外源性p27kip1基因表达对人肝癌细胞生长抑制作用

目的: 研究p27kip1基因对人肝癌细胞的生长抑制作用. 方法: 采用可诱导性真核表达载体pMD-kip1,脂质体转染法将p27kip1全长cDNA转入肝癌细胞系HCC-9204中,通过外加Zn离子诱导目的基因的表达. 免疫印迹分析及RT-PCR检测p27kip1基因在蛋白质和mRNA水平上的表达;细胞活力实验检测转染p27kip1基因对细胞增殖的作用;并将转染的肝癌细胞接种于裸鼠皮下,观察该肿瘤细胞的致瘤情况. 结果: 转染p27kip1的HCC-9204细胞在mRNA和蛋白质水平均显p27kip1高表达. 细胞活力检测显示在外加Zn离子48 h后,细胞生长被抑制35%;转染p27kip1的HCC-9204细胞在裸鼠体内的致瘤能力明显下降[(0.62±0.12) vs (1.31±0.17), P<0.01 )]. 结论: 外源性p27kip1基因表达能够抑制人肝癌细胞的恶性增殖和致瘤性.     

细胞周期因子cyclinD1,cyclinE,P27KIP1在肝细胞癌中的表达研究

目的探讨cyclinD1,cyclinE,P27KIP1在肝细胞癌中的表达及其意义.方法应用免疫组织化学S-P法检测50例肝细胞癌组织标本及44例相应的癌旁肝组织标本中的cyclinD1,cyclinE,P27KIP1的表达.结果cyclinD1,cyclinE,P27KIP1在肝细胞癌组织中的阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05).P27KIP1的低表达,cyclinD1的过度表达与肝细胞癌临床分期、有无转移显著相关.cyclinE过度表达者也易发生远处转移.肝癌组织中P27KIP1的低表达与cyclinE的过度表达有相关关系.P27KIP1阳性表达者术后生存率高.结论P27KIP1、cyclinD1作为调节细胞周期的重要因子,在肝细胞癌的发生、发展中发挥重要作用.P27KIP1是预测肝癌转移和预后的一个指标.     

细胞周期蛋白D1和p27kip1在前列腺癌中表达的意义

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、p27kip1在前列腺癌组织中的表达水平以及与生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学方法检测62例前列腺癌组织中cyclinD1、p27kip1蛋白的表达水平。结果62例前列腺癌中，cyclinD1、p27kip1蛋白表达总阳性率分别为41．9％(26／62)、30．6％(19／62)；两种蛋白阳性表达与病理组织学分级、被膜浸润呈负相关。结论cyclinD1、p27kip1蛋白表达可作为前列腺癌恶性表型的指标,cyclinD1是前列腺癌发生、发展过程中早期的分子事件。     

卵巢上皮性肿瘤p27kip1及细胞周期蛋白E的表达及临床意义

目的　检测p2 7kip1和细胞周期蛋白E(CyclinE)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其与卵巢癌临床病理参数之间的关系。方法　应用免疫组化SP法检测 2 4例良性卵巢肿瘤以及 5 2例恶性卵巢上皮性肿瘤中p2 7kip1和Cyc linE的表达情况 ,并分析它们与临床病理参数之间的关系。结果　同良性卵巢肿瘤组织相比 ,卵巢癌组织中p2 7kip1的表达显著降低 ,CyclinE的表达则明显增高 ,差异均有显著性。p2 7kip1阴性表达与卵巢上皮性肿瘤低组织分化 ,淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,CyclinE阳性表达与卵巢上皮性肿瘤的临床分期、腹水及淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。结论　p2 7kip1和CyclinE的表达与卵巢上皮性肿瘤的发生、发展及恶性程度密切相关 ,可作为估计卵巢肿瘤恶性程度和预后的重要指标     

p27kip1在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的　研究p2 7kip1在原发性肝细胞癌 (HCC)中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组化S -P法检测 4 0例HCC、15例肝硬化组织和 5例正常肝组织石蜡标本中 p2 7kip1的表达。 结果　p2 7kip1蛋白在 4 0例HCC中表达阳性率为 32 .5 % (13/40 ) ,在 15例肝硬化组织中为 6 0 % (9/15 ) ,在 5例正常肝组织中为 80 % (4/5 )。p2 7kip1蛋白在HCC中的表达与其在肝硬化组织和正常肝组织中的表达相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,p2 7kip1蛋白与HCC的组织学分级、组织学类型、淋巴结转移、远处转移和生存期均有统计学差异。结论　p2 7kip1与HCC的发生、发展可能均有密切联系 ,p2 7kip1蛋白在一定程度上可判断患者的病情进展和预后。     

Prdx1、Spy1、p27kip1蛋白在肝细胞肝癌中的表达及其相关性*

目的：探讨Prdx1、Spy1、p27kip1蛋白在肝细胞肝癌中的表达及相关性。方法：应用Western blot及免疫组化检测肝癌及相应的癌旁组织中Prdx1、Spy1、p27kip1的表达;免疫共沉淀分析Prdx1、Spy1的相互作用;Western blot分析Prdx1、Spy1相互结合对p27kip1蛋白表达的影响。结果：Prdx1、Spy1在肝癌组织及肝癌细胞中高表达,与p27kip1表达呈负相关;Prdx1、Spy1相互结合使p27kip1的表达水平下调,此作用与Prdx1的抗氧化物活性无关。结论：Prdx1、Spy1蛋白的表达与肝细胞肝癌的发生发展有关,两者的表达可能在肿瘤的恶性进展中起协同作用,而与p27kip1的表达呈拮抗作用。     

蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939增殖及cyclin E和P27蛋白表达影响的研究

目的 已有诸多研究显示中药蟾蜍灵具有明显抑制肿瘤增殖的作用,观察蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939的cyclin E和P27表达的影响,探讨其调控胆管癌细胞增殖的途径和机制. 方法 MTT比色法观察不同浓度蟾蜍灵(0.1、1、10μmol/L)对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)实验检测蟾蜍灵毒性;流式细胞术检测人胆管癌细胞QBC939细胞周期的变化;Western blot法测定cyclin E、P27蛋白水平变化. 结果 MTT比色法结果 表明蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939生长具有较强的抑制作用,并在一定范围内具有时间和浓度依赖性,流式细胞仪检测细胞周期阻滞在G0/G1期,具有良好的量效关系.Western blot 测定cyclin E蛋白表达量下降,P27蛋白表达量升高. 结论 蟾蜍灵可能是通过阻滞细胞周期,减少cyclinE蛋白表达,增加P27蛋白表达,来达到抗肿瘤作用.     

p27kip1、VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27^kipl、血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞肝癌中的表达及临床意义。方法 用免疫组织化学方法研究p27^kipl、VEGF在40例肝细胞肝癌手术切除标本及5例正常肝组织标本中的表达。结果 40例肝细胞癌中,p27^kipl。和VEGF蛋白的阳性表达率分别为50％和72．5％,且随着肿瘤病理分级、临床分期的增高,p27蛋白阳性表达率呈下降趋势;而VEGF的阳性表达率则增高,两者呈负相关。结论 p27^kipl、VEGF在肝细胞肝癌中的表达与肿瘤的生物学行为及预后密切相关。     

益肾汤对糖尿病大鼠肾脏细胞周期调节蛋白p27表达的影响

目的观察中药复方益肾汤对糖尿病大鼠肾脏细胞周期调节蛋白p27表达的影响。方法将41只SD大鼠随机分为正常对照组与糖尿病组。后者以链脲佐菌素腹腔内注射诱导糖尿病大鼠模型,成模大鼠按干预方法不同分为:益肾汤、缬沙坦、糖尿病未治疗3组。干预8周,观察大鼠体重、肾重、血糖、24 h尿总蛋白、24 h尿白蛋白、尿素氮、肾组织p27表达等指标。结果与糖尿病未治疗组比较,益肾汤及缬沙坦组肾组织p27表达显著减少,尿白蛋白含量降低;肾组织p27的表达量与24 h尿白蛋白浓度呈显著正相关。结论益肾汤防治糖尿病肾病的作用与降低肾脏p27表达有关。     

透明质酸结合蛋白对肿瘤细胞表达 cyclin E及p27kip1的影响

目的：研究透明质酸结合蛋白（HABP）对人乳腺癌、前列腺癌细胞和牛血管内皮细胞cyclinE及p27^kip1表达的影响。方法：将人脑透明质酸结合蛋白（hbHABP）全长cDNA转染到人乳腺癌细胞（MDA435）和前列腺癌细胞（TSU）中，研究细胞周期蛋白cyclinE及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27^kip1表达的变化。再将这些转基因细胞的培养上清液（CM）加入牛主动脉血管内皮细胞（ABAE）的培养上清液中，观察CM对ABAE的p27^kip1表达的影响。结果：MDA435和TSU细胞转染hbHABP基因后，cyclinE的表达水平均明显低于对照组细胞，而p27^kip1的表达水平均升高。ABAE细胞受CM作用后，p27^kip1的表达水平也高于对照组细胞。结论：hbHABP可能具有下调肿瘤细胞周期蛋白cyclinE和上调细胞周期蛋白依赖性激酶 抑制物p27^kip1的作用，从而抑制肿瘤细胞的生长；同时，hbHABP促进血管内皮细胞p27^kip1的表达，可以抑制肿瘤新生血管的形成。     

Survivin和P27kip1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究原发性肝癌中Survivin和P27kip1表达的关系,并探讨其在HCC中发生发展的作用.方法 收集HCC组织及相应癌旁组织标本各40例,应用免疫组织化学(SP)法,检测Survivin蛋白和P27kip1蛋白的表达.结果 85%(34/40)的肝癌组织表达Survivin蛋白,而癌旁及正常肝组织内无一例呈阳性表达.Survivin蛋白表达的阳性率在肝内转移者为96.7%,显著高于无肝内转移者 (50.0%,P<0.05);在门静脉癌栓浸润者为61.5%,显著高于无门静脉癌栓浸润者 (90.3%,P<0.05).20%(8/40)的肝癌组织内可见到P27kip1阳性表达,80%(32/40)癌旁组织可见不同程度P27kip1阳性表达,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).34例Survivin表达阳性组织中有4例见P27kip1表达阳性 (11.7%),而6例 Survivin表达阴性组织中有4例见P27kip1阳性表达 (66.7%),两者比较差异统计学意义(P<0.05).结论 Survivin在肝癌组织中选择性表达,与肿瘤转移、血管浸润等恶性生物学行为有关,其作用机制可能涉及P27kip1蛋白阳性表达的降低,导致了细胞周期的失控并促进细胞异常增殖,从而参与了HCC的发生和发展. Abstract： Objective To investigate the role of Survivin and P27kip1 expression in the pathogenesis of hepatocellular carcinoma(HCC).Methods Forty histologically verified HCC specimens and their neighboring noncancerous tissues were obtained.Immunohistochemistry was used to detect protein expressions of Survivin and P27kip1.Results Survivin protein expression was positive in 34 of 40 (85%)cases.By comparison,no positive expression of Survivin was detected in corresponding tissues.The positive rate of Survivin protein expression in the cases of intrahepatic metastasis was higher than those without intrahepatic metastasis(P<0.05),and the rate of Survivin expression in the cases of portal vein invasion was higher than those without portal vein invasion(P<0.05).The expression of P27kip1 was positive in 8 of 40 (20%) cases and 80% in noncancerous tissues.The expression of P27kip1 was 11.7% in the cases of Survivin expression,which was lower than the cases without Survivin expression(66.7%).Conclusions The optional expression of Survivin have a close correlation with the tumor macastasis and vascular infiltration. Survivin expression may play an important part in HCC,which offer a wide prospective for clinical application in the primitive prognosis of hepatic-carcinoma.     

肝细胞癌组织中Skp2的表达及与p27kip1、PCNA蛋白表达的关系

目的:探讨Skp2的表达在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用,及其与p27kip1(p27)和PCNA的关系。方法:收集76例HCC及癌旁组织,l0例肝血管瘤旁肝组织的临床病理档案资料,l0例HCC及癌旁肝新鲜组织,采用免疫组织化学方法及免疫印迹技术检测Skp2、p27及PCNA蛋白在这些组织中的表达。结果:免疫印迹结果显示:Skp2在HCC组织中的表达明显高于对应的癌旁肝组织。免疫组织化学结果显示HCC中Skp2的阳性率(24.08%)显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.001)。Skp2的表达与肝癌组织分化程度,血清AFP值及转移有关(P<0.05)。p27在正常肝组织和癌旁组织中的表达明显高于HCC组织(P<0.001)。HCC组织中PCNA蛋白的表达明显高于癌旁和正常组织(P<0.01)。HCC组织中Skp2的表达与p27呈负相关(P<0.001);与PCNA呈正相关(P<0.01)。结论:Skp2在HCC组织中表达是上调的,可能是通过作用于细胞周期调控蛋白p27,加速了对p27泛素化依赖的蛋白降解,使其表达及代谢发生异常。导致细胞周期失控并促进细胞异常增殖,从而参与了HCC的发生和发展。     

5-脱氧杂氮胞苷诱导肝癌细胞株p16基因高表达

目的 研究５－脱氧杂氮胞苷对肝癌细胞株ｐ１６基因表达的影响及其机制。方法 肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７２２１、ＨｅＰＧ２用５－脱氧杂氮胞苷处理,处理前后采用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组织化学染色法观察和分析其ｍＲＮＡ和蛋白表达变化。结果 经５－脱氧杂氮胞苷处理的肝癌细胞株ｍＲＮＡ和蛋白表达均明显增强。结论 ５－脱氧杂氮胞苷可使ｐ１６基因在转录水平和翻译水平表达增高,其机制可能是通过去甲基化使ｐ１６基因表达恢复。     

SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株的表达

目的研究SATB1在不同侵袭潜能的人肝癌细胞株表达状况。方法分别用荧光定量PCR,RT-PCR,Western blotting及免
疫荧光方法,检测人永生化肝细胞株HL-7702及肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3 中SATB1
的表达。结果相对于HL-7702,SATB1 mRNA在其余5 种肝癌细胞株中都有较高程度的表达,其中高侵袭性HCCLM3、
MHCC97H 表达最高,MHCC97L 次之,SMMC-7721、HepG2 最低（P<0.001）;Western blotting 分析HepG2、SMMC-7721、
MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3肝癌细胞株的蛋白相对表达量分别为0.271±0.002;0.351±0.023;0.621±0.026;0.878±0.026;
1.236±0.006,高侵袭性HCCLM3相当于HepG2的4.6倍（P<0.001）;免疫荧光显示SATB1在5种肝癌细胞株的胞浆和胞核内均
有分布,高侵袭性细胞株HCCLM3、MHCC97H表现强阳性染色。结论SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株中的表达有差异,
与肝癌转移密切相关。     

口腔鳞癌中p27kip的免疫组化定量分析

目的：研究p27^kip蛋白在口腔鳞癌中的表达,探讨其与口腔鳞癌发生、发展的关系。 方法：采用免疫组化S-P法,对37例口腔鳞癌组织、30例癌旁组织及10例正常口腔黏膜中p27^kip蛋白的表达进行检测。结果：p27^kip蛋白在37例口腔鳞癌组织、30例癌旁组织、10例正常口腔黏膜组织中表达率分别67.6%、93.3%、100%,经统计学检验,差异有显著性(P＜0.01)。随着病理分级及临床分期增高,口腔鳞癌组织中p27^kip 蛋白的表达水平逐渐下降。 结论：p27^kip蛋白的表达与口腔鳞癌的发生、发展及恶性程度有关,可作为一种有价值的标志物,为口腔鳞癌的预后判断提供依据。     

P27kip1和Skp2在食管癌中的表达

目的:探讨p27Kip1,Skp2蛋白在食管癌发生、恶性增殖及转移扩散中的作用及二者间的相互关系. 方法:运用免疫组织化学EnVision法检测p27Kip1,Skp2蛋白在97例食管癌、30例食管癌旁组织标本中的表达情况. 结果:P27kip1与Skp2蛋白的阳性表达率在癌旁组(93.33%, 0%)与食管癌组(45.36%, 48.45%),淋巴结转移阳性组(31.71%, 63.41%)与阴性组(55.36%, 37.50%),高分化组(62.96%, 29.63%)与中(42.22%, 53.33%),低分化组(32.00%, 60.00%)之间差异有显著性(P＜0.01),而与食管癌肿瘤的大小、性别、患病年龄和临床分期无关(P＞0.05). 结论:p27Kip1,Skp2蛋白表达与食管癌的分化程度及淋巴结的转移状况有关,分化程度低者或伴随有淋巴结转移者,p27Kip1蛋白表达明显降低,相反,Skp2蛋白则明显增高,而且二者呈负相关.     

Gankyrin在肝癌细胞系中的表达

目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及Western blotting检测。结果Gankyrin基因在3种肝癌细胞系中均有表达。结论多种肝癌细胞系中均有Gankyrin基因的表达，HepG2、SMMC-7721、HHCC均可作为阳性靶细胞，进行Gankyrin基因的RNA干涉研究。