微管相关蛋白与自噬的研究进展

微管相关蛋白和微管蛋白共同控制微管的组装和稳定性,进而调控一些重要的生理过程,例如:调节细胞物质运输,维持细胞形态,细胞分裂分化,肿瘤的发生及自噬的发生.本综述将重点关注于微管相关蛋白与自噬之间的联系.     

Stathmin蛋白与乳腺癌的研究进展

微管解聚蛋白Stathmin具有其特有的微管解聚活性,在细胞的增殖、分化、迁移和肿瘤的发生中具有十分重要的作用。研究表明,大多数恶性肿瘤中,Stathmin蛋白均有较高水平的表达。目前已经证实,Stathmin的过表达能够影响某些作用于微管的化学药物的疗效,对于肿瘤的临床治疗有指导意义,成为肿瘤治疗的一个分子新靶点。现就Stathmin的生物学特性、生物学功能及其与乳腺癌的关系综述如下。     

人横纹肌肉瘤中微管蛋白的表达

目的　研究人横纹肌肉瘤中细胞骨架成分微管的改变。方法　采用免疫组化 SP法 ,对 70例人横纹肌肉瘤石蜡组织切片中微管蛋白的表达进行研究 ;应用激光共聚焦显微镜对三种不同转移潜能的横纹肌肉瘤细胞系 (PL A- 80 2 ,A6 73,RD)中微管进行免疫荧光染色研究。结果　人横纹肌肉瘤石蜡组织切片中普遍存在微管蛋白的低表达。肿瘤组织学分级 级 microtubulin- β的低表达细胞为 5 2 .38% , 级为 85 .0 0 % (P<0 .0 5 )。有转移、复发的 32例中 ,microtubulin- β的低表达细胞为 87.5 0 % ;无转移、复发的 38例中 ,其低表达细胞为 5 5 .2 6 % (P<0 .0 5 )。在三种人横纹肌肉瘤细胞系中 ,PL A- 80 2细胞的微管发育最不完善 ;RD细胞中微管形态接近正常肌母细胞 ;A6 73细胞微管发育程度居中 (P<0 .0 5 )。结论　人横纹肌肉瘤中 ,普遍存在微管蛋白的低表达。微管蛋白的减少和微管的发育不完善与肿瘤细胞的转移潜能 ,肿瘤的组织学分级和转移复发有关。     

β-谷甾醇对子宫颈癌细胞微管系统的影响

目的 探讨β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa的生长抑制作用及对细胞内微管系统的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定β-谷甾醇对SiHa细胞的增殖抑制作用,并用流式细胞技术分析β-谷甾醇作用前后细胞周期的变化,应用激光共聚焦显微技术观察β-谷甾醇处理的SiHa细胞内微管和微管相关蛋白2的表达、分布,采用蛋白免疫印迹法检测微管蛋白、微管相关蛋白2的表达,及聚合和未聚合微管蛋白含量的变化。结果 20μmol／L的β-谷甾醇能明显抑制SiHa细胞的增殖,并显著促进S期细胞的集聚。激光共聚焦分析表明,β-谷甾醇作用5d的SiHa细胞微管网络异常,微管相关蛋白2表达显著下调,蛋白免疫印迹结果进一步证实β-谷甾醇能抑制微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达,同时β-谷甾醇能抑制SiHa细胞内微管蛋白的聚合,并随着作用时间的延长而逐渐增强。结论 β-谷甾醇能降低SiHa细胞微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达,并抑制SiHa细胞内微管的聚合,提示β-谷甾醇具有一定的抗微管作用,这一作用可能是造成SiHa细胞生长抑制的重要原因。     

JWA 蛋白与α-微管蛋白结合和对微管稳定性的调节

目的：探讨了JWA蛋白与α-微管蛋白在细胞内的分布和相互关系，特别是在有丝分裂过程中的动态变化及与微管蛋白的关系。方法：用荧光显微镜技术研究低温处理、处理后恢复的NIH3T3细胞JWA蛋白和微管蛋白的相互作用：用激光共聚焦技术检测NIH3T3细胞的JWA蛋白与α-微管蛋白在细胞内的分布。结果：JWA蛋白在细胞内与α-微管蛋白的分布基本平行。结论：JWA蛋白，作为一种新的微管相关蛋白，在微管动力学变化过程和有丝分裂过程中与α-微管蛋白有交互作用，与α-微管蛋白结合，可能对微管稳定性起一定的调节作用。     

促微管聚合蛋白家族的研究进展

 促微管聚合蛋白(tubulin polymerization promoting proteins, TPPPs)家族是一类能与微管蛋白结合,从而促使微管聚集、维持微管系统稳定性和完整性的蛋白质,其在细胞有丝分裂纺锤体组装中发挥重要作用。目前已知该家族在人类基因组中有3个成员：TPPP/p25、TPPP2/p18和TPPP3/p20,其共同点是在C末端都包含一个保守的p25-α序列。TPPP1主要与神经系统疾病相关,如多发性硬化和多系统萎缩;TPPP3在许多肿瘤细胞中表达,与肿瘤的增殖密切相关;而TPPP2的研究相对较少。本文将主要阐述TPPP家族成员及其相关疾病的最新研究进展。     

中心体α-微管蛋白、γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达及其与Survivin表达的相关性研究

目的 探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达,及其与凋亡抑制基因Survivin表达的相关性。方法 应用免疫组织化学方法检测51例脑胶质瘤组织中α-微管蛋白、Survivin蛋白的表达,免疫荧光染色方法检测γ 微管蛋白的表达,并分析其之间的相关性。结果 脑胶质瘤高级别组（Ⅲ～Ⅳ级）α-微管蛋白、γ-微管蛋白及Survivin蛋白表达阳性率（88.0%、80.0%、92.0%）明显高于低级别组（Ⅰ、Ⅱ级）（22.2%、47.1%;11.1%、35.3%;33.3%、52.9%）,且差异具有统计学意义(P均＜0.0125)。α-微管蛋白、γ-微管蛋白与Survivin表达之间均呈正相关（r分别为0.440?4、0.547?8,P＜0.05)。结论 α-微管蛋白、γ-微管蛋白和Survivin在胶质瘤中的表达随恶性程度升高而增加,且相互之间均呈正相关。微管蛋白与Survivin的相互作用可能是胶质瘤发生发展过程中的重要事件。     

β3-微管蛋白及tau蛋白的表达在乳腺癌紫杉类药物化疗耐药中的预测价值

目的：探讨乳腺癌β3-微管蛋白及微管相关蛋白tau的表达与紫杉类药物化疗耐药的相关性.方法：对48例进展期乳腺癌患者采用含紫杉类药物化疗方案进行2～6个周期新辅助化疗,应用空芯针穿刺技术获取化疗前及化疗后的第2、第4、第6周期末乳腺癌组织标本.免疫组织化学法分别检测β3-微管蛋白及tau蛋白的表达水平,探讨化疗疗效与β3-微管蛋白及tau蛋白表达的相关性.结果：化疗前β3-微管蛋白的平均表达率为45.6％±33.3％,tau蛋白平均表达率为62.9％±24.3％,化疗总体有效率为60.4％.β3-微管蛋白表达与紫杉类药物化疗有效率呈负相关,在化疗的第2、第4、第6疗程末,β3-微管蛋白的平均表达率分别为51.6％±31.2％,54.6％±29.1％,57.8％士30.4％,表达呈上升趋势,并在第4疗程获得了统计学的差异.tau蛋白表达与雌激素受体表达存在正相关,与化疗有效率之间无显著相关.tau在化疗前后表达无显著改变.结论：β3-微管蛋白是良好的紫杉类化疗敏感性预测因子,并且可能是紫杉类继发耐药发生的重要原因,在化疗前及化疗过程中检测其表达情况有助于化疗方案的选择.tau蛋白可能并不是一个良好的紫杉类化疗敏感性预测因子.     

乳腺癌β3-微管蛋白表达与紫杉类药物化疗耐药的相关研究

目的探讨乳腺癌β3-微管蛋白表达与紫杉类药物化疗耐药发生的关系。方法对42例乳腺癌患者进行2～6个周期的含紫杉类药物方案化疗,并在化疗前及化疗的第2、4、6周期末检测β3-微管蛋白的表达,分析化疗疗效与β3-微管蛋白表达的相关关系以及化疗过程中β3-微管蛋白表达的改变。结果化疗前β3-微管蛋白的平均表达率为0．456±0．320,化疗总体有效率为57．1％,tubb3表达与紫杉类药物化疗有效率呈负相关。在化疗过程中,β3-微管蛋白表达呈上升趋势,并在第4疗程达到了统计学的差异。结论β3-微管蛋白是良好的紫杉类化疗敏感性预测因子,并且可能是紫杉类继发耐药的重要原因,在化疗前及化疗过程中检测其表达情况有助于化疗方案的选择。     

天然植物药物IHA-01体外对微管聚合影响作用的研究

目的研究天然植物药物IHA-01对猪脑微管蛋白的影响,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法通过在体外对温度进行两次循环调控,应用超速离心机从新鲜猪脑中提取纯化出微管蛋白,体外建立微管蛋白亚单位聚合-解聚平衡系统,在此平衡系统中通过测量其吸光度值的变化来检测药物对微管的作用。结果 IHA-01抑制微管蛋白亚单位聚合过程中吸光光度值升高。结论抑制微管蛋白聚合可能是天然植物药物IHA-01抗癌机制之一。     

新型微管结合蛋白在肿瘤发生与发展中的研究进展

新型微管结合蛋白(NuSAP)是一种重要的有丝分裂调节蛋白,在细胞分裂间期定位于核仁,在有丝分裂期与纺锤体的微管共同定位于胞质。NuSAP磷酸化和去磷酸化可动态调节其在细胞内功能。越来越多的研究表明,NuSAP选择性地在增殖性细胞中表达,其不仅参与纺锤体的稳定组装,而且与肿瘤组织的血管形成、增殖和侵袭有一定的相关性。随着分子生物学的发展,NuSAP有望成为新的肿瘤生物标志物和临床治疗的靶点,为肿瘤的早期诊断、临床治疗和预后提供新的方向。     

Stathmin与妇科肿瘤的研究进展

Stathmin蛋白由于其特有的微管解聚活性,在细胞的增殖和分化及肿瘤发生中发挥着十分重要的作用。多种恶性肿瘤中Stathmin都有高水平表达,抑制其表达可以干扰恶性细胞的增殖。目前已经证实,Stathmin的过表达能够影响某些作用于微管化疗药物的疗效,对指导临床用药有一定的意义。Stathmin为肿瘤基因治疗提供了一个分子新靶点。Stathmin在妇科肿瘤方面的研究目前尚不多见。现就Stathmin的分子结构、生物学功能、作用机制及其与妇科肿瘤的关系进行综述。     

中心体α、γ-微管蛋白在乳腺癌前病变及乳腺癌中的表达及其意义初探

目的 探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在人乳腺癌前病变和乳腺癌中的表达及其在乳腺癌发生发展过程中的作用。方法 采用免疫组织化学S-P法检测乳腺导管上皮不典型增生、乳腺导管内癌和浸润性导管癌各40例中中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白表达水平，30例正常乳腺组织作为对照组，并用Western印迹进行验证。所得数据经统计学分析并结合随访情况进行评价。结果 不同样本组α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达水平不同（P=0．000），随正常上皮组织到出现不典型增生至进展为原位癌和浸润性癌的发展变化，α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达量呈增高趋势，以浸润性癌为最高（40例中分别有14例、11例表达为＋＋＋），各组问差异均有统计学意义（P=0．001）。比较同例和同组α、γ-微管蛋白的表达程度差异无统计学意义（P〉0．05）。癌前病变、导管内癌、浸润性导管癌组α、γ-微管蛋白的表达水平与预后具有相关性。结论 中心体异常为乳腺癌细胞恶性表型的明显特征之一，并可能为乳腺癌形成过程中的早期事件。α、γ-微管蛋白的表达情况可为乳腺癌发生机制探讨、高危病例筛选及估测预后提供一种新的途径。     

宫颈永生化细胞和癌细胞的α、β、γ-微管蛋白比较分析

目的：探讨中心体α、β、γ-微管蛋白在人鳞状上皮宫颈永生化细胞（H8细胞株）和癌细胞（Caski细胞株）的表达差异及其在宫颈癌发生发展过程中的作用。方法：采用免疫细胞化学sP法检测中心体α、β-微管蛋白在人宫颈永生化细胞和癌细胞中的表达差异,提取两株细胞的骨架蛋白并用Western blotting对α、β、γ-微管蛋白的表达水平进行半定量分析。结果：Caski细胞中α、β-微管蛋白表达水平高于H8细胞,差异均有统计学意义（P〈0．05）。半定量分析α、β、γ-微管蛋白,Caski细胞中的表达量高于H8细胞。结论：中心体异常可能是宫颈癌细胞恶性表型的特征之一,以中心体微管蛋白为治疗靶点的研究有着可期待的前景。     

姜黄素通过调控微管系统干扰HepG2细胞周期研究

目的 研究姜黄素对人肝癌HepG2细胞周期的影响及微管系统在其中的作用。方法 MTT法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析姜黄素对HepG2细胞周期分布的影响;激光共聚焦显微镜观察姜黄素对HepG2细胞微管结构变化的影响;Western blotting 检测姜黄素对微管蛋白α-tubulin表达的影响;在离体条件下,观察姜黄素对微管蛋白聚合和解聚活性的影响。结果 姜黄素对HepG2细胞增殖具有抑制作用且与时间和剂量相关;随着姜黄素浓度的升高,HepG2细胞阻滞于G₂/M期的比例也逐渐增加;激光共聚焦显微镜观察可见姜黄素明显破坏细胞微管结构,改变细胞微管蛋白聚合状态的发生;Western blotting检测发现细胞内α-tubulin蛋白表达的减弱与试药浓度相关。姜黄素还可影响微管蛋白聚合和解聚活性。结论 姜黄素通过破坏HepG2细胞的微管结构及下调微管蛋白α-tubulin的表达,将HepG2细胞阻滞于G₂/M期,从而抑制肝癌HepG2细胞的生长。     

微管相关蛋白tau转基因细胞和动物模型的建立及tau蛋白病变表征

目的 构建并表征tau及突变tau蛋白细胞和动物模型,检测模型tau蛋白及磷酸化tau蛋白表达情况及微管的形态,为tau蛋白及相关疾病的研究提供疾病模型。方法 将不同的质粒分别转染到HEK293细胞中,构建过表达野生型tau以及P301L/P301S突变tau的细胞模型。引进并繁育rTg4510小鼠（P301L突变tau转基因小鼠）以及PS19小鼠（P301S突变tau转基因小鼠）。通过Western blotting法检测总tau及磷酸化tau蛋白的表达,应用免疫组织化学的方法检测转基因小鼠脑内磷酸化tau蛋白的表达情况,应用免疫荧光的方法检测HEK293细胞微管形态的变化。结果 本研究成功构建过表达tau蛋白的细胞模型,繁育了两种tau转基因小鼠,在这些模型中tau蛋白表达及tau蛋白的磷酸化水平显著高于对照组。在不同突变类型的细胞和动物模型中,tau蛋白不同位点的磷酸化水平变化以及微管形态变化略有差异。结论 本研究成功构建了P301L/P301S突变tau蛋白的细胞和动物模型,这些模型均表现了显著的tau蛋白过度磷酸化的病变,并引起了细胞微管形态或tau蛋白病理的变化,进而为包括AD在内的tau蛋白病变提供了实验模型。     

免疫荧光染色检测不同组织细胞微管蛋白-β的表达

为了探讨体外培养的正常及肿瘤细胞微管蛋白 β的表达 ,将肺成纤维细胞 ( 3T3)、胃癌细胞 (BGC 82 3)、神经母细胞瘤株 (SH SY5Y)、大鼠胶质瘤细胞株 (C6)、多形性胶质母细胞瘤株 (BT32 5)体外培养 ,免疫荧光细胞染色检测微管蛋白 β的表达。发现 :所有细胞均为微管蛋白 β免疫反应阳性。结果提示 :微管蛋白 β阳性反应可发生在增生活跃的培养细胞     

钒酸根和钒氧离子与微管蛋白作用

目的：研究钒酸根和钒氧离子分别作为磷酸根和二价金属离子的类似物作用于微管蛋白对其聚合过程的影响。方法：用浊度法和荧光光度法测定钒化合物对猪脑微管蛋白的作用。结果：钒酸根促进微管蛋白聚合，而钒氧离子则抑制其聚合，对微管蛋白荧光影响表明二者均使蛋白内源荧光淬灭，但钒酸根作用大于钒氧离子。结论：钒酸根作用类似于其它磷酸类似物如ＡｌＦ４＾－和ＢｅＦ３＾－，即促进微管蛋白的聚合，钒氧离子的作用类似于二阶阳离     

黎药海南地不容氧化克班宁对人乳腺癌MCF-7细胞微管位点和微管蛋白的调控机制研究

目的：本论文深入探究黎药海南地不容抗乳腺癌活性化合物氧化克班宁对微管网络的破坏能力，研究氧化克班宁在分子层面和细胞层面对微管网络稳态的影响。方法：首先采用EBI位点竞争法和分子对接来确定氧化克班宁对微管位点的占据力；其次，采用Western Blot法检测STAT3、PKA1、CAMK4和PKA检测氧化克班宁对微管蛋白的影响。结果：EBI位点竞争法结果显示，EBI与β-微管蛋白加合物比β-微管蛋白出现在分子量更小的区域（ctrl2）。分子对接结果显示，氧化克班宁可以占据微管蛋白的秋水仙碱位点。Western Blot结果显示，低、中、高3个浓度的氧化克班宁或阳性药Taxol作用MCF-7细胞48 h后，显著降低STAT3蛋白表达水平（P<0.01），显著降低PKA1和CAMK4蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01），并且可降低PKA蛋白表达水平，与对照组差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：氧化克班宁结合在微管蛋白秋水仙碱位点扰乱微管蛋白聚合，造成MCF-7细胞有丝分裂，从而导致MCF-7细胞死亡。氧化克班宁可通过抑制MCF-7细胞中STAT3、PKA1...     

作用于微管的天然产物

微管在有丝分裂中扮演着重要的角色,微管靶点药物是抗肿瘤药物的重要组成部分。很多天然产物能作用于微管的不同部位,其中包括紫杉醇类和长春花碱类。根据这些天然产物对微管蛋白聚合所起的促进作用或抑制作用,将其划分成两类,着重讨论它们的来源、作用机制和生物活性。