Chk1反义寡核苷酸影响胶质瘤放疗敏感性的研究

目的：观察转染Chk1 反义寡核苷酸（ASON） 后,对照射后U251 细胞株中Chk1 表达、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法：采用脂质体转染法,Chkl 的正义、反义寡核苷酸对U251 细胞株进行Chkl 转染.以放射线照射后,测定其细胞周期和凋亡率变化,比较Chkl 转染正义链和反义链对细胞放射敏感性的不同.用Western Blot 法检测Chk1 蛋白,Real time PCR 检测Chk1 mRNA 表达.结果：转染Chk1 反义寡核苷酸后,能明显下调Chk1 蛋白和mRNA 的表达,显著增强放射线诱导的肿瘤细胞凋亡,并消除细胞周期阻滞.结论：反义核酸技术灭活Chk1 基因显著增强放疗诱导的U251 细胞凋亡,为增敏胶质瘤的放射治疗提供了理论依据.     

蓖麻毒素引起HeLa细胞凋亡和细胞周期G_2/M期阻滞

目的　蓖麻毒素与HeLa细胞共培养 ,观察蓖麻毒素引起细胞毒性死亡规律及对细胞周期的影响。方法　噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞毒性 ,流式细胞分析仪分析细胞周期。结果　 10 -3μmol·L-1蓖麻毒素即可引起HeLa细胞死亡 ,随着蓖麻毒素浓度的升高 ,其细胞毒性增大 ,10 μmol·L-1蓖麻毒素与细胞作用 2 4h ,其细胞存活率为 39 6 %。 0 0 5 μmol·L-1蓖麻毒素可引起HeLa细胞发生典型的细胞凋亡 ,主要表现为细胞核染色质浓缩 ,碎裂 ,形成新月状核或膜包裹核染色质的凋亡小体。结论　 0 0 5 μmol·L-1蓖麻毒素对细胞周期G0 /G1期无影响 ,但对G2 /M有影响。作用 2 4h ,G2 /M期细胞从对照组的13 86± 0 48%上升至 33 15± 0 45 % ,细胞周期阻滞在G2 /M期。     

甲基叔丁基醚对细胞周期及细胞凋亡的影响

目的：探讨汽油添加剂甲基叔丁基醚（ＭＴＢＥ）对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 采用流式细胞仪检测ＭＴＢＥ对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期（染毒浓度分别为１、２、４μｌ／ｍｌ,染毒时间为２４ｈ）的影响;应用结晶紫染色法,通过检测Ｈｅｌａ细胞的存活情况,了解ＭＴＢＥ对细胞凋亡的影响。结果 流式细胞仪结果显示,ＭＴＢＥ可使ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期发生改变。表现为Ｓ期细胞减少,而处于Ｇ２＋Ｍ期的细胞增多,提示ＭＴＢ     

蓖麻毒素引起HeLa细胞凋亡和细胞周期G2／M期阻滞

目的蓖麻毒素与HeLa细胞共培养,观察蓖麻毒素引起细胞毒性死亡规律及对细胞周期的影响.方法噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞毒性,流式细胞分析仪分析细胞周期.结果10-3μmol@L-1蓖麻毒素即可引起HeLa细胞死亡,随着蓖麻毒素浓度的升高,其细胞毒性增大,10μmol@L-1蓖麻毒素与细胞作用24h,其细胞存活率为39.6%.0.05μmol@L-1蓖麻毒素可引起HeLa细胞发生典型的细胞凋亡,主要表现为细胞核染色质浓缩,碎裂,形成新月状核或膜包裹核染色质的凋亡小体.结论0.05μmol@L-1蓖麻毒素对细胞周期G0/G1期无影响,但对G2/M有影响.作用24h,G2/M期细胞从对照组的13.86±0.48%上升至33.15±0.45%,细胞周期阻滞在G2/M期.     

DNA依赖性蛋白激酶在石英诱导的细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白依赖激酶2蛋白表达及细胞周期改变中的作用

目的 探讨DNA依赖性蛋白激酶(DNA dependent protein kinase,DNA-PK)在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中细胞周期蛋白E(CyclinE)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)蛋白表达及细胞周期改变中的作用.方法 200μg/ml石英处理阴性对照细胞(H-NC)及采用RNAi技术分别抑制DNA-PKcs和Ku80蛋白表达的细胞系(H-PKcs和H-Ku80)0、3、6、12、24 h,采用流式细胞术检测石英刺激24 h不同细胞系的细胞周期变化情况,免疫印迹(Western blot)技术检测不同细胞系各时间点CyclinE、CDK2蛋白的表达水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.结果 石英刺激H-NC,G1期细胞所占比例从83.53%±2.24%下降到69.11%±3.12%;石英刺激H-Ku80,石英诱导的G1期细胞的比例进一步减少,从85.16%±3.73%下降到59.92%±3.31%;石英刺激H-PKcs,G1期细胞比例也显示进一步减少,从75.06%±2.23%下降到58.32%±1.35%,差异均有统计学意义(P＜0.05).石英刺激H-NC,CyclinE和CDK2蛋白表达随时间延长有增高趋势,并在12 h达峰值;石英刺激H-Ku80,H-PKcs和CyclinE蛋白表达水平在各时间点均低于H-NC,差异有统计学意义(P＜0.05),CDK2蛋白的表达水平变化不明显.结论 DNA-PK参与石英诱导的细胞周期改变,对CyclinE的表达呈正性调节作用.

Abstract：

Objective To study the roles of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)in silicainduced cell cycle changes and expressions of CyclinE and CDK2 in human embryo lung fibroblasts (HELF).Methods The expressions of Ku80 and DNA-PKcs proteins were inhibited by siRNA plasmids, respectively.Flow cytometry was used to detect the distributions of cell cycle and western blot assay was used to determine the expression levels of CyclinE and CDK2 after cells were exposed to 200 μg/ml silica for 0,3,6,12,24 h.Results The proportion of G1 phases in negative control cells decreased from 83.53%±2.24% to 69.11%±3.12%after exposure to silica; the proportion of G1 phases in H-Ku80 and H-PKcs cells exposed to silica decreased from 85.16%±3.73% to 59.92%±3.31% and from 75.06%±2.23% to 58.32%±1.35%, respectively (P＜0.05).The exposure to silica resulted in the increasing protein expression levels of CyclinE and CDK2 in negative control cells, and the expression levels of CyclinE were obviously suppressed in H-Ku80 and H-PKcs as compared with control cells. However, the expression level of CDK2 protein did not change significantly.Conclusion DNA-PK might play a role in silica-induced alternations of cell cycle and regulate silica-induced overexpression of CyclinE in human embryo lung fibroblasts.     

人脑胶质瘤中细胞周期蛋白D1和血管内皮生长因子的表达和意义

目的检测细胞周期蛋白D1和血管内皮生长因子在胶质瘤中的表达,并探讨其与恶性程度的关系及二者之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测52例不同级别胶质瘤中细胞周期蛋白D1和血管内皮生长因子蛋白的表达,分析其相互关系。结果细胞周期蛋白D1和血管内皮生长因子在胶质瘤中的表达率分别是71．15％和78．85％,并随着胶质瘤病理分级的增加而增高,差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞周期蛋白D1和VEGF的表达间存在着密切关系（P〈0．005）。结论细胞周期蛋白D1和皮生长因子的高表达与胶质瘤的恶性进展有密切关系;且细胞周期蛋白D1和皮生长因子协同在胶质瘤的发生发展过程中起重要作用。     

氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 :研究氟化物对大鼠颅骨成骨细胞生长、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞 ;AlamarBlue摄入法检测细胞活性 ;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 :氟化钠 (NaF)浓度为 0～ 2mmol L、2 4h对细胞活性无影响 ;浓度为 2mmol L时 ,S期细胞数增多 ,G0 G1 期和G2 M期细胞无明显改变。NaF浓度为 4mmol L时 ,细胞活性受抑制 ,S期细胞数明显增多 ,G2 M期细胞明显减少。NaF浓度为 2mmol L和 4mmol L时 ,凋亡百分率明显增加。结论 :过量氟化物可影响大鼠颅骨成骨细胞活性及细胞周期的分布 ,使细胞停滞于S期 ,并可诱导细胞凋亡     

不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

目的:研究不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞凋亡的影响。方法:采用体外培养的子宫肌瘤细胞,用不同浓度米非司酮处理后培养48h,用流式细胞仪分析子宫肌瘤细胞周期和凋亡率的改变。结果:不同浓度的米非司酮均可诱导子宫肌瘤细胞的凋亡,随着米非司酮浓度的增加,子宫肌瘤细胞的凋亡率有增高的趋势(P<0·05),低浓度米非司酮(10-8~10-7mol/L)可使G2/M期子宫肌瘤细胞比例减少(P<0·05),高浓度米非司酮(10-6~10-4mol/L)可使S期细胞比例减少(P<0·05)和G2/M期细胞比例减少(P<0·01)。结论:米非司酮可引起体外培养子宫肌瘤细胞的凋亡,呈现浓度-效应关系,低浓度米非司酮和高浓度米非司酮可能引起不同时期子宫肌瘤细胞的凋亡。     

锌缺乏和锌过量对培养长骨细胞周期和细胞凋亡的影响

目的　探讨锌缺乏和锌过量对培养长骨细胞周期和细胞凋亡的影响 ,为阐明锌对骨骼的生长发育影响的机制提供科学依据。方法　用小鼠胚胎长骨体外培养 ,采用流式细胞仪研究细胞周期各个时相所占比例和凋亡细胞百分比 ,进行电镜分析 ,观察细胞的超微结构。结果　缺锌可使细胞周期停滞在 G0 /G1期 ,培养 2 d,缺锌组 G0 /G1期细胞所占百分比 (82 .3% )高于对照组(76.9% ) ,G2 /M期细胞所占百分比 (3.4% )低于对照组 (8.9% ) ;培养 4d,缺锌组 G0 /G1期细胞所占百分比 (88.6% )明显高于对照组 (78.4% ) ,S期细胞所占百分比 (4.3% )明显低于对照组 (1 1 .0 % ) ;缺锌可使凋亡细胞数目增加。电镜观察 ,缺锌组可见大量的凋亡细胞 ,而高锌组则有大量的坏死细胞。结论　锌缺乏可改变培养长骨的细胞周期 ,诱导细胞凋亡 ,但锌过量对细胞周期和细胞凋亡没有影响。     

氯化镧对原代大鼠星形胶质细胞凋亡和细胞周期的影响

目的研究不同浓度的氯化镧对原代大鼠星形胶质细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨氯化镧所致神经损伤的机制。方法取新生大鼠大脑皮质进行原代星形胶质细胞分离和培养。在纯化及鉴定细胞后,用0,0.25,0.5,1.0 mmol/L氯化镧(LaC l3)处理24 h后,应用MTT法检测细胞活力,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放,应用倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪法检测细胞凋亡和细胞周期。结果随着LaC l3暴露浓度的增加,细胞活力明显降低,LDH释放明显增加,细胞形态出现不同程度的损伤,细胞凋亡率从0.72%上升至11.6%(P<0.05),G1期细胞指数从78.35%上升至92.11%(P<0.05),S期细胞指数从6.19%下降至1.53%(P<0.05),G2期细胞指数从15%下降至7.09%(P<0.05),均呈现剂量-效应关系。结论氯化镧可诱发原代大鼠星形胶质细胞凋亡,改变细胞周期,从而产生神经毒性。 更多还原     

胞外Ca2+浓度对辐射诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的探讨胞外不同Ca^2＋浓度对辐射诱导HL-60细胞凋亡的促进作用.方法对体外培养的HL-60细胞经一定剂量的32P辐射后发现加入不同浓度的Ca^2＋继续培养24、48h,流式细胞仪检测凋亡率.结果胞外Ca^2＋作用于HL-60细胞24、48h后发现对辐射诱导细胞凋亡随Ca^2＋浓度的增加细胞凋亡率增大,Ca^2＋有明显的促凋亡作用,相关性很好r24=0.9001（P=0.0145）,r48=0.9343（P=0.0063）.结论胞外不同浓度的Ca^2＋对辐射诱导HL-60细胞有明显的促进凋亡的作用.     

碘对成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的研究不同浓度碘对成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法使用碘离子(终浓度为0～10000μg/L)染毒1×104个/ml的成纤维细胞悬液。于4、12、24、48h后测定细胞增殖活性;于24、48h后测定细胞周期及凋亡,计算细胞增殖指数和细胞凋亡率。结果染毒24h,碘离子浓度≤7000μg/L时具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度7000μg/L时可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。染毒48h,碘离子浓度≤3000μg/L具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度≥7000μg/L可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。结论碘对成纤维细胞的细胞增殖和凋亡具有双向效应。     

微囊藻毒素-LR对人肝癌HT17细胞周期及细胞凋亡的影响

目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝癌HT17细胞周期、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 调整HT17细胞密度为1×104/孔,分别设终浓度为0(溶剂对照,0.1%DMSO)、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、2.0、5.0μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)染毒组以及...     

芹菜素对小鼠生精细胞周期影响的实验研究

目的研究芹菜素对小鼠睾丸生殖细胞周期的影响。方法将50只SPF级健康成年雄性昆明小鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)、溶剂对照组(0.5%DMSO)和低(84mg/kg)、中(168mg/kg)、高(252mg/kg)剂量芹菜素染毒组,每组10只。采用灌胃方式进行染毒,染毒剂量为10ml/kg,每天1次,连续灌胃14天,于末次灌胃后第21天处死小鼠,分别称重附睾、睾丸,并计算脏器系数。采用流式细胞仪检测小鼠生精细胞的周期。结果染毒前后各组小鼠体重间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。除高剂量芹菜素染毒组小鼠附睾湿重高于中剂量芹菜素染毒组(P0.05)外,各组小鼠睾丸、附睾湿重及其脏器系数间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。细胞周期分析结果显示,与阴性对照组比较,低、高剂量芹菜素染毒组小鼠睾丸组织中的二倍体细胞所占百分比下降,低剂量芹菜素灌胃可引起G0/G1期细胞明显降低,低、高剂量芹菜素染毒组小鼠睾丸组织1C∶2C值明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论芹菜素对小鼠生精细胞有一定的抑制作用。     

腺病毒介导的p27kip1基因转移对食管癌细胞周期的影响

用腺病毒为栽体，研究p27kip1基因转移对食管癌细胞周期的影响。方法将携带p27kip1基因的重组腺病毒转染食管癌细胞株Eea9706，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应，免疫细胞化学法检测p27kip1表达，流式细胞仪(FcM)检测细胞周期。结果p27klp1基因转染食管癌细胞株Eca9706后，p27kip1表达增强，细胞生长显著受抑制，G0／G1期细胞比例增加，S期、G2／M期比例降低。结论腺病毒介导的p27kip1基因转移能显著抑制食管癌细胞的生长，使细胞产生G1期阻滞。     

Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究

目的探讨Woltmannin抑制PI3K途径对K562、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL-2蛋白表达的影响。探明PI3K途径在K562、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL-2蛋白表达中的不同作用。方法用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径．AraC诱导细胞凋亡，药物作用214h后，细胞经DNA特异性荧光染色，用流式细胞仪(FCM)检测细胞DNA含量、BCL-2蛋白表达。Multicyele Verson 4．00软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL-2蛋白表达。观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化。结果K562、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara-C、Wortmannin Ara-C作用24h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰(亚G1期细胞)这一凋亡细胞的特征性改变，实验组细胞增殖指数(PI)明显低于对照组，凋亡百分比显著增加。Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K562细胞阻滞于G1期。作用24h后细胞实验组细胞BCL-2蛋白表达较对照组降低，说明Wortmannin可促进K562细胞的凋亡。结论Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖。并可以通过抑制PBK通路使K562细胞阻滞于GI期。Wortmannin可抑制K562细胞的BCL-2蛋白表达，促进K562细胞的凋亡。Wortmannin属于细胞周期特异性药物。     

三种方法检测射线照射后细胞存活率的结果比较

目的分析倒置显微镜计数、流式细胞仪及MTT等三种方法检测放射线照射后细胞存活率(S)结果间的差异。方法对相同剂量照射后的同一样本,分别用上述三种方法进行检测及计算以获得S值并进行比较分析。结果三种方法获得的S值结果间差异很大。基本上从流式细胞仪测试结果获得的S值最低,从倒置显微镜计数结果获得的S值次之,而MTT测量结果获得的S值最大,甚至与其他两种方法计算获得的结果有几倍差距。结论在应用上述三种方法进行检测时最好根据实验的具体要求和目的进行选择,否则可能造成结果的偏差。     

X射线全身照射对小鼠骨髓细胞周期的影响

目的 研究不同剂量X射线全身照射对小鼠骨髓细胞周期的影响。方法 采用PI标记及流式细胞术（FCM）检测细胞周期的变化。结果 发现，1.0-6.0GyX射线线全身照射后12h，小鼠骨髓细胞G1及G2期明显增高，而S期明显减少；同时发现，0.05-0.2Gy低剂量X射线全身照射后72h,G1期骨髓细胞明显减少。而S期细胞明显增高。结论 0.5Gy以上剂量X射线全身照射可诱导小鼠骨髓细胞G1及G2期阻滞，使骨髓细胞增殖明显受抑；而0.2Gy以下低剂量照射则可刺激骨髓细胞增殖。     

氢醌对L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的 探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响.方法 将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320 μmol/L)的HQ作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定L-02肝细胞的相对存活率,采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤状况,并采用流式细胞术检测细胞周期分布状况.结果 在0～80 μmol/L的范围内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P＞0.05);当染毒剂量超过160μmol/L时,其存活率则明显地下降(P＜0.01).随着HQ作用浓度的升高,L-02肝细胞DNA链的断裂程度也随着逐渐增加.0～80μmol/L范围内的HQ作用24h后,L-02肝细胞的细胞周期也发生了明显的改变,表现为S期细胞比例明显增加,G1期细胞的比例下降.结论 HQ对L-02肝细胞DNA具有损伤作用,并且在体外能够引起明显的S期细胞阻滞.