Prev-DAF试剂盒分析线粒体基因1555A-G突变

目的建立应用标准试剂盒方法检测线粒体基因1555A-G(mtDNA1555A-G)突变的程序,进行母系遗传耳聋家系的基因型分析.方法采用Prev-DAF试剂盒分析14个母系遗传耳聋家系,共检测耳聋患者34个,正常个体11个,并以Alw26酶切和测序方法验证试剂盒检测的准确性.结果Prey-DAF试剂盒检测结果证实13个家系中33个耳聋患者携带有mtDNA1555A-G突变,另1个耳聋家系中的一名耳聋患者不携带此突变,11个正常个体中无此突变,试剂盒检测方法与Alw26I酶切法和测序结果完全吻合.结论在中国,mtDNA1555A-G氨基糖甙类抗生素致聋的家系多,分布广,Prev-DAF试剂盒在分析线粒体基因1555A-G突变方面具有简单、低耗、结果直观的特点,适合在中国用于进行此突变的大规模筛查或预防性检查.     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA12S和16S rRNA基因突变分析

目的 研究线粒体rRNA基因突变与氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的关系，为建立相应的基因诊断方法提供依据。方法 收集了五个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的耳聋家系共27名成员的外周静脉血标本。从白细胞中提取DNA，PCR扩增线粒体DNA片段。Alw26I限制性内切酶分析和DNA序列分析检测A1555G点突变，并对其中一个家系进行了线粒体DNAl2S和16SrRNA基因的全序列分析。结果家系A．C．D和E的2l份样品均为A1555G点突变阳性，家系B的6份样品为A1555G点突变阴性。家系B线粒体DNAl2S和16SrRNA基因全序列分析显示该家系存在16SrRNA基因第2227位“AA”插入突变。结论 本研究发现了一个A1555G点突变阴性的氨基糖甙类抗生素致聋家系，说明线粒体DNA A1555G点突变不是氨基糖甙类抗生素遗传易感性唯一的分子基础，对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的预测仅检测A1555G点突变是不够的。应与mtDNA其它相关突变位点的检测结合起来。     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA A1555G突变分析

目的 研究线粒体12S rRNA基因A1555G点突变与氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的关系，为建立相应的基因诊断方法提供依据。方法 收集了五个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的耳聋家系共23名成员的外周静脉血标本，从白细胞中提取DNA，PCR扩增线粒体DNA片段，限制性内切酶分析和DNA序列分析检测A1555G点突变。结果 五个家系有母系血缘关系的18份样品均为A1555G点突变阳性，5名配偶为A1555G点突变阴性。结论 线粒体DNA A1555G点突变是氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性最主要的原因，检测A1555G点突变对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的预测有重要意义。     

线粒体DNA突变致聋家系检测及单倍型分析

目的 探讨母系遗传氨基糖甙类抗生素诱发致聋家系的线粒体DNA突变情况及其单倍型背景.方法 收集贵州遵义地区6个母系遗传非综合征性耳聋家系的临床资料及血液样本,经PCR-RFLP(polymerase chain re-action-restriction fragment length Polymorphism,聚合酶链反应-限制性片段长度多态)及测序技术检测线粒体DNA1555G突变,并通过对各家系线粒体DNA高变区序列测定及编码区限制性片段多态性分析以划分单倍型类群.结果 经酶切及测序证实其中4个家系存在线粒体DNA 1555G突变,分别属于A、D6、G及M*单倍型.结论 该地区线粒体DNA 1555G突变引起氨基糖甙类抗生素高度敏感致聋的家系发生率较高,线粒体DNA1555G突变致聋家系呈现不同的线粒体单倍型类型.     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA1555G点突变分析

目的考察１５５５Ｇ点突变与氨基糖甙类抗生素致聋的对应关系，建立相应的基因诊断方法提供依据。方法收集了３个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的母系遗传耳聋家系１３人（包括聋人和听力正常者）的外周静脉血标本，聚合酶链反应扩增线粒体ＤＮＡ，Ａｌｗ２６Ｉ限制性内切酶分析、ＤＮＡ斑点杂交和ＤＮＡ序列分析检测１５５５Ｇ点突变。结果家系１和３的７份样品均为１５５５Ｇ点突变阳性，家系２的６份样品为１５５５Ｇ点突变阴性。结论发现１个１５５５Ｇ点突变阴性的氨基糖甙类抗生素致聋家系，说明线粒体ＤＮＡ１５５５Ｇ点突变不是氨基糖甙类抗生素遗传易感性唯一的分子基础。     

与线粒体12S rRNA 1095 T>C突变相关的遗传性耳聋病因分析

目的探讨线粒体单倍体型、环境因素及核基因背景在1095 T〉C突变携带者耳聋表型中的作用。方法对通过基因筛查在赤峰市特教学校发现的3例携带1095 T〉C突变的耳聋患者进行病史、家系调查、常见耳聋基因检测及线粒体基因组全序列测定。结果3例耳聋患者均表现为重度-极重度感音神经性耳聋，均有聋前氨基糖甙类药物应用史，家族中其他成员听力正常，耳聋外显率低。线粒体全序列分析表明这3例患者的线粒体基因组除都有1095 T〉C突变之外，其线粒体DNA的多态位点还显示独特的多态性。75例中国听力正常对照中发现1例携带该突变。结论1095 T〉C在这些遗传背景不同的、应用过氨基糖甙类抗生素的、有听力损失的家庭中出现及其低外显率强烈提示这个突变是导致听力损失的条件致病因素，可以在携带者接触氨基糖甙类药物后发病，1095 T〉C突变可能与母系遗传氨基糖甙类药物性耳聋有关。     

母系遗传药物性聋与非综合征性聋大家系与基因突变的研究

目的对一个氨基糖甙类药物性聋和非综合征聋的母系遗传性中国大家系进行遗传学分析,并发现全新的线粒体DNA C1494T突变.方法征集该家系中成员进行听力学检查,并收集提取DNA进行线粒体DNA PCR扩增分析,对其主要成员建立传代细胞系进行氨基糖甙类抗生素敏感试验和细胞氧消耗率检测.结果在没有接受氨基糖甙类抗生素时,一些母系遗传的成员表现为迟发/进行性听力下降,其程度不等,平均发病年龄自55岁(第2代)逐渐提前到10岁(第5代).氨基糖甙类抗生素可导致母系成员听力下降,而且接受药物的年龄似乎与听力下降程度有关.对该家系成员进行线粒体DNA测序发现高度保守的12S rRNA中1494位点C突变为T(C1494T),可以形成新的U1494-1555A碱基对,与耳聋有关的A1555G突变所造成的C1494-1555G碱基对结构相类似.当培养液中含有氨基糖甙类抗生素时,携带C1494T突变的4名听力遗传者和2名听力正常成员所建立的传代淋巴细胞系的细胞倍增时间显著延长,并且其细胞氧消耗总量显著降低.结论线粒体12S rRNA的A点是氨基糖甙类药物性聋的主要作用位点,而细胞核背景在氨基糖甙类药物性聋的发病中有重要作用,对C1494T突变的相关的耳聋发病中也有重要作用.     

线粒体基因组A1555G突变致非综合征性聋患者的临床表型分析

目的评估线粒体基因组（mitochondrial DNA，mtDNA）A1555G突变致非综合征性聋患者的临床表型及听力学特点。方法对经聚合酶链反应一限制性内切酶酶解法证实携带线粒体基因组A1555G突变的96例母系成员，进行病史调查和纯音听阈测试，并对性别、应用氨基糖甙类抗生素史、发病年龄等与耳聋程度的关系进行统计学分析。结果96例研究对象中耳聋患者与正常个体的性别分布均衡，34例有明确的氨基糖甙类抗生素用药史，67例耳聋患者中33例由氨基糖甙类药物耳毒性引起，26例用药后一周内发生耳聋，7例迟发。10个家系的平均耳聋外显率为68．8％。耳聋患者的临床表型多样，耳聋程度与应用氨基糖甙类药物时的年龄以及发病年龄相关，年龄越小，发生耳聋的程度越重；研究对象中年龄大于60岁的9例均为耳聋患者，但耳聋程度相对较轻。结论mtDNA A1555G突变本身不足以引起临床症状，氨基糖甙类药物和核基因在mtDNA A1555G突变的发病机制上起重要作用。携带mtDNA A1555G突变的成员年龄越小，越易出现听力下降，而且耳聋的程度越重。本组资料对耳毒性药物的风险提供了有价值的信息，从而提高氨基糖甙类药物使用的安全性，最终降低耳聋的发生率。     

核修饰基因与氨基糖甙类药物在母系遗传性聋发病机制及功能研究

目的对同时存在线粒体DNA 12S rRNA基因突变（A1555G突变）和存在个体表现出对氨基糖甙类药物不敏感的家系进行系统的资料收集和分子机制分析工作。方法对此家系进行体格检查、耳鼻咽喉专科检查、听力学检查，并对此家系进行线粒体DNA测定、线粒体单体型分型、氨基糖甙类药物敏感性检测、线粒体DNA相关核修饰基因TRMU和MTO1等研究。结果通过对全体成员的线粒体DNA序列测序分析，该家系的母系成员均有同质性A1555G突变；线粒体单体型分析为D5b1b；对发现的氨基糖甙类药物不敏感成员及家系中另一敏感成员行核基因TRMU和MTO1测序序列分析，对比发现MTO1基因变异：74202000_74202001insG和74202003delG，而TRMU基因未发现有意义的突变。结论线粒体DNA 12S rRNA基因突变家系中，存在对氨基糖甙类药物不敏感个体，MTO1为可能的核修饰基因，但其分子机制需要进一步深入研究。     

巴龙霉素对携带线粒体DNA C1494T突变的细胞系生长的影响

目的用细胞学方法,分析线粒体DNA 12S rRNA基因中C1494T突变在氨基糖甙类抗生素聋发病机理中的作用.方法从携有线粒体DNA C1494T突变的母系遗传性氨基糖甙类抗生素性耳聋的中国大家系选择部分成员,另外从遗传背景相同的正常中国人群选择对照个体,分别建立淋巴细胞系;并通过细胞融合技术,将淋巴细胞系的线粒体分别融合到缺乏线粒体DNA的p0206细胞中,建立相应的转线粒体细胞系;家系成员与对照个体的淋巴细胞系和转线粒体细胞系,分别在不含/含有氨基糖甙类抗生素(巴龙霉素)的培养液中培养,以倍增时间(doublingtime,DT)作为细胞生长特性的评价标准,通过计算在正常和含有氨基糖甙类抗生素的培养液中倍增时间的比值,比较氨基糖甙类抗生素对细胞生长的影响.结果携有线粒体DNA C1494T突变家系成员较对照个体的淋巴细胞系的倍增时间比值平均增加了24%,但不同家系成员的细胞倍增时间比值的增加程度不同,自10%至50%不等;而当细胞核遗传背景相同后,家系成员较对照个体的转线粒体细胞系的倍增时间比值增长30%,并且来自不同表型的家系成员的细胞倍增时间比值基本相同.结论线粒体DNA C1494T突变可以造成细胞对氨基糖甙类抗生素的超敏性,但其效应要受到核基因的调控.