同种异体工程化软骨的构建和修复甲状软骨缺损的实验研究

目的探讨同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫功能动物体内构建的可行性及其对甲状软骨缺损的修复能力.方法利用组织工程技术制备同种异体片状和"C”型半管状工程化软骨;将4周形成的片状工程化软骨用于修复12只新西兰大白兔甲状软骨大片缺损;一定时间取材,分别对预定形态工程化软骨的构建情况及其修复效果进行大体和组织学评价.结果①构建4周形成的预定形态工程化软骨呈乳白色,有弹性和支撑力,8周时软骨呈瓷白色,镜下观察显示软骨组织特征;②甲状软骨缺损修复术后4、8、12周观察,修复区愈合良好,组织学检查修复区与正常软骨间的界面区可见软骨细胞生长及软骨基质生成,无免疫排斥迹象.结论在有免疫功能的动物体内可形成同种异体预定形态组织工程化软骨,获取的工程化软骨对甲状软骨缺损有良好的修复效果,无明显免疫排斥反应.     

实验性变应性鼻炎鼻粘膜神经生长因子的测定

目的 探讨同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫功能动物体内构建的可 行性及其对甲状软骨缺损的修复能力。方法 利用组织工程技术制备同种异体片状和“C” 型半管状工程化软骨;将4周形成的片状工程化软骨用于修复12只新西兰大白兔甲状软骨大 片缺损;一定时间取材,分别对预定形态工程化软骨的构建情况及其修复效果进行大体和组 织学评价。 结果 ①构建4周形成的预定形态工程化软骨呈乳白色,有弹性和支撑力,8周时软骨 呈瓷白色,镜下观察显示软骨组织特征;②甲状软骨缺损修复术后4、8、12周观察,修复区 愈合良好,组织学 检查修复区与正常软骨间的界面区可见软骨细胞生长及软骨基质生成,无免疫排斥迹象。 结论 在有免疫功能的动物体内可形成同种异体预定形态组织工程化软骨,获取的工程化软 骨对甲状软骨缺损有良好的修复效果,无明显免疫排斥反应。     

聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损

目的 探讨聚羟基乙酸(polyglycolic acid，PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法 酶消化法获取3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞，采用组织工程技术制备软骨细胞-PGA复合物，体外共同培养1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损(实验组7只)。设单纯PGA材料修复组(对照A组4只)和单纯软骨细胞修复组(对照B组4只)作为对照实验。分别于术后不同时间取材，对甲状软骨缺损的修复效果进行大体和组织学评价。结果 体外培养阶段可见黏附于PGA纤维表面的细胞分泌出丰富的软骨基质，呈蜘蛛网状分布于PGA纤维之间。术后4周大体观察：实验组修复区呈淡黄色，与正常软骨界限分明；组织学检查：修复区内有软骨细胞生成和基质分泌，但与正常软骨间存在界面无细胞区，未见明显炎细胞浸润。8周：实验组修复区色乳白，与正常软骨仍有界限；镜下见修复区软骨细胞较成熟，软骨基质含量丰富。12周：实验组修复区呈瓷白色，界面区软骨细胞不明显，但修复区软骨细胞数量、形态和基质与正常软骨相似。各时间点对照组大体观察修复区均呈不同程度的凹陷，暗红色，部分软组织充填其中，质软；组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。新生软骨内未见血管生长。结论PGA负载软骨细胞能修复具有正常免疫功能同种异体兔甲状软骨缺损，但新生软骨与正常软骨间存在无细胞区界面，无明显免疫排斥。     

同种异体组织工程软骨修复气管壁缺损的实验研究

目的　探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞 ,可吸收材料PLA作为支架 ,应用组织工程学方法形成的新生软骨组织修复动物气管壁缺损的可行性。方法　将出生 3～ 5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解 ,分离出软骨细胞 ,接种到PLA可吸收支架上 ,移植到成年新西兰大白兔的背部皮下 ,7周后形成新生软骨组织修复实验动物颈部气管前壁约 10mm× 10mm大小的缺损 ,术后观察 8周 ,组织标本行大体观察和组织学检查。结果　软骨细胞 PLA复合物在同种异体的动物体内形成新生组织 ,经组织学染色 ,证实为软骨组织。新生组织工程软骨修复动物气管壁缺损后 8周 ,气管管腔通畅 ,无狭窄 ;组织学染色证实修复处软骨组织生长良好 ,无坏死 吸收。结论　同种异体幼年动物的软骨细胞 PLA复合物在有免疫力的动物体内形成的组织工程软骨可以作为气管壁缺损的修复材料。     

同种异体软骨修复甲状软骨缺损的实验研究

目的　观察用不同类型的同种异体软骨修复喉软骨缺损的效果。方法　取新西兰白兔16只 ,平均分成两组。在每只兔的双侧甲状软骨切除 6mm× 3mm× 1mm全层软骨。一组动物将RPMI 16 4 0液和甲醛保存 30d的同种异体甲状软骨 (大小为 5mm× 2mm× 1mm)分别植入甲状软骨两侧缺损处 ,另一组动物于甲状软骨两侧缺损处分别植入新鲜的自体和异体软骨。分别于术后 7、30、180及 36 0d时处死取材 ,用大体观察、HE染色及免疫组织化学方法观察移植修复效果。结果经连续 1年观察 ,RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨与自体软骨移植排斥反应轻 ,均能较好修复甲状软骨缺损 ,而甲醛保存软骨早期有明显炎性细胞浸润 ,移植 180d至 36 0d时软骨基质明显吸收 ,软骨细胞退变 ,甲状软骨缺损区为纤维结缔组织修复。结论　RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨都具有活性 ,和自体软骨一样是软骨缺损修复的良好材料 ,可应用于临床     

同种异体组织工程化软骨组织形成的初步研究

目的：探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞、以聚乳酸(PLA)作为支架，应用组织工程学方法在体内形成新生软骨组织的可能性，为组织工程软骨修复喉、气管软骨缺损提供实验依据。方法：将出生3～5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解，分离出软骨细胞，体外扩增后，将其接种到PLA三维可吸收支架上；将软骨细胞-PLA复合物移植到成年新西兰大白兔的背部皮下，经过7周的体内培养，将组织标本行大体观察和组织学检查。结果：软骨细胞-PLA复合物在同种异体的动物体内有新生组织形成，经组织学染色，证实为软骨组织；随着植入时间的延长，软骨基质的分泌增加，炎性细胞的浸润逐渐减轻。结论：同种异体的软骨细胞-PLA复合物在有免疫力的动物体内能够形成新生软骨组织，这一方法为喉、气管软骨缺损的修复提供了一条新的途径。     

转化生长因子β1和同种异体软骨细胞及高孔隙率聚乳酸复合物修复兔耳廓软骨缺损

目的 观察加入转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1，TGF-β1)的同种异体软骨细胞／高孔隙率聚乳酸(poly-DL-lactide，PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的效果。方法 18只大白兔随机分为同种异体软骨细胞／PDLLA复合物加TGF-β1组(复合物组)、同种异体软骨细胞／PDLLA复合物组(复合物对照组)和不用任何修复材料的空白对照组，每组6只。分别于4、12、18周取材，行HE和甲苯胺蓝染色，观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果 术后18周，TGF-β1复合物组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是病理组织学检查都比复合物对照组的修复效果好，空白对照组为纤维组织修复。结论 同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植可形成组织工程化软骨修复兔耳廓软骨缺损，TGF-β1可提高同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植修复兔耳廓软骨缺损的质量。     

聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损

目的　探讨聚羟基乙酸 ( polyglycolicacid ,PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法　酶消化法获取 3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞 ,采用组织工程技术制备软骨细胞 PGA复合物 ,体外共同培养 1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损 (实验组 7只 )。设单纯PGA材料修复组 (对照A组 4只 )和单纯软骨细胞修复组 (对照B组 4只 )作为对照实验。分别于术后不同时间取材 ,对甲状软骨缺损的修复效果进行大体和组织学评价。结果　体外培养阶段可见黏附于PGA纤维表面的细胞分泌出丰富的软骨基质 ,呈蜘蛛网状分布于PGA纤维之间。术后 4周大体观察 :实验组修复区呈淡黄色 ,与正常软骨界限分明 ;组织学检查 :修复区内有软骨细胞生成和基质分泌 ,但与正常软骨间存在界面无细胞区 ,未见明显炎细胞浸润。 8周 :实验组修复区色乳白 ,与正常软骨仍有界限 ;镜下见修复区软骨细胞较成熟 ,软骨基质含量丰富。1 2周 :实验组修复区呈瓷白色 ,界面区软骨细胞不明显 ,但修复区软骨细胞数量、形态和基质与正常软骨相似。各时间点对照组大体观察修复区均呈不同程度的凹陷 ,暗红色 ,部分软组织充填其中 ,质软 ;组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。新生软骨     

内衬上皮的管状组织工程软骨构建的实验研究

目的研究以聚丙交酯-乙交酯共聚物[poly（DL-lactide-co-glycolide）,PLGA]包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,在有免疫力的动物体内构建内衬上皮的管状组织工程软骨的可行性,为喉、气管缺损的修复探索新方法。方法取1月龄兔耳廓软骨,收集体外培养第3～4代的软骨细胞,接种于经多聚赖氨酸处理的以PLGA包埋甲壳胺无纺布的片状细胞支架材料上,体外培养7～10d后包裹于兔腹部缝制的皮管上并深埋于体内,分别于6、12、18周取材行大体和组织学观察以及HE染色、甲苯胺蓝染色和Masson＇s三色染色。结果同种异体软骨细胞/PLGA包埋甲壳胺无纺布的细胞支架复合物体外培养1周时有基质产生;植入体内6周后,复合物中有基质分泌,软骨细胞不成熟;12周时,软骨细胞接近成熟并形成凹陷,内衬上皮的管状组织工程软骨形成;18周时,新生软骨基本接近正常软骨。结论以PLGA包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,同种异体软骨细胞与细胞支架所形成的复合物在有免疫力的动物体内可构建出内衬上皮的管状组织工程软骨。     

转化生长因子β1和同种异体软骨细胞及高孔隙率聚乳酸复合物修复兔耳廓软骨缺损

目的　观察加入转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor beta 1,TGF β1)的同种异体软骨细胞 /高孔隙率聚乳酸 (poly DL lactide,PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的效果。 方法18只大白兔随机分为同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物加TGF β1组 (复合物组 )、同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物组 (复合物对照组 )和不用任何修复材料的空白对照组 ,每组 6只。分别于 4、12、18周取材 ,行HE和甲苯胺蓝染色 ,观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果　术后 18周 ,TGF β1复合物组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是病理组织学检查都比复合物对照组的修复效果好 ,空白对照组为纤维组织修复。结论　同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物移植可形成组织工程化软骨修复兔耳廓软骨缺损 ,TGF β1可提高同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物移植修复兔耳廓软骨缺损的质量。     

鼻中隔软骨细胞细胞组织工程法构建预定形态软骨

目的 探讨利用人算中隔软骨细胞组织工程方法构建预定形态软骨的可能性。方法 将人鼻中隔软骨细胞播种在聚乙醇酸（polyglycoli acid,PGA)无纺网支架材料上，制成片状和管状结构，埋入裸裸鼠体内，经4、6、8周后取材作大体及组织学观察。结果 大体观察见裸 本内形成了预定的片状和管状软骨。组织学观察：6周时软骨细胞基本成熟，Masson三色染色显示胶原形成，番红花－“O”染色证实其基质中存在糖多糖。对照组于6周时PGA纤维基本消失。结论 人鼻中软骨细胞与PGA无纺网复合可在裸鼠体内形成预定形态软骨。     

同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损实验研究

已有采用组织工程软骨修复裸鼠气管软骨缺损及同种异体组织工程软骨修复甲状软骨缺损等相关研究报道[1,2 ] ,在此基础上 ,我们采用同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损。一、材料和方法1 采用短期固定培养法构建兔软骨细胞 聚羟基乙酸(ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃａｃｉｄ ,ＰＧＡ)复合体[3 ] (图 1,2 ) ,复合培养 3周后行同种异体移植。2 软骨细胞 ＰＧＡ复合体同种异体皮下移植 :0 5～ 1ｋｇ新西兰兔 12只 ,每只兔背部皮下移植 3ｍｍ× 3ｍｍ的软骨细胞 ＰＧＡ复合体各 2块 ,移植术后 1、2、3和 4个月分批取出标本 ,每批 3只 (6块标…     

鼻中隔软骨细胞组织工程法构建预定形态软骨

目的探讨利用人鼻中隔软骨细胞组织工程方法构建预定形态软骨的可能性。方法将人鼻中隔软骨细胞播种在聚乙醇酸（polyglycolicacid,PGA）无纺网支架材料上,制成片状和管状结构,埋入裸鼠体内,经4、6、8周后取材作大体及组织学观察。结果大体观察见裸鼠体内形成了预定的片状和管状软骨。组织学观察6周时软骨细胞基本成熟,Masson三色染色显示胶原形成,番红花-“O”染色证实其基质中存在糖氨多糖。对照组于6周时PGA纤维基本消失。结论人鼻中隔软骨细胞与PGA无纺网复合可在裸鼠体内形成预定形态软骨。     

一般问题

20 0 4 0 4 81　　聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损 /孙安科… / /中华耳鼻咽喉科杂志 - 2 0 0 3;38(5 ) - 347～ 35 0目的 :探讨聚羟基乙酸 (PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法 :酶消化法获取 3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞 ,采用组织工程技术制备软骨细胞PGA复合物 ,体外共同培养 1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损 (实验组 7只 )。设单纯PGA材料修复组 (对照A组 4只 )和单纯软骨细胞修复组 (对照B组 4只 )作为对照实验。分别于术后不同时间取材 ,对甲…     

用组织培养的同种异体软骨进行喉重建的实验研究

目的　观察用组织培养法保存的兔活性甲状软骨进行同种异体喉软骨移植重建的效果。方法　先取大小约 5mm× 2mm× 1mm兔甲状软骨块 ,分别用RPMI - 1640培养液及 4 %甲醛保存 2 0d ,然后将两种方法保存的软骨块同时移植于同一兔甲状软骨板中线两侧缺损处 ,培养软骨置于左侧 ,甲醛保存软骨置于右侧 ,分别于 7d、14d、30d、60d、90d、12 0d、180d、2 0 0d及 30 0d时取标本观察移植重建效果。结果　用组织培养软骨进行喉移植后与受体组织相容性好 ,移植排斥反应小 ,喉重建修复效果明显优于甲醛保存软骨。结论　用组织培养法保存的活性软骨进行同种异体喉软骨移植其排斥反应小 ,喉重建修复效果满意。     

耳鼻咽喉科领域的软骨组织工程

耳、鼻、喉和气管的软骨组织工程研究已有较大进展，已分别在裸鼠和具有免疫力动物体内形成了与耳鼻咽喉有关的组织工程化软骨组织，并有初步应用的实验研究报道。随着胚胎干细胞、骨髓基质干细胞、同种异体软骨细胞和智能生物材料的研发和应用，耳鼻咽喉科软骨组织工程有望获得突破性进展。本文综述了该领域的软骨组织工程研究现状和发展趋势。     

同种异体骨移植修复甲状软骨缺损实验研究（摘要）

同种异体骨移植修复甲状软骨缺损实验研究（摘要）钱炜，黄鹤年，吴韵芳，田熙一、材料与方法：１．材料：实验动物采用家兔（日本大白兔）２０只，全部为雄性，，体重２５００～３０００ｇ。实验组修复材料采用同种异体兔肩胛骨（以下简称移植骨）；对照组修复材料采用同...     

同种异体软骨细胞修复耳廓缺损的动物实验研究

目的探讨兔同种异体软骨细胞和自行制备生物材料高孔隙率聚乳酸(poly—DL-lactide,PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的可行性。方法 18只大白兔分为软骨细胞/PDLLA复合物移植组、单纯PDLLA对照组和空白对照组,将体外培养的兔同种异体软骨细胞和自行制备的PDLLA支架形成复合物,修复兔耳廓软骨缺损。分别于植入后6周、12周、18周取材,HE和甲苯胺蓝染色了解兔耳廓缺损修复情况。结果术后18周,软骨细胞/PDLLA复合物移植组软骨缺损区为软骨组织修复,新生软骨与正常软骨问连接好,单纯PDLLA对照组和空白对照组为纤维软骨或纤维组织修复。结论同种异体软骨细胞/自制PDLLA复合物移植可较好地修复兔耳廓软骨缺损。     

组织工程化喉软骨的构建

目的 研究组织工程化喉支架软骨的构建方法。方法 酶消化法获取幼兔肋和关节软骨细胞并进行体外培养,传代时延长胰蛋白酶作用时间3-5 min,收集第3代培养的软骨细胞用于实验;采用溶液浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉形态聚羟基烷酸酯类[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate,PHBHH)]生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞-PHBHH复合物,体外共同培养1周后,分别在成兔体内用大网膜充填复合物中空部分与整体包裹、腹内成形(9只动物)和背部筋膜瓣与肌肉组织共同充填与包裹复合物、皮下成形(9只)的方法将负载软骨种子细胞的喉形态材料塑形物植入腹腔和背部,设空白对照组(每批3只)。术后一定时间取材,大体形态观察、组织学和免疫组织化学检测评估工程化喉软骨的成形与再生情况。结果 获取的软骨细胞活性为(93±2)％,传统方法为(94±2)％(P>0.05)。制备的喉形态生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,液体(乙醇)静态容积测定孔隙率>90％。两种体内植入法均构建出喉形态组织工程化组织,大体形态维持良好,组织学和免疫组织化学均证实为软骨组织,且形态学和组织学表现两者基本一致。结论 改良培养细胞传代过程中胰酶作用程度未影响软骨细胞的成软骨性能;PHBHH可作为喉形态塑形物的塑形和构建组织工程化软骨的     

头颈外科

20020316 气管切开术在头面颈部烧伤吸人性损伤治疗中的应用/朱立洁//徐州医学院学报一2001,21(2)一146~147 目的;探讨头面颈部烧伤病人气管切开术的适应证和手术时机。方法:对52例头面颈部烧伤并行气管切开术的患者进行回顾性总结。结果:52例病人均在伤后12~24h内行气管切开术,术后并发症少。结论:对于头面颈部烧伤特别是吸入性损伤病人,应尽早行气管切开术,时间选择在伤后12h内为宜。参3(原提要)20020317同种异体工程化软骨的构建和修复甲状软骨缺损的实验研究/孙安科…//中华耳鼻咽喉科杂志一2001,36(4)一278~280 目的:探讨同种异体预定…