4-氨基吡啶抑制肺癌SPCA1及PC9细胞侵袭转移

目的: 探讨4-氨基吡啶对肺癌细胞侵袭转移的影响及其分子机制。方法: 采用浓度为0、3、4.7或0、3.125、6.25 mmol/L的4 氨基吡啶分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,Transwell实验观察肺癌细胞迁移侵袭能力, 蛋白质印迹法检测细胞侵袭转移相关的上皮间质转化标志蛋白N 钙黏蛋白、E-钙黏蛋白以及Snail的表达。结果： Transwell迁移实验和侵袭实验结果显示,4-氨基吡啶组细胞穿膜数明显减少（P＜0.05）。蛋白质印迹法结果显示,4-氨基吡啶组细胞E-钙黏蛋白表达上调,N-钙黏蛋白和Snail表达下调。结论： 4-氨基吡啶通过调控上皮间质转化蛋白的表达抑制肺癌细胞SPCA1及PC9侵袭转移。     

4-氨基吡啶对MPP+诱导帕金森病细胞具有神经保护作用

目的 探究4-氨基吡啶（4-aminopyridine,4-AP）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+）诱导的帕金森病细胞模型是否存在保护作用。方法 利用不同浓度的MPP+孵育SH-SY5Y细胞,探究不同浓度MPP+对细胞活性的影响。单独利用4-AP孵育细胞,探究4-AP是否影响细胞活性。利用4-AP预处理SH-SY5Y细胞系24h后,随后选取合适浓度的MPP+孵育细胞24h,CCK8测定细胞活性并进行统计学分析。结果 随着MPP+药物浓度的升高,SH-SY5Y细胞活性下降。不同浓度的4-AP单独孵育SH-SY5Y细胞系对细胞活性不产生影响。不同浓度的4-AP预处理细胞24h后,加入1mol/L的MPP+孵育24h,当4-AP浓度在0.3～10mol/L时SH-SY5Y细胞的活性增加,在1mol/L时细胞活性增加最佳,为正常细胞的66%。结论 一定浓度范围内的4-AP可减少MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,具有神经保护作用。     

过表达KLF4抑制非小细胞肺癌增殖及上皮间质转化的作用机制

目的探究KLF4 调控非小细胞肺癌（NSCLC）增殖及上皮间质转化（EMT）发生的作用机制,为NSCLC 的临床研究提供理论依据。方法收集临床病理资料进行统计学分析,免疫组织化学检测KLF4 在癌旁及癌组织中的表达,细胞水平检测KLF4 在癌细胞和正常细胞中的表达差异,过表达KLF4 检测对肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT 相关标志物的影响。结果KLF4 在癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达,并且与患者的临床分期及远处转移密切相关,细胞水平检测也得到了相同的结果,上调KLF4 的表达抑制了细胞的增殖、侵袭及迁移,同时抑制EMT 相关的间充质标志物的表达,促进上皮标志物的表达。结论过表达KLF4能够抑制NSCLC 增殖及EMT 的发生。     

趋化因子受体CXCR4在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的探讨CXCR4在肺癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学方法检测84例肺癌组织、20例正常肺组织中CXCR4的表达,其中84例肺癌中包括36例淋巴结转移。结果 CXCR4蛋白在肺正常组织表达较低,在84例肺癌组织中的阳性表达率高达60.7%(51/84)。CXCR4的表达与肺癌患者的年龄、性别无关,而与分化程度、TNM分期、病理类型和淋巴结转移有相关性。低分化组肺癌组织CXCR4阳性表达率(78.95%)明显高于高中分化组(45.65%)。临床Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期的肺癌组织CXCR4蛋白阳性表达率分别为50.81%和86.96%;伴淋巴结转移组肺癌CXCR4蛋白阳性表达率为77.78%,没有淋巴结转移组阳性表达率为47.92%;而病理类型中腺癌的阳性表达较高(86.36%)。结论肺癌组织中高表达的CXCR4很可能是促进肺癌侵袭和转移的一个重要分子。     

BRD4抑制剂JQ1抑制非小细胞肺癌生长的研究

目的:探讨BRD4抑制剂JQ1对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株及厄洛替尼耐药细胞株生长的影响并探讨其作用机制?方法:用不同浓度JQ1处理不同类型NSCLC细胞株,72 h后用磺酰罗丹明B(SRB)法检测JQ1对细胞增殖的抑制作用,分别用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测癌基因eIF4E的mRNA及蛋白表达水平?结果:JQ1呈浓度依赖性抑制NSCLC细胞株的生长,包括厄洛替尼敏感和耐药细胞株,下调eIF4E的mRNA及蛋白水平表达?结论:JQ1可抑制不同NSCLC细胞株的生长,其作用机制可能与降低eIF4E表达有关?     

合成4-氨基-2-甲基吡啶的改良方法

4-氨基 - 2 -甲基吡啶是合成 2 -甲基吡啶 - 4 -取代衍生物的中间体 ,国内目前无产品出售 ,笔者对其合成进行了研究。文献 [1 ]用 30 % H2 O2 和冰 HAc氧化吡啶制备吡啶氮氧化物 ,文献 [2 ]综述了几种吡啶 N-氧化物制备方法 ;笔者参考文献 [1～ 3 ] ,用 30 % H2 O2 和冰 HAC 氧化 2 -甲基吡啶制备 2 -甲基 - N-氧化物吡啶 ,不需减压蒸馏分离 2 -甲基 - N-氧化吡啶 ,直接用混酸HNO3 - H2 SO4硝化制备 2 -甲基 - 4 -硝基 - N-氧化吡啶 ,两步收率达 82 % ;文献 [4]分两步用钯碳、锌粉还原 2 -甲基 - 4 -硝基 - N-氧化吡啶制备 4-氨基 -…     

隐丹参酮联合顺铂作用于非小细胞肺癌PC9细胞的体外研究

目的 研究隐丹参酮(cryptotanshinone,CPT)与顺铂(cisplatin,DDP)联合作用于非小细胞肺癌PC9细胞具有协同抗肿瘤作用及其可能的分子机制,为隐丹参酮联合顺铂应用于临床提供理论依据。方法 肺癌PC9细胞分为对照组、隐丹参酮组、顺铂组及联合用药组,MTT法检测和免疫印迹技术检测细胞增殖凋亡,免疫印迹技术、RT-PCR检测抗凋亡分子的表达、STAT3及上游调控激酶JAK2/SRC蛋白表达水平及磷酸化水平。结果 隐丹参酮联合顺铂明显抑制肺癌PC9细胞的增殖作用(P＜0.05),联合用药组作用于肺癌PC9细胞24h后,caspase 3和caspase 9及PARP剪切段蛋白表达明显增高,高于对照组及单药组,联合用药后Mcl-1、Bcl-2、XIAP、survivin抗凋亡蛋白表达下调, STAT3磷酸化Tyr₇₀₅和ser₇₂₇水平下降,其上游JAK2磷酸化水平下调,SRC蛋白及磷酸化水平变化不明显。结论 隐丹参酮与顺铂具有协同抗肺癌PC9细胞的作用,其作用机制为通过抑制STAT3磷酸化Tyr₇₀₅和ser₇₂₇表达水平进而下调Mcl-1、Bcl-2、XIAP、Survivin蛋白的表达及上调caspase 3和caspase 9及PARP剪切段蛋白表达。     

银杏叶提取物对鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba leaves,EGB)对PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用细胞培养的方法,建立PC12细胞的鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )损伤的模型.用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测胞外多巴胺(DA)水平.结果:同毒物组比较,EGB在0.35、0.70、1.40 mg/ml浓度下能减轻MPP 引起的PC12细胞损伤,在1.40 mg/ml浓度下能减轻鱼藤酮引起的损伤,明显提高细胞的存活率, 增高胞外DA水平:2 mmol/L MPP 和10 μmol/L鱼藤酮作用下胞外DA分别为(6.875±0.201)和(5.321±0.167) ng/ml,而1.40 mg/ml EGB分别与2 mmol/L MPP 或10 μmol/L鱼藤酮共同作用,DA升高至(7.595±0.139) ng/ml(P<0.05)和(6.917±0.201) ng/ml(P<0.01).结论:EGB对鱼藤酮和MPP 体外诱导PC12 细胞的损伤具有明显的保护作用.     

白细胞介素-9及其受体在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨白细胞介素-9?(IL-9)?及其受体?(IL-9R)?在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集2017年1月至2018年12月中国医科大学附属盛京医院胸外科110例手术切除并经病理确诊的非小细胞肺癌癌组织及其癌旁正常石蜡包埋组织标本,并收集其中19例非小细胞肺癌的癌组织及其周围正常的新鲜组织标本....     

真核细胞起始因子-4E表达与非小细胞肺癌预后的相关性

目的探讨真核细胞起始因子-4E(e IF-4E)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及其与预后的关系。方法选择2009年1月~2010年12月温州医科大学附属黄岩医院外科手术切除的NSCLC组织60例以及30例癌旁正常组织样本作为对照,采用免疫组化法检测NSCLC组织以及癌旁正常肺组织中el F4E的表达。NSCLC患者术后均接受2周以上的榄香烯联合顺铂化疗,对所有患者均进行系统地随访评价,分析e IF-4E的表达与无瘤生存期(DFS)和总生存时间(OS)的关系。结果 e IF-4E在NSCLC癌组织中的表达率为80.00%,显著高于正常癌旁组织(33.33%),差异有高度统计学意义(P<0.01)。年龄≥60岁及TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者的e IF-4E高表达率明显高于年龄<60岁及分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。e IF-4E低表达患者的DFS和OS均显著高于高表达者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 e IF-4E基因在NSCLC组织中呈高水平表达,榄香烯联合顺铂化疗后e IF-4E低表达患者的DFS和OS明显延长。e IF-4E高表达水平可作为NSCLC不良预后的预测因子。     

槲皮素通过Stat3/Mcl-1途径介导肺癌PC9/GR细胞凋亡的研究

目的 探究槲皮素(Que)对人非小细胞肺癌(NSCLC)获得性耐药细胞株PC9/Gefitinib-Resisitant (GR)细胞的凋亡的影响及作用机制.方法 MTT法检测不同浓度Que对PC9/GR细胞增殖的影响,计算其半数抑制浓度(IC50)值.光镜下观察细胞形态学改变.流式细胞术检测Que介导的细胞凋亡.Western blot法检测Stat3/Mcl-1信号途径相关蛋白水平的改变.结果 MTT显示Que可明显抑制PC9/GR细胞增殖,并呈浓度依赖性,IC50值为(74.83±4.83)μmol/L.流式细胞学结果表明,与对照组相比,Que 可呈浓度依赖性地促进细胞凋亡(P＜0.05).Western blot 表明Que可减弱Stat3蛋白的活化水平,其下游的凋亡相关蛋白Mcl-1表达亦减弱(P＜0.05).结论 Que对获得性耐药NSCLC细胞PC9/GR具有较强的抗肿瘤作用,作用机制可能与Stat3/Mcl-1途径介导的细胞凋亡密切相关.     

腺病毒介导的ING4基因抑制胃癌细胞生长及其分子机制

目的:研究肿瘤生长抑制基因4(inhibitor of growth family4,ING4)体外对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及其分子机制。方法:将携带有人ING4基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hING4)感染胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR法检测腺病毒介导的外源性hING4基因的转录,MTT法检测hING4基因对SGC-7901细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察hING4基因诱导SGC-7901细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测hING-4基因诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子bcl-2和bax的改变。结果:Ad-hING4感染SGC-7901细胞后,RT-PCR结果提示有hING4目的基因的转录,该基因表达可以显著抑制SGC-7901细胞的生长,诱导S期减少、G2/M期阻滞和凋亡,hING4基因能使SGC-7901细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论:重组腺病毒Ad-hING4对胃癌细胞SGC-7901具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2基因和上调bax基因的表达有关。     

miR-494对肺癌细胞株A549及SPCA1生长及侵袭的抑制作用

目的探讨miR-494对肺癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法利用化学合成的miR-494mimics转染A549及SPCA1肺癌细胞株,通过MTT、Transwell小室迁移实验、Boyden小室侵袭实验等观察过表达miR-494后细胞迁移、侵袭能力及生长的变化;利用Western blot检测细胞周期、上皮间叶转变(EMT)标志物相关蛋白。结果 MTT法显示,与对照组比较,过表达miR-494组细胞生长速度减慢,差异有统计学意义(P<0.001)。Transwell及Boyden实验显示过表达组细胞穿过聚碳酸酯膜的数量少于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。Western blot结果显示,与对照组比较,过表达miR-494的A549和SPCA1细胞中,CCND1、N-CA、VIMENTIN表达下调。结论miR-494可能通过下调CCND1、VIMENTIN、N-CA对肺癌细胞株A549及SPCA1的增殖、迁移及侵袭起到抑制作用。     

Beclin-1在非小细胞肺癌中的表达与意义

目的 探讨白噬重要调控因子Beclin-1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其临床意义.方法 收集150例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织并制成组织芯片,应用免疫组化的方法检测Beclin-l在肺癌组织及癌旁组织中的表达情况.分析Beclin-1的表达与肺癌不同临床参数之间的关系并对病例进行生存分析.结果 Beclin-1在肺癌组织的阳性表达率(26.00％)显著低于癌旁组织(82.00％)(P＜0.05);肺鳞癌组织中Beclin-1的阳性表达率(34.66％)显著高于肺腺癌(17.34％)(P＜0.05);Beclin-1的表达率在不同性别、年龄、分化程度、淋巴结转移、远处转移组间无显著差异(P＞0.05);Beclin-1阴性表达的非小细胞肺癌患者的生存率显著低于阳性表达的患者(P＜0.05).结论 Beclin-1可能是一个非小细胞肺癌治疗的新的靶点,有可能成为非小细胞肺癌病理类型判断的辅助指标和预后评估候选指标之一.     

EIF4G1对非小细胞肺癌细胞凋亡的抑制作用

目的 研究真核翻译起始因子4γ1(eukaryotic translation initiation factor 4γ1,EIF4G1)对非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡的抑制作用。方法 使用RNAi技术下调A549细胞内EIF4G1的表达后,通过MTS法检测细胞生长增殖,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,采用蛋白质印记(Western blot)技术检测下调EIF4G1后对A549细胞中与细胞凋亡相关的蛋白表达影响。 结果 下调A549细胞内EIF4G1的表达后,细胞生长受到明显抑制,细胞凋亡率也明显增加(P＜0.05),且凋亡相关蛋白和对照组相比,FAS,P21和TRAF2的表达量明显增高(P＜0.05)。 结论 EIF4G1在A549细胞中表达降低后,凋亡相关蛋白FAS,P21和TRAF2的表达量升高,促进A549细胞凋亡。     

VEGF-C及其受体Flt-4基因在非小细胞肺癌中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)及其受体Flt-4与非小细胞肺癌(NSCLC)组织的关系.方法:采用RT-PCR检测40例NSCLC、12例癌旁组织VEGF-C、Flt-4基因的转录表达,并与肺癌的临床病理特征进行分析.结果:NSCLC中VEGF-C mRNA及Flt-4 mRNA的相对含量明显高于癌旁组织(P＜0.01);与淋巴结转移正相关(P＜0.01).VEGF-C mRNA与肺癌的TNM分期正相关(P＜0.01).结论:VEGF-C与NSCLC的发生有一定关系;VEGF-C表达可做为肺癌患者判断淋巴转移的估计指标之一.     

IL-4协同雌二醇对小鼠乳腺癌细胞生长的促进作用及其机制

目的：探讨白细胞介素4（IL-4）协同雌二醇对小鼠乳腺癌4T1细胞对其生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养4T1细胞,加入不同浓度（0、12.5、25.0、50.0和100.0 μg·L^-1） IL-4或雌二醇（0、6.25、12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1）,作用72 h后MTT法检测乳腺癌4T1细胞增殖率。将乳腺癌4T1细胞分为对照组（不进行任何处理）、IL-4组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4）、雌二醇组（加入12.50 nmol·L^-1雌二醇）和联合组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4+12.50 nmol·L^-1雌二醇）,MTT法检测各组乳腺癌4T1细胞增殖率,流式细胞术检测各组不同细胞周期乳腺癌4T1细胞百分比,Western blotting法检测各组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、Erk、p-Erk、P70S6K、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平。结果：与0 μg·L^-1 IL-4组比较,25.0、50.0和100.0 μg·L^-1IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与0 nmol·L^-1雌二醇组比较,12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与对照组比较,雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）;雌二醇组乳腺癌4T1细胞中S期细胞百分比明显升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高,雌二醇组乳腺癌4T1细胞中p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）;联合组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：IL-4协同雌二醇可促进小鼠4T1乳腺癌细胞膜IL-4受体（IL-4R）和雌激素受体（ER）表达,增强乳腺癌4T1细胞中Erk1和p70S6K激酶的激活及下游分子S6蛋白的磷酸化。     

GLI1真核表达载体的构建、鉴定及其对肺癌PC9细胞增殖的影响

构建GLI1真核表达载体,探讨过表达GLI1对肺癌PC9细胞增殖的影响。