细胞外信号调解激酶对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡影响的研究

目的:探讨细胞外信号调解激酶(ERK)对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡的影响.方法:形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:0.5μmol/L蟾蜍灵作用K562细胞24h诱导典型的细胞凋亡,预先用ERK抑制剂PD98059处理细胞1 h,明显增加蟾蜍灵诱导的细胞凋亡率(P＜0.05);而用佛波酯预先处理后,明显拮抗蟾蜍灵的作用(P＜0.05).结论:ERK负向调节蟾蜍灵诱导的K562细胞凋亡过程.     

细胞外信号激酶在泰素引起的卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号激酶(ERK)在紫杉醇引起的卵巢癌细胞调亡中的作用.方法用紫杉醇处理人卵巢上皮性腺癌细胞株Caov-3 and Skov-3,应用二氨基联苯染色,在显微镜下观察其凋亡.应用蛋白印迹法技术,用特异性识别双磷酸化ERK1/2的抗体,检测卵巢癌细胞经泰素作用后ERK1/2的活化情况.用MTT法检测PD98059对泰素引导的卵巢癌细胞毒性的影响.结果在80 nM泰素导致Caov-3和Skov3细胞凋亡和ERK1/2激活,泰素作用9h后,出现ERK的激活,15h后活性最大.用100μM的PD 98059作用于不同药物浓度(60nM和80nM)的泰素作用的细胞,细胞存活率显著降低(P＜0.05).结论泰素能激活卵巢癌Caov-3和Skov3细胞ERK.抑制ERK的活性能提高Caov-3和Skov3细胞对泰素的敏感性.阻断MEK1/ERK信号转导通路,可以增加泰素对卵巢癌的细胞毒作用.     

细胞外信号调节激酶在人纤维化肝组织中的表达

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在人纤维化肝组织中的表达及其与肝纤维化发生的相关性。方法:收集肝手术标本(纤维化肝组织和远癌的纤维化肝组织,以正常的肝组织做对照),以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常肝和不同程度纤维化肝组织中ERK的表达情况,对结果进行统计分析。结果:人肝纤维化的发生发展过程中,ERK的表达增加。结论:ERK参与并介导其中的RAS/RAF/MEK/ERK信号通路,可能与肝纤维化的发生密切相关。     

细胞外信号调节蛋白激酶在梗阻性肾组织中的表达及其意义

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）在梗阻性肾病的分子发病机制中作用。方法 应用免疫组化方法检测ERK和增殖细胞核抗原（PCNA）在47份梗阻性肾组织中表达，并分析ERK表达与梗阻肾纤维化之间相关关系。结果 梗阻肾的肾小管和间质中ERK表达均高于正常的，但仅间质中两者表达差异有显著性（P〈0．05）。间质中ERK表达与梗阻肾纤雏化程度密切正相关（P〈0．05），而肾小管中两者相关差异无显著性（P〉0．05）。梗阻肾的肾小管和间质中ERK强表达者的PCNA指数均分别显著高于ERK弱表达者（P〈0．01）。结论 ERK活性增强促进细胞增殖增多、从而参与梗阻挂肾病的发病过程，尤其在肾纤维化过程中起着重要作用。     

ERK蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的：研究细胞外信号调节激酶（ERK）在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法：采用Westem blot技术和免疫组化方法，研究ERKI和ERK2蛋白在50例上皮性卵巢癌，10例卵巢良性肿瘤，10例正常卵巢组织中的表达。结果：ERK1和ERK2在卵巢癌中有过度表达，与正常卵巢及卵巢良性肿瘤相比，差异十分显著（P〈0．01）。Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅰ～Ⅱ期，差异显著（P〈0．05）。ERK1和ERK2与卵巢癌分化程度、病理类型无关。结论：ERK的过度表达在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

细胞外信号调节激酶在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在乳腺癌中的表达及在乳腺癌发生发展中的作用。方法:采用Westernblot技术和免疫组化方法,研究ERK1和ERK2蛋白在60例乳腺癌,10例乳腺良性肿瘤,10例正常乳腺组织中的表达。结果:ERK1和ERK2在乳腺癌中有过度表达,与正常乳腺及乳腺良性肿瘤相比,其差异有显著性(P<0.01),乳腺癌Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅱ期和Ⅰ期,差异有显著性(P<0.05);有腋窝淋巴结转移者表达高于无腋窝淋巴结转移者,差异有显著性(P<0.05)。ERK1和ERK2在高、中、低分化乳腺癌中无显著差异,与乳腺癌病理类型无关。结论:ERK的过度表达在乳腺癌的发生发展及淋巴结转移中起重要作用。     

缺血后处理对再灌注损伤大鼠胃黏膜细胞ERK表达的影响

目的探讨缺血后处理（ischemic post-conditioning,I-postC）对大鼠胃黏膜再灌注（GI-R）损伤的影响及细胞机制。方法制备胃缺血后处理模型。实验分为3组（n=6）：假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I-R组）、缺血后处理组（I-postC组）。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法（TUNEL）检测胃黏膜细胞的凋亡,用免疫组化方法检测胃黏膜细胞增殖及凋亡相关基因p-ERK的表达。结果与Sham组相比,I-R组胃黏膜细胞凋亡增加及增殖减少,p-ERK表达下调;与I-R组相比,缺血后处理显著降低胃黏膜细胞凋亡率,同时可以增加胃黏膜增殖率及p-ERK的表达。结论缺血后处理可抑制胃黏膜细胞凋亡,促进细胞增殖。其机制可能与p-ERK的表达上调有关。     

Glucocorticoid modulation of extracellular signal-regulated protein kinase1/2 and p38 in human ovarian cancer HO-8910 cells

Objective To investigate the signaling pathway through testing the effects of dexamethasone (Dex)on the activation of the extracellular signal-regulated protein kinase 1/2 (ERK1/2 and p38 kinase(p38) in HO-8910 cells.Methods Activation of the ERK1/2against the total ERK1/2 and p38 mitogen-activated protein kinases (MAPKs) protein and the phosphorylated forms of them.Results Dex could suppress the activation of ERK1/2, while enhance the activation of p38 rapidly and strongly in a dose- and time- dependent manner. Neither effect could be blocked by RU486, the antagonist of glucocorticoid receptor (GR).Conclusion Dex has rapid effects on the activation of ERK1/2 and p38, and these effects are not mediated by GR.     

p53非依赖性信号通路在DNA损伤致细胞凋亡中的研究进展

p53在DNA损伤诱导细胞凋亡中发挥关键作用,但p53基因在大多数肿瘤细胞中易发生突变,突变率可超过50%。目前研究发现,p73、p63、Caspase 2、NF-κB等蛋白介导的信号通路能够在p53非依赖的DNA损伤诱导细胞凋亡中发挥作用。因此,有必要对p53非依赖信号通路近年来的研究进展作一综述,为癌症治疗提供新的思路。     

病毒性心肌炎小鼠细胞外信号调节激酶表达变化及其意义

目的：探讨病毒性心肌炎小鼠细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的表达变化及其意义。方法：105只清洁级近交系4～6周龄雄性Balb/C小鼠,随机分为两组,正常对照组40只和心肌炎组65只。心肌炎组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3复制心肌炎动物模型。在病毒接种后第1、第3、第5、第7和第14天,每组各取8只,留取血清及心脏标本。采用HE染色及电镜观察心肌组织学改变,化学发光免疫法测定血清心肌肌钙蛋白-I（cardiac troponin,cTn-I）含量,Western-blot及免疫组化法检测心肌组织中磷酸化ERK含量,Pearson等级相关分析磷酸化ERK和心肌组织炎症积分、血清cTn-I含量之间的关系。结果：心肌炎组小鼠在病毒接种后第3天出现炎症细胞浸润,炎症积分于第7天达到高峰;心肌损伤标志物血清cTn-I在病毒接种后第3天出现升高,于第5天达到峰值,然后逐渐下降;小鼠在病毒接种后第1、第3、第5天磷酸化ERK含量明显增加,伴核转位,第7天减弱至接近正常对照组水平,第14天磷酸化ERK含量又复增加,表现为早期和晚期2次活化;相关分析结果显示,磷酸化ERK水平和血清cTn-I含量成正相关,和炎症积分之间则无明显相关性。结论：病毒性心肌炎小鼠心肌组织的ERK表现为早、晚期两个活化阶段,这可能和病毒早期所致的心肌损伤及晚期疾病进展有关。     

细胞外信号调节激酶ERK1/ERK2对胰腺癌生长的影响

目的研究胰腺癌患者组织中及细胞系Pane-1及Jf-305中的ERK1／ERK2蛋白表达情况,以探讨其在胰腺癌发生、发展过程中的意义。方法应用免疫组织化学技术检测临床胰腺癌患者组织中ERK1／ERK2蛋白表达;Western blot方法观察胰腺癌细胞系Pane-1及Jf-305中的ERK1／ERK2蛋白表达。结果胰腺癌患者组织ERK1和ERK2蛋白均呈显著性高表达,阳性率分别为86．7％(39／45)和84．44％(38／45),而对照组织的阳性率分别为30％(6／20)和20％(4／20),胰腺癌组织和对照组织阳性率有显著差异;胰腺癌细胞系Panc-1及Jf-305中均有ERK1／ERK2蛋白的高表达。结论胰腺癌患者组织及细胞系中均有ERK1／ERK2蛋白强表达,ERK1和ERK2蛋白的过表达可能在人胰腺癌的发生、发展过程中起重要作用。     

Gemin3抑制p53介导的细胞凋亡

目的 探讨Gemin3基因表达在细胞增殖中的作用及其途径.方法 采用免疫共沉淀、谷胱苷肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相互作用的结构域.荧光素酶报告基因检测转染Gemin3基因对p53基因的影响,依靠慢病毒载体介导发卡RNA干涉敲减Gemin3基因的表达并经嘌呤霉素筛选获得稳定的Gemin3低表达细胞系,实时PCR检测Gemin3敲减对p53及其下游基因在转录水平的影响,流式细胞检测Gemin3敲减对细胞增殖的影响.结果 Gemin3的C端与p53的中部DNA结合部位相互结合,Gemin3在转录水平抑制p53基因的表达,敲减Gemin3基因的表达导致细胞凋亡的增加. 结论 Gemin3与p53相互结合并通过抑制p53的表达促进细胞的增殖.     

siRNA靶向沉默p53对PCNA泛素化修饰及细胞凋亡的影响

目的siRNA靶向沉默p53蛋白后,观察其对PCNA泛素化修饰及细胞凋亡的影响。方法将p53siRNA及阴性对照siRNA通过脂质体分别转染入HeLa细胞中;转染后48h,顺铂处理不同细胞系,Westernblot法检测p53低表达对细胞PCNA泛素化修饰（ubi-PCNA）及凋亡诱导基因Caspase-3的影响。结果siRNA可显著抑制p53的表达;Westernblot结果提示,与对照组比较,顺铂损伤后p53低表达细胞系其PCNA泛素化修饰蛋白表达增加,同时Caspase-3蛋白表达下降,细胞存活率升高。结论靶向沉默p53的表达,可促进顺铂损伤诱导的PCNA泛素化修饰,降低细胞凋亡率。     

结肠癌及其癌前病变中P~(53),c-myc蛋白的表达及与细胞凋亡关系的研究

[目的 ]探讨P53,c myc蛋白在结肠癌及癌前病变中的表达及与细胞凋亡的关系 .[方法 ]应用免疫组织化学染色及TENEL法 .[结果 ]P53,c myc蛋白的阳性表达率在结肠癌中分别为 60 % ( 2 4 / 4 0 )和 78% ( 3 1/ 4 0 ) ,在结肠腺瘤中分别为 4 0 % ( 6/ 15 )和 5 3 % ( 8/ 15 ) ,与正常组织中的 0 % ( 0 / 8)和 13 % ( 1/8)相比有显著性差异 .凋亡指数在结肠腺瘤中明显增高 ,与正常结肠组织比较有非常显著性差异 ;凋亡指数在结肠腺癌中明显降低 ,与结肠腺瘤比较有非常显著性差异 .P53阴性的结肠腺瘤凋亡指数增高 ,与P53阳性的结肠腺瘤凋亡指数相比有显著性差异 ;c myc蛋白阳性的结肠腺癌凋亡指数与c myc蛋白阴性的结肠腺癌凋亡指数相比有显著性差异 .[结论 ]P53,c myc蛋白的过表达在结肠组织恶性转化过程中起重要作用 ;结肠癌的发生与细胞凋亡调控失调有密切关系 ,其中P53蛋白对细胞凋亡起抑制作用 ,而c myc蛋白对细胞凋亡起促进作用 .     

大鼠脑创伤后海马区p53蛋白表达对神经细胞凋亡影响

目的 :从分子生物学水平 ,进一步深入研究颅脑创伤后神经细胞延迟性死亡的机制 ,探讨美洛宁对大鼠脑创伤后的影响 ,为临床治疗颅脑创伤提供一定的理论基础 .方法 :采用重型闭合性颅脑创伤模型 .利用免疫组化及原位凋亡检测 ,动态观察大鼠颅脑创伤后海马区p5 3蛋白的表达及神经细胞凋亡 .结果 :假手术组及正常对照组海马CA2区未检测出 p5 3蛋白的表达及凋亡阳性细胞 .创伤组大鼠伤后 3h海马CA2区出现 p5 3蛋白表达 ,2 4h (A =0 .14 9± 0 .0 16 )达高峰 ,72h即有所下降 ;伤后 2 4h ,海马CA2区即出现少量凋亡阳性细胞 ,于 16 8h (2 9.2± 4 .7/HP)达高峰 ,336h凋亡阳性细胞下降 .美洛宁组的 p5 3蛋白表达高峰 (A =0 .10 6±0 .0 17)及细胞凋亡的高峰 (2 1.0± 4 .6 /HP)较创伤组明显下调 .结论 :脑创伤后 p5 3蛋白表达增加可能造成神经细胞凋亡 ,美洛宁能够减少脑创伤后 p5 3蛋白表达 ,抑制神经细胞凋亡 .     

细胞外信号激酶蛋白5在卵泡刺激素介导的卵泡颗粒细胞甾体激素生成中的作用

目的研究细胞外信号激酶蛋白5(ERK5)在卵巢颗粒细胞甾体激素生成中的作用。方法采用Western blot检测在卵泡刺激素(FSH)刺激原代颗粒细胞甾体激素生成过程中ERK5的表达变化和激活情况,荧光共聚焦技术分析ERK5的亚细胞定位,腺病毒技术观察活化型ERK5和显性负性ERK5对颗粒细胞甾体激素生成的影响。结果 Western blot检测结果表明,FSH处理颗粒细胞后ERK5的表达随处理时间延长而下调,而ERK5活性形式的表达随处理时间延长而逐渐上升。荧光共聚焦技术分析结果显示,FSH的处理并没有明显影响ERK5在颗粒细胞中的定位。腺病毒技术观察结果发现,在细胞中联合感染活化型MEK5重组腺病毒和野生型ERK5重组腺病毒能促进FSH引起的细胞内StAR的表达升高和孕酮分泌,而显性负性ERK5重组腺病毒感染细胞则出现相反的效应。结论 ERK5可能促进了FSH介导的颗粒细胞甾体激素生成。     

磷酸化胞外信号调节激酶在小鼠海马发育过程中的表达及其意义

目的：观察磷酸化胞外信号调节激酶（pERK）在胚龄（E）18 d以及生后不同日龄（P）小鼠海马不同阶段的表达,探讨其在海马发育中的可能作用。方法：分别取E18 d和P 1、3、7、14、21和28 d小鼠的海马组织,每个时间点均作为观察组,采用免疫组织化学和免疫印迹法、结合图像分析技术检测各时间点海马组织中pERK蛋白表达水平。结果：免疫组织化学检测,pERK蛋白主要在海马齿状回（DG）颗粒细胞层和阿蒙角（CA）锥体细胞层神经元的细胞核中表达。E 18 d,海马DG和CA区pERK表达染色浅,排列稀疏,表达水平很低;E 18 d~P 7 d,pERK染色逐渐加深、密集,pERK表达水平逐渐升高,与其他6个时间点比较,P 7 d时pERK表达水平最高（F=34.537,P<0.01）。P 14~21 d,pERK染色逐渐变浅,密集程度逐渐降低,pERK表达水平逐渐下降（F=28.754,P<0.01）;P 28 d时pERK表达水平处于稳定的较低水平（F=6.075,P>0.05）。免疫印迹检测,各时间点均有pERK表达,E 18 d~P 7 d,pERK表达水平逐渐升高,与其他6个时间点比较,P 7 d时pERK表达水平最高（F=33.856,P<0.01）;P 14~21 d时pERK表达水平逐渐降低（F=22.627,P<0.01）;P 28 d时pERK表达处于稳定的较低水平（F=7.421,P>0.05）。结论：小鼠生后早期阶段,即E 18 d~P 7 d,海马发育明显增速,pERK表达水平也随之逐渐升高,P 7 d达高峰,随后逐渐下降直至稳定,pERK参与小鼠海马发育过程中的细胞增殖。     

人截短型凋亡诱导因子AIF△1-480的表达对HeLa细胞的促凋亡作用

目的: 观察人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用. 方法: 在人截短型AIF(AIF△1-120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-480位氨基酸)编码序列的人截短型AIF(AIF△1-480)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达以及对转染细胞形态的影响.结果: 成功构建了人截短型AIF(AIF△1-480)基因的真核表达载体.转染细胞后,可检测到人截短型AIF(AIF△1-480)分子的表达.转染后48 h,可观察到表达人截短型AIF(AIF△1-480)分子的细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.     

Calcitonin gene-related peptide induces proliferation and monocyte chemoattractant protein-1 expression via extracellular signal-regulated kinase activation in rat osteoblasts

Background Calcitonin gene-related peptide （CGRP）, a sensory neuropeptide, affects osteoblast proliferation and bone formation. However, the mechanisms are not fully understood. Monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1） is a chemokine that stimulates the migration of monocytes and plays important roles in regulating bone remolding during fracture repair. In this study, we investigated the effects of CGRP on proliferation and MCP-1 expression in cultured rat osteoblasts. Methods Primary rat osteoblasts were isolated from fetal rats calvariae. Cells were exposed to gradient concentrations （10^-9 to 10^-7 mol/L） of CGRP. Protein and mRNA levels of MCP-1 were quantified by Western blotting and semiquantitative reverse transcdption-polymerase chain reaction, respectively. The protein level of MCP-1 was investigated and compared in cell culture media by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. Phospho-extracellular signal-regulated kinase （ERK） expression was detected by Western blotting. Cell proliferative activity was measured by 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide （MTT） and BrdU assay. The effects of MAPK/ERK kinase （MEK）-inhibitor U0126 on CGRP-induced MCP-1 expression in primary rat osteoblasts were examined. Results CGRP effectively enhanced primary rat osteoblast proliferation and led to significant increases in the expression of MCP-1 mRNA and protein in time- and dose-dependent manners. CGRP activated the ERK pathway. Pretreatment of cultured rat osteoblasts with MEK inhibitor U0126 resulted in dose-dependent inhibitions of CGRP-induced MCP-1 mRNA and protein levels. Thus, CGRP promoted cell proliferation and stimulated MCP-1 expression in cultured rat osteoblasts. Conclusion These studies document novel links between CGRP and MCP-1 and illuminate the effects of CGRP in regulating bone remodeling.