完全睡眠剥夺对大鼠caspase-3表达的影响

目的:探讨完全睡眠剥夺对大鼠caspase-3的影响及其导致记忆、认知等功能障碍的机制.方法:取Sprague-Dawley大鼠35只,随机分为正常对照组、大平台对照组和完全睡眠剥夺组.其中正常对照组(NC)5只大鼠,正常笼养;大平台对照组(TC)只有72、96及120 h 3个时间点,每个时间点5只大鼠;完全睡眠剥夺组(TSD)也有72、96及120 h 3个时间点,每个时间点5只大鼠.采用小平台水环境法建立完全睡眠剥夺模型,在不同的时点处死大鼠后运用免疫组化SP法检测各组大鼠海马和皮质caspase-3的分布规律和动态变化.结果:caspase-3在各组的海马和皮质均有表达,随着睡眠剥夺时间的延长,caspase-3的表达逐渐增加,与正常对照组、大平台对照组差异有显著性(P<0.01).结论:完全睡眠剥夺能引起大鼠海马和皮质caspase-3的表达增加.并随睡眠剥夺时间的延长而渐趋明显.可能是完全睡眠剥夺引起大鼠神经元调亡,进而引起大鼠记忆、认知等功能障碍的机制之一.     

大鼠急性肺损伤过程中STAT3的活化对bcl-2 bax表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠急性肺损伤(ALI)过程中,信号转导和转录活化因子-3(STAT3)的活化是否可以起到一定的抗凋亡作用及其可能机制。方法健康雌性大鼠30只分为生理盐水组(NS)组、内毒素(LPS)损伤组、STAT3抑制剂——西罗莫司干预组。采用原位杂交法测定肺组织中STAT3基因的表达,免疫组织化学及细胞凋亡原位末端标记技术(TUNEL)测定肺组织中凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达及肺细胞的凋亡情况。结果以西罗莫司阻断STAT3的基因表达后,肺组织中抗调亡蛋白bcl-2表达下调,凋亡蛋白bax表达则增高,同时肺细胞凋亡数增加。结论急性肺损伤过程中STAT3通路的激活可上调bcl-2且下调bax的表达,从而起到一定的抗凋亡作用。     

肝病二号合剂对肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究肝病二号合剂能否诱导肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡,且能使bcl-2、bcl-2a、bax蛋白表达增加。方法雄性SD大鼠50只,体质量200g±25g,50只大鼠均用40%(V/V)四氯化碳溶液按0.15mL/100g皮下注射,每周2次,连续用药8周后,随机处死其中5只证实肝纤维化模型形成,将剩余45只随机分成空白组(A组)20只,模型组5只(C组)、治疗组(B组)20只,B组20只予肝病二号合剂4mL/(100g d)灌服8周,A组20只,用等量的生理盐水灌服8周治疗结束,C组为模型组。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测肝细胞凋亡,采用免疫组化法检测bcl-2 bcl-2a和bax蛋白。结果 B组与A、C组比较,肝星状细胞数量B组的细胞数量明显减少,肝星状细胞凋亡的数量明显增加,细胞凋亡指数增加明显。B组bcl-2 bcl-2a和bax蛋白明显增加。结论肝病二号合剂可以诱导肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡,且能使bcl-2、bcl-2a、bax蛋白表达增加。     

氯化铝对大鼠皮层神经元凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的探讨氯化铝(AlCl3)对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用及对bcl-2、bax基因表达的影响.方法体外原代无血清培养至第7天的大鼠皮层神经元,实验组的培养液中加入A1C13(终浓度分别为10、100、1000μmol/L),对照组的培养液中加入等体积分数为0.9%的生理盐水,培养48 h后,用原位末端标记法(TUNEL)测定其细胞凋亡率;培养24h后,用RT-PCR法检测bcl-2、bax基因的表达.结果各染铝组大鼠皮层神经元凋亡率明显升高,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05),并具有明显的剂量-反应关系;bcl-2基因表达明显下降,bax基因表达明显升高,bcl-2/bax逐渐下降,与对照组相比,差异有显著性,也具有明显的剂量-反应关系.相关分析表明,大鼠皮层神经元凋亡率与bcl-2基因表达呈负相关,与bax基因表达呈正相关,而与bcl-2/bax呈负相关(P＜0.01).结论铝可以诱导大鼠皮层神经元凋亡,其机制可能与bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调以及bcl-2/bax下降有关.     

氯沙坦对大鼠心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及对bcl-2,bax 和p53基因表达的影响

目的:研究氯沙坦对大鼠在体心肌缺血再灌注后细胞凋亡影响以及与bcl-2,bax和p53基因表达变化之间的关系.方法:用原位末端标记、原位杂交、免疫组化分别检测细胞凋亡、基因表达产物的mRNA和蛋白质,经图象分析系统测量阳性染色区域的平均光密度值,从而对原位杂交和免疫组化检测物质进行量化分析.大鼠分成对照组、治疗组和假手术组.结果:细胞凋亡数各组间差异非常显著(P<0.001);原位杂交和免疫组化bcl-2对照组、治疗组的升高值与假手术组之间差异显著(P<0.05),治疗组和对照组之间无显著差异(P>0.1);免疫组化bax治疗组、假手术组的降低值与对照组间差异非常显著(P<0.001),治疗组和假手术组之间无差异(P>0.9);bcl-2/bax比值由高到低分别为治疗组、对照组和假手术组.原位杂交p53各组间差异非常显著(P<0.001),假手术组>治疗组>对照组;免疫组化p53假手术组显著高于对照组和治疗组(P＜0.001 ),治疗组和对照组间差异无显著性(P>0.1).结论:氯沙坦可抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡,机制可能是通过抑制bax基因表达使bcl-2/bax比值升高,并抑制p53基因表达的降低.     

依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡的实验研究

目的观察依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡率的影响,探讨其对急性脊髓损伤后脊髓组织的保护作用。方法成年SD雄性大鼠60只,随机分成对照组和依达拉奉组,均采用改良Allen’s撞击法,致伤力为50gcf(10g×5cm)损伤T9～10制作动物模型,术后实验组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水。每组分别于6h、12h、24h、72h、7d5个时间点处死动物取材,每个时间点6只大鼠,对受损脊髓部位进行免疫组织化学检测神经细胞凋亡因子bcl-2和bax基因的表达及用原位末端标记法(TUNEL法)标记神经元凋亡细胞。结果与对照组相比,依达拉奉组bcl-2蛋白表达水平显著提高,bax蛋白表达水平明显下降。对照组检测到较高的细胞凋亡率。依达拉奉组细胞凋亡率较对照组明显下降。结论依达拉奉可能通过清除氧自由基、上调bcl-2和下调bax蛋白表达来抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,从而保护大鼠神经组织。     

糖尿病结肠动力障碍近端结肠平滑肌细胞相关凋亡基因表达的研究

目的:探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍近端结肠平滑肌细胞的凋亡变化。方法:雄性SD大鼠36只随机分为正常对照6周组、正常对照10周组、DM6周组和DM10周组,每组9只。检测空腹血糖(FBG)、胃肠推进率、血清胰岛素(FINS),HE染色观察近端结肠平滑肌的变化,应用荧光实时定量PCR(Realtime-qPCR)检测大鼠近端结肠平滑肌细胞的bax、bcl-2及caspase-3的mRNA表达情况。结果:(1)DM组大鼠较同时间点正常对照组大鼠空腹血糖增高,胃肠推进率及血清胰岛素降低,近端结肠平滑肌变薄,bax及caspase-3的mRNA表达增强,bcl-2的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)DM10周组大鼠较DM6周组大鼠的空腹血糖增高,胃肠推进率及血清胰岛素降低,近端结肠平滑肌变薄,bax及caspase-3的mRNA表达增强,bcl-2的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DM结肠动力障碍与近端结肠平滑肌细胞的凋亡密切相关,且细胞凋亡随病程发展而加重。     

鹅掌楸碱银配合物体外诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡及其机制的研究

目的研究鹅掌楸碱银配合物(AgLA2)体外诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡作用及其机制。方法采用MTT法,观察鹅掌楸碱银配合物对肺癌SPC-A-1细胞增殖的抑制作用,采用DNA ladder检测、细胞形态学观察、酶联免疫法进行凋亡检测;采用RT-PCR检测细胞bcl-2、bax mRNA表达水平,免疫细胞化学法考察细胞bcl-2、bax蛋白的改变。结果鹅掌楸碱银配合物对肺癌SPC-A-1细胞的IC50为3.447±0.436mg·mL-1。在鹅掌楸碱银配合物的作用下,可见典型的核染色质凝集、碎裂等细胞凋亡的特征;药物作用后细胞中Caspase-3含量明显高于对照组;用药组细胞较对照细胞bcl-2mRNA、蛋白表达降低,同时bax mRNA、蛋白表达升高。结论鹅掌楸碱银配合物可抑制肺癌SPC-A-1细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能是改变bax/bcl-2的比值,改变凋亡的调定点,使得凋亡力量在细胞内占主导优势。     

补气活血方对慢性支气管炎肺气虚证大鼠肺组织bcl-2、bax表达的影响

目的：观察补气活血方对慢性支气管炎肺气虚证大鼠肺组织 bcl-2及 bax表达的影响。方法 SD大鼠50只,随机选取10只作为空白对照组,其余40只采用改良烟熏法复制慢性支气管炎肺气虚证大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、补气活血方高剂量组、补气活血方低剂量组、补肺汤组,每组10只。采用免疫组化法检测细胞凋亡相关基因蛋白 bcl-2、bax的表达情况。结果与空白对照组比较,模型组大鼠 bcl-2表达明显增加,bax表达降低（ P 〈0.01）;与模型组比较,补气活血方高剂量组、补气活血方低剂量组、补肺汤组 bcl-2蛋白表达降低,bax 蛋白表达增加（ P〈0.01）;补气活血方高剂量组 bcl-2的表达较低剂量组和补肺汤组明显减少,bax的表达较低剂量组和补肺汤组明显增多（P〈0.01）;补气活血方低剂量组 bcl-2表达低于补肺汤组,bax表达高于补肺汤组（P 〈0.05）。结论补气活血方能够通过抑制细胞凋亡相关基因蛋白 bcl-2的表达,上调蛋白 bax的表达,促进炎性细胞凋亡,可作为预防和治疗慢性支气管炎的有效方法。     

前列腺素E_1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的:探讨前列腺素E1(PGE1)抑制缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的作用机制。方法:采用离体纯化培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,PGE1高、中、低各剂量组在缺氧复氧期分别给药;各组采用电镜技术和原位末端标记技术检测心肌细胞的凋亡情况,免疫组化技术检测bcl-2、bax蛋白表达情况。结果:与模型组比较,PGE1组心肌细胞的凋亡率显著降低,bcl-2蛋白表达明显上调而bax蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论:离体培养的乳鼠心肌细胞建立的缺氧复氧损伤模型可诱导心肌细胞的凋亡,而PGE1可明显抑制这种凋亡的发生,其机制可能与促进bcl-2蛋白表达、抑制bax蛋白表达有关。     

刺五加注射液对大鼠脑缺血损伤保护机制的研究

目的：研究刺五加注射液对大鼠脑缺血损伤的保护机制。方法：Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组和刺五加注射液组（45、90mg/kg）,腹腔注射给药,连续7d。末次给药后30min,采用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血损伤24h模型,通过硫代巴比妥酸法、化学比色法、TUNEL及免疫组化等方法,观察刺五加注射液对脑缺血损伤大鼠脑组织丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性、大脑皮质区细胞调亡及bcl-2、bax和caspase-3基因蛋白表达的影响。结果：刺五加注射液（45、90mg/kg）可明显降低MDA含量,提高SOD活性,抑制神经细胞调亡,增加bcl-2蛋白表达,减少bax和caspase-3蛋白表达。结论：刺五加注射液对脑缺血损伤的保护机制可能与抗自由基、抑制细胞调亡有关。     

原花青素对实验性脑出血大鼠脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨原花青素对脑出血大鼠脑组织细胞凋亡的影响及其可能机制。方法采用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血,建立脑出血模型。54只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、原花青素低剂量组(50 mg.kg-1)、中剂量组(100 mg.kg-1)、高剂量组(200 mg.kg-1)及尼莫地平对照组(10 mg.kg-1)。术后24 h,检测大鼠脑组织谷胱甘肽(GSH)含量与过氧化氢酶(CAT)的活性,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织切片bax和bcl-2蛋白表达,TUNEL法检测各组大鼠脑组织凋亡细胞的数量。结果与模型组比较,原花青素低、中、高剂量组大鼠脑中GSH含量与CAT活性明显升高(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,与模型组相比,原花青素低、中、高剂量组的大鼠脑组织bax蛋白表达降低,原花青素中、高剂量组大鼠脑组织bcl-2蛋白表达升高,差异均有显著性(P<0.05,P<0.01)。TUNEL结果显示,与模型组相比,原花青素低、中、高剂量组细胞凋亡数有所减轻(P<0.05,P<0.01)。结论原花青素能够减轻脑出血大鼠的细胞凋亡,其机制可能与原花青素能够提高机体的抗氧化能力,同时增强抗凋亡基因bcl-2的表达,降低促凋亡基因bax的表达有关。     

间歇缺氧、睡眠剥夺大鼠血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮的含量变化

目的采用间歇缺氧、睡眠剥夺建立睡眠呼吸暂停综合征动物模型,观察间歇缺氧、睡眠剥夺对SD大鼠血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮的影响,探讨间歇缺氧、睡眠剥夺引起睡眠呼吸暂停综合征的机制。方法选取SD雄性青年3个月龄大鼠16只,随机分为2组,分别是间歇缺氧睡眠剥夺组,常氧正常睡眠对照组,每组8只。实验组动物每天给予间歇性缺氧和睡眠剥夺,时间为8周。实验终点测量大鼠有创动脉压,取血测定血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮水平。结果实验组有创动脉压明显高于对照组,差异有非常显著意义（P〈0．01）;实验组血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮水平均高于对照组,差异有非常显著意义（P〈0．01）。结论类似睡眠呼吸暂停综合征病理生理改变的间歇性缺氧、睡觉剥夺可以引起SD大鼠血压增高,血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮水平增高。     

强化胰岛素治疗对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡蛋白bcl-2和bax的影响

目的观察强化胰岛素治疗对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bax的影响。方法将36只Wistar大鼠随机分为对照组和高脂组,对照组给予基础饲料喂养,高脂组给予脂肪乳灌胃＋基础饲料喂养10d,然后给高脂组大鼠腹腔注射链脲佐菌素,3d后再将高脂组大鼠随机分为2个亚组,即糖尿病对照组和糖尿病治疗组,疗程4周。在脂肪乳灌胃第10天、注射STZ第3天和治疗4周末测大鼠各项指标;实验结束时用免疫组化法测大鼠胰岛β细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果大鼠在强化胰岛素治疗4周末,与糖尿病对照组相比,糖尿病治疗组的bcl-2蛋白表达升高,bax蛋白表达降低,两组差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论强化胰岛素治疗可增强2型糖尿病大鼠胰岛β细胞bcl-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,减轻2型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡。     

曲妥珠单抗对心肌细胞损害作用的实验研究

目的探讨曲妥珠单抗对大鼠心功能的影响及其作用机制。方法 50只6周龄SPF级SD大鼠随机均分为观察组和对照组。观察组大鼠腹腔注射曲妥珠单抗,共计给药7 d;对照组大鼠腹腔注射生理盐水,体积与注射时间同观察组。分别于给药前后用心脏超声检查大鼠心功能变化;采用TUNEL技术检测细胞凋亡情况,同时检测大鼠心肌细胞Caspase-3活性。结果给药1周后,观察组大鼠LVEDd、LVESd显著扩大,LVPWDd、LVPWSd明显变薄,LVEF、LVFS显著降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。给药1周后,观察组凋亡指数(AI)显著增加,Caspase-3活性显著增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论曲妥珠单抗会导致心肌细胞损害,其机制可能与激活Caspase-3、促进心肌细胞凋亡有关。     

硫化氢供体硫氢化钠对肺缺血-再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的：探讨硫氢化钠（NaHS）对肺缺血-再灌注损伤（LIRI）时细胞凋亡的影响。方法：采用在体大鼠单肺原位肺缺血-再灌注模型。健康SD大鼠30只,随机均分成3组：假手术对照（Sham）组,肺缺血-再灌注（LIR）组,肺缺血-再灌注＋硫氢化钠（LIR＋NaHS）组。各组大鼠实验结束后取肺组织,观察肺组织bcl-2、bax蛋白的表达、凋亡指数（AI）、肺系数（LW/BW）、肺组织肺泡损伤率（IAR）及光镜、电镜下的肺组织形态学改变。结果：在肺小血管内膜、肺泡上皮及细支气管上皮,LIR＋NaHS组bcl-2蛋白表达及bcl-2/bax的比值显著高于LIR组（均P〈0.01）,bax蛋白的表达显著低于LIR组（均P〈0.01）;AI、LW/BW、IAR值显著低于LIR组（P〈0.05）;肺组织形态学异常改变不同程度减轻。结论：硫化氢供体（NaHS）可上调bcl-2蛋白的表达,下调bax蛋白的表达,调控bcl-2/bax之间的平衡而减轻细胞凋亡,对LIRI具有保护作用。     

川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的探讨川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响及可能的机制。方法雄性SD大鼠36只随机分三组:假手术组、模型组、川芎嗪治疗组,每组12只。用结扎大鼠左冠状动脉前降支法制备心肌缺血再灌注模型,测定再灌注前静脉注入川芎嗪对损伤大鼠心肌组织中MDA,SOD生成的影响;免疫组化法检测大鼠心肌细胞Bcl-2、Bax基因表达。结果①川芎嗪组能减少心肌组织中MDA生成,并明显提高缺血再灌注组织中SOD的活力;②川芎嗪组中bcl-2表达明显增多,平均灰度值明显下降,与模型组比较有显著差异(P>0.01),bax表达下降,但无统计学意义(P>0.05)。结论川芎嗪可能通过拮抗氧自由基、上调凋亡抑制基因bcl-2等作用,对心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡有一定的防治作用。     

丁苯酞对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用及机制研究

目的:研究丁苯酞对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丁苯酞低、中、高剂量组(50、75、100 mg/kg),每组10只,各组大鼠每天ig相应药物1次,假手术组及模型组大鼠ig等量生理盐水,连续3d。末次给药后除假手术组外其余各组大鼠再灌注120 min后检测各组大鼠心肌梗死面积比例、细胞凋亡率、凋亡相关蛋白[促凋亡蛋白(Caspase-3、Fas、Caspase-9)、抑制凋亡蛋白(Bcl-2)]表达、左室射血分数(LVEF)和血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠的心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率均明显升高,心肌细胞中Caspase-3、Fas、Caspase-9蛋白表达明显增强,Bcl-2蛋白表达明显减弱,LVEF和血清VEGF含量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,除丁苯酞低剂量组大鼠的LVEF无明显变化(P>0.05)外,其余各给药组大鼠的上述指标均明显改善(P<0.05)。与丁苯酞低剂量组比较,丁苯酞高剂量组大鼠的心肌梗死面积、细胞凋亡率均明显降低(P<0.05);丁苯酞中、高剂量组大鼠心肌细胞中Caspase-3、Fas、Caspase-9蛋白表达明显减弱,Bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论:丁苯酞可有效减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,保护心功能,其机制可能与上调VEGF有关。     

高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的：观察高浓度葡萄糖体外对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。探讨葡萄糖毒性及其分子机制。方法：应用TUNEL法检测高浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR（QRT-PCR1）检测培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞bcl-2和baxmRNA的表达；应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2和baxmRNA的表达。结果：高浓度葡萄糖使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc-3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中。诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降．致使bcl-2／bax比率明显降低；对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论：高浓度葡萄糖可能通过诱导胰岛细胞凋亡增加而加重糖尿病。其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

睡眠剥夺对大鼠大脑功能的影响

目的:探讨睡眠剥夺(SD)对大鼠大脑功能的影响。方法:采用小平台水环境法建立SD模型,以正常对照组和大平台对照组为对照,以学习记忆能力和脑电活动为指标,观察SD对大鼠脑功能的影响。结果:(1)大平台对照组学习记忆能力提高(P<0.05);SD组学习记忆能力降低(P<0.05、0.01);随着SD时间的延长,学习记忆能力下降越明显。(2)大平台对照组与正常对照组的脑电活动无差异(P>0.05);SD组与大平台组有差异(P<0.05、0.01),说明SD的确对大鼠的脑电活动有抑制作用,而且SD时间越长抑制越明显。结论:SD对大脑功能有明显的抑制作用。