甲基转移酶与肿瘤耐药预见性、个体化化疗的研究

如何预见和克服肿瘤细胞对化疗药物的耐药性是肿瘤化疗急需解决的问题。我们通过对中国人肿瘤细胞系、裸鼠移植瘤及肿瘤患者的组织分子水平的研究,探讨肿瘤细胞中O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O^6-methylguanine-DNA methyltraasferase,MGMT)活性和蛋白水平高低与细胞对烷化剂、特别是对亚硝脲化疗药物耐药的关系。研究证明,肿瘤细胞的MGMT蛋白水平高,对烷化剂耐药;MGMT蛋白水平低对烷化剂敏感。在研究工作基础上,我们提出了以分析MGMT蛋白为依据．合理使用烷化剂、特别是使用亚硝脲类药物的预见性、个体化治疗方案。并进一步采用制备MGMT单抗的技术途径,研制出MGMT免疫组化检测试剂盒。本文结合文献和我们的研究工作,对甲基转移酶与肿瘤耐药预见性、个体化化疗的研究,从理论依据到实验研究作一全面的介绍。     

MGMT与化疗关系的研究进展

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶，在人由MGMT基因（O^6-methylguaninc-DNA methyltransferase gene）编码，位于10q^26。MGMT可将烷化剂作用下形成的O^6位甲基鸟嘌呤（O^6-methylguanine，O^6MG）上的甲基转移到自身的活性半胱氨酸残基上，从而有效地修复DNA损伤，但同时自身不可逆地失活，是目前报道的修复DNA烷化损伤的一个十分重要的酶。     

DNA修复酶MGMT与肿瘤关系的研究进展

DNA损伤后的修复情况在基因突变，肿瘤形成以及细胞死亡中都有着重要的作用。烷化剂致DNA损伤的修复由O^6-甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）负责，该酶结构与功能异常与肿瘤发生，肿瘤的临床特征以及肿瘤治疗等都有着密切的联系。本文就近年来这方面的研究进展作一综述。     

MGMT基因启动子甲基化检测在脑胶质瘤化疗中的意义

背景与目的：如何预测和克服肿瘤细胞对化疗药物的耐药性,实施个体化治疗是肿瘤化疗急需解决的问题。与基因启动子甲基化密切相关的DNA损伤修复基因O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT）表观沉默与肿瘤对烷化剂药物化疗敏感性密切相关。本研究探讨检测MGMT基因启动子CpG岛甲基化在判断脑胶质瘤患者预后及预测肿瘤对烷化剂药物耐药性中的意义。方法：甲基化特异性PCR（MSP）法检测脑胶质瘤组织及肿瘤细胞株MGMT基因启动子甲基化状态,蛋白印迹和免疫组化法测定蛋白表达。MTF法检测肿瘤细胞株对烷化剂药物敏感性,将患者随访资料针对MGMT甲基化状态绘制Kaplan-Meier生存曲线,并进行log—rank检验分析。结果：39例脑胶质瘤患者组织MGMT基因启动子甲基化发生率为46．2％,蛋白表达阳性率为61．5％,且肿瘤组织中MGMT基因甲基化状态与蛋白表达显著相关（P〈0．05）：6例正常组织均未检测出基因甲基化。MGMT基因过甲基化的脑胶质瘤SHG44细胞株用5-Aza-CdR处理后完全脱甲基化．MGMT蛋白恢复了表达,同时细胞株对烷化剂药物敏感性也发生逆转．由敏感转变为耐受。在采用手术、放疗和烷化剂尼莫司汀化疗等综合治疗的39例脑胶质瘤患者中,MGMT基因甲基化的患者生存率显著高于MGMT基因未甲基化患者（P〈0．05）。结论：MGMT基因甲基化状态与蛋白表达及肿瘤细胞对烷化剂药物敏感性密切相关,有可能替代MGMT蛋白检测成为判断脑胶质瘤患者预后和预测肿瘤对烷化剂化疗耐药性的标志分子。     

甲基化抗肿瘤药物治疗中的DNA修复:治疗效果与健康结局

在甲基化抗肿瘤药物治疗中,DNA修复是决定治疗效果与不良生物效应（如突变、癌变和致畸）的一个关键机制。本文主要对甲基化抗肿瘤药物在DNA修复过程的作用进行综述。尽管这些抗肿瘤药物无选择性地靶向作用于癌细胞和正常细胞的DNA,但因其削弱了癌细胞内某些特异的DNA修复活动,从而更多地杀死癌细胞。单功能的烷化剂显示出甲基化改变特性（丙卡巴肼、达卡巴嗪、链脲佐菌素、替莫唑胺）,或者氯乙基化形成单加合物并在下一步反应中引起DNA链内交联（洛莫司汀、尼莫地平、卡莫司汀、福莫司汀）。癌细胞对抗肿瘤药物的一个主要机制是通过自杀酶O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）直接逆转DNA损伤,形成O⁶-甲基鸟嘌呤和O⁶-氯化鸟嘌呤。由于MGMT对恶性肿瘤治疗的结局有显著影响,它被认为是一个耐药的重要标志,特别是在高级恶性胶质瘤。MGMT也被认为是甲基化抗肿瘤药物有效性的预测标志,许多临床试验正在分析MGMT抑制对治疗效果的影响。其他涉及甲基化抗肿瘤药物耐药的DNA修复因素包括错配修复、通过同源重组和DNA双链断裂（DSB）信号启动的相关修复。碱基切除修复和alkB同源蛋白（如ABH2）也可能与烷化类药物耐药有关,该现象在高表达MGMT的细胞株异常明显。对于这些机制的进一步了解,将有助于设计更为有效的治疗方案,同时减少副作用。     

烷化剂耐药基因真核表达质粒的构建及在K562细胞中的表达

目的克隆烷化剂耐药基因MGMT，构建真核表达质粒并导入真核细胞进行表达，筛选稳定表达的细胞系。方法从人肝组织中克隆MGMT基因后重组构建真核表达粒质pIRES2-MGMT—EGFP并鉴定。通过脂质体法将目的基因导入K562细胞，应用RT—PCR及Western blot检测目的基因的表达并筛选稳定转染的细胞克隆。结果成功克隆MGMT并构建了真核表达质粒pIRES2-MGMT—EGFP。转染细胞后MGMT在mRNA及蛋白水平均有表达，而对照组则为阴性。结论含烷化剂耐药基因MGMT真核表达质粒的构建及转染后表达的成功为烷化剂耐药基因的相关研究奠定了良好的基础。     

MGMT表达指导下的复发恶性胶质瘤挽救性化疗疗效分析（附30例报告）

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）是与恶性胶质瘤对替莫唑胺（temozolomide,TMZ）等烷化剂耐药相关的重要指标。本文总结根据MGMT表达状态选择不同的化疗方案,对复发恶性胶质瘤患者进行挽救性化疗的临床疗效。方法:经手术后病理确诊的复发恶性胶质瘤患者30例,均有可评价病灶。应用免疫组化法检测肿瘤MGMT表达状态,分为阳性组和阴性组。阳性组患者应用非TMZ常规5天方案或非烷化剂药物进行化疗,阴性组患者不限制化疗方案。结果:全组患者客观有效率为20%,中位无进展生存时间为8个月（95%CI:4.3～11.7）,中位生存时间为16个月（95%CI:7.4～24.6）。其中MGMT阳性组16例,阴性组14例。阳性组和阴性组患者的客观有效率分别为18.8%和21.4%,中位无进展生存时间分别为7个月（95%CI:3.1～10.9）和8个月（95%CI:3.9～12.1）,中位生存时间分别为16个月（95%CI:5.4～26.6）和16个月（95%CI:7.3～24.7）,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:复发恶性胶质瘤挽救性化疗具有良好的临床获益,根据肿瘤MGMT表达进行个体化化疗,特别是对于MGMT阳性复发恶性胶质瘤患者,能够避免耐药,得到与MGMT阴性患者相当的临床疗效。      

MGMT和EGFR在乳腺癌中的表达及其相关性分析

[目的]研究乳腺癌组织中DNA修复酶O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）和表皮生长因子受体（EGFR）表达的相关性及其临床意义。[方法]采用免疫组织化学SABC法。检测66例乳腺癌组织中MGMT及EGFR的表达。[结果]乳腺癌中MGMT的阳性率为57．58％。EGFR的阳性率为48．48％，MGMT与EGFR的表达具有中度相关性（r=0．403）。有淋巴结转移患者MGMT与EGFR阳性率均高于无转移（P〈0．05）。[结论]检测MGMT与EGFR的表达对乳腺癌患者的预后判断和制定化疗方案具有指导意义。     

O~6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶与肿瘤预见性化疗

亚硝脲类药物造成细胞DNA烷化损伤,杀伤肿瘤细胞.O~6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)可以修复这种损伤,使细胞产生抗药性.我们以中国人肿瘤细胞株和临床肿瘤标本为材料,分析了MGMT酶活,应用ACNU和BCNU进行肿瘤预见性化疗的基础研究.主要结果如下:1 分析了20株中国人肿瘤细胞(包括肝癌、肺癌、鼻咽癌、脑瘤、胃癌、恶性黑色素瘤、直肠癌、舌癌、乳腺癌、食管癌和宫颈癌等)MGMT酶活性及对亚硝脲药物的敏感性.发现MGMT酶活性高的细胞对亚硝尿有抗性,MGMT酶活低的细胞对亚硝脲药物敏感.     

弥漫大B细胞淋巴瘤患者血浆MGMT基因甲基化与化疗疗效关系

目的检测弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者外周血血浆中06．甲基鸟嘌呤．DNA甲基转移酶（O6-methylgua-nine-DNAmethyltransferase,MGMT）基因的甲基化状态,探讨MGMT基因甲基化与含烷化剂方案治疗DLBCL疗效的关系。方法利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测CHOP方案治疗前后DLBCL患者外周血血浆MGMT基因的甲基化状态。结果30例DLBCL患者血浆MGMT基因甲基化率为63．3％（19／30）,血浆MGMT基因甲基化者化疗有效率为100．O％（19／19）,非甲基化者化疗有效率为72．7％（8／11）,两组化疗有效率差异有统计学意义（P=0．041）。血浆MGMT基因甲基化者化疗后耐药发生率为10．5％（2／19）,非甲基化者耐药发生率为54．5％（6／11）,两组化疗耐药率差异有统计学意义（P=0．028）。结论外周血血浆中MGMT基因甲基化可能是预示DLBCL使用含烷化剂方案化疗疗效和耐药的指标。