胞Caspase-3表达与血清T含量呈负相关(r=-0.799,P<0.01),与血清中FSH、LH水平呈正相关(r=0.735,r=0.737,P<0.01).结论 染锰大鼠血清T水平降低,FSH和LH水平上升是生精细胞caspase-3表达上调的主要原因.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞FasL蛋白及mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对GC-2 spd细胞FasL蛋白和mRNA表达的影响。方法将处于对数生长期的GC-2spd细胞,分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养液培养24 h。分别用q RT-PCR及Western blotting检测GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达。结果 100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平均高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平呈上升趋势。结论 DEHP可能通过增强生精细胞FasL mRNA及蛋白表达,激活Fas/FasL信号通路,最终导致生精细胞凋亡。     

短暂轻度阴囊热应激对小鼠睾丸的损害作用

目的 探讨单次、短暂、轻度阴囊热处理（43℃,15 min）对小鼠睾丸的损害作用。方法 24只成年ICR雄性小鼠,随机分为4组。将热处理组小鼠身体的下1/3部分浸于43℃恒温水浴中15 min,于热处理后0.5 h、2 h和6 h取睾丸组织。将对照组小鼠下腹部浸入22℃水浴15 min,6 h后处死取睾丸组织。采用HE染色对睾丸组织进行病理学检查,采用TUNEL方法检测细胞凋亡,采用western blotting检测睾丸caspase-3蛋白表达。结果 热处理后6 h小鼠睾丸组织生精小管间隙增大,生精小管内细胞排列紊乱,胞浆空泡化明显,核固缩细胞增多,多核精细胞显著增加。与阴性对照组相比,阴囊热处理能够显著诱导小鼠睾丸生殖细胞凋亡,增加睾丸组织裂解型caspase-3蛋白的表达。结论 单次、短暂、轻度阴囊热处理（43℃,15 min）能够明显引起睾丸病理组织学损伤,诱导睾丸生殖细胞凋亡。     

硒对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺Fas/FasL表达的影响

目的 研究适碘条件下不同硒摄入水平对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠甲状腺细胞凋亡蛋白Fas/FasL表达的影响.方法 将32只雌性Lewis大鼠按数字表法随机分成4组,分别设为对照组(C组),模型组(M组),补硒+模型组(Se++M组),低硒+模型组(Se-+M组),在适碘条件下(含10.90 mg/kg)对各组先施加不同水平的硒(Se++M组2 mg/kg,C与M组0.20 mg/kg,Se-+M组0.02 mg/kg)干预2周后,再采用猪甲状腺球蛋白免疫大鼠建立EAT模型,取甲状腺组织制成石蜡切片,采用免疫组织化学检测、比较Fas/FasL表达情况的差异.结果 EAT大鼠甲状腺Fas及FasL较对照均出现表达增加,其中Fas的表达有随补硒水平的升高而下降的趋势,Se++M组吸光度值(0.036±0.004)与M组(0.059±0.006)相比,Fas表达明显受到抑制(q=11.591,P=0.000),与Se-+M组(0.050±0.005)相比,Se++M组Fas呈较低表达水平(q=7.055,P=0.000);但补硒对FasL的表达无明显影响.结论 补硒能减少Fas在甲状腺细胞中的表达,对自身免疫性甲状腺疫病的发展具有抑制作用.     

复合应激对大鼠皮质细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨复合应激对大鼠皮质细胞凋亡的影响,以期为应激致脑皮质损伤的研究提供一定的实验依据。方法选择成年雄性SD大鼠30只,实验期每日采用7种应激源:即禁食/禁水、昼夜颠倒、鼠笼倾斜45度、单笼孤独饲养、限制活动、4℃冷应激、20℃强迫游泳刺激实验大鼠3~4周,以建立复合应激动物模型;以TUNEL试剂盒检测大鼠脑皮质部位原位细胞凋亡的变化,Western blot检测ERK1/2的活化表达水平。结果复合应激3周后,复合应激组大鼠体质量为(236.7±25.2)g,明显低于对照组(270.3±23.7)g,(P<0.05);复合应激组0.5 h和1 h时的蔗糖消耗量分别为(64.76±17.80)%和(67.33±14.35)%,明显少于对照组(82.73±20.67)%和(80.20±15.41)%(P<0.05);TUNEL原位凋亡检测实验发现,复合应激后大鼠皮质细胞凋亡数目明显增加(P<0.01);Western blot检测显示,复合应激后,p-ERK1表达增强(P<0.05),p-ERK2无明显改变。结论复合应激可以显著增加大鼠皮质细胞的凋亡,ERK1蛋白磷酸化水平的提高可能参与了复合应激所致的大鼠脑皮质部位凋亡的形成过程。     

米非司酮对大鼠增生型子宫内膜中Fas/FasL表达的影响

目的:观察米非司酮对大鼠增生型子宫内膜中Fas和FasL表达的影响,探讨其治疗功能性子宫增生症的作用机制。方法:45只SD大鼠,随机抽取15只作为正常组,另外30只采取"雌激素负荷法"建立大鼠子宫内膜增生模型。将建模后的大鼠随机分为米非司酮组15只,予米非司酮混悬液灌胃4周;模型组15只,等容量生理盐水灌胃4周。采用免疫组化S-P法检测各组大鼠子宫内膜中Fas和FasL的表达水平。结果:模型组大鼠子宫内膜中Fas蛋白表达的灰度值(146.90±24.12)高于正常组(116.63±16.94)(P0.01);米非司酮组与正常组比较差异无统计学意义(P0.05)。模型组大鼠子宫内膜中FasL蛋白表达的灰度值(122.77±28.10)低于正常组(149.75±29.53)(P0.01);米非司酮组FasL蛋白表达的灰度值(132.50±27.97)较模型组高,较正常组低,但与两者比较均无统计学意义(P均0.05)。结论:Fas蛋白表达降低和FasL蛋白表达升高所介导的细胞凋亡异常,可能是子宫内膜增生过长的发病机制之一。米非司酮治疗子宫内膜增生的机理之一可能是通过恢复宫内膜腺上皮细胞凋亡平衡,抑制内膜腺上皮增生,最终达到治疗目的。     

超氧化物歧化酶复合酶对尘肺患者肺泡巨噬细胞Fas/FasL信号转导及细胞凋亡的调控作用

目的 探讨超氧化物歧化酶(SOD)复合酶对尘肺患者肺泡巨噬细胞(AM)Fas/FasL信号转导及细胞凋亡的调控作用,为尘肺的早期防治提供依据.方法 收集在某专科医院进行大容量双肺灌洗治疗的0+接尘工人、Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者(共50例)的肺泡灌洗液中的细胞成分,将每例的AM分为非处理组、SOD组、Fas/FasL组.分别取5×106个细胞于DMEM中纯化培养2 h,3组均换新的DMEM,SOD组加SOD复合酶200 U/ml、Fas/FasL组加抗肿瘤坏死因子α((TNF-α)抗体50 ng/ml、抗-TRAIL抗体200 ng/ml后继续培养24 h.取1×106个AM进行细胞裂解,用western blot方法检测Fas、FasL、Caspases-8、Caspases-3蛋白表达,用quantity one 7.0图像分析软件测定各蛋白的相对含量.采用末端脱氧核酸转移酶(TdT)介导的duTP缺口末端标记技术(TFUNEL)检测AM凋亡情况;琼脂糖凝胶电泳法定性检测AM DNA片断化.结果 SOD组、Fas/FasL组凋亡指数分别为(9.50±2.76)%和(14.01±2.56)%,均低于未处理组[(19.18±2.83)%],差异有统计学意义(P＜0.05);未处理组呈现细胞凋亡的特征性DNA梯状带,Fas/FasL组梯状带隐约可见,SOD组未见特征性梯状带.SOD组Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者的Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达水平均低于未处理组和Fas/FasL组,差异有统计学意义(P＜0.05).不同处理组各期尘肺的AM Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3的蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 SOD复合酶可下调Fas/FasL系统的Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3的蛋白表达水平,抑制AM的凋亡.     

苯并(a)芘对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的探讨苯并（a）芘（BaP）对小鼠肝细胞Fas／Fas—L凋亡信号通路的影响。方法ICR小鼠灌胃染毒，染毒剂量分别为0，5，10，20，40mg／kg，采用免疫组织化学法检测肝细胞Fas、Fas—L、caspase-3基因表达情况，应用吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）荧光双染法检测肝细胞凋亡情况。结果BaP各剂量染毒组肝细胞凋亡发生率及Fas、Fas—L、caspase-3基因表达阳性率与对照组比较差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论BaP可诱发小鼠肝细胞发生凋亡。Fas／Fas—L信号通路改变是引起肝细胞凋亡发生的重要途径之一。     

人工流产与反复自然流产蜕膜组织中凋亡调控基因的表达

目的:探讨人工流产与自然流产蜕膜组织中凋亡调控基因的表达。方法:人工流产和反复自然流产蜕膜组织各30份,应用免疫组织化学方法测定Bc l-2、Bax、P 53、Fas、FasL 5种调控基因在蜕膜组织中的蛋白表达。结果:Bc l-2的表达在人工流产组与自然流产组无明显差异(P>0.05);Bax在自然流产组中的表达较人工流产组明显增强(P<0.05);FasL的表达在自然流产组明显低于人工流产组(P<0.05);Fas表达自然流产组与人工流产组无明显差异(P>0.05);P 53蛋白在自然流产组的表达强于人工流产组(P<0.05)。结论:自然流产的发生有3条凋亡调控途径:一为Fas/FasL途径:由于滋养细胞表面FasL表达的减少,不能引起母体内特异性的活化T细胞的凋亡,导致母体对胚胎的排斥反应,引起自然流产;另一为Bc l-2/Bax途径:虽然Bc l-2的表达在人工流产与自然流产蜕膜中无明显差异,但由于Bax在早孕自然流产蜕膜组织中的表达明显增强,导致Bc l-2/Bax的表达量失衡而引起流产;再一为P 53途径:野生型的P 53增多诱发细胞凋亡而导致流产发生。     

砷染毒大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力的变化

目的观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力表达的变化。方法将40只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成4组,分别为低、中、高剂量(0.375、0.75、1.5 mg/kg)砷染毒组和对照组,以灌胃法连续染毒16周后计算各组大鼠精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞端粒酶活力的表达。结果与对照组比较,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P<0.01),生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞端粒酶活力表达明显降低(P<0.01);每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);生精细胞凋亡与端粒酶活力呈负相关(r=-0.896,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞端粒酶活力,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量减少,产生雄性生殖毒性。